Бюллетень экспериментальной биологии и медицины, 2002, Приложение № 4 76 ÑÂÅÐÕÌÀËÛÅ ÄÎÇÛ ÀÍÒÈÈÄÈÎÒÈÏÈ×ÅÑÊÈÕ ÀÍÒÈÒÅË Ê ÈÍÒÅÐÔÅÐÎÍÓ-γγ ×ÅËÎÂÅÊÀ: ÈÇÓ×ÅÍÈÅ ÈÌÌÓÍÎÒÐÎÏÍÛÕ ÑÂÎÉÑÒ Å.Þ.Øåðñòîáîåâ, Í.Â.Ìàñíàÿ, À.À.×óðèí, Î.Ñ.Áîðñóê, À.Â.Ìàðòþøåâ*, Î.È.Ýïøòåéí* ÍÈÈ ôàðìàêîëîãèè ÒÍÖ ÑÎ ÐÀÌÍ; *Íàó÷íî-ïðîèçâîäñòâåííàÿ ôèðìà “Ìàòåðèà Ìåäèêà Õîëäèíã”, Ìîñêâà Èçó÷àëè âëèÿíèå ñâåðõìàëûõ äîç àíòèèäèîòèïè÷åñêèõ àíòèòåë ê èíòåðôåðîíó-γ ÷åëîâåêà íà ãóìîðàëüíûé èììóííûé îòâåò ýêñïåðèìåíòàëüíûõ æèâîòíûõ ïðè èììóíèçàöèè òèìóñçàâèñèìûì àíòèãåíîì, èíòåíñèâíîñòü ðåàêöèè ãèïåð÷óâñòâèòåëüíîñòè çàìåäëåííîãî òèïà è ôàãîöèòàðíóþ àêòèâíîñòü íåéòðîôèëîâ ïåðèòîíåàëüíîãî ýêññóäàòà. Ïîêàçàíî, ÷òî äàííûé ïðåïàðàò ñòèìóëèðóåò ãóìîðàëüíûé îòâåò è íå âëèÿåò íà ôóíêöèîíèðîâàíèå Ò-êëåòîê-ýôôåêòîðîâ, òåì íå ìåíåå îí ñïîñîáåí ñóùåñòâåííî àêòèâèçèðîâàòü ôàãîöèòîç. Êëþ÷åâûå ñëîâà: ñâåðõìàëûå äîçû, àíòèèäèîòèïè÷åñêèå àíòèòåëà, èíòåðôåðîí-γ ÷åëîâåêà, ãóìîðàëüíûé è êëåòî÷íûé èììóííûé îòâåò Ñîâðåìåííàÿ íàóêà íå íàõîäèò àäåêâàòíîãî îáúÿñíåíèÿ íàëè÷èþ áèîëîãè÷åñêîé àêòèâíîñòè ó âåùåñòâ â ñâåðõìàëûõ êîíöåíòðàöèÿõ, ïîëó÷àåìûõ ñ ïîìîùüþ ãîìåîïàòè÷åñêîé òåõíîëîãèè ïîòåíöèðîâàíèÿ, îäíàêî ãîìåîïàòè÷åñêèå ñðåäñòâà îáëàäàþò äîñòàòî÷íîé òåðàïåâòè÷åñêîé ýôôåêòèâíîñòüþ ïðè ðàçëè÷íûõ çàáîëåâàíèÿõ. Âûÿâëåííàÿ ó ñâåðõìàëûõ äîç àíòèòåë ê ýíäîãåííûì ðåãóëÿòîðàì, â òîì ÷èñëå ê èíòåðôåðîíó-γ (ÈÔÍ-γ) [4,6], ñïîñîáíîñòü ìîäèôèöèðîâàòü ôóíêöèîíàëüíóþ àêòèâíîñòü ýòîãî ðåãóëÿòîðà, ïîäòâåðæäåíà â öåëîì ðÿäå ðàáîò [1,4-7]. Öåëüþ íàñòîÿùåãî èññëåäîâàíèÿ ÿâèëîñü ýêñïåðèìåíòàëüíîå èçó÷åíèå èììóíîòðîïíûõ ñâîéñòâ ñâåðõìàëûõ äîç àíòèèäèîòèïè÷åñêèõ àíòèòåë ê ÈÔÍ-γ ÷åëîâåêà. ÌÅÒÎÄÈÊÀ ÈÑÑËÅÄÎÂÀÍÈß Ýêñïåðèìåíòû ïðîâåäåíû íà 92 ìûøàõ (63 ñàìöà è 29 ñàìîê) ëèíèè ÑÂÀ/ÑàLac ìàññîé 16-18 ã, ïîëó÷åííûõ èç êîëëåêöèîííîãî ôîíäà Íàó÷íîèññëåäîâàòåëüñêîé ëàáîðàòîðèè ýêñïåðèìåíòàëüíî-áèîìåäèöèíñêîãî ìîäåëèðîâàíèÿ ÍÈÈ ôàðìàêîëîãèè ÒÍÖ ÑÎ ÐÀÌÍ (ñåðòèôèêàò èìååòñÿ). Ñàìîê èñïîëüçîâàëè ïðè èçó÷åíèè ôàãîöèòîçà, îñòàëüíûå îïûòû ïîñòàâëåíû íà ñàìöàõ. Èñïîëüçîâàëè ñìåñü ãîìåîïàòè÷åñêèõ ðàçâåäåíèé (Ñ12+Ñ30+Ñ200) àíòèèäèîòèïè÷åñêèõ àíòèòåë ê ÈÔÍ-γ ÷åëîâåêà (ÏÀÒ-ÈÔÍ), êîòîðóþ ââîäèëè per os â îáúåìå 0.2 ìë êóðñîì â òå÷åíèå 10 äíåé (ýêâèâàëåíòíàÿ êîíöåíòðàöèÿ — 10—24 ìàññîâûõ äîëåé). Ìûøè ãðóïï ñðàâíåíèÿ ïîëó÷àëè ðàñòâîðèòåëü — ïîòåíöèðîâàííóþ äèñòèëëèðîâàííóþ âîäó (ÏÄÂ, Ñ12+Ñ30+Ñ200) ïî òàêîé æå ñõåìå. Ôîíîâûå çíà÷åíèÿ ðåãèñòðèðîâàëè ó èíòàêòíûõ æèâîòíûõ ñîîòâåòñòâóþùåãî ïîëà. Ïðè èçó÷åíèè ãóìîðàëüíîãî èììóííîãî îòâåòà ìûøåé èììóíèçèðîâàëè ìèíèìàëüíûìè äîçàìè ýðèòðîöèòîâ áàðàíà (ÝÁ) [3] â äîçå 5½ 106/ìûøü îäíîêðàòíî âíóòðèáðþøèííî â îáúåìå 0.2 ìë â êîíöå 10-äíåâíîãî êóðñà ââåäåíèÿ ÏÀÒ-ÈÔÍ èëè ÏÄÂ. Íà 4-å ñóòêè ïîñëå èììóíèçàöèè îáùåïðèíÿòûìè ìåòîäàìè [2] îïðåäåëÿëè îáùåå êîëè÷åñòâî ëåéêîöèòîâ â ïåðèôåðè÷åñêîé êðîâè, ìàññîâûå èíäåêñû è îáùóþ êëåòî÷íîñòü òèìóñà è ñåëåçåíêè, à òàêæå îòíîñèòåëüíîå è àáñîëþòíîå êîëè÷åñòâî àíòèòåëîîáðàçóþùèõ êëåòîê (ÀÎÊ) â ñåëåçåíêå ïî ìåòîäó [8] è òèòð àíòèòåë â ñûâîðîòêå êðîâè ñ ïîìîùüþ ðåàêöèè ãåìàããëþòèíàöèè. Ïðè ïîñòàíîâêå ðåàêöèè ãèïåð÷óâñòâèòåëüíîñòè çàìåäëåííîãî òèïà (ÃÇÒ) [3] ñåíñèáèëèçàöèþ ÝÁ ïðîâîäèëè â êîíöå 10-äíåâíîãî êóð- ФАРМАКОЛОГИЯ СВЕРХМАЛЫХ ДОЗ 77 Ñóùåñòâåííîå âëèÿíèå íà ìàññó è êëåòî÷íîñòü òèìóñà îêàçûâàëà ëèøü ÏÄ (òàáë. 1), ïðèìåíåíèå ÏÀÒ-ÈÔÍ íå ïðèâîäèëî ê ñêîëüêî-íèáóäü çíà÷èòåëüíûì èçìåíåíèÿì â òèìóñå. Èììóíèçàöèÿ ïîñëå êóðñîâîãî ââåäåíèÿ ÏÄ ñïîñîáñòâîâàëà òàêæå ïîâûøåíèþ îáùåé êëåòî÷íîñòè ñåëåçåíêè îòíîñèòåëüíî êîíòðîëÿ; ÏÀÒ-ÈÔÍ íà ñîñòîÿíèå ñåëåçåíêè ñóùåñòâåííîãî âëèÿíèÿ íå îêàçûâàë (òàáë. 1).  îòëè÷èå îò ýêñïåðèìåíòîâ ïî èçó÷åíèþ èììóíîòðîïíîãî äåéñòâèÿ ÏÀÒ-ÈÔÍ [4], â äàííîé ñåðèè îïûòîâ ïîïóëÿöèÿ ìûøåé ëèíèè ÑÂÀ îêàçàëàñü ñïîñîáíîé äîñòàòî÷íî àêòèâíî ôîðìèðîâàòü ãóìîðàëüíûé èììóííûé îòâåò íà ââåäåíèå ìèíèìàëüíûõ äîç ÝÁ: â êîíòðîëå îòìå÷åíî ñóùåñòâåííîå íàðàñòàíèå îòíîñèòåëüíîãî è àáñîëþòíîãî êîëè÷åñòâà ÀÎÊ â ñåëåçåíêå ïî ñðàâíåíèþ ñ ôîíîì (òàáë. 1), à òèòð ñïåöèôè÷åñêèõ ãåìàããëþòèíèíîâ â ñûâîðîòêå êðîâè ýòèõ ìûøåé êîëåáàëñÿ â ïðåäåëàõ ðàçâåäåíèé 1:2561:512. Èììóíèçàöèÿ ÝÁ ïî îêîí÷àíèè êóðñà ââåäåíèÿ ÏÀÒ-ÈÔÍ òàêæå ïðèâîäèëà ê ñòàòèñòè÷åñêè çíà÷èìîìó ïîâûøåíèþ ïðîöåíòíîãî ñîäåðæàíèÿ ÀÎÊ îòíîñèòåëüíî ôîíîâûõ âåëè÷èí. ÏÀÒ-ÈÔÍ íå ñïîñîáñòâîâàëè àêòèâèçàöèè èììóííîãî îòâåòà: îòíîñèòåëüíîå è àáñîëþòíîå êîëè÷åñòâî ÀÎÊ è òèòð àíòèòåë ó ìûøåé ýòîé ãðóïïû áûëè ñóùåñòâåííî íèæå àíàëîãè÷íûõ ïîêàçàòåëåé â êîíòðîëå (òàáë. 1). Ïðè èììóíèçàöèè â êîíöå êóðñîâîãî ââåäåíèÿ ÏÄ ïîëó÷åíû àíàëîãè÷íûå ðåçóëüòàòû (òàáë. 1). Íè ÏÀÒ-ÈÔÍ, íè ÏÄ ñóùåñòâåííî íå âëèÿëè íà âûðàæåííîñòü ðåàêöèè ÃÇÒ: èíäåêñ ðåàêöèè ñîñòàâèë 28.86±2.44 è 23.83±1.84% ñîîòâåòñòâåííî ïðîòèâ 26.10±2.14% â êîíòðîëå. ñà ââåäåíèÿ ÏÀÒ-ÈÔÍ èëè ÏÄÂ, äîçà ÝÁ â ýòîì ñëó÷àå ñîñòàâëÿëà 107 êëåòîê/ìûøü ïîäêîæíî â îáúåìå 0.1 ìë, ðàçðåøàþùóþ äîçó ÝÁ (108 êëåòîê â îáúåìå 20 ìêë) ââîäèëè â ïîäóøå÷êó çàäíåé ëàïû íà 5-é äåíü ïîñëå ñåíñèáèëèçàöèè. Îäíîâðåìåííî â êîíòðàëàòåðàëüíóþ ëàïó ââîäèëè 0.9% NaCl â òîì æå îáúåìå. Èíòåíñèâíîñòü ðåàêöèè îöåíèâàëè ÷åðåç 24 ÷ ïî èíäåêñó ðåàêöèè, êîòîðûé âû÷èñëÿëè èíäèâèäóàëüíî äëÿ êàæäîãî æèâîòíîãî, âûðàæàÿ ðàçíîñòü ìåæäó ìàññîé ëàïû â îïûòå è â êîíòðîëå â ïðîöåíòàõ îò ïîñëåäíåé. Ôàãîöèòàðíóþ àêòèâíîñòü íåéòðîôèëîâ ïåðèòîíåàëüíîãî ýêññóäàòà îöåíèâàëè ÷åðåç 24 ÷ ïîñëå îêîí÷àíèÿ 10-äíåâíîãî êóðñà ââåäåíèÿ ÏÀÒ-ÈÔÍ èëè ÏÄ ïî ñïîñîáíîñòè ýòèõ êëåòîê ïîãëîùàòü ñóòî÷íóþ êóëüòóðó S. aureus, øòàìì 209 (ïîëó÷åí ñ êàôåäðû ìèêðîáèîëîãèè Ñèáèðñêîãî ãîñóäàðñòâåííîãî ìåäèöèíñêîãî óíèâåðñèòåòà), êîíöåíòðàöèÿ âçâåñè ìèêðîáîâ — 108 êëåòîê/ìë; ó÷èòûâàëè ïðîöåíò íåéòðîôèëîâ, ïîãëîòèâøèõ ìèêðîáû (ôàãîöèòàðíûé èíäåêñ — ÔÈ), è ñðåäíåå ÷èñëî ñòàôèëîêîêêîâ, ïîãëîùåííîå îäíîé êëåòêîé (ôàãîöèòàðíîå ÷èñëî — Ô×) [3]. Ïðè ñòàòèñòè÷åñêîé îáðàáîòêå ïðèìåíÿëè ïàêåò ïðîãðàìì “Statgraphics 3.0” ñ ïðåäâàðèòåëüíîé îöåíêîé íîðìàëüíîñòè ðàñïðåäåëåíèÿ, èñïîëüçîâàëè t êðèòåðèé Ñòüþäåíòà. ÐÅÇÓËÜÒÀÒÛ ÈÑÑËÅÄÎÂÀÍÈß Êàê “÷èñòàÿ” èììóíèçàöèÿ ÝÁ, òàê è èíúåêöèÿ àíòèãåíà â êîíöå 10-äíåâíîãî êóðñîâîãî ââåäåíèÿ ÏÀÒ-ÈÔÍ èëè ÏÄ ïðèâîäèëè ê ñíèæåíèþ óðîâíÿ ëåéêîöèòîâ â ïåðèôåðè÷åñêîé êðîâè ìûøåé ïî ñðàâíåíèþ ñ ôîíîì (òàáë. 1). Òàáëèöà 1. Âëèÿíèå ÏÀÒ-ÈÔÍ íà ãóìîðàëüíûé èììóííûé îòâåò ìûøåé ëèíèè ÑÂÀ/CaLac (M±m) Èììóíèçàöèÿ ÝÁ Ïîêàçàòåëü Èíòàêòíûå 9 Общее количество лейкоцитов, 10 /л 12.95±0.70 êîíòðîëü +ÏÄ 10.00±0.57* +ÏÀÒ-ÈÔÍ 7.45±0.48* 10.10±0.74* о 6 Общая клеточность, 10 клеток тимуса 107.75±9.10 67.20±16.20 95.00±6.39 88.20±11.22 селезенки 155.50±2.53 110.20±10.94* 139.60±3.00* 123.60±13.53 Массовый индекс тимуса 1.75±0.13 1.46±0.09 2.30±0.24 1.80±0.18 селезенки 3.70±0.09 3.03±0.19* 3.09±0.25 3.33±0.20 4.18±0.31 6.42±0.63* 4.99±0.39* 4.19±0.57+++ 2.70±0.24 5.84±0.13* 3.56±0.21* 3.36±0.16*+ 0 9.00±0.37 6.20±1.24 4.25±0.63++ АОК, 10 6 % Титр антител, log2 Примечание. Здесь и в табл. 2: *различия с интактными достоверны; +p=0.000002, контролем, оp=0.02 по сравнению с группой ПДВ. ++ p≤0.0001, +++ p=0.03 по сравнению с Бюллетень экспериментальной биологии и медицины, 2002, Приложение № 4 78 Òàáëèöà 2. Âëèÿíèå ÏÀÒ-ÈÔÍ íà ôàãîöèòàðíóþ àêòèâíîñòü íåéòðîôèëîâ ïåðèòîíåàëüíîãî ýêññóäàòà ìûøåé ÑÂÀ/CaLac (M±m) Ïîêàçàòåëü Èíòàêòíûå ÏÄ ÏÀÒ-ÈÔÍ Фагоцитарный индекс, % 23.60±3.84 11.40±2.14* 51.20±3.98*++ Фагоцитарное число 4.06±0.31 6.18±0.80 7.42±0.45* Êóðñ ÏÀÒ-ÈÔÍ ñóùåñòâåííî ñòèìóëèðîâàë ôàãîöèòîç (òàáë. 2). ÏÄ íå îêàçûâàëà ñòèìóëèðóþùåãî âëèÿíèÿ íà ôàãîöèòàðíóþ àêòèâíîñòü íåéòðîôèëîâ, áîëåå òîãî, ïðîöåíò êëåòîê, ñïîñîáíûõ ïîãëîùàòü ñòàôèëîêîêêè, áûë ñóùåñòâåííî íèæå, ÷åì ó èíòàêòíûõ æèâîòíûõ; ôàãîöèòàðíîå ÷èñëî â ãðóïïàõ ÏÄ è ÏÀÒ-ÈÔÍ çíà÷èìî íå ðàçëè÷àëîñü (òàáë. 2). Íàëè÷èå íàïðàâëåííîé ôàðìàêîëîãè÷åñêîé (èììóíîòðîïíîé) àêòèâíîñòè ó ÏÄÂ, áåçóñëîâíî, çàñëóæèâàåò îòäåëüíîãî èçó÷åíèÿ. Òàêèì îáðàçîì, èññëåäîâàíèå âîçìîæíîãî èììóíîòðîïíîãî äåéñòâèÿ ñâåðõìàëûõ äîç àíòèèäèîòèïè÷åñêèõ àíòèòåë ê ÈÔÍ-γ ÷åëîâåêà ïîêàçàëî, ÷òî ïðè ââåäåíèè per os ìûøàì ëèíèè ÑÂÀ/CaLac â èçó÷åííûõ äîçèðîâêàõ è â âûáðàííûõ óñëîâèÿõ ýêñïåðèìåíòà ïðåïàðàò íå îáëàäàåò ñïîñîáíîñòüþ ñòèìóëèðîâàòü ãóìîðàëüíûé îòâåò ïðè èììóíèçàöèè òèìóñçàâèñèìûì àíòèãåíîì è ïðàêòè÷åñêè íå âëèÿåò íà ôóíêöèîíèðîâàíèå Ò-êëåòîê-ýôôåêòîðîâ ïðè ðàçâèòèè ðåàêöèè ÃÇÒ â îòâåò íà ñåíñèáèëèçàöèþ ÝÁ. Òåì íå ìåíåå ÏÀÒ-ÈÔÍ ñïîñîáíû ñóùåñòâåííî ïîâûøàòü ôàãîöèòàðíóþ àêòèâíîñòü íåéòðîôèëîâ ïåðèòîíåàëüíîãî ýêññóäàòà â îñíîâíîì çà ñ÷åò óâåëè÷åíèÿ ïðîöåíòà àêòèâíûõ ôàãîöèòîâ. Ïðèíèìàÿ âî âíèìàíèå òîò ôàêò, ÷òî èììóíîòðîïíûå ýôôåêòû ÏÀÒ-ÈÔÍ ðåàëèçóþòñÿ âî ìíîãîì çà ñ÷åò èíäóêöèè ýíäîãåííîãî ÈÔÍ-γ [7], ìîæíî ñäåëàòü âûâîä, ÷òî ïîòåíöèðîâàííûå àíòèèäèîòèïè÷åñêèå àíòèòåëà ê ÈÔÍ-γ íå îáëàäàþò ñïîñîáíîñòüþ èíäóöèðîâàòü âûðàáîòêó ýíäîãåííîãî ÈÔÍ-γ. ËÈÒÅÐÀÒÓÐÀ 1. Àãàôîíîâ Â.È., Áåëüñêàÿ Í.Â., Äàíèëåö Ì.Ã. è äð. // Áþë. ýêñïåð. áèîë. 2001. Ïðèë. 3. Ñ. 46-48. 2. Ãîëüäáåðã Å.Ä., Äûãàé À.Ì., Øàõîâ Â.Ï. Ìåòîäû êóëüòóðû òêàíè â ãåìàòîëîãèè. Òîìñê, 1992. 3. Ìåòîäè÷åñêèå óêàçàíèÿ ïî èçó÷åíèþ èììóíîòðîïíîé àêòèâíîñòè ôàðìàêîëîãè÷åñêèõ âåùåñòâ // Ðóêîâîäñòâî ïî ýêñïåðèìåíòàëüíîìó (äîêëèíè÷åñêîìó) èçó÷åíèþ íîâûõ ôàðìàêîëîãè÷åñêèõ âåùåñòâ. Ì., 2000. Ñ. 257-263. 4. Øåðñòîáîåâ Å.Þ., Ìàñíàÿ Í.Â., ×óðèí À.À. è äð. // Áþë. ýêñïåð. áèîë. 2001. Ïðèë. 3. Ñ. 37-39. 5. Ýïøòåéí Î.È. Íåéðîôèçèîëîãè÷åñêèå ìåõàíèçìû ôàðìàêîëîãè÷åñêèõ ýôôåêòîâ ïîòåíöèðîâàííûõ (“ãîìåîïàòèçèðîâàííûõ”) àíòèòåë ê ìîçãîñïåöèôè÷åñêîìó áåëêó S-100. Àâòîðåô. äèñ. ... êàíä. ìåä. íàóê. Òîìñê, 1999. 6. Ýïøòåéí Î.È., Áåëüñêèé Þ.Ï., Øåðñòîáîåâ Å.Þ. è äð. // Áþë. ýêñïåð. áèîë. 2001. Ïðèë. 3. Ñ. 34-36. 7. Ýïøòåéí Î.È., Æäàíîâ Â.Â., Ñòàâðîâà Ë.À. è äð. Ãåìîñòèìóëèðóþùèå ñâîéñòâà ñâåðõìàëûõ äîç àíòèòåë ê ýðèòðîïîýòèíó // Òàì æå. Ñ. 40-42. 8. Cunningham A.I. // Nature. 1965. Vol. 207. P. 4313.