Вибрионы Семейство Vibrionacae Рода: Vibrio, Aeromonas, Plesiomonas Aeromonas, Plesiomonas высоко патогенно для гидробионтов, у человека вызывают гастоэнтериты. Род Vibrio. Вид V. Cholerae Биовары: cholerae cholerae (classica) сholerae eltor O1 Вид V. cholerae (bengl) O139 Все это вызывает холеру у человека и являются патогенными только для человека . Вид V. parahaemoliticus, V. minicus, V. orientalis. Вызывают вибриозы которые могут протекать как гастроэнтероколит, раневая инфекция, отиты и сепсис. Общая характеристика. Изогнутая палочка в форме запятой, Г-, подвидная, имеет один жгутик, спор нет, капсул нет (искл. V. cholerae (bengl)), морфологически нестабильны – могут превращаться в нитевидные и шаровидные формы, аэробы (факультативные анаэробы). Растут на простых питательных средах (очень быстро). Элективные среды: 1% пептонная вода, щелочной агар рН 8-9. ТСВS (тиосульфат-цитрат-бром-сахарозный агар), среды с телуидом. На жидкой среде пленка, на твердой мелкие колонии. Диапазон температуры +14 - +40. Биохимические свойства используются для родовой идентификации: Оксидаза + Глюкоза окисление + ферментация + Индол + Сероводород Лизин/орнитин декарбоксилазная активность + Аргинин декарбоксилазная активность Антигенные свойства. Связаны с наличием о-соматического антигена и Н-антигена. Для идентификации большое значение имеет значение О-антигена по которому внутри рода Vibrio и вида V. Cholerae различают от 1 до 139. О антиген термотстабилен. Возбудители холеры (classica, сholerae eltor) относятся к О1 группе и bengl О139. Другие вибрионы относятся ко 2,3,5,10 и т.д. группам т.е. non О1 или НАГвибрионы (не агглютинирующие О1 и О139 сыворотке) они не возбудители холеры. Н-антиген общий, термолябильный и большого значения для идентификации вибрионов не имеет. О-антиген липополисахарид белковой приводы и имеет в своем составе три фракции А, Б и С и в зависимости от сочетания фракций V. Cholerae classica и V. Cholerae сholerae eltor делятся на три серовара, между собой они биовары. Classica inaba (АС) agava (AB) hikojima (ABC) Eltor: inaba (АС) agava (AB) hikojima (ABC) Определение скеровара возбудителя имеет диагностическое значение если идентифицируется (в Индии) один серовар, а в Шри-Ланка тоже возбудитель, но другой серовар, то они друг с другом не связан. Серовары в bengae не выявляются. История открытий возбудителей. Первый возбудитель холеры – палочка Коха (classica) открыта в 1882 году из органов больного, второй возбудитель сholerae eltor в 1902 году из организма паломника на станции Эльтор в Индонезии, роль как возбудителя установлена в 1961 году, до этого не считался возбудителем холеры. В этом году установлено начало седьмой пандемии холеры. Это было связано со сменой классического возбудителя на холеру эльтор. Третий возбудитель (bengl) был выделен в 1992 году в Бангладеш. Он стал распространятся в юго-восточной Азии, индию. В 1993 году завезен в Россию в Ростов-на-Дону. Восьмая пандемия начавшись в 93 будет связана с этим возбудитетелем. Сейчас все случаи холеры связаны с Eltor, но его удельный вес уменьшается на Bengal. То есть возбудитель холеры постоянно меняется для него черезвычайно важна изменчивость морфологическая, патогенная. Поэтому среди возбудителей есть высоко патогенные штаммы (вызывают пандемии) и низко патогенные (вызывают легкие случаи). Факторы патогенности у возбудителей. Высокая подвижность, способность пробуравливать слизистый слой и адросбироваться на эпителиоцитов тонкого кишечника с помощью факторов адгезии и колонизации, продукция ферментов муциназа, нейроамидаза, лецитиназы, протеиназы. Главный фактор патогенности продукция экзотоксина – холерогена уникального по свойствам. Другие токсины энторотокиснов, эндотоксинов тоже обеспечивают токсические свойства. Холероген продуцируется специальным геном в сосаве генома бактериальной клетки – Vct-ген. Управляет этими генами два регуляторных гена: tox-ген и r-ген в структуре которых могут быть мутации, рекомбинации, что отражается на функции гена и делает организм возбудителем и способен вызывать эпидемии. Если регуляторные гены подверглись другим воздействием и что то отщепнулость от гена, то он не будет работать «молчать». Таким образом есть высокотоксигенные возбудители и низкотокисгенные. Обнаружить холероген у возбудителя можно методами: Биологический – проба на кроликах и котятах. Заражают → извлекают кишечник → смотрят на изменения. Иммуноферментный анализ Реакции непрямой гемагглютинации Обнаружение холерогена на клеточной культуре ткани – повреждает клетки. Генетический метод – ищут Vct-ген методом ПЦР или ДНК-зондов. Патогенез холеры. Источник: больной человек, бактерионоситель т.к. животные не болеют Пути попадания: через рот Пути передачи: водный, пищевой, контактно-бытовой Инфицирующая доза: 109-1011 (содержится в 1 г фекалий) т.е. надо несколько дней для заражения. Путь инфекции: желудок (кислая среда губительна - может дальше не резвится, если низкая кислотность, с водой или натощак барьер не срабатывает) → тонкий кишечник (щелочная среда – ему хорошо) → адсорбируется на ворсинка тонкого кишечника и начинает размножаться и выделяет все факторы патогенности, особенно холероген. Холероген определяет типические признаки холеры т.к. это специфический экзотоксин. Холероген белок хорошо изучен, состоит из двух фракций (А и В). А – истинный токсин, а В не обладает токсическими свойствами она распознает рецепторы эпителия тонкой кишки, формирует поры в составе мембраны эпителиоцита и отвечает за проникновения А фракции. Затем А фракция имеет мишень аденилатциклазу (фермент отвечающий за переход АТФ в цАМФ) → накопление цАМФ → клетка теряет воду, соли Na, К бикарбонаты в просвет кишечника → нарушение водно-солевого баланса организма. Человек теряет много внутриклеточной жидкости, солей → жидкий стул (рисовый отвар), рвота → дегидратация (за сутки несколько литров, похудеть на 10 кг). Объем порянной жидкости и веса определяет степень дегидротации: 1 степень - 3% 2 степень - 5% (холерный гастроэнтерит) 3 степень – 10% 4 степень – 15% (стадия алгиды) Основное лечение: срочная нормализация водно-солевого баланса (струйно, капельно вводят растворы). В стуле нет лейкоцитов (нет воспаления), температура ниже нормы. Микробиологическая диагностика холеры. Основной метод диагностики: бактериологический т.к. входит в группу особенно опасных. Исследованию подлежат: фекалии, промывные воды кишечника, рвотные массы, секционный материал тонкого кишечника, желчного пузыря. Вода, пищевые продукты, смывы с овощей и фруктов, смывы с рук персонала, забор материала делается специально-обученным персоналом и специальными методами защиты. Исследования проводится в лабораториях спец. Назначния 1 час: засевания на слективные среды: 1% пептонная вода, щелочной агар, TCBS → термостат 370 – 3-4 часа →пересев на вторую ПВ, ЩА → 2 часа. Экспресс методы диагностики холеры: Исследование материала в реакции иммунофлуоресценции с О1холерной сывороткой или О139-й(первичного или вторичного). Постановка реакции аглютинации в препарате висячая капля + Иммобилизация холерного вибриона: висячая капля + О 1 сыворотка → прекращение подвижности. 12 часов: учет роста, отвивка подозрительной колонии на косой агар Клиглера, щелочного агара для выделения возбудителя. 12 - 24 часа: рост чистой культуры и идентификация культуры. Идентификация: окраска по Грамму, изучение подвижности и установления принадлежности к роду по биотестам (оксидаза, ферментация глюкозы, проба на индол, сероводород). Дифференцировка: возбудителя от холероподобных вибриов по тестам: Реакция агглютинации по 1 и 139 сыворотке, отношение к триаде сахаров Хейберга (арабиноза -, сахароза +, манноза +, у подобных все +), отношение к фагам. 24-36 часов: устанавливается биологический вариант возбудителя (биовар): Лизабельность Рост на агаре с полимексином В Агглютинация эритроцитов курицы Реакция фогес-проскауера Холерный вибрион Эльтор Лизируется с 4 типом Мукерджи Не растет Не аглютинирует Лизируется фагом Эльтор2 Растет Аглютинирует Отрицательная положительная Установление серовара с помощью сывороток: inaba, agava. Серологический метод: определение парных сывороткам больного специфических антител в реакции пассивной гемагглютинации. Профилактика. Общаяя: выявление, изоляция, исследование воды, устройство туалетов, сан-просвет работа. Специфическая: холерная моновакцина – убитая взвесь возбудителей, холерная вакцина+анатоксин – приготовлена из холерогена, холерные бактериофаги (через рот), химиопрофилактика – терациклином, фуразалидолом.