ID E-2500 Вирус простого герпеса 1 и 2 типов IgM (ВПГ1-2 IgM) Набор реагентов для ИФА для определения антител к ВПГ 1 и 2 типов IgM в сыворотке человека. Только для in vitro диагностики. Хранение и стабильность: Все реагенты необходимо хранить при 2 – 8˚С. Не используйте компоненты набора по истечении срока годности, указанного на этикетке. Не смешивайте компоненты из наборов разных серий в одном исследовании. Состав набора: Концентрат промывочного буфера Микропланшет 1 х 100 мл Концентрат; разведите содержимое флакона до конечного объёма 1000 мл; Хранение: до 6 мес. при 2-8˚С 1 х 96 лунок Субстрат Раствор для разведения 1 х 12 мл 1 х 100 мл STOPSOLN CONJUGA TE Стоп-раствор 1 х 15 мл Конъюгат 1 х 12 мл CONTROL CONTROL ± CONTROL + Отрицательный контроль Cut-off контроль 1 х 2 мл 12 стрипов, по 8 лунок, разборный, с иммобилизованным анти ВПГ 1&2 IgM антителами . Готов к использованию; содержит ТМБ Готов к использованию; содержит белковый раствор с 0,09% азида натрия в качестве консерванта Готов к использованию, содержит 0,25 М серной кислоты Готов к использованию. анти- ВПГ 1&2 антиген человека меченный пероксидазой, в растворе фосфатного буфера с 0.02% Proclin Готов к использованию 1 х 2 мл Готов к использованию Положительный контроль 1 х 2 мл Готов к использованию ID E-0030 WASHCONC 10× ID E-2531 IGM ID E-0055 ID E-0060 SUBSTRAT ID E-0080 ID E-2540 ID E-2551 ID E-2552 ID E-2553 DILUENT НЕОБХОДИМОЕ ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ, НЕ ВХОДЯЩИЕ В СОСТАВ НАБОРА - ИФА анализатор, измеряющий ОП на длине волны 450 нм. - Дистиллированная или деионизированная вода - Откалиброванные прецизионные микропипетки на 10 мкл, 100 мкл и 1 мл - Полуавтоматические пипетки на 100 мкл - Вошер - Абсорбирующий материал - Водяная баня с контролируемой температурой (37˚С) или аналогичное устройство (инкубатор) Хранение и стабильность образцов: Для анализа должна использоваться сыворотка. При венепункции должны быть соблюдены обычные меры предосторожности. Образцы могут храниться при температуре 2-8 ° С в течение 2 дней. При более длительном периоде хранения – при - 20° С. Не используйте гемолизированные или липемические образцы. Избегайте повторных циклов замораживания/оттаивания образцов. ПОДГОТОВКА К АНАЛИЗУ Глубокое понимание этого раздела необходимое для успешного использования продукта. Надежные результаты будут получены только при точном следовании инструкции. - Перед использованием приведите все реагенты и образцы до комнатной температуры (~ 25 ° C) и тщательно аккуратно перемешайте. - Не смешивайте компоненты из разных наборов и партий в одном исследовании - Не используйте компоненты с истекшим сроком годности, указанного на этикетке - Неполное промывание отрицательно сказывается на точности результата анализа - Для минимизации потенциальных ошибок анализа в связи с изменением времени инкубации субстрата, следует позаботиться, чтобы стоп-раствор в лунки добавлялся в той же последовательности и с той скоростью, что и раствор ТМБ. - Избегайте бактериального загрязнения реагентов, промывочного буфера и раствора для разведения. Избегайте загрязнения раствора ТМВ. Используйте чистые одноразовые наконечники пипетки для каждого реагента. Избегайте пипетки с металлическими частями. - Контейнеры и полуавтоматические наконечники для пипеток, используемые для конъюгата и ТМБ могут быть повторно использованы при условии, что они тщательно промыты деионизированной / дистиллированной водой и высушены до и после каждого использования. - Ферменты, используемые в качестве метки, инактивируются кислородом и очень чувствительны к микробной контаминации, азиду натрия, хлорноватистой кислоте и ароматическим хлоруглеводородам, которые часто встречаются в лабораторном оборудовании и воде. - Используйте воду высокого качества. - Избегайте воздействия на реагенты избыточного тепла или солнечного света во время хранения и инкубации. Подготовка реагентов Промывочный раствор Развести 100 мл промывочного концентрата дистиллированной водой до конечного объема 1000 мл. Хранение: до 6 месяцев при 2-8 ° C. Микротитровальные стрипы Извлечь из упаковки стрипы, которые будут использоваться, и поместить неиспользованные в фольгированный пакет с силикагелем, удалить воздух и запечатать. Процедура анализа Прогреть все образцы и реагенты до комнатной температуры (20-25 °С). Образцы сыворотки и калибраторы исследуют в дублях. 1. Разбавьте образцы сыворотки 1:101 (10 мкл сыворотки в 1 мл раствора для разведения) 2. Добавьте 100 мкл каждого разведенного образца сыворотки и готового к использованию калибратора в соответствующие лунки. Оставьте одну лунку пустой, будет добавляться ТМБ субстрат на этапе инкубации субстрата. 3. Инкубируйте в течение 45 минут при 37 °С Удалите жидкость и промойте каждую лунку четыре (4) раза в течение 30 секунд промывочным раствором при помощи автоматического микропланшетного вошера или вручную с помощью дозатора. Переверните планшет и прижмите к абсорбирующей бумаге до сухого пятна. Рекомендуется использование автоматического микропланшетного вошера. Если микропланшетный вошер недоступен, то (а) полностью удалите жидкость из каждой лунки, (б) добавьте 300 мкл промывочного раствора в каждую лунку, и (в) повторить этапы (а) и (б) в четыре раза. 4. Добавьте по 100 мкл конъюгата в каждую лунку. 5. Инкубируйте в течение 45 минут при 37 °С. Удалите жидкость и промойте каждую лунку четыре (4) раза в течение 30 секунд промывочным раствором при помощи автоматического микропланшетного вошера или вручную с помощью дозатора. Переверните планшет и прижмите к абсорбирующей бумаге до сухого пятна. 6. Добавить 100 мкл субстрата в каждую лунку с использованием дозатора 7. Инкубировать 15 минут при комнатной температуре (20-25 ° С). Избегайте воздействия прямых солнечных лучей. 8. Добавить 100 мкл Стоп-раствора в каждую лунку с использованием дозатора. 9. Определить оптическую плотность раствора в лунках в течении 30 минут при 450 нм. Если доступно, то определите также ОП при 600 или 620 нм. Расчет результатов: Определите среднюю ОП для каждого контроля и неизвестных. Качественный результат. Если ОП образца выше, чем Cut-Off, то анализ на наличии специфического IgM положительный. Рассчитайте соотношение между средним значением ОП образца и Cut-Off. Образец считают: Положительным: если коэффициент > 1,1. Сомнительным: если + / - 10% Cut-Off. Отрицательным: если коэффициент < 0,9. Если результат сомнительный, то повторите анализ. Если он остается сомнительным, то необходимо исследовать новые образцы сыворотки. Ограничения: - Сыворотки , полученные при ранней стадии инфекции, когда присутствуют только IgG антитела, могут быть отрицательными. - Оценивайте результат анализа в сочетании с другими доступными клиническими и диагностическими данными - Повторное замораживание и оттаивание реагентов и образцов. - Не используйте макроскопически гемолизированные, желтушные или липемические образцы. - Не используйте инактивированную теплом сыворотку. Контроль качества: Вычтите значение пустой лунки из всех остальных определенных значений. Значение ОП контроля Cut-Off должно быть не менее 0,2. Значение ОП Положительного контроля должно быть не менее чем в 1,5 раза больше, чем Cut-Off контроля.