Парвовирус ИФА

Инструкция.
Иммуноферментный тест для определения антител к собачьему парвовирусу в пробах сыворотки собаки
ТЕХНИЧЕСКИЕ ОСНОВЫ
Тест основан на ферментном иммунологическом анализе.
Фиксируем антиген на твердой опоре (микролунки из полистирола). При наличии специфических антител
против вируса в сыворотке для пробы, они соединяются с антигеном, адсорбированным на пластине. После
промывания с целью удаления всего материала, не связанного с пластиной, можно определить наличие
иммуноглобулинов собаки, используя специфический конъюгат пероксидазы.
После добавления субстрата произойдет колориметрическая реакция, которую можно измерить
спектрофотометром.
В данном случае наличие цвета означает наличие антител против вируса, и наоборот, отсутствие цвета
говорит об отсутствии антител к собачьему парвовирусу.
RO-17\06\08

























СОДЕРЖАНИЕ КОМПЛЕКТА
В комплект входит:
1 пластина, 12 стрипов по 8 лунок в каждой
1 ампула с 3,5 мл позитивным контролем, в готовом виде.
1 ампула с 3,5 мл негативным контролем, в готовом виде.
1 ампула с 350 µл конъюгатаI (пероксидаза с маркировкой Mab) 100Х.
1 бутылка (100 мл) промывочного раствора, концентрированного х10.
1 бутылка с разбавителем (125 мл)
1 бутылка с 15 мл ТМБ-субстрата.
1 бутылка с 15 мл стоп-раствора (серная кислота)
МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ И ПРЕДУПРЕЖДЕНИЯ ДЛЯ ПОЛЬЗОВАТЕЛЯ
Внимательно изучить инструкцию по применению.
Перед использованием выдержать все реагенты при комнатной температуре (20°С - 25°С)
Не перепутать реагенты или инструкции из разных комплектов или наборов.
Избегать загрязнения реагентов комплекта.
Не использовать компоненты после истечения их срока годности.
В помещении для работы с образцами либо комплектом запрещается есть, пить или курить.
Для каждой пробы использовать новую пипетку.
При каждом использовании комплекта систематически проводить тестирование позитивной позитивного и
негативного контроля.
Субстрат очень чувствителен к свету и загрязнениям.
Стоп-раствор - сильная кислота, обращаться с осторожностью.
Хранение реагентов: комплект необходимо хранить при +4°С.
ИНФОРМАЦИЯ ПО ЭТАПАМ ПРОМЫВКИ
Этапы промывки необходимо осуществлять, используя автоматическую моющую машину либо многоканальное
капельно-дозировочное устройство, позволяющее дозировать 300 µл в каждую лунку.
Промывку необходимо проводить после выдержки следующим образом:
Опорожнить содержимое пластины, быстро перевернув пластину во избежание возможного смешения
содержимого разных лунок
Дозировать 300 µл промывочного раствора в каждую лунку.
Аккуратно встряхнуть пластину, избегая попадания из одной лунки в другую.
Вылить жидкость из пластины и энергично постучать по лункам для удаления промывочного буфера.
Повторить процедуру столько раз, сколько указано в инструкции к комплекту.
Перед опорожнением содержимого пластины на последнем этапе промывки убедитесь, что следующий
реагент, который нужно будет добавить на пластину, находится в готовом виде.
Не нужно просушивать лунки дольше необходимого времени перед дозированием реагента на следующем
этапе.
После последнего этапа промывки промакнуть пустые перевернутые лунки чистыми бумажными полотенцами
либо абсорбирующей бумагой для удаления остатка промывочного буфера.
ПОДГОТОВКА ПРОБ
Перед тестированием необходимо разбавить пробы сыворотки в разбавителе в соотношении 1 : 100. (5 µл
сыворотки в 495 µл разбавителя).
ПОДГОТОВКА РЕАГЕНТОВ
Промывочный буферный раствор:
Разбавить одну часть концентрированного промывочного буфера, поставляемого с комплектом, в 9 частях
дистиллированной либо деионизованной воды.
После разбавления промывочный буферный раствор нужно хранить при +4°С.
Позитивные и негативные контроли:
Контроли готовы к использованию.
Приготовление конъюгата: готовить непосредственно перед применением
Приготовить раствор требуемого конъюгата с разбавителем 1/100 (например 10 µлконъюгатаI в 1 мл
разбавителя для проб и конъюгата I более чем достаточно для полосы с 8 лунками). Перед использованием
раствор хорошо встряхнуть. Каждый раз готовить только необходимое количество, потому что оставшийся
объем подлежит утилизации.








ПОРЯДОК ПРОВЕДЕНИЯ ТЕСТА
Перед началом проведения теста выдержать все реагенты, пластины, полосы либо микролунки, которые
понадобятся, в условиях комнатной температуры минимум на 60 минут.
Добавить в лунки 100 µл позитивного контроля и 100 µл негативного контроля и 100 µл каждой разбавленной
пробы. Рекомендуется работать с пробами в двойных лунках. Герметично закрыть пластину и выдерживать 10
минут при комнатной температуре.
Промыть 3 раза ранее описанным способом.
Добавить 100 µл конъюгата, подготовленного в соответствии с ранее приведенными указаниями, в каждую
лунку. Герметично закрыть пластину и выдерживать 10 минут при комнатной температуре.
Промыть 4 раза.
Добавить 100 µл раствора субстрата в каждую лунку. Герметично закрыть пластину и выдерживать 5 минут
при комнатной температуре.
Добавить 100 µл стоп-раствора в каждую лунку.
Измерить спектральную поглощательную способность каждой лунки с помощью спектрофотометра с длиной
волны 450 нм.
СЧИТЫВАНИЕ И РАСШИФРОВКА РЕЗУЛЬТАТОВ
Считывание значений спектральной поглощательной способности необходимо проводить при длине волны 450
нм.
Комплект Валидизация
Тест считается действительным, если:
Результаты позитивного контроля > 1,2
Результаты негативного контроля < 0,15
Расшифровка результатов
Определяемое значение при отсечке
Отсечка = 0,2 х результаты наблюдений за позитивной регуляцией
Отрицательные пробы на CPV: пробы с результатами наблюдений ниже, чем отрицательная отсечка
Положительные пробы на CPV : пробы с результатами наблюдений выше, чем значение положительной
отсечки.
При работе с пробами в двойных лунках значение результатов наблюдений за пробой будет средним
значением по обеим лункам.