MS E-5200 Альдостерон Набор реагентов для ИФА для прямого

MS E-5200 Альдостерон
Набор реагентов для ИФА для прямого количественного определения альдостерона в сыворотке,
плазме и моче человека.
Только для in-vitro диагностики.
1. Дополнительные необходимые материалы и оборудование, не входящие в комплект:
- прецизионные микропипетки с одноразовыми наконечниками на 50, 100, 150 и 300 мкл
- дистиллированная или деионизированная вода
- микропланшетный шейкер
- микропланшетный вошер (рекомендуется)
- Микропланшетный анализатор с фильтром, установленным на длине 450 нм и пределом ОП 3.0
или больше
- Разбавитель мочи – требуется, если исследуются образцы мочи. Используется для разбавления
мочи перед исследованием. Должен быть заказан отдельно (MS E-5241, 20 мл)
2. Реагенты
Храните реагенты при температуре 2 - 8 ° C до истечения срока годности
MS E-5231 Микропланшет
1
Кроличьи анти-Альдостерона антитела
покрытый антителами
нанесенные на микролуночный планшет –
разборный (12 х 8), готов к использованию.
MS E-5240 Концентрированный
1 х 300
Альдостерон – пероксидаза хрена (HRP)
конъюгат х 50
мкл
концентрированный конъюгат, перед
применением развести буфером для анализа в
соотношении 1 + 50
MS E-5213 Буфер для анализа
1 х 15 мл 1 флакон, содержащий белковый основной
раствор с консервантом не содержащим ртуть готов к использованию
AA E-0030 Концентрат
1 х 50 мл Концентрат; одна бутыль, содержащая буфер с не
промывочного буфера
ионными детергентами и консервантом, не
х10
содержащим ртуть. Перед применением развести
дистиллированной водой в соотношении 1 + 9.
AA E-0055 Субстрат
1 х 12 мл Готов к использованию, содержит раствор
тетраметилбензидина (ТМБ) и перекись водорода
AA E-0080 Стоп-раствор
1 х 15 мл Готов к использованию, содержит 1 М H2SO4
MS E-5201 Стандарт A
1 х 2 мл
0 стандарт. Готов к использованию
MS E-5202 Стандарт B
1 х 0,6 мл Готов к использованию
MS E-5203 Стандарт C
1 х 0,6 мл Готов к использованию
MS E-5204 Стандарт D
1 х 0,6 мл Готов к использованию
MS E-5205 Стандарт E
1 х 0,6 мл Готов к использованию
MS E-5206 Стандарт F
1 х 0,6 мл Готов к использованию
MS E-5251 Контроль
1 х 0,6 мл Готов к использованию.
Точные концентрации стандартов указана на этикетке флаконов. После вскрытия стандарты и
аликвоты должны быть использованы в течение 14 дней или храниться в замороженном виде.
Избегайте нескольких циклов замораживания и оттаивания.
Взятие и хранение проб.
Сыворотка:
Необходимо около 0,2 мл сыворотки для исследования в дублях. Соберите 4-5 мл крови в
соответствующую пробирку и дождитесь образования сгустка. Центрифугируйте его и осторожно
снимите слой сыворотки. Хранить при температуре 4 ° С в течение 24 часов или при -10 ° C или
ниже, если анализы должны быть сделаны позже.
Плазма:
Необходимо около 0,2 мл плазмы для исследования в дублях. Соберите 4-5 мл крови в пробирку
с ЭДТА . Хранить при температуре 4 ° С в течение 24 часов или при -10 ° C или ниже, если анализы
должны быть сделаны позже.
Моча:
Необходимо около 0,2 мл мочи для исследования в дублях. Соберите суточную мочу в
специальные контейнеры. Хранить при температуре 4 ° С в течение 24 часов или при -10 ° C или
ниже, если анализы должны быть сделаны позже.
Образцы тканей человека являются потенциально опасным биологическим материалом.
Принимайте соответствующие меры предосторожности.
3. Процедура анализа
Перед использованием все реагенты должны достичь комнатной температуры. Стандарты,
контроли и образцы проб должны быть исследованы в дублях. Как только процедура начата, все
этапы должны быть завершены без перерыва.
Приготовление рабочего раствора конъюгата:
Разведите концентрированный раствор конъюгата буфером для анализа в соотношении 1+50
непосредственно перед использованием. (например 40 мкл концентрата в 2 мл буфера для
анализа). Если будет использован весь планшет, то разведите 240 мкл концентрата в 12 мл
буфера для анализа. Не используйте то, что осталось.
Приготовление рабочего промывочного раствора:
Разведите концентрат дистиллированной или деионизированной водой в соотношении 1+9
перед применением. Если будет использован весь планшет для анализа, то разведите 50 мл
концентрата промывочного буфера и 450 мл дистиллированной воды.
1. Извлеките необходимое количество стрипов для исследования калибраторов, контроля и
сыворотки в дублях. Неиспользованные поместите обратно, герметично закупорьте и
поместите в холодильник.
2. Добавьте 50 мкл каждого стандарта, контроля и исследуемых образцов сыворотки в
соответствующие лунки в дублях.
3. Добавьте 100 мкл рабочего раствора конъюгата в каждую лунку (мы рекомендуем
использовать многоканальную пипетку)
4. Инкубируйте в шейкере при 200 об./мин. в течение 1 часа при комнатной температуре
5. Промойте каждую лунку по 3 раза: внося по 300 мкл раствора промывочного буфера,
удаляя остатки влаги абсорбирующей бумагой до сухого пятна (мы рекомендуем
использовать вошер).
6. Добавьте 150 мкл ТМБ-субстрата в каждую лунку через заданные интервалы времени
7. Инкубируйте в шейкере 15-20 минут при комнатной температуре (или до того момента,
когда Калибратор А станет темно-синего цвета, достигнув необходимой ОП)
8. Добавьте 50 мкл Стоп-раствора в каждую лунку через те же интервалы, что и в этапе 6.
9. Считайте результат на микропланшетном анализаторе при 450 нм в течении 20 минут
после добавления стоп-раствора.
4. Расчет результатов.
1. рассчитайте среднюю оптическую плотность каждого стандарта в дублях
2. рассчитайте среднюю оптическую плотность каждого неизвестного в дублях.
3. Нарисуйте калибровочную кривую на логарифмической бумаге со средней оптической
плотности на Y-оси и концентрацией стандарта на X-оси
4. Рассчитайте значение неизвестных при помощи калибровочной кривой.
5. Данные о концентрации в моче, считанные с калибровочной кривой, умножьте на
коэффициент 50. Затем, умножьте на объём суточной мочи (в мл), для того чтобы
получить результат пг/сут. Наконец, разделите значение пг/сут. на 1х10 6, для получения
результата мкг/сут.
6. Если образец сыворотки или плазмы получается более 1000 пг / мл, то разведите его
Калибратором А не больше, чем 1:8. Полученный результат следует умножить на фактор
(коэффициент) разведения. Если образец мочи более 1000 пг/мл, то разведите его
разбавителем мочи в соотношении не более 1:2 (от первоначального разведения 1:50).
Полученный результат следует умножить на фактор (коэффициент) разведения.
5. Типичная таблица данных (не используйте для расчета)
Стандарт
ОП 1
ОП 2
Средняя ОП
A
B
C
D
E
F
2.267
2.102
1.848
1.210
0.763
0.542
2.197
2.037
1.836
1.190
0.788
0.550
2.232
2.070
1.842
1.200
0.776
0.549
Концентрация
(пг/мл)
0
15
50
200
500
1000
Типичная калибровочная кривая (не используйте для расчета)
см. оригинал инструкции.
Чувствительность: 10 пг / мл
Ожидаемые нормальные значения:
Настоятельно рекомендуется, чтобы каждая лаборатория определяла свои границы нормальных и
аномальных значений.
Альдостерон
Моча (нормальное потребление соли)
5-19 мкг/сутки
Сыворотка (стоя, нормальное потребление соли)
40-310 пг / мл
Сыворотка (лежа, нормальное потребление соли)
10-160 пг / мл