ÓÄÊ: 546.-21:591.461.1/.2:616-092.4 ÐÎËÜ NO-ÑÈÍÒÀÇÛ Â ÑÒÈÌÓËßÖÈÈ ÎÏÈÀÒÍÛÕ ÐÅÖÅÏÒÎÐÎÂ È ÓÑÒÎÉ×ÈÂÎÑÒÈ ÏÎ×ÅÊ Ê ÎÊÑÈÄÀÒÈÂÍÎÌÓ ÑÒÐÅÑÑÓ Å. À. ÎÐËÎÂÀ, È. À. ÊÎÌÀÐÅÂÖÅÂÀ Ëóãàíñêèé ãîñóäàðñòâåííûé ìåäèöèíñêèé óíèâåðñèòåò, Óêðàèíà; e-mail: KVN@ñci.lg.ua Áóëî âñòàíîâëåíî, ùî ââåäåííÿ â îðãàí³çì äàëàðã³íó äî ôîðìóâàííÿ ãîñòðîãî íèðêîâîãî äåô³öèòó ïîïåðåäæຠ³íòåíñèô³êàö³þ ó íèðêîâ³é òêàíèí³ ïðîòåîë³çó, çá³ëüøåííÿ âì³ñòó NO2 òà NO3 ³ çíèæåííÿ àêòèâíîñò³ ñóïåðîêñèääèñìóòàçè. Àíòèîêñèäàíòíèé åôåêò àãîí³ñòà îï³àòíèõ ðåöåïòîð³â ïîâí³ñòþ ë³êâ³äóºòüñÿ çà ïîïåðåäíüî¿ ³íºêö³¿ ùóðàì àíòàãîí³ñòà íàëîêñîíà. Ââåäåííÿ ¿ì ³íã³á³òîðà ³íäóöèáåëüíî¿ NO-ñèíòàçè òàêîæ óñóâຠïîâí³ñòþ ïîçèòèâíèé åôåêò ñòèìóëÿö³¿ îï³àòíèõ ðåöåïòîð³â. Òàêèì ÷èíîì, ñòèìóëÿö³ÿ îñòàíí³õ ï³äâèùóº òîëåðàíòí³ñòü íèðîê äî îêñèäàòèâíîãî ñòðåñó âíàñë³äîê àêòèâàö³¿ NO-ñèíòàçè òà ñóïåðîêñèääèñìóòàçè. ñòðåñ. Ê ë þ ÷ î â ³ ñ ë î â à: äàëàðã³í, ñóïåðîêñèääèñìóòàçà, ïðîòåîë³ç, NO-ñèíòàçà, îêèñëþâàëüíèé Ï îâðåæäàþùèå ôàêòîðû âûçûâàþò óâåëè÷åíèå ñîäåðæàíèÿ â îðãàíèçìå àêòèâíûõ ôîðì êèñëîðîäà, íàðóøåíèå ðàâíîâåñèÿ ñèñòåìû àíòèîêñèäàíòûïðîîêñèäàíòû è àêòèâàöèþ ñâîáîäíîðàäèêàëüíîãî îêèñëåíèÿ, âñëåäñòâèå ÷åãî ìîäèôèöèðóþòñÿ êàê îòäåëüíûå êîìïîíåíòû êëåòêè, òàê è íàäìîëåêóëÿðíûå êîìïëåêñû. Íà ñåãîäíÿ èìåþòñÿ ìíîãî÷èñëåííûå ïóáëèêàöèè ïî èçó÷åíèþ ìåõàíèçìîâ ïåðîêñèäíîãî îêèñëåíèÿ ëèïèäîâ êëåòî÷íûõ ìåìáðàí â íîðìå è ïðè ïàòîëîãèè. Óñòàíîâëåíî, ÷òî àêòèâíûå ôîðìû êèñëîðîäà ïðåæäå âñåãî îáóñëîâëèâàþò îêñèäàòèâíóþ äåñòðóêöèþ áåëêîâ [1], ÷òî ìîæåò íåïîñðåäñòâåííî ïðèâåñòè ê èõ ôðàãìåíòàöèè èëè äåíàòóðàöèè. Ôðàãìåíòèðîâàííûå è äåíàòóðèðîâàííûå áåëêè ÿâëÿþòñÿ ñóáñòðàòàìè äëÿ âíóòðèêëåòî÷íûõ ïðîòåàç [2]. Ïîýòîìó àêòèâàöèÿ ïðîòåîëèçà âíîñèò îïðåäåëåííûé âêëàä â ïàòîãåíåç çàáîëåâàíèé ïðàêòè÷åñêè âñåõ ñèñòåì îðãàíèçìà, â ò.÷. è ìî÷åâûäåëèòåëüíîé. Îñîáåííî ñóùåñòâåííîå çíà÷åíèå èìåþò àêòèâíûå ôîðìû êèñëîðîäà â ïàòîãåíåçå ïî÷å÷íûõ ðåïåðôóçèîííûõ ïîâðåæäåíèé [3]. Ñèíòåòè÷åñêèå àíòèîêñèäàíòû ñïîñîáíû ýôôåêòèâíî ïðåäóïðåæäàòü ïîâðåæäåíèÿ, âîçíèêàþùèå ïðè ýêñïåðèìåíòàëüíîé èøåìèè è ðåïåðôóçèè òêàíè. Ìû ïîëàãàåì, ÷òî îäíèì èç ôàêòîðîâ, ïîâûøàþùèõ àêòèâíîñòü ñèñòåìû ýíäîãåííûõ àíòèîêñèäàíòîâ, ìîæåò áûòü àêòèâàöèÿ îïèàòíûõ ðåöåïòîðîâ. Ýêñïåðèìåíòàëüíûå èññëåäîâàíèÿ è êëèíè÷åñêèé îïûò ðÿäà èññëåäîâàòåëåé ïîçâîëÿþò ñäåëàòü âûâîä îá àíòèîêñèäàíòíîé àêòèâíîñòè äàëàðãèíà, êîòîðûé êîððåãèðóåò ìî÷åâûäåëèòåëü- íóþ ôóíêöèþ ó êðûñ ïðè îñòðîé ïî÷å÷íîé íåäîñòàòî÷íîñòè (ÎÏÍ) âñëåäñòâèå ïîâûøåíèÿ ôèëüòðàöèîííîé çàãðóçêè êëóáî÷êîâ. Ïðè ýòîì îòìå÷àåòñÿ ïîëîæèòåëüíàÿ òåíäåíöèÿ â ïåðåðàñïðåäåëåíèè âîäû è ýëåêòðîëèòîâ ìåæäó ðàçëè÷íûìè îðãàíàìè [4]. Âêëþ÷åíèå äàëàðãèíà â êîìïëåêñ òåðàïèè â óñëîâèÿõ òðàâìàòè÷åñêîãî øîêà è ÎÏÍ óñèëèâàåò èíãèáèðîâàíèå ïðîòåîëèòè÷åñêèõ ôåðìåíòîâ è íîðìàëèçóåò ãåìîäèíàìèêó [5]. Òàê, ðàíåå íàìè áûëî ïîêàçàíî, ÷òî ñìåøàííûé àãîíèñò µ- è δ-ðåöåïòîðîâ äàëàðãèí ñïîñîáåí ñíèæàòü àêòèâíîñòü ëàêòàòäåãèäðîãåíàçû è ñòèìóëèðîâàòü àíòèîêñèäàíòíóþ ñèñòåìó [6]. Âûøåïðèâåäåííûå äàííûå ñâèäåòåëüñòâóþò î íåôðîïðîòåêòîðíîì äåéñòâèè ïðåïàðàòà. Îäíàêî îñòàåòñÿ íåèçó÷åííûì âîïðîñ, ìîæåò ëè àêòèâàöèÿ îïèàòíûõ ðåöåïòîðîâ óâåëè÷èâàòü òîëåðàíòíîñòü êëåòîê ïî÷åê ê îêñèäàòèâíîìó ñòðåññó. Åñëè òàê, òî ñâÿçàí ëè ýòîò çàùèòíûé ýôôåêò ñ àêòèâàöèåé àíòèîêñèäàíòíîãî ôåðìåíòà ñóïåðîêñèääèñìóòàçû? Ïðåäñòàâëÿåò òàêæå èíòåðåñ âûÿñíèòü, êàêîå âëèÿíèå îêàçûâàþò èçìåíåíèå ñèíòåçà îäíîãî èç âíóòðèêëåòî÷íûõ ìåññåíäæåðîâ NO íà ðåàëèçàöèþ ïðîòåêòîðíîãî äåéñòâèÿ îïèîèäîâ. Ïîýòîìó öåëüþ äàííîé ðàáîòû áûëî èçó÷åíèå ðîëè îêñèäà àçîòà, àêòèâíîñòè ñóïåðîêñèääèñìóòàçû è èíòåíñèâíîñòè ïðîòåîëèçà â êëåòêàõ ïî÷åê ó êðûñ ïðè îêñèäàíòíîì ñòðåññå è ñòèìóëÿöèè îïèàòíûõ ðåöåïòîðîâ. ISSN 0201 8470. Óêð. á³îõ³ì. æóðí., 2004, ò. 76, ¹ 1 97 Ìàòåðèàëû è ìåòîäû Ýêñïåðèìåíò ïðîâîäèëè íà áåëûõ êðûñàõ 1618-íåäåëüíîãî âîçðàñòà. Ýêñïåðèìåíòàëüíóþ ÅÊÑÏÅÐÈÌÅÍÒÀËÜͲ ÐÎÁÎÒÈ ÎÏÍ, âñëåäñòâèå êîòîðîé ðàçâèâàåòñÿ îêñèäàòèâíûé ñòðåññ ó æèâîòíûõ âûçûâàëè ïóòåì âíóòðèìûøå÷íîãî ââåäåíèÿ èì 50%-ãî âîäíîãî ðàñòâîðà ãëèöåðîëà â äîçå 1 ìë/100 ã. ×åðåç îäíè, äâîå è òðîå ñóòîê æèâîòíûõ äåêàïèòèðîâàëè.  îáðàçöàõ ïî÷å÷íîé òêàíè îïðåäåëÿëè ïðîòåîëèòè÷åñêóþ àêòèâíîñòü, àêòèâíîñòü ñóïåðîêñèääèñìóòàçû è ñîäåðæàíèå ñòàáèëüíûõ ìåòàáîëèòîâ NO. Êîíòðîëåì ñëóæèëè èíòàêòíûå áåëûå êðûñû òàêîãî æå âîçðàñòà, êîòîðûõ ñîäåðæàëè â àíàëîãè÷íûõ óñëîâèÿõ ñ îïûòíûìè. Ó÷àñòèå δ- è µ-îïèàòíûõ ðåöåïòîðîâ â ðåãóëÿöèè óñòîé÷èâîñòè ïî÷åê ê ïîâðåæäàþùåìó äåéñòâèþ àêòèâíûõ ôîðì êèñëîðîäà îöåíèâàëè ñ ïîìîùüþ äàëàðãèíà (D-Ala-Leu-Arg6-enkephalin, ÇÀÎ «Á³îë³ê», Óêðàèíà), êîòîðûé èíúåêöèðîâàëè æèâîòíûì âíóòðèáðþøèííî â äîçå 100 ìêã/êã çà 20 ìèí äî ôîðìèðîâàíèÿ ÎÏÍ [5]. Àíòàãîíèñò îïèàòíûõ ðåöåïòîðîâ ñìåøàííîãî òèïà íàëîêñîí (Õàðüêîâñêîå ãîñóäàðñòâåííîå ïðåäïðèÿòèå Çäîðîâÿ íàðîäó, Óêðàèíà) ââîäèëè âíóòðèáðþøèííî (3 ìêã/êã ìàññû òåëà) çà 30 ìèí äî ôîðìèðîâàíèÿ ÎÏÍ èëè çà 20 ìèí äî èíúåêöèè äàëàðãèíà. Äëÿ âûÿñíåíèÿ ýôôåêòà èíãèáèðîâàíèÿ NO-ñèíòàçû íà ïðîÿâëåíèå àíòèîêñèäàíòíûõ ñâîéñòâ àãîíèñòîâ îïèàòíûõ ðåöåïòîðîâ â óñëîâèÿõ îêñèäàòèâíîãî ñòðåññà æèâîòíûì âíóòðèáðþøèííî ââîäèëè èíãèáèòîð èíäóöèáåëüíîé NO-ñèíòàçû (iNO-ñèíòàçû) àìèíîãóàíèäèí íèòðàò â äîçå 10 ìã/êã («Sigma», ÑØÀ). Èíúåêöèþ èíãèáèòîðà êðûñàì îñóùåñòâëÿëè ëèáî çà 30 ìèí äî íà÷àëà ýêñïåðèìåíòà, ëèáî çà 20 ìèí äî ââåäåíèÿ èì äàëàðãèíà. Ïðîòåîëèòè÷åñêóþ àêòèâíîñòü òêàíåé ïî÷åê îïðåäåëÿëè â åä. àáñîðáöèè /÷ íà 1 ã òêàíè ïî ëèçèñó àçîêîëà è àçîêàçåèíà (Ltd «Simko», Ëüâîâ) è âûñâîáîæäåíèþ àçîêðàñèòåëÿ, èìåþùåãî ìàêñèìóì ïîãëîùåíèÿ ïðè äëèíå âîëíû 440 íì [7]. Òêàíü ãîìîãåíèçèðîâàëè â áîðàòíîì áóôåðå (ðÍ 9,0). Ïðîáèðêè, ñîäåðæàùèå 1,5 ìë áîðàòíîãî áóôåðà, 1 ìã àçîêàçåèíà èëè àçîêîëà è 0,5 ìë ãîìîãåíàòà, èíêóáèðîâàëè íà âîäÿíîé áàíå ïðè 37 °Ñ â òå÷åíèå 15 ìèí. Ïîñëå èíêóáàöèè â íèõ äîáàâëÿëè 2 ìë äèñòèëëÿòà è çàùåëà÷èâàëè ñðåäó 50 ìêë 5 Ì ðàñòâîðà NaOH. Ñîäåðæèìîå ïðîáèðîê ôèëüòðîâàëè äëÿ óäàëåíèÿ íåïðîðåàãèðîâàâøèõ àçîñîåäèíåíèé è îïðåäåëÿëè âåëè÷èíó àáñîðáöèè íà ÑÔ-46 (λ = 440 íì). Îäíîâðåìåííî â îáðàçöàõ ïî÷åê îïðåäåëÿëè àêòèâíîñòü ñóïåðîêñèääèñìóòàçû (ÊÔ 1.15.1.1), êîòîðóþ îöåíèâàëè ïî ñïîñîáíîñòè ôåðìåíòà èíãèáèðîâàòü íàêîïëåíèå ïðîäóêòà àóòîîêèñëåíèÿ àäðåíàëèíà â ùåëî÷íîé ñðåäå (ðÍ 10,65), ïîãëîùàþùåãî ïðè äëèíå âîëíû 347 íì [8]. Ìåòîäîì äèôôåðåíöèàëüíîãî öåíò- ðèôóãèðîâàíèÿ (14 000 g, 10 ìèí) èç ãîìîãåíàòà âûäåëÿëè ìèòîõîíäðèàëüíóþ ôðàêöèþ. Ïðîìûòûé îñàäîê ðàçðóøàëè 0,1%-ì ðàñòâîðîì òðèòîíà Õ-100, ïðèãîòîâëåííîãî íà áèêàðáîíàòíîì áóôåðå. Çàòåì â ïðîáàõ ðåãèñòðèðîâàëè àêòèâíîñòü ñóïåðîêñèääèñìóòàçû ïî ñòåïåíè èíãèáèðîâàíèÿ ñêîðîñòè àóòîîêèñëåíèÿ àäðåíàëèíà (â % èíãèáèðîâàíèÿ èëè åä. àêò.) Ê 2 ìë áèêàðáîíàòíîãî áóôåðà (0,2 Ì Na2CO3, 0,2 Ì NaHCO3, ðH 10,65) äîáàâëÿëè 100 ìêë 0,1%-ãî ðàñòâîðà àäðåíàëèíà è 10 ìêë ïðîáû, ïîñëå ÷åãî ñìåñü òùàòåëüíî è áûñòðî ïåðåìåøèâàëè. Ïðîáû ñïåêòðîôîòîìåòðèðîâàëè â òå÷åíèå 35 ìèí ïðè λ = 347 íì íà ÑÔ-46. Ïî ôîðìóëå ðàññ÷èòûâàëè ñòåïåíü èíãèáèðîâàíèÿ ôåðìåíòîì ñêîðîñòè àóòîîêèñëåíèÿ àäðåíàëèíà. Óðîâåíü NO â êëåòêàõ ïî÷åê îïðåäåëÿëè ñ ïîìîùüþ ðåàêòèâà Ãðèññà, ó÷èòûâàÿ ñòàáèëüíûå ìåòàáîëèòû íèòðèò- è íèòðàò-àíèîíû, ïðåäâàðèòåëüíî âîññòàíîâèâ ïîñëåäíèå äî íèòðèòà [9]. Ãîìîãåíàò òêàíè ãîòîâèëè â ñðåäå âûäåëåíèÿ, ñîäåðæàùåé 0,25 Ì ñàõàðîçû è 1 ìÌ ÝÄÒÀ â ñîîòíîøåíèè 1 : 9. Äàëåå ïðîâîäèëè äèàëèç â òå÷åíèå 1,52,0 ÷ ïðîòèâ äèñòèëëÿòà. Ïîñëå åãî îêîí÷àíèÿ îòáèðàëè îáðàçöû ïðîá è èçìåðÿëè îáúåì äèàëèçàòà. Ïåðåä àíàëèçîì íà íèòðèòû è íèòðàòû â äèàëèçàòå îñàæäàëè áåëêè ñìåñüþ 0,5 í. ÊÎÍ è 5%-ãî ZnSO4 â îáúåìíîì ñîîòíîøåíèè 2 : 5. Äëÿ îïðåäåëåíèÿ ñîäåðæàíèÿ íèòðèòîâ ê 10 ìë ïðîáû äîáàâëÿëè 1 ìë ðåàêòèâà Ãðèññà (ïðè t 5 °Ñ). ×åðåç 15 ìèí ïîñëå èíòåíñèâíîãî âñòðÿõèâàíèÿ ïðîáèðîê ðàçâèâàëàñü îêðàñêà. Äàëåå ïðîâîäèëè ñïåêòðîôîòîìåòðèðîâàíèå ïðè λ = 540 íì, êîíòðîëåì ñëóæèë äèñòèëëÿò. Ïîñêîëüêó ðåàêöèÿ äèàçîòèðîâàíèÿ ÿâëÿåòñÿ ñïåöèôè÷íîé òîëüêî íà íèòðèòû, òî äëÿ îïðåäåëåíèÿ íèòðàòîâ íåîáõîäèìî áûëî èõ ïðåäâàðèòåëüíî âîññòàíîâèòü.  êà÷åñòâå âîññòàíîâèòåëÿ èñïîëüçîâàëè öèíêîâóþ ïûëü. Ïðîöåññ âîññòàíîâëåíèÿ è äèàçîòèðîâàíèÿ ïðîèñõîäèë îäíîâðåìåííî ïðè t = 5 °Ñ. ×åðåç 10 ìèí ïðîáèðêè öåíòðèôóãèðîâàëè, îòáèðàëè ñóïåðíàòàíò è ïðîâîäèëè ñïåêòðîôîòîìåòðèðîâàíèå ïðè λ = 540 íì ïðîòèâ õîëîñòîé ïðîáû (îáðàáîòàííîé àíàëîãè÷íî). Äëÿ îïðåäåëåíèÿ ñîäåðæàíèÿ íèòðèò- è íèòðàòèîíîâ (ìêã/ã) èñïîëüçîâàëè êàëèáðîâî÷íóþ êðèâóþ, ïîñòðîåííóþ ïî íèòðèòó íàòðèÿ è íèòðàòó êàëèÿ ñîîòâåòñòâåííî. Ñòàòèñòè÷åñêóþ îáðàáîòêó ýêñïåðèìåíòàëüíûõ äàííûõ ïðîâîäèëè ñ èñïîëüçîâàíèåì t-êðèòåðèÿ Ñòüþäåíòà. 98 ISSN 0201 8470. Óêð. á³îõ³ì. æóðí., 2004, ò. 76, ¹ 1 Ðåçóëüòàòû è îáñóæäåíèå Äàííûå, ïðåäñòàâëåííûå â òàáëèöå, ñâèäåòåëüñòâóþò, ÷òî ìîäåëèðîâàíèå îêñèäàòèâíîãî ñòðåññà in vivo ñîïðîâîæäàåòñÿ èíòåíñèôèêàöèåé Å. À. ÎÐËÎÂÀ, È. À. ÊÎÌÀÐÅÂÖÅÂÀ ïðîöåññîâ ïðîòåîëèçà â òêàíÿõ ïî÷åê ïðè èñïîëüçîâàíèè â êà÷åñòâå ñóáñòðàòà êàê àçîêîëà, òàê è àçîêàçåèíà. Êðîìå òîãî, ðàçâèòèå ñâîáîäíîðàäèêàëüíîé àêòèâàöèè ïðîòåîëèçà ïðèâîäèò ê äîñòîâåðíîìó ñíèæåíèþ àêòèâíîñòè ñóïåðîêñèääèñìóòàçû îòíîñèòåëüíî èíòàêòíûõ æèâîòíûõ. Ïðè ýòîì íàáëþäàåòñÿ óâåëè÷åíèå ñîäåðæàíèÿ ñòàáèëüíûõ ìåòàáîëèòîâ îêñèäà àçîòà íà ïåðâûå, âòîðûå è òðåòüè ñóòêè â 2,0 è 1,5 ðàçà ñîîòâåòñòâåííî. Ïðåäâàðèòåëüíàÿ ñòèìóëÿöèÿ îïèàòíûõ ðåöåïòîðîâ äàëàðãèíîì äî ôîðìèðîâàíèÿ ÎÏÍ èíãèáèðóåò ëèçèñ âûñîêîìîëåêóëÿðíûõ áåëêîâ è êîëëàãåíàçíîé àêòèâíîñòè â òêàíè ïî÷åê æèâîòíûõ, ïîäâåðãøèõñÿ ÎÏÍ. Ïðèìåíåíèå äàëàðãèíà òàêæå ñîïðîâîæäàåòñÿ ïîâûøåíèåì àêòèâíîñòè ñóïåðîêñèääèñìóòàçû îòíîñèòåëüíî çíà÷åíèé ó æèâîòíûõ ñ ÎÏÍ íà ïåðâûå, âòîðûå è òðåòüè ñóòêè ýêñïåðèìåíòà â 1,8, 2, 8 è 2,0 ðàçà ñîîòâåòñòâåííî. Ïðè ýòîì áûëî îòìå÷åíî íåêîòîðîå ñíèæåíèå óðîâíÿ îêñèäà àçîòà ó êðûñ âñåõ ãðóïï, ïîäâåðãøèõñÿ îêñèäàòèâíîìó ñòðåññó, íà ôîíå àêòèâàöèè îïèàòíûõ ðåöåïòîðîâ äàëàðãèíîì. Èç ðåçóëüòàòîâ, ïðåäñòàâëåííûõ â òàáëèöå, ñëåäóåò, ÷òî ñìåøàííàÿ áëîêàäà îïèàòíûõ ðåöåïòîðîâ ïðè èíúåêöèè æèâîòíûì íàëîêñîíà ñóùåñòâåííî íå îòðàæàåòñÿ (êàê ïî àçîêîëó, òàê è ïî àçîêàçåèíó) íà ïðîòåîëèòè÷åñêîé àêòèâíîñòè ãîìîãåíàòà ïî÷åê ó æèâîòíûõ ñ ÎÏÍ. Ââåäåíèå èì íàëîêñîíà íå èçìåíÿåò â ïî÷å÷íîé òêàíè ñîäåðæàíèå íèòðèò- è íèòðàò-àíèîíîâ. Ïðè ïðåäâàðèòåëüíîì èíãèáèðîâàíèè îïèàòíûõ ðåöåïòîðîâ ïîëíîñòüþ óñòðàíÿåòñÿ àíòèîêñèäàíòíûé ýôôåêò äàëàðãèíà, îòìå÷åííûé íàìè ïðè àêòèâàöèè ñâîáîäíîðàäèêàëüíûõ ïðîöåññîâ âñëåäñòâèå ðàçâèòèÿ ÎÏÍ. Òàê, ó ýòèõ æèâîòíûõ íå óäàåòñÿ îáíàðóæèòü ñíèæåíèÿ ïðîòåîëèòè÷åñêîé àêòèâíîñòè ïî àçîêàçåèíó è àçîêîëó íà ââåäåíèå èì äàëàðãèíà. Êðîìå òîãî, èíúåêöèÿ êðûñàì àíòàãîíèñòà îïèàòíûõ ðåöåïòîðîâ ïðåïÿòñòâóåò îïîñðåäîâàííîé ïîñëåäíèìè àêòèâàöèè ñóïåðîêñèääèñìóòàçû. Ââåäåíèå èì íàëîêñîíà â ñî÷åòàíèè ñ äàëàðãèíîì íà ôîíå ðàçâèòèÿ ÎÏÍ òàêæå íå âëèÿåò íà èçìåíåíèå óðîâíÿ îêñèäà àçîòà â êëåòêàõ ïî÷å÷íîé òêàíè.  ñëåäóþùåé ñåðèè ýêñïåðèìåíòîâ ìû ïîïûòàëèñü îöåíèòü âêëàä îêñèäà àçîòà â ðåàëèçàöèþ àíòèîêñèäàíòíîãî ýôôåêòà äàëàðãèíà, îïîñðåäîâàííîãî îïèàòíûìè ðåöåïòîðàìè, â óñëîâèÿõ ðàçâèòèÿ îêñèäàòèâíîãî ñòðåññà ïðè ýêñïåðèìåíòàëüíîé ìîäåëè ÎÏÍ. Ââåäåíèå â îðãàíèçì èíãèáèòîðà èíäóöèáåëüíîé NO-ñèíòàçû íèòðîàìèíîãóàíèäèíà íå îòðàæàåòñÿ íà àêòèâíîñòè ñóïåðîêñèääèñìóòàçû ïî ñðàâíåíèþ ñ êðûñàìè, íàõîäÿùèìèñÿ â ñî- ñòîÿíèè ÎÏÍ. Ñîäåðæàíèå ñòàáèëüíûõ ìåòàáîëèòîâ îêñèäà àçîòà â òêàíè ïî÷åê îïûòíûõ æèâîòíûõ íå îòëè÷àåòñÿ îò òàêîâûõ ïîêàçàòåëåé ó êîíòðîëüíûõ. Íå îòìå÷åíî òàêæå èçìåíåíèé â àêòèâàöèè ñèñòåìû îãðàíè÷åííîãî ïðîòåîëèçà ïî ñðàâíåíèþ ñ êðûñàìè, ó êîòîðûõ îòìå÷åíî ðàçâèòèå ÎÏÍ. Ïðåäâàðèòåëüíîå ââåäåíèå æèâîòíûì íèòðîàìèíîãóàíèäèíà óñòðàíÿåò ïîçèòèâíûé ýôôåêò äàëàðãèíà â ñëó÷àå àêòèâàöèè ñâîáîäíîðàäèêàëüíûõ ïðîöåññîâ è ðàçâèòèè ÎÏÍ. Àêòèâíîñòü ñóïåðîêñèääèñìóòàçû ïðàêòè÷åñêè íå îòëè÷àåòñÿ îò òàêîâîé ïðè ÎÏÍ. Íàêîïëåíèå ñòàáèëüíûõ ìåòàáîëèòîâ NO â êëåòêàõ ïî÷åê äîñòîâåðíî íå ïîâûøàåòñÿ îòíîñèòåëüíî êîíòðîëÿ. Êðîìå òîãî, ó ýòèõ æèâîòíûõ íà ïåðâûå, âòîðûå è òðåòüè ñóòêè íå óäàåòñÿ îáíàðóæèòü ñíèæåíèå àêòèâàöèè ïðîòåîëèçà ïî àçîêîëó è àçîêàçåèíó ïîñëå èíúåêöèè èì äàëàðãèíà. Ïðè ãëèöåðèíîâîé ìîäåëè ÎÏÍ âñëåäñòâèå ãèïîêñèè ðàçâèâàåòñÿ îêñèäàòèâíûé ñòðåññ, ÷òî ñîïðîâîæäàåòñÿ èíòåíñèôèêàöèåé ñâîáîäíîðàäèêàëüíûõ ðåàêöèé è çà÷àñòóþ àêòèâàöèåé ïðîòåîëèçà. Îòìå÷åííûå íàìè èçìåíåíèÿ ïðîòåîëèòè÷åñêîé àêòèâíîñòè óêàçûâàþò íà òî, ÷òî âîçðàñòàåò îêñèäàòèâíàÿ ìîäèôèêàöèÿ áåëêîâ â êëåòêàõ ïî÷åê, êîòîðûå ÿâëÿþòñÿ ñóáñòðàòàìè äëÿ âíóòðèêëåòî÷íûõ ïðîòåàç. Ýòî ïîäòâåðæäàåòñÿ ðåçóëüòàòàìè èññëåäîâàíèé B. C. Yang è J. L. Mechta [10], êîòîðûå ñâèäåòåëüñòâóþò î ÷óâñòâèòåëüíîñòè áåëêîâ ê äåéñòâèþ àêòèâíûõ ôîðì êèñëîðîäà. Ìîäåëèðîâàíèå îêñèäàòèâíîãî ñòðåññà â òêàíè ïî÷åê ñîïðîâîæäàåòñÿ ñíèæåíèåì àêòèâíîñòè ñóïåðîêñèääèñìóòàçû è âñëåäñòâèå ýòîãî íàêîïëåíèåì Î2- è àêòèâàöèåé ïðîòåîëèçà. Òàê, ñîãëàñíî äàííûì, ïðèâåäåííûì â ñòàòüå [2], îêñèäàòèâíàÿ ìîäèôèêàöèÿ ôåðìåíòà ïåðåâîäèò åãî â êàòàëèòè÷åñêè íåàêòèâíûå èëè ìåíåå àêòèâíûå ôîðìû, ÷òî âûçûâàåò èíãèáèðîâàíèå àíòèîêñèäàíòíîé ñèñòåìû. Ñ äðóãîé ñòîðîíû, â ñîîòâåòñòâèè ñ ïðèíöèïîì îáðàòíîé ñâÿçè, ñíèæåíèå àêòèâíîñòè ñóïåðîêñèääèñìóòàçû ïîä âëèÿíèåì ðàçëè÷íûõ ôàêòîðîâ ìîæåò ïðèâåñòè ê íàêîïëåíèþ â êëåòêàõ îêèñëåííûõ áåëêîâ. Îáíàðóæåííîå íàìè ïîâûøåííîå ñîäåðæàíèå ñòàáèëüíûõ ìåòàáîëèòîâ NO â óñëîâèÿõ îêñèäàòèâíîãî ñòðåññà íà ðàííåé ñòàäèè ðàçâèòèÿ ÎÏÍ ÿâëÿåòñÿ, âåðîÿòíî, çâåíîì êîìïåíñàòîðíîé ðåàêöèè. Òàê, âî-ïåðâûõ, ïðè ãèïîêñèè íàðóøàåòñÿ êðîâîñíàáæåíèå ïî÷åê, ÷òî ñòèìóëèðóåò ãåíåðàöèþ NO êàê ìîùíîãî âàçîäèëàòàòîðà. Îäíàêî äëèòåëüíàÿ (â òå÷åíèå òðåõ ñóòîê) óìåðåííàÿ ãèïåðïðîäóêöèÿ NO ñâÿçàíà ñ ñèíòåçîì iNO-ñèíòàçû. Âî-âòîðûõ, èçâåñòíî, ÷òî â óñëîâèÿõ ãèïîêñèè óñèëèâàåòñÿ ñèíòåç îêñèäà àçîòà ISSN 0201 8470. Óêð. á³îõ³ì. æóðí., 2004, ò. 76, ¹ 1 99 ÅÊÑÏÅÐÈÌÅÍÒÀËÜͲ ÐÎÁÎÒÈ Âëèÿíèå ïðåäâàðèòåëüíîãî ââåäåíèÿ ëèãàíäîâ îïèàòíûõ ðåöåïòîðîâ è áëîêàòîðà iNO-ñèíòàçû íà ïðîòåîëèç, àêòèâíîñòü ñóïåðîêñèääèñìóòàçû è ñîäåðæàíèå ñòàáèëüíûõ ìåòàáîëèòîâ NO â òêàíè ïî÷åê êðûñ ïðè ýêñïåðèìåíòàëüíîé ÎÏÍ (M ± m, n = 7) Âðåìÿ ï îñëå äåêàï è òàö è è êðûñ, ñóò Èí òàêòí ûå êðûñû Ïðîòåîëè ç Ïðîòåîëèç ï î àçîêàçåèíó, àçîêàçåè í ó, ïî (λÀ440 = 4/÷40íàí ì 1 )ã ñ Ïðîòåîëè ç Ïðîòåîëèç ï î àçîêîëó, ïî àçîêîëó, àáñîðáö è è /÷ À440 /÷ íà 1 ã (lλ= 440 í ì) Ñóï åðîêñè ääè ñìóòàçà, % è í ãè áè ðîâ àí è ÿ îòí îñè òåëüí î êîí òðîëÿ N O 2- + N O 3-, ìêã/ã 1 5 ,8 ± 0 ,3 8 ,3 ± 0 ,4 1 0 0 ± 0 ,8 3 4 ± 1 ,6 Ïåðâ ûå Âòîðûå Òðåòüè 22,9 ± 1,4 (ð1 < 0,05) 31,9 ± 0,5 (ð1 < 0,05) 24,7 ± 0,4 (ð1 < 0,05) ÎÏÍ 10,5 ± 0,3 (ð1 < 0,05) 36,9 ± 1,8 (ð1 < 0,05) 67,83 ± 10,0 (ð1 < 0,05) 10,8 ± 0,3 (ð1 < 0,05) 22,1 ± 1,1 (ð1 < 0,05) 82,24 ± 6,8 (ð1 < 0,05) 10,3 ± 0,2 (ð1 < 0,05) 43,7 ± 1,0 (ð1 < 0,05) 51,87 ± 11,3 (ð1 < 0,05) Äàëàðãèí + ÎÏÍ Ïåðâ ûå 2 0 ,9 ± 0 ,3 (ð1 < 0,05) 2 3 ,3 ± 0 , 6 (ð1 < 0,05; ð2 < 0,05) 1 6 ,2 ± 0 ,2 (ð1 < 0,05; ð2 < 0,05) 9 ,3 ± 0 ,2 (ð1 < 0,05, ð2 < 0,05) 9 ,6 ± 0 ,2 (ð1 < 0,05; ð2 < 0,05) 9 ,1 ± 0 ,2 (ð1 < 0,05; ð2 < 0,05) 6 9 ,1 ± 1 ,2 5 (ð1 < 0,05, ð2 < 0,05) 5 0 ,9 ± 1 ,3 (ð1 < 0,05; ð2 < 0,05) 7 7 ,4 ± 1 ,6 (ð1 < 0,05; ð2 < 0,05) 4 4 ,8 ± 6 ,0 (ð1 < 0,05, ð2 < 0,05) 4 7 ,8 ± 8 ,7 (ð1 < 0,05; ð2 < 0,05) 4 3 ,9 ± 7 ,3 (ð1 < 0,05; ð2 < 0,05) 2 1 , 3 ± 0 ,3 (ð1 < 0,05) 2 4 ,3 ± 0 , 6 (ð1 < 0,05; ð2 < 0,05) 2 0 ,7 ± 0 ,9 (ð1 < 0,05; ð2 < 0,05) 9 ,8 ± 0 ,3 (ð1 < 0,05) 1 0 ,3 ± 0 ,2 (ð1 < 0,05) 1 0 ,2 ± 0 ,2 (ð1 < 0,05) 5 3 ,8 ± 1 ,3 (ð1 < 0,05; ð2 < 0,05) 4 3 ,5 ± 1 ,8 (ð1 < 0,05; ð2 < 0,05) 5 7 ,5 ± 1 ,8 (ð1 < 0,05; ð2 < 0,05) 5 8 ,0 ± 3 ,1 (ð1 < 0,05) 5 8 ,6 ± 3 ,1 (ð1 < 0,05; ð2 < 0,05) 4 4 ,8 ± 6 ,7 (ð1 < 0,05) 1 0 ,3 ± 0 ,2 (ð1 < 0,05) 10,3 ± 0,2 (ð1 < 0,05) 1 7 ,9 ± 1 ,8 (ð1 < 0,05) 41,2 ± 1,6 (ð1 < 0,05) 68,7 ± 8,3 (ð1 < 0,05) 8 3 ,1 ± 7 ,5 (ð1 < 0,05) 53,5 ± 9,1 (ð1 < 0,05) 2 2 , 1 ± 0 ,4 (ð1 < 0,05) 2 9 ,3 ± 0 , 4 (ð1 < 0,05) 2 0 ,1 ± 0 ,2 (ð1 < 0,05; ð2 < 0,05) 1 0 ,0 ± 0 ,4 (ð1 < 0,05) 1 0 ,4 ± 0 ,4 (ð1 < 0,05) 1 0 ,1 ± 0 ,2 (ð1 < 0,05) 3 9 ,9 ± 1 ,5 (ð1 < 0,05) 2 4 ,3 ± 2 ,1 (ð1 < 0,05) 4 4 ,8 ± 0 ,8 (ð1 < 0,05) 3 2 ,6 ± 2 ,8 (ð1 < 0,05; ð2 < 0,05) 3 1 ,3 ± 1 ,9 (ð1 < 0,05; ð2 < 0,05) 3 9 ,7 ± 2 ,1 (ð1 < 0,05; ð2 < 0,05) 2 3 ,3 ± 0 ,6 (ð1 < 0,05) 3 1 ,1 ± 0 , 5 (ð1 < 0,05) 2 3 ,4 ± 1 ,4 (ð1 < 0,05) 1 0 ,1 ± 0 ,3 (ð1 < 0,05) 1 0 ,5 ± 0 ,3 (ð1 < 0,05) 1 0 ,0 ± 0 ,2 (ð1 < 0,05) 4 4 ± 1 ,2 (ð1 < 0,05) 3 0 ,5 ± 1 ,8 (ð1 < 0,05) 4 6 ,3 ± 1 ,5 (ð1 < 0,05) 3 4 ,8 ± 2 ,1 (ð1 < 0,05; ð2 < 0,05) 3 7 ,0 ± 2 ,2 (ð1 < 0,05; ð2 < 0,05) 3 7 ,9 ± 2 ,9 (ð1 < 0,05; ð2 < 0,05) Âòîðûå Òðåòüè Ïåðâ ûå Âòîðûå Òðåòüè Ïåðâ ûå Âòîðûå Òðåòüè Ïåðâ ûå Âòîðûå Òðåòüè Íàëoêñîí + ÎÏÍ Íàëîêñîí + äàëàðãèí + ÎÏÍ 24,8 ± 0,3 (ð1 < 0,05) 9,8 ± 0,2 (ð1 < 0,05) 32,9 ± 1,75 (ð1 < 0,05) 2 6 ,5 ± 0 , 4 (ð1 < 0,05; ð2 < 0,05) 23,3 ± 0,8 (ð1 < 0,05) Íèò ðîàìèíîãóàíèäèí + ÎÏÍ Íèò ðîàìèíîãóàíèäèí + äàëàðãèí + ÎÏÍ Ïåðâ ûå Âòîðûå Òðåòüè Ïðèìå÷àíèå: ð1 äîñòîâåðíîñòü îòíîñèòåëüíî èíòàêòíûõ êðûñ, ð2 äîñòîâåðíîñòü îòíîñèòåëüíî æèâîòíûõ ñ ÎÏÍ. 100 ISSN 0201 8470. Óêð. á³îõ³ì. æóðí., 2004, ò. 76, ¹ 1 Å. À. ÎÐËÎÂÀ, È. À. ÊÎÌÀÐÅÂÖÅÂÀ è èîíîâ NO3- è NO2-. Èñõîäÿ èç ýëåêòðîííîàêöåïòîðíîé ïðèðîäû èîíîâ NO2-, ìîæíî ïðåäïîëîæèòü, ÷òî ïðè äåôèöèòå êèñëîðîäà âîçìîæåí ïåðåõîä êëåòîê íà íèòðàòíî (íèòðèòíîå) äûõàíèå [11]. Àíàëèç àêòèâíîñòè ñìåøàííîãî àãîíèñòà µ- è δ-îïèàòíûõ ðåöåïòîðîâ â óñëîâèÿõ îêñèäàòèâíîãî ñòðåññà ñâèäåòåëüñòâóåò î åãî àíòèîêñèäàíòíîì âîçäåéñòâèè. Äàííîå ïðåäïîëîæåíèå ïîäòâåðæäàåòñÿ ðåçóëüòàòàìè îïûòîâ ïðè ñîâìåñòíîì ââåäåíèè æèâîòíûì àíòàãîíèñòà è àãîíèñòà îïèàòíûõ ðåöåïòîðîâ. Òàê, ïðåäâàðèòåëüíàÿ áëîêàäà îïèàòíûõ ðåöåïòîðîâ ïðè ïîìîùè íàëîêñîíà ïîëíîñòüþ íèâåëèðóåò ïîçèòèâíûé ýôôåêò äàëàðãèíà ïðè ìîäåëèðîâàíèè îêñèäàòèâíîãî ñòðåññà. Ñëåäîâàòåëüíî, ðåãóëÿöèÿ óñòîé÷èâîñòè íåôðîíîâ ê öèòîòîêñè÷åñêîìó äåéñòâèþ ñâîáîäíûõ ðàäèêàëîâ îñóùåñòâëÿåòñÿ ïðè ó÷àñòèè îïèàòíûõ ðåöåïòîðîâ. Ââåäåíèå êðûñàì äàëàðãèíà, íà íàø âçãëÿä, èíãèáèðóåò ïðîöåññû ïðîòåîëèçà. Äàííûå ýêñïåðèìåíòîâ ñâèäåòåëüñòâóþò, ÷òî îí óìåíüøàåò ïðîòåîëèòè÷åñêóþ àêòèâíîñòü êàê ïî îòíîøåíèþ ê àçîêîëó, òàê è àçîêàçåèíó. À áëîêàäà òàêîãî òèïà îïèàòíûõ ðåöåïòîðîâ íàëîêñîíîì, ïðåäøåñòâóþùàÿ èíúåêöèè æèâîòíûì äàëàðãèíà, ñîïðîâîæäàåòñÿ äîñòîâåðíûì óâåëè÷åíèåì ëèçèñà âûñîêîìîëåêóëÿðíûõ áåëêîâ è êîëëàãåíà. Èñõîäÿ èç ïîëó÷åííûõ íàìè ðåçóëüòàòîâ, ìîæíî ïðåäïîëîæèòü, ÷òî ïîäàâëåíèå ïðîòåîëèçà ðåàëèçóåòñÿ âñëåäñòâèå îïîñðåäîâàííîé îïèàòíûìè ðåöåïòîðàìè ñòèìóëÿöèè àíòèîêñèäàíòíûõ ôåðìåíòîâ. Ó æèâîòíûõ ñ ïðåäâàðèòåëüíûì ââåäåíèåì èì ñèíòåòè÷åñêîãî ëåéýíêåôàëèíà íàáëþäàåòñÿ òåíäåíöèÿ ê âîññòàíîâëåíèþ àêòèâíîñòè ñóïåðîêñèääèñìóòàçû. Óâåëè÷åíèå åå ïðè îêñèäàòèâíîì ñòðåññå ïîñëå ñòèìóëÿöèè îïèàòíûõ ðåöåïòîðîâ îáåñïå÷èâàåò óòèëèçàöèþ àêòèâíûõ ôîðì êèñëîðîäà è òåì ñàìûì ñïîñîáñòâóåò ñíèæåíèþ â òêàíÿõ óðîâíÿ NO. Èçâåñòíî, ÷òî äàëàðãèí õàðàêòåðèçóåòñÿ ìîäóëèðóþùèì âëèÿíèåì íà ñèíòåç ïðîñòàíîèäîâ. Òàê, àâòîðû ðàáîòû [12] îòìå÷àþò, ÷òî äàëàðãèí ñïîñîáñòâóåò âîññòàíîâëåíèþ ñèíòåçà ïðîñòàöèêëèíà, îáëàäàþùåãî êàðäèîïðîòåêòîðíûìè ñâîéñòâàìè. Ìîæíî ïðåäïîëîæèòü, ÷òî ïðîÿâëåíèå àíòèîêñèäàíòíîãî äåéñòâèÿ äàëàðãèíà íàáëþäàåòñÿ âñëåäñòâèå ñóììèðîâàíèÿ åãî ïîëîæèòåëüíîãî âëèÿíèÿ íà ñèíòåç ïðîñòàãëàíäèíîâ è àêòèâíîñòü àíòèîêñèäàòèâíûõ ôåðìåíòîâ. Ðåãóëÿòîðíîå âëèÿíèå NO íà àêòèâíîñòü ñóïåðîêñèääèñìóòàçû â óñëîâèÿõ èøåìèè ðåïåðôóçèè [13], íàáëþäàåòñÿ è ïðè îêñèäàòèâíîì ñòðåññå. Èìåþòñÿ ñâåäåíèÿ, ÷òî ìîëåêóëà NO ñïîñîáíà íåïîñðåäñòâåííî èíàêòèâèðîâàòü íåêîòîðûå ñâîáîäíûå ðàäèêàëû [10]. Äàííûå íàøèõ ýêñïåðèìåíòîâ ïîêàçûâàþò, ÷òî ïðåäâàðèòåëüíîå ââåäåíèå êðûñàì íèòðîàìèíîãóàíèäèíà ñíèìàåò ýôôåêò áëîêàäû iNOS-ñèíòàçû íà èíòåíñèâíîñòü ïðîòåîëèçà è àêòèâíîñòü ñóïåðîêñèääèñìóòàçû ïðè ñðàâíåíèè ñ êðûñàìè, ïîäâåðãíóòûìè ÎÏÍ. Ïðè ýòîì ñîäåðæàíèå ñòàáèëüíûõ ìåòàáîëèòîâ îêñèäà àçîòà ñíèæàåòñÿ äî óðîâíÿ çíà÷åíèé ó èíòàêòíûõ êðûñ. Áëîêàäà iNO-ñèíòàçû, ïðåäøåñòâóþùàÿ ââåäåíèþ èì äàëàðãèíà, îáåñïå÷èâàåò ïîëíîå óñòðàíåíèå àíòèîêñèäàíòíîãî ýôôåêòà îïèîèäà ïðè ìîäåëèðîâàíèè îêñèäàòèâíîãî ñòðåññà. Ýòî äàåò îñíîâàíèå ïðåäïîëîæèòü ó÷àñòèå NO â ðåàëèçàöèè çàùèòíîãî ýôôåêòà îïèîèäíûõ ïåïòèäîâ. Îäíàêî â íàøèõ èññëåäîâàíèÿõ íå íàáëþäàëîñü çíà÷èòåëüíîãî óâåëè÷åíèÿ ñîäåðæàíèÿ íèòðèò- è íèòðàò-èîíîâ ïîñëå ñòèìóëÿöèè îïèàòíûõ ðåöåïòîðîâ, à, íàîáîðîò, ïðîèñõîäèëî íåêîòîðîå ñíèæåíèå óðîâíÿ ýòèõ àíèîíîâ â êëåòêàõ ïî÷å÷íîé òêàíè. Ìû ñêëîííû îáúÿñíèòü ïîëó÷åííûå ðåçóëüòàòû àêòèâàöèåé öèêëà îêñèäà àçîòà. Óâåëè÷åíèå ñèíòåçà NO â îòâåò íà ñòèìóëÿöèþ îïèàòíûõ ðåöåïòîðîâ ïðè ãèïîêñèè âëå÷åò çà ñîáîé îäíîâðåìåííîå ïîâûøåíèå àêòèâíîñòè ôåðìåíòîâ, ó÷àñòâóþùèõ â âîññòàíîâëåíèè íèòðèò- è íèòðàò-èîíîâ â NO [14]. Íåîáõîäèìî òàêæå ó÷èòûâàòü, ÷òî âàæíóþ ðîëü ïðè ãèïîêñèè ìîæåò èãðàòü íèòðèòðåäóêòàçíàÿ àêòèâíîñòü ìèòîõîíäðèé. Ñëåäîâàòåëüíî, ïðè ââåäåíèè êðûñàì äàëàðãèíà íà ôîíå ÎÏÍ öèêë îêñèäà àçîòà ìîæíî ðàññìàòðèâàòü êàê ïåðâîå çâåíî çàùèòû êëåòîê îò èçáûòêà NO è ïîâûøåííîãî ñîäåðæàíèÿ àêòèâíûõ ôîðì êèñëîðîäà, à èçìåíåíèå èíòåíñèâíîñòè ïðîòåîëèçà è àêòèâíîñòè ñóïåðîêñèääèñìóòàçû, î÷åâèäíî, ÿâëÿåòñÿ ñëåäñòâèåì ñíèæåíèÿ óðîâíÿ ñâîáîäíûõ ðàäèêàëîâ. Òàêèì îáðàçîì, ïîëó÷åííûå íàìè äàííûå ïîêàçûâàþò, ÷òî àêòèâàöèÿ îïèàòíûõ ðåöåïòîðîâ ñïîñîáñòâóåò ñíèæåíèþ èíòåíñèâíîñòè ïðîòåîëèçà è óâåëè÷åíèþ àêòèâíîñòè ñóïåðîêñèääèñìóòàçû, ÷òî ïîâûøàåò òîëåðàíòíîñòü ïî÷åê ê îêñèäàòèâíîìó ñòðåññó. Ýòè çàùèòíûå ýôôåêòû îïîñðåäîâàííû îïèàòíûìè ðåöåïòîðàìè è çàâèñÿò îò àêòèâàöèè NO-ñèíòàçû â êëåòêàõ ïî÷å÷íîé òêàíè. ISSN 0201 8470. Óêð. á³îõ³ì. æóðí., 2004, ò. 76, ¹ 1 101 ÅÊÑÏÅÐÈÌÅÍÒÀËÜͲ ÐÎÁÎÒÈ ROLE OF NO-SYNTHASE IN STIMULATION OF OPIATE RECEPTOR AND KIDNEY OXIDATIVE STRESS RESISTANCE Ye. A. Orlova, I. A. Komarevtseva Lugansk State Medical University; e-mail: KVN@cci.lg.ua Summary It was established that dalarginum injection before ARI (acute renal insufficiency) formation prevented an increases of proteolysis, decrease of SOD (superoxide dismutase), increase of NO2- / NO3- content in kidney tissue. Antioxidant effect of opiate receptor agonist was completely abolished by preliminary injection of OR antagonist naloxone. Aminoguanidine nitrate (inducible NO-synthase inhibitor) injection removed positive effect of OR stimulation too. Thus OR stimulation increases kidney oxidative stress resistance due to NO-synthase and SOD activation. K e y w o r d s: dalarginum, superoxide dismutase, proteolysis, NO-synthase, oxidative stress. 1. Oliver C. N., Ahn B.-W., Moermann E. J. // J. Biol. Chem. 1997. 262, N 12. P. 54885491. 2. Ìåùèøåí ². Ô ., Ïîëüîâèé Â. Ï. // Áóêîâ. ìåä. â³ñíèê. 1999. 3, ¹ 1. Ñ. 196205. 102 3. Áèëåíêî Ì. Â. Èøåìè÷åñêèå è ðåïåðôóçèîííûå ïîâðåæäåíèÿ îðãàíîâ (ìîëåêóëÿðíûå ìåõàíèçìû, ïóòè ïðåäóïðåæäåíèÿ è ëå÷åíèÿ). 1989. Ì.: Ìåäèöèíà. 4. Ïàøóòèí Ñ. Á. // Áþë. ýêñïåðèì. áèîë. 1991. 113, ¹ 11. Ñ. 505507. 5. Àëåêñàíäðîâà Â. À., Ðû÷êîâà Ñ. Â. // Ïåäèàòðèÿ. 1993. ¹ 3. Ñ. 101104. 6. Îðëîâà Å. À. // Ìåä. àëüìàíàõ. 2002. 5, ¹ 4. Ñ. 9698. 7. Îðëîâà Å. À. // Ìåä. àëüìàíàõ. 2002. 5, ¹ 5. Ñ. 98100. 8. Ñèðîòà Ò. Â. // Âîïðîñû ìåä. õèìèè. 1999. ¹ 3. Ñ. 4353. 9. Îðëîâà Å. À. // Óêð. æóðí. åêñòðåì. ìåäèöèíè. 2002. 3, ¹ 1. Ñ. 7983. 10. Davies K. J. A., Delsignore M. E., Lin S. W. // J. Biol. Chem. 1987. 262, N 20. P. 99029907. 11. Ðåóòîâ Â. Ï. // Óñïåõè áèîë. õèìèè. 1995. 35. Ñ. 189228. 12. Ëèøìàíîâ Þ. Á., Ðåáðîâà Ò. Þ., Àôàíàñüåâ Ñ. À., Êðàâ÷åíêî À. È. // Áþë. ýêñïåðèì. áèîë. è ìåä. 1992. 11. Ñ. 8891. 13. Yang B. C., Mechta J. L. // Life Sciences. 1997. 61, N 1. P. 229236. 14. Ðåáðîâà Ò. Þ., Ìàñëîâ Ë. Í., Ëèøìàíîâ À. Þ., Òàì Ñ. Â. // Áèîõèìèÿ. 2001. 66, ¹ 4. Ñ. 520 528. Ïîëó÷åíî 15.05.2003 ISSN 0201 8470. Óêð. á³îõ³ì. æóðí., 2004, ò. 76, ¹ 1