-

БИО-ЛА-ТЕСТ
ГОМОЦИСТЕИН
(FHER 100)
Кат.№ 50003034
Хранить при (+2 - +8)0С
Набор жидких реагентов для количественного определения
общего гомоцистеина в сыворотке и плазме крови.
Введение
Гомоцистеин
(Гц)
промежуточный
продукт
обмена
незаменимой аминокислоты метионина, то есть, является
продуктом обмена белков. Гомоцистеин не входит в состав
белков, под действием ферментов он может превращаться в
цистеин, либо обратно - в метионин. При низком уровне
гомоцистеина не происходит повреждения артериальных
сосудов, соединение не опасно для организма в целом.
Повышение уровня гомоцистеина (гипергомоцистеинемия)
может привести к воспалению в стенке артериальных сосудов, и
в конечном итоге, - к их повреждению и снижению поступления
крови к ткани сердца. Клинические исследования начались в
1969 году, когда Dr. Kilmer и S. McCully описали детей с
генетическими нарушениями метаболизма гомоцистеина,
которые сопровождаются повышением уровня гомоцистеина и
гомоцистинурией. Дети умирали в очень раннем возрасте от
выраженного повреждения артериальных сосудов (1). Более
поздние исследования показали, что повышенный уровень
гомоцистеина
является
предиктором
риска
развития
ишемической болезни сердца, таким же каким является
повышенный
уровень
холестерина
(2,3).
Последние
исследования также показали роль гомоцистеина в развитии
акушерской патологии, выкидышах и рождении детей с
врожденными аномалиями развития.
Принцип метода
Связанный или димеризованный гомоцистеин (окисленная
форма) восстанавливается до свободного гомоцистеина,
который
реагирует с серином. Реакция катализируется
цистатионин-β-синтазой, с образованием L-цистатионина.
Цистатионин расщепляется цистатионин-β-лиазой (ЦβЛ) до
гомоцистеина, пирувата и аммиака. Лактатдегидрогеназа
катализирует преобразование пирувата в лактат. Изменение
поглощения за время превращения НАДН в НАД+, измеряемое
при
340
нм,
прямо
пропорционально
концентрации
гомоцистеина.
Серин + Гомоцистеин
L-цистатионин
Пируват + NADH
ЦβЛ
ЛДГ
ЦβС
L-цистатионин
Гомоцистеин + Пируват + NH3
Лактат + NAD+
Состав набора
Все реагенты жидкие, готовые к использованию.
Реагент R1
Прозрачная
NADH (0,56 ммоль/л),
1х36 мл, янтарный жидкость
без Лактатдегидрогеназа
флакон
запаха
(65 кЕ/л),
Серин (1,3 ммоль/л),
Trizma 1-10%,
Trizma гидрохлорид
1-10%,
Азид натрия < 1%
Реагент R2
1х15
прозрачный
флакон
Реагент R3
1х7
прозрачный
флакон
мл,
Прозрачная
жидкость
без
запаха
Желтая
мл опалесцирующая жидкость
без запаха
Калибратор 1
1х3
мл,
прозрачный
флакон (голубая
крышка)
Калибратор 2
1х3
мл,
прозрачный
флакон (красная
крышка)
Восстановитель
25 ммоль/л)
(TCEP
Циклические ферменты
ЦβС (0,748 кЕ/л) и ЦβЛ
(16,4 кЕ/л)
Азид натрия <1%
Прозрачная
жидкость
без
запаха
Водный раствор бланка
гомоцистеина
(0
мкмоль/л)
Прозрачная
жидкость
без
запаха
Водный
гомоцистеина
мкмоль/л)
раствор
(27
Приготовление и стабильность рабочих реагентов
Реагенты и калибраторы жидкие готовые для использования.
Реагенты и калибраторы стабильны до достижения указанного
срока годности, если хранится при 2-80С, в тщательно закрытых
флаконах. Избегать контаминации.
Не замораживать. Реагенты стабильны на борту анализатора в
течение 30 дней. Не смешивать реагенты разных серий.
Образцы
Для определения концентрации гомоцистеина использовать
свежую ЭДТА или гепаринизированную плазму без гемолиза и
мутности.
Для
сыворотки
рекомендуетя
использовать
специальные пробирки с активатором образования сгустка.
Образцы крови необходимо поместить на лед сразу после
сбора, отцентрифугировать в максимально короткие сроки (в
течение 1 часа).
Не использовать липемичные образцы.
Образцы
хранить при 2-80С в течение 48 часов, для
длительного хранения заморозить при –200С.
Определение концентрации гомоцистеина рекомендуется
проводить на автоматических анализаторах.
Протоколы для использования на автоматических анализаторах
могут быть получены по запросу.
Калибровка
Убедитесь в том, параметры измерения выставлены в
соответствии с инструкцией и правильно проведена калибровка.
В каждой лаборатории необходимо определять свои диапазоны
допустимых
значений
для
контрольных
материалов.
Поставляются контрольные материалы с низким, нормальным и
высоким уровнем гомоцистеина.
Контрольные материалы
сыворотка крови человека, содержащая L-гомоцистеин
следующих концентрациях:
Контроль
Средняя
Диапазон
концентрация
концентраций
гомоцистеина
гомоцистеина
(мкмоль/л)
(мкмоль/л)
Контроль
низкий
7,0
5,6-8,4
уровень
Контроль
средний
12,5
10,0-15,0
уровень
Контроль
высокий
25,0
20,0-30,0
уровень
(определено на биохимическом анализаторе Cobas Mira)
в
Сравнение методов
Сравнение было проведено с использованием свежей плазмы
крови взрослых пациентов Все образцы протестированы с
использованием данного энзиматического метода, метода
Москва, ул Нижегородская, 32, корп. 15, офис 503
Тел./факс: (495) 755-78-51, 755-55-80, 755-78-81, 755-78-92, е-mail: lachema@mail.ru, www.lachema.ru
флюоресцентного поляризационного анализа фирмы Abbot
(Abbott FPIA) и метода высокоэффективной жидкостной
хроматографии фирмы Pacific Biometrics, Inc (HPLC Pacific
Biometrics, Inc).
Сравнение методов показало хорошую сходимость результатов.
Воспроизводимость
Исследование воспроизводимости энзиматического метода
определения гомоцистеина проводилось в соответствии с
протоколом NCCLS ЕР5-А (7).
Образец
СреднеарифметиCV%
CV%
CV%
ческое значение
внутри
между
общий
(мкмоль/л)
серии
сериями
1
4,6
6,6
3,1
7,3
2
11,6
3,5
0,7
4,0
3
27,0
1,6
1,5
2,6
Аналитическая чувствительность
Нижний предел определения: 0,40 мкмоль/л.
Специфичность/Влияющие вещества
Влияющие вещества
Концентрация
Интерференция
влияющих
%
веществ
Билирубин
20 мг/дл
<5%
Гемоглобин
1000 мг/дл
<5%
Липемия(триглицериды)
1000 мг/дл
<10%
Глутатион
20 мкмоль/л
<5%
Метионин
800 мкмоль/л
<5%
Цистеин
200 мкмоль/л
<5%
Пируват
1000 мкмоль/л
<5%
Ни одно из указанных веществ достоверно не влияет на
точность анализа (<10%).
Нормальные величины
Исследование проведено с участием практически здоровых
пациентов (131 обследуемый: 59 мужчин и 72 женщины в
возрасте 18-86 лет). В образцах плазмы крови с ЭДТА
определялась концентрация общего гомоцистеина. Нормальный
диапазон концентрации гомоцистеина составил:
Взрослые: 4,0-15,4 мкмоль/л.
Приведенные
величины
следует
рассматривать
как
ориентировочные. Каждой лаборатории необходимо определять
свои диапазоны.
При работе необходимо соблюдать правила личной гигиены.
Запрещается есть, пить и курить.
1. Точно соблюдать инструкцию, особенно те пункты,
которые касаются подготовки реагентов и их хранения.
2. Реагент R1 и R3 содержат азид натрия в качестве
консерванта. Не глотать! Избегать попадания на кожу и
слизистые оболочки! При сливе реактива в канализацию,
смывать большим количеством воды.
Первая помощь
При приеме внутрь следует прополоскать рот водой, выпить 0,5
л воды и вызвать рвоту. При попадании в глаза быстро промыть
их проточной водой. При попадании на кожу необходимо
промыть теплой водой с мылом. Во всех серьезных случаях
обратиться к врачу.
Литература
1. McCully KS. Vascular pathology of homocysteinemia:
implications for the pathogenesis of arteriosclerosis, Am J
Pathol. 1969;56:111-128.
2. McCully KS. Chemical pathology of homocysteine: I.
Atherogenesis. Ann Clin Lab Sci. 1993;23:447-493.
3. Cramer DA. Homocysteine vs cholesterol-competing views, or a
unifying explanation of arteriosclerotic cardiovascular disease?
Laboratory Medicine vol. 29, no. 7, July 1998.
4. Rosenquist TH, Ratashak SA, Selhub J. Homocysteine induces
congenital defects of the heart and neural tube: effect of folic
acid. Proc Natl Acad Sci USA 1996;93:15227-15232.
5. Young, DS. Effects of drugs on clinical laboratory tests, 5th ed.,
AACC Press, Washington, DC, 2000, p 3-441.
6. Ueland PM, Refsum H, Stabler SP, et al, Total Homocysteine in
Plasma or Serum: Methods and Clinical Applications, Clin
Chem 1993;39:1764-79.
7. National Committee for Clinical Laboratory Standards.
Evaluation of precision performance of clinical chemistry
devices; Approved Guidelines. NCCLS Document EP5-A,
Wayne, PA:NCCLS, 1999.
Примечание
1. Линейность метода определения гомоцистеина
до 50
мкмоль/л. Если концентрация гомоцистеина в образцах
превышает 50 мкмоль/л, разбавить образцы в соотношении
1+3 физраствором (0.9%NaCl) и повторить анализ,
используя данное разведение. Полученный результат
умножить на 3.
2. Реагент R1 должен быть прозрачным. Если в растворе
появилась мутность, или начальная абсорбция меньше, чем
0,700, то данный реагент непригоден для анализа.
3. Если в образце присутствует цистатионин, то он может
быть определен как гомоцистеин. В норме в сыворотке и
плазме крови цистатионин не присутствует в достаточных
количествах, чтобы повлиять на результаты анализа
(обычно, в концентрации 0,065-0,301 мкмоль/л).
4. Лекарственные препараты, такие как метотрексат,
карбамазепин, фенитоин, закись азота, или 6 азауридин
триацетат могут влиять на концентрацию гомоцистеина в
плазме крови.
Меры предосторожности
Набор реагентов предназначен для in vitro диагностики
профессионально обученным лаборантом.
Во время работы соблюдать все правила общей безопасности,
соблюдаемые при использовании лабораторных реагентов.
Москва, ул Нижегородская, 32, корп. 15, офис 503
Тел./факс: (495) 755-78-51, 755-55-80, 755-78-81, 755-78-92, е-mail: lachema@mail.ru, www.lachema.ru