352 ÂÅÑÒÍ. ÌÎÑÊ. ÓÍ-ÒÀ. ÑÅÐ. 2. ÕÈÌÈß. 1998. Ò. 39. ¹ 5 ÕÈÌÈß ÏÐÈÐÎÄÍÛÕ ÑÎÅÄÈÍÅÍÈÉ ÓÄÊ 615.332.038 CÈÍÒÅÇ È ÑÂÎÉÑÒÂÀ ÍÅÊÎÒÎÐÛÕ N-ÀÖÈËÜÍÛÕ ÏÐÎÈÇÂÎÄÍÛÕ ÀÍÒÈÁÈÎÒÈÊÀ-ÃËÈÊÎÏÅÏÒÈÄÀ ÐÈÑÒÎÌÈÖÈÍÀ À È.Â. Äåíèñîâà, È.Ã. Ñìèðíîâà, Ò.Ô. Áåðäíèêîâà* , Ã.Ñ. Êàòðóõà* (êàôåäðà õèìèè ïðèðîäíûõ ñîåäèíåíèé) Ïðîâåäåíà ñïåöèôè÷åñêàÿ õèìè÷åñêàÿ ìîäèôèêàöèÿ ñâîáîäíûõ àìèíîãðóïï ìîëåêóëû àíòèáèîòèêà ãëèêîïåïòèäà ðèñòîìèöèíà À îñòàòêàìè æèðíûõ êèñëîò: ýíàíòîâîé (Ñ7Í14Î2), ìèðèñòèíîâîé (Ñ14Í28Î2), ïàëüìèòèíîâîé (Ñ16Í32Î2). Ïîëó÷åíû ñîîòâåòñòâóþùèå ìîíî- è äè-N-àöèëüíûå ïðîèçâîäíûå àíòèáèîòèêà. Èçó÷åíû èõ ôèçèêî-õèìè÷åñêèå è áèîëîãè÷åñêèå ñâîéñòâà. Íàñòîÿùàÿ ðàáîòà ÿâëÿåòñÿ ïðîäîëæåíèåì èññëåäîâàíèé ïî íàïðàâëåííîé õèìè÷åñêîé ìîäèôèêàöèè êëèíè÷åñêîãî àíòèáèîòèêà ðèñòîìèöèíà À (ðèñòîöåòèíà À) [14] . Ðèñòîìèöèí À ïîëó÷åí â ÍÈÈ ïî èçûñêàíèþ íîâûõ àíòèáèîòèêîâ ÐÀÌÍ [5, 6], îòíîñèòñÿ ê àíòèáèîòèêàì ãðóïïû äàëáàãåïòèäîâ [7, 8] è ïðèìåíÿåòñÿ â ìåäèöèíñêîé ïðàêòèêå ïðè ëå÷åíèè îñòðûõ áàêòåðèàëüíûõ èíôåêöèé, âûçâàííûõ ãðàìïîëîæèòåëüíûìè áàêòåðèÿìè ñòàôèëîêîêêàìè, ñòðåïòîêîêêàìè è ýíòåðîêîêêàìè, â òîì ÷èñëå è îáëàäàþùèìè óñòîé÷èâîñòüþ ê β-ëàêòàìíûì àíòèáèîòèêàì, òåòðàöèêëèíàì è ìàêðîëèäàì. Àíòèáèîòèêè-äàëáàãåïòèäû îáëàäàþò óíèêàëüíîé ñïîñîáíîñòüþ âîçäåéñòâîâàòü íà áàêòåðèè, êîòîðàÿ çàêëþ÷àåòñÿ â èíãèáèðîâàíèè áèîñèíòåçà êëåòî÷íîé ñòåíêè áàêòåðèé ïóòåì ñâÿçûâàíèÿ ñ D-Ala-DAla-OH ôðàãìåíòîì ðàñòóùåãî ïåïòèäîãëèêàíà [9, 10].  ïîñëåäíåå âðåìÿ îáíàðóæåíû ðåçèñòåíòíûå ê äàëáàãåïòèäàì øòàììû áàêòåðèé, â ïåïòèäîãëèêàíàõ *ÍÈÈ ïî èçûñêàíèþ íîâûõ àíòèáèîòèêîâ ÐÀÌÍ (Ìîñêâà) . êëåòî÷íîé ñòåíêè êîòîðûõ âìåñòî ôðàãìåíòà D-Ala-DAla-OH ïðèñóòñòâóåò ôðàãìåíò D-Ala-D-Lactat [11], êîòîðûé ïðàêòè÷åñêè íå ñâÿçûâàåòñÿ ñ àíòèáèîòèêàìè ðàññìàòðèâàåìîé ãðóïïû, è áàêòåðèÿ ïðîäîëæàåò ñâîé æèçíåííûé öèêë. Îïàñíîñòü øèðîêîãî ðàñïðîñòðàíåíèÿ ðåçèñòåíòíûõ êî ìíîãèì àíòèáèîòèêàì øòàììîâ áîëåçíåòâîðíûõ áàêòåðèé òðåáóåò ðàçâèòèÿ èññëåäîâàíèé ïî âûÿñíåíèþ ìåõàíèçìà ðåçèñòåíòíîñòè è ïîèñêà ñîåäèíåíèé, ïðåîäîëåâàþùèõ ðåçèñòåíòíîñòü. Îäíèì èç ïîäõîäîâ ê ðåøåíèþ äàííîé çàäà÷è ÿâëÿåòñÿ íàïðàâëåííàÿ õèìè÷åñêàÿ ìîäèôèêàöèÿ àíòèáèîòèêîâ äàëáàãåïòèäîâ âàíêîìèöèíîâîé è ðèñòîìèöèíîâîé ãðóïï [12]. Èçâåñòíî, ÷òî ââåäåíèå â ìîëåêóëó ãëèêîïåïòèäîâ ãèäðîôîáíûõ ðàäèêàëîâ îïðåäåëåííîãî ðàçìåðà âûçûâàåò íå òîëüêî ïðåîäîëåíèå ðåçèñòåíòíîñòè, íî è ðàñøèðåíèå ñïåêòðà äåéñòâèÿ àíòèáèîòèêà [1315]. Ïîýòîìó â äàííîé ðàáîòå èçó÷åíà âîçìîæíîñòü ïîëó÷å- ÂÅÑÒÍ. ÌÎÑÊ. ÓÍ-ÒÀ. ÑÅÐ. 2. ÕÈÌÈß. 1998. Ò. 39. ¹ 5 íèÿ àöèëüíûõ ïðîèçâîäíûõ ïî ñâîáîäíûì àìèíîãðóïïàì ðèñòîìèöèíà À ñ èñïîëüçîâàíèåì àêòèâèðîâàííûõ ïåíòàôòîðôåíèëîâûõ ýôèðîâ æèðíûõ êèñëîò ñ ðàçëè÷íûì ÷èñëîì óãëåðîäíûõ àòîìîâ.  ðàáîòå èñïîëüçîâàëè ýíàíòîâóþ (Ñ6Í13ÑÎÎÍ), ìèðèñòèíîâóþ (Ñ 13 Í 27 ÑÎÎÍ) è ïàëüìèòèíîâóþ (Ñ15Í31ÑÎÎÍ) êèñëîòû. Äëÿ àêòèâàöèè êàðáîêñèëüíîé ãðóïïû ïîëó÷àëè ïåíòàôòîðôåíèëîâûå ýôèðû æèðíûõ êèñëîò ïî ìîäèôèöèðîâàííîé ìåòîäèêå [16] ñ ïðèìåíåíèåì äèöèêëîãåêñèëêàðáîäèèìèäà (ÊÄÈ). Àêòèâèðîâàííûå ýôèðû æèðíûõ êèñëîò ââîäèëè â ðåàêöèþ ñ àíòèáèîòèêîì ðèñòîìèöèíîì â ïðèñóòñòâèè N-ìåòèëìîðôîëèíà â ñìåñè ÄÌÔÀ Í2Î ïðè 37 ° Ñ. Êîíòðîëü çà õîäîì ðåàêöèè îñóùåñòâëÿëè ñ ïîìîùüþ ýëåêòðîôîðåçà íà áóìàãå â ýëåêòðîëèòå (ðÍ 1.1). Èçâåñòíî, ÷òî ðèñòîìèöèí ñîäåðæèò äâå ñâîáîäíûå àìèíîãðóïïû: àìèíîãðóïïó N-êîíöåâîé ðèñòîìèöèíîâîé êèñëîòû è àìèíîñàõàðà ðèñòîçàìèíà, ñâÿçàííîãî ñ àãëèêîíîì ÷åðåç β-îêñèãðóïïó òðåõÿäåðíîé äèäåõëîðâàíêîìèöèíîâîé êèñëîòû [6].  çàâèñèìîñòè îò êîëè÷åñòâà ââîäèìîãî â ðåàêöèþ àêòèâèðîâàííîãî ýôèðà íàáëþäàëîñü îáðàçîâàíèå ëèáî äè-N,N '-àöèëüíîãî ïðîèçâîäíîãî ðèñòîìèöèíà À, ëèáî ñìåñè ìîíî-N-, äè-N,N '-àöèëüíûõ ïðîèçâîäíûõ è ñâîáîäíîãî ðèñòîìèöèíà À. Äëÿ ïîëó÷åíèÿ èíäèâèäóàëüíûõ êîìïîíåíòîâ ðåàêöèîííóþ ñìåñü ðàçäåëÿëè ñ ïîìîùüþ ìåòîäà ÒÑÕ íà ñèëèêàãåëå â ñèñòåìå I í.-áóòàíîë ÍÑÎÎÍ Í2Î (4:1:1). Îäíîðîäíîñòü ïîëó÷åííûõ N-àöèëüíûõ ïðîèçâîäíûõ ðèñòîìèöèíà À ïðîâåðÿëè ìåòîäîì ÒÑÕ íà ñèëèêàãåëå â ñèñòåìå II ýòèëàöåòàò èçî-ïðîïàíîë 25%-é àììèàê (15:15:20), à àíòèáàêòåðèàëüíóþ àêòèâíîñòü in vitro ìåòîäîì áèîàâòîãðàôèè ñ èñïîëüçîâàíèåì â êà÷åñòâå òåñò-îðãàíèçìà Bacillus subtilis ATCC 6633. Áûëî ïîêàçàíî, ÷òî ïîëó÷åííûå ìîíî-N-àöèëüíûå ïðîèçâîäíûå ðèñòîìèöèíà À îáëàäàþò àíòèáàêòåðèàëüíîé àêòèâíîñòüþ â îòíîøåíèè âûáðàííîãî òåñòîðãàíèçìà. Ïðè÷åì íàèáîëüøóþ àêòèâíîñòü èìååò ðèñòîìèöèí À , àöèëèðîâàííûé ýíàíòîâîé êèñëîòîé. Äè-N,N'-àöèëüíûå ïðîèçâîäíûå ðèñòîìèöèíà À ïðàêòè÷åñêè íåàêòèâíû, âîçìîæíî, âñëåäñòâèå èõ ïëîõîé ðàñòâîðèìîñòè â èñïûòàííûõ âîäíî-îðãàíè÷åñêèõ ñðåäàõ.  äàëüíåéøåì ïðåäïîëàãàåòñÿ ïðîäîëæèòü ðàáîòó ïî ïîëó÷åíèþ íîâûõ N-àöèëüíûõ ïðîèçâîäíûõ ðèñòîìèöèíà À , à òàêæå èçó÷åíèþ èõ áèîëîãè÷åñêèõ ñâîéñòâ â îïûòàõ in vitro è in vivo è êîìïëåêñîîáðàçîâàíèÿ ñ Ñ-êîíöåâûì ôðàãìåíòîì ðàñòóùåãî ïåïòèäîãëèêàíà áàêòåðèàëüíîé ñòåíêè N-Ac-D-Ala-D-Ala-OH. 353 Ýêñïåðèìåíòàëüíàÿ ÷àñòü  ðàáîòå èñïîëüçîâàëè îáðàçöû ðèñòîìèöèíà À ñóëüôàòà, ïîëó÷åííîãî íà îïûòíîé óñòàíîâêå ÍÈÈ ïî èçûñêàíèþ íîâûõ àíòèáèîòèêîâ ÐÀÌÍ (λ max 280 íì, 1% Å = 40, [a] 20D = –131° (ñ1, âîäà); àëèôàòè÷åñêèå êèñëîòû, ïåíòàôòîðôåíîë, äèöèêëîãåêñèëêàðáîäèèìèä è ïëàñòèíêè ñ ñèëèêàãåëåì ôèðìû «Merck» (Ãåðìàíèÿ)). ÒÑÕ ïðîâîäèëè â ñèñòåìàõ: í-áóòàíîë ÍÑÎÎÍ âîäà (4:1:1) (I), ýòèëàöåòàò èçî-ïðîïàíîë 25%-é àììèàê (15:15:20) (II), áåíçîë ãåêñàí (1:1) (III). Ýëåêòðîôîðåç ïðîâîäèëè íà ïðèáîðå, ðàáîòàþùåì ïî ïðèíöèïó âëàæíîé êàìåðû Äóððîìà (áóìàãà Filtrak FN-14 (Ãåðìàíèÿ), ýëåêòðîëèò ÍÑÎÎÍ ÑÍ3ÑÎÎÍ Í2Î (28:20:52), 300 Â, 3 ÷). Ýëåêòðîôîðåòè÷åñêóþ ïîäâèæíîñòü âåùåñòâ (U) îïðåäåëÿëè ïî ôîðìóëå 2 –1 –1 U = d . l / V. t ( ñì . . ÷ ) , ãäå d ðàññòîÿíèå, ïðîéäåííîå âåùåñòâîì îò òî÷êè íàíåñåíèÿ (ñì) , l äëèíà ïîëîñêè áóìàãè (ñì), V íàïðÿæåíèå (Â), t âðåìÿ ýëåêòðîôîðåçà (÷). Àêòèâèðîâàííûå ýôèðû îáíàðóæèâàëè íà ïëàñòèíêàõ ïî ïîãëîùåíèþ â ÓÔ-ñâåòå è ñ ïîìîùüþ êà÷åñòâåííûõ ðåàêöèé (ãèäðîêñàìîâîé è ñ èíäèêàòîðîì áðîìòèìîëîâûì-ñèíèì). Ðèñòîìèöèí è åãî ïðîèçâîäíûå îáíàðóæèâàëè ïî ïîãëîùåíèþ â ÓÔ-ñâåòå, à òàêæå ñ ïîìîùüþ äèàçîðåàêöèè Ïàóëè è íèíãèäðèíîâîãî ðåàêòèâà [17]. Ñèíòåç àêòèâèðîâàííûõ ýôèðîâ æèðíûõ êèñëîò Ïåíòàôòîðôåíèëîâûé ýôèð ïàëüìèòèíîâîé êèñëîòû. Ê ðàñòâîðó 1.282 ã ïàëüìèòèíîâîé êèñëîòû â ñìåñè äèîêñàí (25 ìë) è ÑH2Cl2 (15 ìë) ïðèáàâèëè 0.924 ã ïåíòàôòîðôåíîëà è ðàñòâîð 1.03 ã ÊÄÈ â 10 ìë äèîêñàíà. Ñìåñü ïåðåìåøèâàëè â òå÷åíèå20 ÷ ïðè êîìíàòíîé òåìïåðàòóðå, îòôèëüòðîâûâàëè îñàäîê äèöèêëîãåêñèëìî÷åâèíû, ðàñòâîð óïàðèâàëè è îñòàòîê ðàñòâîðÿëè â ýòèëàöåòàòå. Ýòèëàöåòàòíûé ðàñòâîð ïðîìûâàëè íåñêîëüêî ðàç 3%-ì âîäíûì ðàñòâîðîì áèêàðáîíàòà íàòðèÿ, âûñóøèâàëè áåçâîäíûì Na2SO4 è óïàðèâàëè â âàêóóìå. Âûõîä 60 %. Ñ22Í31Î2F5. Ì = 422, Òïë= 3940°Ñ, Rf = 0.92 (I), 0.56 (II) è 0.60 (III). Ïåíòàôòîðôåíèëîâûé ýôèð ìèðèñòèíîâîé êèñëîòû ïîëó÷åí ïî àíàëîãè÷íîé ìåòîäèêå. Âûõîä 60 %. C 20H 27O 2F5 . M = 394. Òïë = 3740 °Ñ, Rf = 0.94 (I), 0.50 (II) è 0.55 (III). 354 ÂÅÑÒÍ. ÌÎÑÊ. ÓÍ-ÒÀ. ÑÅÐ. 2. ÕÈÌÈß. 1998. Ò. 39. ¹ 5 Ïåíòàôòîðôåíèëîâûé ýôèð ýíàíòîâîé êèñëîòû ïîëó÷åí ïî îïèñàííîé âûøå ìåòîäèêå. Âûõîä 18 %. C 13H 13O 2 F 5. M= 296. Ò ïë= 25–28 ° Ñ, Rf = 0.97 (I), 0.48 (II) è 0.54 (III). Ñèíòåç N-àöèëüíûõ ïðîèçâîäíûõ ðèñòîìèöèíà À Ê ðàñòâîðó 83 ììîëü ðèñòîìèöèíà À ñóëüôàòà â 0.5 ìë âîäû ïðèáàâèëè ïî êàïëÿì N-ìåòèëìîðôîëèí äî ðÍ 9.0, à çàòåì ðàñòâîð 46 ììîëü àêòèâèðîâàííîãî ýôèðà â 1.0 ìë ÄÌÔÀ. Ðåàêöèîííóþ ñìåñü ïåðåìåøèâàëè â òå÷åíèå 1820 ÷ ïðè 37°Ñ, ïðîäóêò ðåàêöèè îñàæäàëè àöåòîíîì, îñàäîê ïðîìûâàëè àöåòîíîì, ðàñòâîðÿëè â ñèñòåìå I è õðîìàòîãðàôèðîâàëè íà ïëàñòèíêàõ 20×20 ñì ñ êèçåëüãåëåì «Merck-60-F254» (Ãåðìàíèÿ) â òîé æå ñèñòåìå. Ìåñòîïîëîæåíèå ïðîèçâîäíûõ íà ïëàñòèíêå îïðåäåëÿëè ïî ïîãëîùåíèþ â ÓÔ-ñâåòå, ñèëèêàãåëü, ñîäåðæàùèé ïðîèçâîäíîå àíòèáèîòèêà, ñîáèðàëè íà ôèëüòð è âåùåñòâî ýëþèðîâàëè 80%-ì ñïèðòîì. Ýëþàò óïàðèâàëè â âàêóóìå è ïðîâîäèëè àíàëèç ïîëó÷åííîãî N-àöèëüíîãî ïðîèçâîäíîãî ðèñòîìèöèíà À . Ïîëó÷åíû ñëåäóþùèå N-àöèëüíûå ïðîèçâîäíûå ðèñòîìèöèíà À: ÑÏÈÑÎÊ ËÈÒÅÐÀÒÓÐÛ 1. Êàòðóõà Ã.Ñ., Òðèôîíîâà Æ.Ï., Ñìèðíîâà È.Ã., Åãàíÿí Å.Ð., Ñìåÿíîâà Ã.È. Òåç. äîêë. Âñåñîþç. ñèìïîç. «Ïåðñïåêòèâû áèîîðãàíè÷åñêîé õèìèè â ñîçäàíèè íîâûõ ëåêàðñòâåííûõ ïðåïàðàòîâ». ã.Ðèãà, 1982. Ñ. 46. 2. Ñìèðíîâà È.Ã., Òðèôîíîâà Æ.Ï., Ñìåÿíîâà Ã.È., Ôåäîðîâà Ã.Á., Êàòðóõà Ã.Ñ. Àíòèáèîòèêè è ìåäèöèíñêàÿ áèîòåõíîëîãèÿ. 1986. 31. Ñ. 588. 3. Òðèôîíîâà Æ.Ï., Ñòóðìàí Í.Â., Êàòðóõà Ã.Ñ.,Ôåäîðîâà Ã.Á.// Àíòèáèîòèêè è õèìèîòåðàïèÿ. 1988. 33. Ñ. 814. 4. Kobrin M.B., Katrukha G.S., Fedorova G.B. // J. Antibiotics. 1989. 42. C. 1441. 5. Ëîìàêèíà Í.Í. Äèñ. ... äîêò. õèì. íàóê. Ì., 1969. 6. Ëîìàêèíà Í.Í., Êàòðóõà Ã.Ñ., Áðàæíèêîâà Ì.Ã., Ñèëàåâ À.Á., Òðèôîíîâà Æ.Ï., Äèàððà Á. // Àíòèáèîòèêè. 1982. 27. Ñ. 8. Ìîíî-N-ýíàíòîèë-ðèñòîìèöèí À C 102 H 121 N 8 O 45 . M = 2178, R f = 0.09 (I), 0.84 (II), U = 0.49. 7. Katrukha G.S., Silaev A.B. / Chemistry of Peptides and Proteins. Vol. 3. 1986. Ð. 289. 8. Cavalleri B., Parenti F. Glycopeptides (dalbaheptides). Encyclopedia of Chem. Technology. 4/e. Vol. 2. 1992. P. 995. Äè-N,N '-ýíàíòîèë-ðèñòîìèöèí À Ñ 109 H 133 N 8 O 46 . M = 2290, R f = 0.20 (I), 0.86 (II), U = 0. Ìîíî-N-ìèðèñòèíîèë-ðèñòîìèöèí À C 109 H 135 N 8 O 45 . M = 2276, R f = 0.17 (I), 0.84 (II), U = 0.48. Äè-N,N '-ìèðèñòèíîèë-ðèñòîìèöèí Òàêèì îáðàçîì, â ðåçóëüòàòå ïðîâåäåííîé ðàáîòû ïîëó÷åíû àêòèâèðîâàííûå ïåíòàôòîðôåíèëîâûå ýôèðû ýíàíòîâîé, ìèðèñòèíîâîé è ïàëüìèòèíîâîé êèñëîò. Ñ ïîìîùüþ àêòèâèðîâàííûõ ýôèðîâ ýíàíòîâîé, ìèðèñòèíîâîé è ïàëüìèòèíîâîé êèñëîò âïåðâûå ïîëó÷åíû ñîîòâåòñòâóþùèå ìîíî- è äè-N-àöèëüíûå ïðîèçâîäíûå àíòèáèîòèêà-ãëèêîïåïòèäà ðèñòîìèöèíà À è ïîêàçàíî, ÷òî ìîíî-N-àöèëüíûå ïðîèçâîäíûå îáëàäàþò àíòèáàêòåðèàëüíîé àêòèâíîñòüþ. À C 123 H 161 N 8 O 46 . M = 2486, R f = 0.33 (I), 0.84 (II), U = 0. Ìîíî-N-ïàëüìèòèíîèë-ðèñòîìèöèí À C 111 H 139 N 8 O 45 . M= 2304. R f = 0.18 (I) è 0.85 (II), U = 0.45. Äè-N,N '-ïàëüìèòèíîèë-ðèñòîìèöèí À C 127H 169N 8 O 46. M = 2542, Rf = 0.29 (I), 0.89 (II), U = 0. 9. Barna J.C.J, Williams D.H. // Ann. Rev. Microbial. 1984. 38. P. 339. 10. Reynolds P.E. // Eur. J. Clin. Microbiol. Infect. Dis. 1989. 8. P. 943. 11. Òðåíèí À.Ñ. Àíòèáèîòèêè è õèìèîòåðàïèÿ. 1996. 41. C. 49. 12. Òðåíèí À.Ñ., Îëñóôüåâà Å.Í. // Áèîîðãàíè÷åñêàÿ õèìèÿ. 1997. 23. C. 851. 13. Allen N.E., LeTourneau D.L., Hobbs J.N., Jr. // J. Antibiotics. 1997. 50. C. 677. 14. Nicas T.I., Mullen D.L., Flokovitch J.E. et al. // Antimicrob. Agents Chemoter. 1996. 40. P. 2194. 15. Schwalbe R.S., McIntosh A.C., Oaiyumi S. et al. // Antimicrob. Agents Chemoter. 1996. 40. P. 2416. 16. Ãåðøêîâè÷ À.À., Êèáèðåâ Â.Ê. Õèìè÷åñêèé ñèíòåç ïåïòèäîâ. Êèåâ, 1992. C. 73. 17. Õðîìàòîãðàôèÿ â òîíêèõ ñëîÿõ / Ïîä ðåä. Ý. Øòàëÿ. Ì., 1965. C. 476. Ïîñòóïèëà â ðåäàêöèþ 31.03.98