×óåíêî Ý.À.*, Óñâÿöîâ Á.ß.** *Èíñòèòóò êëåòî÷íîãî è âíóòðèêëåòî÷íîãî ñèìáèîçà ÓðÎ ÐÀÍ, ã. Îðåíáóðã **Îðåíáóðãñêàÿ ãîñóäàðñòâåííàÿ ìåäèöèíñêàÿ àêàäåìèÿ, ã. Îðåíáóðã ÕÀÐÀÊÒÅÐÈÑÒÈÊÀ ÀÍÒÈÊÀÐÍÎÇÈÍÎÂÎÉ ÀÊÒÈÂÍÎÑÒÈ ÐÀÇÍÛÕ ÂÈÄΠÑÒÀÔÈËÎÊÎÊÊΠÈçó÷åíà àíòèêàðíîçèíîâàÿ àêòèâíîñòü (ÀêðÀ) ïàòîãåííûõ è óñëîâíî-ïàòîãåííûõ ñòàôèëîêîêêîâ, âûäåëåííûõ ñî ñëèçèñòîé îáîëî÷êè íîñà çäîðîâûõ ëþäåé è áàêòåðèîíîñèòåëåé. Óñòàíîâëåíî, ÷òî ñòåïåíü âûðàæåííîñòè è ÷àñòîòà ÀêðÀ çàâèñèò îò âèäîâîé ïðèíàäëåæíîñòè ìèêðîîðãàíèçìîâ è èñòî÷íèêà âûäåëåíèÿ.  ãðóïïå óñëîâíî-ïàòîãåííûõ ñòàôèëîêîêêîâ âûÿâëåíà ïðÿìàÿ ñâÿçü ÀêðÀ ñ ôàêòîðàìè êîëîíèçàöèè è ïåðñèñòåíöèè, íî îáðàòíàÿ çàâèñèìîñòü ñ ôàêòîðàìè âèðóëåíòíîñòè. Ó ïàòîãåííîãî âèäà S. aureus îïðåäåëÿåòñÿ ïðÿìàÿ çàâèñèìîñòü ìåæäó ýêñïðåññèåé ÀêðÀ è ÷àñòîòîé âñòðå÷àåìîñòè ôàêòîðîâ êîëîíèçàöèè, ïåðñèñòåíöèè è âèðóëåíòíîñòè. Êëþ÷åâûå ñëîâà: ñòàôèëîêîêêè, àíòèêàðíîçèíîâàÿ àêòèâíîñòü, ôàêòîðû ïàòîãåííîñòè. Ââåäåíèå Ñòàôèëîêîêêè ÿâëÿþòñÿ ýòèîëîãè÷åñêèì ôàêòîðîì âîçíèêíîâåíèÿ èíôåêöèîííîãî ïðîöåññà. Òðóäíîñòè ëå÷åíèÿ è ïðîôèëàêòèêè ñòàôèëîêîêêîâûõ èíôåêöèé ñâÿçàíû ñ íàëè÷èåì ðàçëè÷íûõ ôàêòîðîâ ïåðñèñòåíöèè ó ýòèõ ìèêðîîðãàíèçìîâ [6]. Áàêòåðèàëüíàÿ êëåòêà ðàñïîëàãàåò ñåêðåòèðóåìûìè ôàêòîðàìè, íàïðàâëåííûìè íà èíàêòèâàöèþ ìåõàíèçìîâ èììóíèòåòà õîçÿèíà: àíòèëèçîöèìíàÿ, àíòèèììóíîãëîáóëèíîâàÿ, àíòèèíòåðôåðîíîâàÿ, àíòèêîìïëåìåíòàðíàÿ àêòèâíîñòè [4]. Áîëüøîé èíòåðåñ ïðåäñòàâëÿþò ïîÿâèâøèåñÿ ñâåäåíèÿ îá èíàêòèâàöèè ñòàôèëîêîêêàìè ãèñòèäèíîâîãî äèïåïòèäà-êàðíîçèíà (â-àëàíèë-L-ãèñòèäèí) [8]. Íàèáîëüøåå ñîäåðæàíèå êàðíîçèíà íàáëþäàåòñÿ â îáîíÿòåëüíîì ýïèòåëèè íîñîâîé ïîëîñòè [13]. Ê íàñòîÿùåìó âðåìåíè óñòàíîâëåíû âàæíûå áèîëîãè÷åñêèå ôóíêöèè, âûïîëíÿåìûå ýòèì ïðèðîäíûì äèïåïòèäîì, òàêèå êàê àíòèîêñèäàíòíûå ñâîéñòâà, íàïðàâëåííûå íà ïîäàâëåíèå ñâîáîäíî ðàäèêàëüíûõ ðåàêöèé, ïðîòèâîàëëåðãè÷åñêîå, àíòèñòðåññîðíîå, ïðîòèâîèøåìè÷åñêîå äåéñòâèå [3]. Òàêæå îáíàðóæåíà àíòèáàêòåðèàëüíàÿ àêòèâíîñòü êàðíîçèíà [12]. Î.Ë. ×åðíîâà óñòàíîâèëà, ÷òî ìèêðîîðãàíèçìû îáëàäàþò ÀêðÀ, ÿâëÿþùåéñÿ îäíèì èç ìåõàíèçìîâ ïåðñèñòåíöèè áàêòåðèé â ýïèòåëèàëüíûõ êëåòêàõ ñëèçèñòîé íîñà [11]. Îïèñàíà ìåñòíàÿ ðåàêöèÿ òêàíåé îðãàíèçìà â îòâåò íà âîçäåéñòâèå ìèêðîîðãàíèçìîâ, îòëè÷àþùèõñÿ ïî àíòèêàðíîçèíîâîìó ïðèçíàêó [10]. Âìåñòå ñ òåì íåäîñòàòî÷íî èçó÷åíû õàðàêòåðèñòèêè ÀêðÀ ñðåäè ñòàôèëîêîêêîâ è ðîëü ýòîãî ïðèçíàêà â ìèêðîáíîé ýêîëîãèè. Öåëüþ íàñòîÿùåé ðàáîòû ÿâèëîñü èçó÷åíèå ÷àñòîòû ðàñïðîñòðàíåíèÿ ÀêðÀ ó ðàçíûõ âèäîâ ñòàôèëîêîêêîâ, ñâÿçü ÀêðÀ ñ äðóãèìè ôàêòîðàìè ïàòîãåííîñòè (ÔÏ) ñòàôèëîêîêêîâ, îáèòàþùèõ íà ñëèçèñòîé îáîëî÷êå íîñà â íîðìå è ïðè áàêòåðèîíîñèòåëüñòâå. Ìàòåðèàëû è ìåòîäû  ðàáîòå èñïîëüçîâàí 261 øòàìì ñòàôèëîêîêêîâ: S.aureus (n = 36), S.epidermidis (n = 114), S.hylosus (n = 26), S.cohnii (n = 18), S.hominis (n = 30), S.capitis (n = 14), S.warneri (n = 11), S.haåmolyticus (n = 12). Øòàììû ñòàôèëîêîêêîâ áûëè âûäåëåíû ñî ñëèçèñòîé îáîëî÷êè íîñîâûõ õîäîâ çäîðîâûõ ëèö (íåíîñèòåëåé) è áàêòåðèîíîñèòåëåé. Áûëî îáñëåäîâàíî 150 ÷åëîâåê, âûÿâëåíî 78 áàêòåðèîíîñèòåëåé. Âçÿòèå èññëåäóåìîãî ìàòåðèàëà ïðîâîäèëè èç ïåðåäíèõ îòäåëîâ íîñà ñòåðèëüíûì âàòíûì òàìïîíîì. Èññëåäóåìûé ìàòåðèàë çàñåâàëè íà ÷àøêè ñ æåëòî÷íî-ñîëåâûì àãàðîì è èíêóáèðîâàëè ïðè 370Ñ â òå÷åíèå 24-48 ÷àñîâ. Äëÿ âûäåëåíèÿ ÷èñòûõ êóëüòóð îòäåëüíûå êîëîíèè ðàññåâàëèñü íà ñêîøåííûé àãàð. Èäåíòèôèêàöèþ ìèêðîîðãàíèçìîâ ïðîâîäèëè ïî ìîðôîëîãè÷åñêèì, êóëüòóðàëüíûì è áèîõèìè÷åñêèì ñâîéñòâàì ñ èñïîëüçîâàíèåì ñèñòåìû STAPHYtest ôèðìû «Lachema» (×åõèÿ). Ëåöèòîâèòåëëàçíàÿ (ËåöÀ), ãåìîëèòè÷åñêàÿ (ÃÀ) àêòèâíîñòè îïðåäåëÿëèñü ïî îáùåïðèíÿòûì ìåòîäèêàì [2]. Ëèçîöèìíàÿ (ËÀ) è àíòèëèçîöèìíàÿ (ÀËÀ) àêòèâíîñòè îöåíèâàëèñü ïî èçâåñòíûì òåñòàì [7]. ÀêðÀ èçó÷àëàñü ïî ðàíåå ðàçðàáîòàííîé ìåòîäèêå [9].  ðàáîòå èñïîëüçîâàëè êàðíîçèí ôèðìû «Sigma». ВЕСТНИК ОГУ 12`2005 63 Ìèêðîáèîëîãèÿ Ñòàòèñòè÷åñêóþ îáðàáîòêó ïîëó÷åííûõ äàííûõ ïðîâîäèëè ñ èñïîëüçîâàíèåì êðèòåðèÿ Ñòüþäåíòà [1]. Ðåçóëüòàòû Èçó÷åíèå ðàñïðîñòðàíåííîñòè ÀêðÀ ñðåäè ñòàôèëîêîêêîâ ïîêàçàëî, ÷òî áîëåå 50% ýòèõ ìèêðîîðãàíèçìîâ îáëàäàëè ÀêðÀ (îò 57% äî 84%), ñðåäíèé óðîâåíü ÀêðÀ êîëåáàëñÿ îò 1,3 ìã/ìë äî 2,4 ìã/ìë. (òàáëèöà 1). Èç èññëåäîâàííûõ 261 øòàììîâ ñòàôèëîêîêêîâ êàðíîçèí èíàêòèâèðîâàëñÿ â 75,8% ñëó÷àåâ. Ñðåäíèé óðîâåíü ÀêðÀ ñîñòàâèë 1,8 ìã/ ìë. Âûñîêàÿ ÷àñòîòà ÀêðÀ îáíàðóæåíà ó ñëåäóþùèõ âèäîâ ñòàôèëîêîêêîâ: S.epidermidis – 84,2%, S.aureus – 80,5%, S.hominis – 80%, S.hylosus – 77%, S.haåmolyticus 75%. ÀêðÀ ðåæå îáëàäàëè âèäû: S.cohnii – 66,7%, S.capitis 58%. ÀêðÀ íå áûëà îáíàðóæåíà ó S.warneri. Îò áàêòåðèîíîñèòåëåé ÷àùå, ÷åì îò çäîðîâûõ ëèö, âûäåëÿëèñü øòàììû ñ ÀêðÀ. Ó áàêòåðèîíîñèòåëåé îò 63% äî 91% øòàììîâ âûäåëÿëèñü ñ ÀêðÀ, òîãäà êàê ó çäîðîâûõ ëèö îò 16% äî 76% øòàììîâ ñ ÀêðÀ. Ñðàâíèòåëüíûé àíàëèç ðàñïðîñòðàíåíèÿ ÀêðÀ ñðåäè ðàçíûõ âèäîâ ñòàôèëîêîêêîâ ñ ó÷åòîì èñòî÷íèêà âûäåëåíèÿ (òàáëèöà 2), ïîêàçàë, ÷òî îò áàêòåðèîíîñèòåëåé ÷àùå, ÷åì îò çäîðîâûõ ëèö, âûäåëÿëè øòàììû ñ ÀêðÀ ó ñëåäóþùèõ âèäîâ ñòàôèëîêîêêîâ: S.epidermidis (91,3% ïðîòèâ76%), S.cohnii (71,4 ïðîòèâ 63,6%), S.hylosus (84,2% ïðîòèâ 57,1%), S.hominis (86,9% ïðîòèâ 57,1%), S.haåmolyticus (88,8% ïðîòèâ 22,3%). S.aureus âûäåëÿëñÿ òîëüêî îò áàêòåðèîíîñèòåëåé è â 80,5% ñëó÷àåâ èíàêòèâèðîâàë êàðíîçèí. S.capitis âûÿâëåí òîëüêî îò çäîðîâûõ ëèö è â 57,0% ñëó÷àåâ õàðàêòåðèçîâàëñÿ ÀêðÀ. Ñâÿçü ìåæäó ýêñïðåññèåé ÀêðÀ è ðàñïðîñòðàíåííîñòüþ ÔÏ ïðåäñòàâëåíà â òàáëèöå 3. Êàê âèäíî èç òàáë. 3 â ãðóïïå óñëîâíî-ïàòîãåííûõ ñòàôèëîêîêêîâ óñòàíîâëåíà ïðÿìàÿ ñâÿçü ìåæäó ýêñïðåññèåé ÀêðÀ è ÷àñòîòîé ýêñïðåññèè ÀËÀ, ËÀ. Ñðåäè øòàììîâ ñòàôèëîêîêêîâ ñ ÀêðÀ ðàñïðîñòðàíåííîñòü ÀËÀ ñîñòàâèëà îò 70% äî 88,8%, ËÀ îò 50% äî 73,8%. Ñðåäè øòàììîâ, íåîáëàäàþùèõ ÀêðÀ, ÷àñòîòà ýêñïðåññèè ÀËÀ îò 57,1% äî 66,6%, ËÀ îò 33,3% äî 54,5%. Ó âèäà S.aureus íàáëþäàåòñÿ ïðÿìàÿ çàâèñèìîñòü ýêñ- 64 ВЕСТНИК ОГУ 12`2005 ïðåññèè ÀêðÀ è ËåöÀ. Øòàììû ñ ÀêðÀ îáëàäàëè ËåöÀ â 86,2% ñëó÷àåâ. Øòàììû áåç ÀêðÀ â 71,4% ñëó÷àåâ. Íàáëþäàåòñÿ îáðàòíàÿ êîððåëÿöèÿ ýêñïðåññèè ÀêðÀ ñ ÷àñòîòîé ïðîÿâëåíèÿ ÃÀ ñðåäè óñëîâíî-ïàòîãåííûõ âèäîâ ñòàôèëîêîêêîâ: S.epidermidis, S.hominis. Ðàñïðîñòðàíåííîñòü ÃÀ ñðåäè ýòèõ âèäîâ ñòàôèëîêîêêîâ ñ ÀêðÀ îò 16,6% äî 45,4%, øòàììû áåç ÀêðÀ îò 25% äî 61,2%. Èñêëþ÷åíèå ñîñòàâëÿåò S.haåmolyticus, ó êîòîðîãî ÷àñòîòà ÃÀ ñðåäè øòàììîâ ñ íàëè÷èåì è îòñóòñòâèåì ÀêðÀ ñîñòàâëÿåò 100%.  îòëè÷èå îò óñëîâíî-ïàòîãåííûõ âèäîâ ó ïàòîãåííîãî âèäà S.aureus íàáëþäàåòñÿ ïðÿìàÿ çàâèñèìîñòü ìåæäó ýêñïðåññèåé ÀêðÀ è ÷àñòîòîé ïðîÿâëåíèÿ ÃÀ. Ñðåäè øòàììîâ S.aureus, èíàêòèâèðóþùèõ êàðíîçèí, ðàñïðîñòðàíåííîñòü ÃÀ ñîñòàâèëà 79,3%, øòàììû S.aureus áåç ÀêðÀ îáëàäàëè ÃÀ â 57,1% ñëó÷àåâ. Îáñóæäåíèå Ïðîâåäåííûå èññëåäîâàíèÿ ïîêàçàëè, ÷òî ÷àñòîòà è ñòåïåíü âûðàæåííîñòè ÀêðÀ çàâèñèò îò èñòî÷íèêà âûäåëåíèÿ è âèäîâîé ïðèíàäëåæíîñòè ìèêðîîðãàíèçìîâ. Âûñîêèé ïðîöåíò ðàñïðîñòðàíåíèÿ áûë âûÿâëåí ó øòàììîâ, âûäåëåííûõ îò áàêòåðèîíîñèòåëåé.  ãðóïïå óñëîâíî-ïàòîãåííûõ ñòàôèëîêîêêîâ (çà èñêëþ÷åíèåì S.haåmolyticus) íàáëþäàåòñÿ ïðÿìàÿ çàâèñèìîñòü ìåæäó ýêñïðåññèåé ÀêðÀ è ÷àñòîòîé ðàñïðîñòðàíåíèÿ ôàêòîðîâ ïåðñèñòåíöèè è êîëîíèçàöèè (ÀËÀ, ËÀ), íî îäíîâðåìåííî âûÿâëåíà îáðàòíàÿ çàâèñèìîñòü ìåæäó ýêñïðåññèåé ÀêðÀ è ÷àñòîòîé âûÿâëåÒàáëèöà 1. Ðàñïðîñòðàíåíèå ÀêðÀ ñðåäè ðàçíûõ âèäîâ ñòàôèëîêîêêîâ Òàêñîíû Âñåãî Èç íèõ % Ñðåäíèé óðîâåíü øòàììîâ ÀêðÀ ÀêðÀ â ìã/ìë S. aureus 36 80,5±1,1 2,3±0,3 S. epidermidis 114 84,2±0,3 1,5±0,2 S. hylosus 26 77±1,6 2,4±0,3 S. cohnii 18 66,7±2,6 1,4±0,4 S. hominis 30 80±1,3 2,2±0,2 S. capitis 14 57±3,5 1,3±0,3 S. warneri 11 S. hàemolyticus 12 75±3,6 1,5±0,4 Âñåãî 261 75,8±0,16 1,8±0,2 ×óåíêî Ý.À., Óñâÿöîâ Á.ß. Õàðàêòåðèñòèêà àíòèêàðíîçèíîâîé àêòèâíîñòè ðàçíûõ âèäîâ ñòàôèëîêîêêîâ íèÿ ÃÀ. S.haåmolyticus îáëàäàåò äîñòàòî÷íî ñëîæíî îðãàíèçîâàííûì ìåìáðàíîïîâðåæäàþùèì êîìïëåêñîì òðåõêîìïîíåíòíîãî ãåìîëèçèíà [14] è âîçìîæíî ýòèì îáúÿñíÿåòñÿ ó äàííîãî âèäà ñòàôèëîêîêêîâ ïðÿìàÿ ñâÿçü ìåæäó ïðîÿâëåíèåì ÀêðÀ è ÃÀ. ×òî êàñàåòñÿ ïàòîãåííîãî âèäà S.aureus, âûÿâëåíà ïðÿìàÿ çàâèñèìîñòü ìåæäó ÀêðÀ è ÷àñòîòîé ýêñïðåññèè ôàêòîðîâ ïåðñèñòåíöèè, êîëîíèçàöèè è âèðóëåíòíîñòè: ÀËÀ, ËÀ, ÃÀ, ËåöÀ. Äàííîå ÿâëåíèå, ïî-âèäèìîìó, ìîæíî îáúÿñíèòü òåì, ÷òî äëÿ íîðìàëüíîé ìèêðîôëîðû ÀêðÀ ÿâëÿåòñÿ ôàêòîðîì ïåðñèñòåíöèè, ïîìîãàþùèì êîëîíèçàöèè áèîòîïà è ñîçäàíèþ óñòîé÷èâîãî ýóáèîçà [5]. Òîãäà êàê ÀêðÀ ïàòîãåííîãî âèäà S.aureus êîððåëèðóåò íå òîëüêî ñ ôàêòîðàìè ïåðñèñòåíöèè è êîëîíèçàöèè, íî ñ ôàêòîðîì âèðóëåíòíîñòè, ÷òî ñïîñîáñòâóåò ôîðìèðîâàíèþ áàêòåðèîíîñèòåëüñòâà, êàê ôîðìû èíôåêöèîííîãî ïðîöåññà. Ñïèñîê èñïîëüçîâàííîé ëèòåðàòóðû: 1. Àøìàðèí È.Ï. Ñòàòèñòè÷åñêèå ìåòîäû â ìèêðîáèîëîãè÷åñêèõ èññëåäîâàíèÿ / È.Ï. Àøìàðèí, À.À. Âîðîáüåâ. Ë., 1962. 179ñ. 2. Áèðãåð Ì.Î. Ñïðàâî÷íèê ïî ìèêðîáèîëîãè÷åñêèì è âèðóñîëîãè÷åñêèì èññëåäîâàíèÿì /Ì.Î. Áèðãåð. Ì., 1982. 254ñ. 3. Áîëäûðåâ À.À. Êàðíîçèí (áèîëîãè÷åñêîå çíà÷åíèå è âîçìîæíîñòè ïðèìåíåíèÿ â ìåäèöèíå) /À.À. Áîëäûðåâ. Ìîñêâà: Èçäâî ìîñêîâñêîãî óíèâåðñèòåòà, 1988. 319ñ. 4. Áóõàðèí Î.Â. Ïåðñèñòåíöèÿ ïàòîãåííûõ áàêòåðèé /Î.Â. Áóõàðèí. Ì.: Ìåäèöèíà; Åêàòåðèíáóðã: ÓðÎ ÐÀÍ, 1999. -366ñ. 5. Áóõàðèí Î.Â. Áàêòåðèîíîñèòåëüñòâî (ìåäèêî-ýêîëîãè÷åñêèé àñïåêò) /Î.Â. Áóõàðèí, Á.ß. Óñâÿöîâ. Åêàòåðèíáóðã: ÓðÎ ÐÀÍ, 1996. 206ñ. 6. Áóõàðèí Î.Â. Áèîëîãèÿ ïàòîãåííûõ êîêêîâ /Î.Â. Áóõàðèí, Á.ß. Óñâÿöîâ, Î.Ë. Êàðòàøîâà Ì.: Ìåäèöèíà; Åêàòåðèíáóðã: ÓðÎ ÐÀÍ, 2002. 281ñ. 7. Áóõàðèí Î.Â.Ìåòîä îïðåäåëåíèÿ àíòèëèçîöèìíîé àêòèâíîñòè ìèêðîîðãàíèçìîâ /Î.Â. Áóõàðèí, Á.ß.Óñâÿöîâ, À.Ï. Ìàëûøêèí, Í.Â. Íåìöåâà //Æóðí.ìèêðîáèîë.-1984. ¹2. Ñ.27-29. 8. Áóõàðèí Î.Â. Ñïîñîáíîñòü ñòàôèëîêîêêîâ ê èíàêòèâàöèè êàðíîçèíà /Î.Â. Áóõàðèí, Î.Ë. ×åðíîâà, Ñ.Á. Ìàòþøèíà // Áþë.ýêñïåð.áèîë.ìåä. 1999. ¹5. Ñ.545-546. 9. Áóõàðèí Î.Â. Ñïîñîá îïðåäåëåíèÿ àíòèêàðíîçèíîâîé àêòèâíîñòè ìèêðîîðãàíèçìîâ /Î.Â. Áóõàðèí, Î.Ë. ×åðíîâà, Ñ.Á. Ìàòþøèíà // Ïàòåíò ¹2132879. 1998. 10. Ñòàäíèêîâ À.À. Âëèÿíèå êàðíîçèíà íà ìîðôîôóíêöèîíàëüíîå ñîñòîÿíèå êëåòîê ñëèçèñòîé îáîëî÷êè ìÿãêîãî íåáà êðûñ ïðè ñòàôèëîêîêêîâîé èíôåêöèè /À.À. Ñòàäíèêîâ, Î.Ë. ×åðíîâà, Ë.Â. Êîâáûê, Í.Í. Øåâëþê // Æóðí.ìèêðîáèîë. 2000. ¹4. Ñ.59-62. 11. ×åðíîâà Î.Ë. Ïåðñèñòåíöèÿ ñòàôèëîêîêêîâ êàê ìîäåëü ñèñòåìû «ïàðàçèò-õîçÿèí»: Àâòîðåô.äèñ äîêò.áèîë.íàóê /Î.Ë. ×åðíîâà; Èíñòèòóò ýêîëîãèè è ãåíåòèêè ìèêðîîðãàíèçìîâ ÓðÎ ÐÀÍ Ïåðìü, 1999. 42ñ. 12. Fujii A. Antistaphylococcal and antifibrinolytic activities of ù-aminoacids and their L-histidine dipeptides /À. Fujii, Ê.Tanaha, Y.Tsuchiya, Å.Cook // Journal of Medicinal Chemistry. 1971. V. 14, ¹4. P.354-357. 13. Margolis F. Carnosine in the primary olfactory pathway / F. Margolis // Science. 1974. V. 184, ¹4139. Ð. 909-911. 14. Sevigny G. Detection and purification of a potential precursor protein or a prohaemolysin produced by Staphylococcus haemolyticus / G. Sevigny, R.Beaudet, G. Mc Sween // Microbius. 1992. V. 71. Ð. 203-215. ВЕСТНИК ОГУ 12`2005 65