Холера Холера – острое инфекционное заболевание, для которого характерно тяжелое обезвоживание, понос в виде рисового отвара, высокая летальность и широкое эпидемическое распространение. Историческая родина холеры – это Восточная Индия и Бангладеш, где созданы благоприятные условия для возбудителя – тропический климат, обилие осадков, заболоченность, высокая плотность населения, большое количество органических веществ, непрерывное загрязнение воды сточными водами и испражнениями, низкий уровень жизни. Таксономия V. cholerae – открыт в 1883 году Р. Кохом. Относится к семейству Vibrionaceae. Род включает более 25 видов. Биологические свойства Короткие, изогнутые, грамотрицательные палочки, диаметром 0,5 мкм и длиной 1,5-3,0 мкм. Подвижные – монотрих. Аэробы или факультативный анаэроб. Хемоорганотрофы. Биохимические свойства: Оксидазоположительные Образуют индол Восстанавливают нитраты в нитриты Расщепляют желатин в виде воронки Свертывают молоко через 2 дня Не имеют уреазу, не образуют сероводород Ферментируют углеводы до кислоты без газа Относится к 1-ой группе Хейберга: расщепляют маннозу и сахарозу, не ферментируют арабинозу Культивирование Неприхотлив к питательным средам Выращивают на элективных средах – 1% пептонная щелочная вода, щелочной агар, тиосульфатцитрат-бром-тимоловый сахарозный агар (TCBS). На 1% ПВ через 6-8 часов образуется нежная серая пленка, которая легко разрушается и падает на дно в виде хлопьев. На щелочном агаре через 10-12 часов образуются гладкие прозрачные голубоватые вязкие колонии. Антигенное строение Имеет О-соматический полисахаридный антиген и Н-жгутиковый антиген. По О-антигену различают 139 серогрупп. Холерный вибрион относится к 1-ой группе. Он имеет общий А-антиген и два типоспецифических В и Сантигены, по которым выделяют три серотипа – Огава (АВ), Инаба (АС), Гикошима (АВС). Также выделяют биотип – V. eltor, который отличается рядом признаков: лизируют бараньи эритроциты, агглютинируют куриные эритроциты, растут на среде с полимиксином, лизируются бактериофагом eltor и дают положительную реакцию Фогеса-Проскауэра. Факторы патогенности Факторы адгезии и колонизации – муциназа, протеаза, нейраминидаза, лецитиназа. Экзотоксин – холероген. Состоит из двух фракций – А и В. Фрагмент В распознает рецепторы и формируют внутримембранный канал для прохождения фракции А-токсина. Фракция А вызывает стимуляцию аденилатциклазы в энтероцитах, что приводит к образованию цАМФ и выходу жидкости в просвет кишечника из клеток. Эндотоксин – липополисахарид, вызывает общую интоксикацию и рвоту. Обнаружение холерогена: Биологическая проба на кроликах. При внутрикишечном введении возбудителя кроликам-сосункам у них развивается типичная картина холерогенного синдрома – диарея, обезвоживание и гибель. ИФА, ДНК-зондирование, реакция пассивного иммунного гемолиза и РИФ. Стимуляция клеточной аденилатциклазы в культуре клеток. Резистентность Холерные вибрионы хорошо выживают при низких температурах – во льду сохраняются до 1 мес., в морской воде до 47 суток, в речной воде до нескольких недель. В почве до 3 мес., в свежих испражнениях до 3 суток, на сырых овощах до 4 дней, на фруктах до 2 дней, в молоке до 5 дней. Холерные вибрионы при 80˚С погибают через 5 мин., при 100˚С-моментально. Чувствительны к кислотам, высушиванию, солнечным лучам, хлору. Эпидемиология Источник – больной и вибриононоситель. Способ заражения – фекально-оральный. Пути заражения – водный, контактно-бытовой и пищевой. Патогенез и клиника Инкубационный период – 2-3 дня. Попав в ЖКТ, часть вибрионов погибает в желудке под действие соляной кислоты, затем проникает в просвет тонкого кишечника. Разрушают слизь с помощью ферментов муциназы, протеазы и нейраминидазы. Прикрепляются к гликокаликсу эпителия и колонизируют микроворсинки тонкого кишечника. При этом выделяют большое количество экзотоксинахолерогена. Различают три стадии течения болезни: Энтерит – длится 2-3 дня, незначительная диарея и рвота, заболевание может оборваться на этой стадии или перейти в бессимптомное бактерионосительство. Гастроэнтерит – диарея и рвота усиливаются, потеря жидкости составляет до 40%, выделения имеют вид рисового отвара (мутная жидкость со слизью и эпителием), общее состояние ухудшается, температура субфибрильная. Холерный алгид – температура падает ниже нормы; кожа становится синюшной, морщинистой и холодной. Кровь сгущается, развивается цианоз, гипоксия, нарушаются функции почек, появляются судороги, потеря сознания и смерть. Постинфекционный иммунитет прочный, длительный, антитоксический и антибактериальный. Лабораторная диагностика Материал для исследования – испражнения, рвотные массы, вода, остатки пищи и смывы с предметов. Бактериологический метод 1 этап Посев материала на 1% ПВ и щелочной агар. Инкубация в термостате 6-12 часов, при 37˚С. 2 этап Учет результатов посева: Культуральные свойства на питательных средах (см. выше). Морфологические и тинкториальные свойства в мазках, окрашенных по Граму (см. выше). Определение подвижности в препарате «раздавленная капля» в темном поле. Реакция агглютинации на стекле с О-1-холерной сывороткой. 3 этап Пересев подозриельных колоний на скошенный щелочной агар. Инкубация 10-12 часов при 37˚С. 4 этап Идентификация чистой культуры: Морфологические и тинкториальные свойства в мазках, окрашенных по Граму (см. выше). Биохимические свойства (см. выше). Сероидентификация с помощью диагностических агглютинирующих холерных сывороток О-1, Инаба и Огава. Постановка тестов для дифференциации cholera и eltor (см. выше). Серологическая диагностика Используется ретроспективно, в дифференциальной диагностике и носит вспомогательный характер. Для обнаружения специфических антител используют РИФ, ИФА, развернутая реакция агглютинации. Ускоренная диагностика Реакция иммобилизации холерных вибрионов – на предметное стекло наносится материал и обрабатывается О1-холерной сывороткой или холерным фагом. Инкубируют 2 часа и микроскопируют с помощью фазово-контрастной или темнопольной микроскопии. Результат – неподвижные вибрионы. РИФ - на предметное стекло наносится материал и обрабатывается О1-холерной флюорисцирующей сывороткой. Инкубируют 2 часа и микроскопируют с помощью люминесцентной микроскопии. Результат – обнаружение желто-зеленого свечения клеток холерных вибрионов. РПГА с антительным диагностикумом. Схема по Ермольевой Исследуемый материал засевают в три пробирки: 1 – содержит 1% ПВ, 2 – 1% ПВ+О1 холерная сыворотка, 3 – 1% ПВ+0,1% крахмал. Посевы инкубируют 6 часов при 37 ˚С и отмечают результаты: 1 – образуется тонкая пленка. Изучают морфологические и тинкториальные свойства, подвижность, ставят РИФ и реакцию агглютинации на стекле с О-1-холерной сывороткой. 2 – осадок в виде белых хлопьев агглютинации. 3 – добавляем раствор Люголя. Цвет среды не меняется так как произошло расщепление крахмала (отличие холерного вибриона от холероподобных). Лечение Восстановление водно-солевого баланса (солевые растворы, глюкоза, препараты плазмы). Антибиотики – тетрациклины, левомицетин и др. Профилактика изоляция больных Выявление и и здоровых бактерионосителей. Хлорирование питьевой воды. Улучшение водоснабжения. Санитарно-гигиенический режим на предприятиях пищевой промышленности, в детских учреждениях, местах общественного пользования. Бактериологический контроль за открытыми водоемами. Иммунизация населения – убитая вакцина из штаммов Инаба и Огава, холероген-анатоксин. Длительность иммунитета 6-8 месяцев.
