Кузнецова Е.П. 14.10.13
реклама
Санкт-Петербургский институт биорегуляции и геронтологии ПЕПТИДЫ ВОССТАНАВЛИВАЮТ ИММУНОГЕНЕЗ В СЕЛЕЗЕНКЕ ПРИ ЕЕ СТАРЕНИИ Кузнецова Е.П. wmailkuz@gmail.com Санкт-Петербург, 2013 Старение иммунной системы Известно, что с возрастом увеличивается вероятность развития аутоиммунных, эндокринных, инфекционных и раковых заболеваний. В старении иммунной системы важную роль играет инволюция тимуса и селезенки. В Санкт-Петербургском геронтологии разработаны институте биорегуляции сигнальные и пептиды, восстанавливающие иммуногенез при старении и различной патологии. Цель работы: изучить влияние коротких пептидов на экспрессию маркеров иммунных клеток в селезенке при старении Задачи: 1. Оценить возрастную динамику экспрессии маркеров недифференцированных Т-лимфоцитов (CD5), В-лимфоцитов (CD20), Т-хелперов (CD4) и цитотоксических Т-лимфоцитов (CD8) в органотипических культурах клеток селезенки. 2. Изучить влияние дипептида Lys-Glu и трипептида Lys-Glu-Asp на экспрессию маркеров недифференцированных Т- лимфоцитов, В-лимфоцитов, Т-хелперов и цитотоксических Т- лимфоцитов в органотипических культурах клеток селезенки молодых и старых крыс. Короткие пептиды Вилон – дипептид со структурной формулой Lys-Glu, сконструированный на основе анализа полипептидного экстракта, входящего в состав эндогенных факторов тимуса и цитокинов. Везуген – трипептид со структурной формулой Lys-Glu-Asp, сконструированный на основе анализа полипептидного экстракта сосудов. Голубым цветом обозначены атомы углерода, белым – атомы водорода, красным – атомы кислорода Методы исследований 1. Метод органотипического культивирования – выращивание фрагментов живых тканей в питательной среде (45% среды Хенкса, 45% среды Игла, 10% FBS, глюкоза 10 мг/мл, гентамицин 0,5 мг/мл). 2. Метод иммуноцитохимии - оценка результатов реакции антигенантитело в органотипических культурах. Были использованы первичные моноклональные антитела к маркерам иммунных клеток CD4, CD5, CD8 и CD20 (1:30, Dako). 3. Метод гистологического окрашивания - морфологическая оценка органотипической культуры клеток селезенки с использованием гематоксилин-эозина. 4. Морфометрический анализ данных - программа «ВидеотестМорфология 5.2» - оценка площади экспрессии исследуемых маркеров. Методика создания органотипической культуры клеток Фрагмент ткани селезёнки крысы эксплантаты селезёнки термостат Молодые – 3 мес. Группы: 37о С Старые – 20-24 мес. 1 – контроль (физраствор) 5% СО2 2 – дипептид вилон 10 нг/мл 3 суток 3 – трипептид везуген 10 нг/мл Органотипическая культура клеток селезенки Эксплантат селезенки лимфоциты Зона роста культуры (монослой клеток) Органотипическая культура клеток селезенки молодой крысы, гематоксилин-эозин, х40. Органотипическая культура клеток селезенки молодой крысы, гематоксилин-эозин, х400 Влияние пептидов на площадь экспрессии маркера CD5 в органотипической культуре клеток селезенки молодых и старых крыс Площадь экспрессии маркера CD5, % 30 # 25 20 молодые 15 старые * 10 # # 5 0 контроль дипептид трипептид •*– р<0,05 по сравнению с молодыми животными. •#- p<0.05 по сравнению с аналогичным показателем в контроле Влияние пептидов на площадь экспрессии маркера CD20 в органотипической культуре клеток селезенки молодых и старых крыс Площадь экспрессии маркера CD20, % 12 # 10 # 8 молодые 6 старые 4 # 2 0 контроль дипептид трипептид •#- p<0.05 по сравнению с аналогичным показателем в контроле Влияние пептидов на площадь экспрессии маркера CD4 в органотипической культуре клеток селезенки молодых и старых крыс Площадь экспрессии маркера CD4, % 30 # 25 20 молодые 15 старые 10 * # 5 0 контроль дипептид трипептид •*– р<0,05 по сравнению с молодыми животными. •#- p<0.05 по сравнению с аналогичным показателем в контроле Влияние пептидов на площадь экспрессии маркера CD8 в органотипической культуре клеток селезенки молодых и старых крыс Площадь экспрессии маркера CD8, % 35 # # 30 25 20 молодые 15 10 старые # * 5 0 контроль вилон везуген •*– р<0,05 по сравнению с молодыми животными. •#- p<0.05 по сравнению с аналогичным показателем в контроле Заключение Увеличение площади экспрессии маркеров CD5, CD4 и CD8 в старых культурах в контроле отражает повышение количества недифференцированных Т-лимфоцитов, Т-хелперов и цитотоксических Тлимфоцитов в селезёнке старых крыс. Таким образом, с возрастом в селезёнке иммуногенез усиливается, что свидетельствует о её выраженной компенсаторной роли при старении иммунной системы. Было показано, что иммуномодулирующий дипептид эффект. имеет Lys-Glu Данный пептид выраженный стимулировал пролиферацию недифференцированных Т-лимфоцитов, В-лимфоцитов, Т-хелперов и цитотоксических культурах молодых и старых крыс. Т-лимфоцитов в органотипических Спасибо за внимание!
