- ФГБУ «ВНИИЗЖ

Референтная лаборатория по АЧС
Тема: «Исследование факторов патогенности
возбудителя АЧС, циркулирующего на территории
Российской Федерации, усовершенствование
методов диагностики АЧС» в 2013 году
Научный руководитель
Д.б.н. проф. Груздев К.Н.
www.arriah.ru
тeл./факс: 8(4922)-26-18-67; 45-37-96.
История лаборатории
Референтная лаборатория по африканской чуме
свиней была создана 1 августа 2012 г.
В настоящее время лаборатория является
структурным подразделением ФГБУ «ВНИИЗЖ»,
входит в состав лаборатории диагностики
болезней сельскохозяйственных животных.
2
Штатный состав лаборатории
•
•
•
•
•
•
•
•
•
Заведующий лабораторией, к.б.н. А.С. Иголкин
Главный научный сотрудник, д.б.н. Н.Н. Власова
Ведущий научный сотрудник, к.в.н. А.А. Шевцов
Старший научный сотрудник, к.в.н. О.С. Пузанкова
Научный сотрудник, к.б.н. В.Л. Гаврилова
Младшие Научные сотрудники, С.Г. Ремыга и А.С. Першин
Ведущий ветеринарный врач, А.А. Варенцова
Ведущие биологи, И.В. Шевченко и И.Ю. Жуков
Техники-лаборанты, В.М. Зайнутдинова, Н.И. Камаева,
Т.В.Клочкова
• Всего: 13 человек
3
Задачи лаборатории
• Научно-исследовательская работа;
• Анализ рисков и оценка развития ситуации по АЧС
на территории РФ и стран ТС ;
• Научное обоснование планов мониторинга АЧС
утверждаемых Россельхознадзором;
• Выполнение государственных
заданий
по
мониторингу и диагностике АЧС;
• Подготовка нормативной и методической
документации по АЧС в соответствии с
международными стандартами;
• Проведение
сличительных
лабораторных
испытаний;
• Участие в международных научных проектах;
• Образовательная деятельность.
4
Научно-исследовательская работа
• После утверждения Россельхознадзором 30.04.2013 г.
темы НИР «Исследование факторов патогенности
возбудителя африканской чумы свиней (АЧС),
циркулирующего на территории Российской Федерации,
усовершенствование методов диагностики АЧС»
осуществляемая в рамках основного мероприятия
«Предупреждение распространения и ликвидации
африканской чумы свиней на территории РФ»
Государственной программы «Развитие сельского
хозяйства
и
регулирования
рынков
сельскохозяйственной
продукции,
сырья
и
продовольствия на 2013-2020 годы» работа велась в
соответствии с календарным планом по 6 этапам.
5
Задачи лаборатории
В настоящее время сотрудники лаборатории
ведут работу по теме: «Исследование факторов
патогенности возбудителя африканской чумы
свиней (АЧС), циркулирующего на территории
Российской Федерации, усовершенствование
методов диагностики АЧС»
в рамках Государственной программы «Развитие
сельского хозяйства и регулирования рынков
сельскохозяйственной продукции, сырья и
продовольствия на 2013-2020 годы».
6
Этап 1
Этап 2
Этап 3
Этап 4
Этап 5
Этап 6
Анализ существующих международных методов и
подходов по проведению исследований для
определения изменчивости вируса АЧС,
установления критериев изменчивости вируса
АЧС
Выделение не менее 5 изолятов вируса АЧС
Изучение культурально - биологических свойств
выделенных изолятов вируса АЧС, в т.ч.
вирулентности, контагиозности для домашних
свиней
Изучение молекулярно-биологических свойств
выделенных изолятов вируса АЧС
Оптимизация условий хранения изолятов с
подбором стабилизирующих сред и режима
лиофилизации
Разработка и совершенствование методов
диагностики АЧС
7
Результаты вирусовыделения ВАЧС на КК АМС
Титр вируса (lg
ГАдЕ/г )
№
Изолят ВАЧС
Происхождение
1
ASFV RU 123080 S/12/1
Дом свинья
2
3
ASFV RU 123080 S/12/2
ASFV RU 190651 B/13
Дом свинья
Павший кабан
4
ASFV RU 69601-B/13/1
Кабан отстрелянный
5,0
5
ASFV RU 36775-S/13/1
Домашняя свинья
5,0
6
ASFV RU 36775-S/13/2
Домашняя свинья
4,5
7
8
ASFV RU 33830-B/13/1
ASFV RU 33830-B/13/2
Павший кабан
Павший кабан
6,0
5,0
9
ASFV RU 67119-S/13/1
Дом свинья
5,0
10
11
ASFV RU 67119-S/13/2
ASFV RU 69315-B/13/1
Дом свинья
Отстрелянный кабан 1 год
5,0
4,5
12
ASFV RU 69315-B/13/2
Отстрелянный кабан 3 года
4,0
1,5
< 1,0
2,0
8
Изучение репродукции вируса АЧС (Российские
изоляты) в перевиваемых культурах клеток
Изолят
ВАЧС
ASFV RU
190651 B/13
ASFV RU
69315-B/13/
ASFV RU
67119-S/13
ASFV RU
67119-S/13
ASFV RU
69315-B/13
ASFV RU
69315-B/13
A4C2
СПЭВ
ППК
Наличие
ЦПД
Гемадсо
рбция
Наличие
ЦПД
Гемадсорб
ция
Наличие
ЦПД
Гемадсор
бция
2п
+
3п
+
3п
-
1п
+
1п
+
3п
-
2п
+
3п
+
3п
-
2п
+
1п
+
1п
-
1п
+
3п
+
3п
-
1п
+
3п
+
3п
9
Динамика изменений температуры тела поросят
зараженных и/назально разными изолятами ВАЧС в дозе
5000 ГАдЕ
10
Динамика изменений температуры тела поросят
зараженных и/назально разными изолятами ВАЧС в дозе
50 ГАдЕ
11
Динамика изменений температуры тела интактных поросят
при их контактном содержании с животными, зараженными
разными изолятами ВАЧС
12
Течение заболевания на свиньях
13
Схема
расположения
подобранных
для
создания
клонотеки генов на полноразмерном геноме вируса АЧС
14
• Сконструирована
клонотека
генов
иммунозначимых белков вируса АЧС и
проведен
анализ
нуклеотидных
последовательнстей
8
генов
изолята
Краснодар 06/12.
• Проведение пиросеквенирования ДНК вируса
АЧС изолята ASFV RU 69601-B/13 и
сравнительный анализ изменений показали,
что в сравнении с последовательностью
изолята Грузия 2007/1 в геноме изолята ASFV
RU 69601-B/13 обнаружены 52 единичные
встройки, 12 делеций и 8 замен, что от 189398
нуклеотидов составляет ~0,0327% изменений.
15
стрелками указаны места мутаций в генах ДНК изолята ASFV RU 69601-B/13.
Dixon, L.K., Abrams C.C., Bowick G., Goatley L.C., Kay-Jackson P.C., Chapman D., Liverani E., Nix R., Silk R., Zhang F. (2004) African swine fever 16
virus
proteins involved in evading host defence systems. / Vet. Immunol Immunopathol. 100:117-134.
Дальнейшие исследования
•
•
•
•
•
•
Для дальнейшего изучения основ патогенности и изменчивости
вируса АЧС планируется:
Выделение, сравнительное изучение биологических свойств изолятов
вирусов АЧС, а также создания новых средств диагностики и
специфической профилактики
Формирование и пополнение коллекции штаммов вирусов АЧС
Определение изменений генома у изолятов вируса АЧС, различающихся
по биологическим свойствам
Совершенствование методов раннего выявления антител к вирусу АЧС в
сыворотке крови зараженных животных
Разработка методов индикации вируса АЧС в кормах и почве
Изучение возможности передачи вируса АЧС видами клещей
представленными на территории Российской Федерации
17
Международное сотрудничество по АЧС
• Развитие сотрудничества с референтными
лабораториями МЭБ и ФАО по АЧС, стажировки
научных сотрудников;
• Совместные работы по изучению биологических
свойств вируса АЧС, циркулирующего на
территории РФ;
• Участие в программах по вопросам профилактики
распространения трансграничных болезней
свиней в приграничных районах России с
сопредельными странами;
• Участие в международных симпозиумах и
конференциях
18
Для продуктивной работы референтной
лаборатории по АЧС ФГБУ «ВНИИЗЖ»
необходима научно-консультативная помощь:
• Секвенирование генома (от пробоподготовки до
выполнения анализа и компьютерной обработки данных)
• Рекомбинантные белки и антитела
• Электронная микроскопия
• Серодиагностика – иммуноферментный анализ,
иммуноблот, дот-блот, иммунофлуоресценция,
гемадсорбция и др.
• Цитофлюориметрия
• Энтомология клещей переносчиков вируса АЧС
21
Заключение
• Изучение культурально-биологических свойств
изолятов вируса АЧС, выделенных на территории
Российской Федерации в 2013 году, позволило
установить изменение патогенности в сторону
снижения вирулентности и увеличения
длительности заболевания.
• Проведенное пиросеквенирование генома
изолята ASFV RU 69601-B/13 выявило наличие
мутаций в 3 генах, ответственных за
вирулентность вируса африканской чумы свиней.
СПАСИБО ЗА ВНИМАНИЕ !
22