Сперма

Исследование
спермы





В настоящее время ни один квалифицированный
гинеколог не
приступает к обследованию и
лечению
женщины в бесплодном браке, не
получив сведений о способности ее мужа к
оплодотворению.
Согласно
статистике,
каждая
десятая
супружеская пара оказывается бесплодной.
Заболевания женщины становятся причиной
бесплодия лишь у 40% супружеских пар.
В 45 % случаев «виновником» оказывается
мужчина.
Остальные
15%
приходятся
на
случаи
несовместимости организмов супругов, так
называемую иммунологическую форму бесплодия
и другие редкие формы.
Существует 2 основные формы
мужского бесплодия
 Секреторное
бесплодие
(нарушено
сперматозоидов в извитых канальцах яичек)

Обтурационное
бесплодие
образование
(имеется
препятствие на их пути к мочеиспускательному каналу)
К мужской половой системе
относятся:







Яичко (1)
Придаток яичка (2)
Семенной канатик (3)
Семенные пузырьки (4)
Предстательная железа
(5)
Некоторые мелкие
железы
Половой член
Яичко (1)
Орган, в котором
вырабатываются
сперматозоиды и
тестостерон – мужской
половой гормон. Яички
находятся в мошонке –
многослойном кожном
мешочке, которая
регулирует температуру в
яичках и предотвращает
их от травм.
Придаток яичка (2)



Прилегает к верхней
поверхности яичек
Содержит выносящие
канальцы сливающиеся
в проток придатка
Проходя через придаток
яичка сперматозоиды
дозревают и
приобретают свое
основное качество подвижность

От
придатка
яичка
отходит
длинная узкая трубка, окруженная
кровеносными сосудами.

Трубка
называется
семявыносящим
протоком,
а
вместе с сосудами – семенным
канатиком.

Семенной канатик (3) начинается
от
нижнего
конца
(хвоста)
придатка затем идет вверх через
паховый
канал
в
брюшную
полость. Здесь достигает шейки
мочевого пузыря и впадает в
верхнюю предстательную часть
мочеиспускательного канала.

От каждого яичка отходит свой
семенной канатик. Основное его
назначение – выведение из яичек
и
продвижение
созревших
сперматозоидов.
Семенные пузырьки (4)

Семявыносящие протоки, подойдя к
шейке
мочевого
пузыря,
расширяются и образуют семенные
пузырьки.

В
них
накапливаются
сперматозоиды и хранятся до того
момента, как будут выведены из
организма.

Семенные пузырьки секретируют
жидкость,
богатую
фруктозой.
Фруктоза является источником
питания сперматозоидов.
Предстательная железа (5)





Находится под дном мочевого пузыря и
охватывает кольцом шейку мочевого
пузыря
и
самое
начало
мочеиспускательного канала.
Размеры ее в норме 2х3х3,5 см.
Простата
является
одновременно
мышечным и железистым органом и
представляет
собой
совокупность
отдельных
железок,
окруженных
мышечной
и
соединительнотканной
стромой.
Как экзокринная железа простата
продуцирует
секрет,
пополняюший
жидкую часть спермы.
Мышечные элементы простаты во время
эякуляции выбрасывают секрет из
железок и образуют непроизвольный
сфинктер мочеиспускательного канала.
бульбоуретральные железы (6)
Две небольшие железки, величиной с
горошину, которые открываются в
мочеиспускательный канал и
секретируют слизистую (и потому
вязкую) жидкость, которая защищает
стенки мочеиспускательного канала от
раздражения мочой и спермой.
Существует 2 основные формы
мужского бесплодия
 Секреторное
бесплодие
(возникает
из-за
нарушений деятельности яичек, когда яички не производят
достаточного
количества
сперматозоидов,
или
у
сперматозоидов нарушена подвижность, или большинство из
них имеют дефекты строения (может быть при варикоцеле,
крипторхизме,
водянке,
опухолях,
травмах
яичка,
недостатке тестостерона, после перенесенного паротита,
при воспалительных заболеваниях мочеполовой системы)

Обтурационное
бесплодие
(продвижение
сперматозоидов по семявыносящим путям невозможно (чаще
развивается после перенесенного воспаления придатка
яичка в следствие образования спаек в его протоках,
травмы,
сдавление
семявыносящих
протоков
опухолью,
сифилис, туберкулез)
Повреждение сперматогенного
эпителия могут вызвать:

Длительное воздействие проникающей радиации

Значительные по интенсивности или продолжительности

электромагнитные колебания

Действие высоких температур

Велосипедные тренировки

Наличие в анамнезе сифилиса, туберкулеза, гормональных нарушений,
длительного
приема противоопухолевых, противоэпилептических
препаратов,
некоторых
антибиотиков,
стероидных
гормонов,
антиандрогенов

Длительный стресс, недостаток белков и витаминов в пище,
хроническое недосыпание, злоупотребление никотином, алкоголем,
наркотиками
Строение яичка

Яички разделены тонкими соединительнотканными перегородками на отдельные дольки

Каждая долька содержит
семенных канальца

В извитых канальцах протекает сперматогенез
и каждую минуту в норме образуется
около50000 новых сперматозоидов

Извитой
каналец
представлен
клетками
сперматогенного эпителия, лежацего
на
базальной мембране.

Среди клеток сперматогенного эпителия
располагаются
поддерживающие
клетки
Сертоли. В цитоплазме этих клеток содержатся
многочисленные
жировые
и
белковые
трофические включения, благодаря которым
обеспечивается
питание
сперматогенного
эпителия.

Кроме того клетки Сертоли
фагоцитозе погибших клеток

В
соединительнотканных
перегородках
располагаются скопления железистых клеток,
вырабатывающих тестостерон - клеток Лейдига

Яички снаружи покрыты серозной оболочкой.
На каждом яичке сверху расположен придаток,
который переходит в семявыносящий проток.
1-2
извитых
участвуют
в
Подготовка к анализу
Для получения достоверного результата нужно:

Несколько дней полового воздержания (от 2 до 7 дней, в
среднем 3 дня). Меньший срок приводит к занижению объема
спермы и количества сперматозоидов, а больший – к снижению
подвижности и увеличению аномальных сперматозоидов в связи
с «постарением» спермы.

Столько же дней воздержания от употребления алкогольных
напитков, лекарственных препаратов, большого количества
кофеина.

Столько же дней воздержания от тепловых процедур – сауны,
горячие ванны, горячий душ, солярий, солнечные ванны.

В последствии, если возникает необходимость в
повторении
спермограммы
для
сравнения
результатов, подготовка к анализу должна быть
точно такой же, как для первого анализа – в
частности половое воздержание с точностью до 1
дня.

Повторную спермограмму нужно делать в той же
лаборатории, что и первую, если качеству работы
этой лаборатории можно доверять.

В
идеале
сперма
должна
быть
получена
непосредственно в лаборатории и сразу же
исследована.

Допускается транспортировка пробы из дома в тепле
в пределах 1,5 часов после получения.
Сперма (синонимы - семенная жидкость, эякулят),
смесь выделяемых во время эякуляции продуктов
секреции мужских половых органов: яичек и их
придатков, предстательной железы, семенных
пузырьков, куперовых желез, уретры. Состав
спермы:



Жидкость из семенных пузырьков (65%)
Жидкость из простаты (30%)
Сперматозоиды (5%)
Исследование спермы включает
 Макроскопическое
исследование
 Микроскопическое исследование
 Биохимическое исследование
Разжиженность.

Сразу
после
консистенцию.
эякуляции
сперма
имеет
густую

Под влиянием ферментов предстательной железы через
10-30 минут обычно происходит полное разжижение
спермы (норма до 60 минут).

Если эякулят длительное время
не разжижается, то
следует думать о воспалении предстательной железы или
семенных пузырьков. В результате увеличения времени
разжижения сперматозоиды
дольше набирают свою
полноценную подвижность.

Это приводит к их более длительному контакту с кислой
средой влагалища, что резко снижает их
шансы на
проникновение в матку и на
оплодотворение. Этот
показатель спермограммы
имеет прямую связь с
вероятностью зачатия.
Вязкость спермы

Вязкость эякулята устанавливалась по методу Хотчкисса в
полностью разжиженном эякуляте.

В размешанный эякулят опускают стеклянную палочку, затем
поднимают ее и приблизительно визуально измеряют длину
образовавшейся нити. Такую процедуру выполняют несколько раз.

В каждом случае отмечается минимальная и максимальная длина
такой слизистой нити, и затем определяется ее среднее значение.
Длина нити измеряется в сантиметрах. В норме вязкость до 2 см.

Если в эякуляте присутствуют тяжи слизи, вязкость оценивается в
свободных от слизи участках.

Отклонение от нормы показателей вязкости эякулята
называется "вискозипатия эякулята".

Увеличение вязкости спермы чаще всего бывает связано с
хроническим воспалением половых желез - простатитом и
везикулитом, но, кроме того, может быть обусловлено
патологическими изменениями и в самих яичках или их
придатках.

Повышенная вязкость спермы ведет к затруднению
передвижения сперматозоидов во влагалище, к более
длительному контакту с кислой средой влагалища, что
значительно снижает шансы на оплодотворение. Этот
показатель спермограммы напрямую связан с вероятность
зачатия.
Объем эякулята.
Объем эякулята в норме 2-6 мл. Его измеряют
сразу после разжижения.
Полиспермия – увеличение объема семенной

жидкости более 10 мл.
Олигоспермия – снижение объема семенной
жидкости менее 2 мл.
И олиго- и поли- спермия обусловлены заболеваниями
предстательной железы и семенных пузырьков.
Уменьшение
объема эякулята менее 1 мл всегда связано с атрофией яичек.
Такой эякулят не содержит сперматозоидов.
Цвет.
В
норме белый, сероватый, желтоватый.
 Описание
цвета
проводится
после
разжижения эякулята.
 Красный или темно -коричневый цвет говорит
о примеси крови (при травмах половых органов,
хроническом везикулите, калькулезной форме простатита).
 Желтый
цвет спермы
в патологических случаях
свидетельствует о примеси гноя, но может быть обусловлен
употреблением пищевых красителей или приемом
некоторых лекарственных препаратов. В этом случае
большого диагностического значения этот показатель не
имеет.
мутность
В
норме эякулят мутный. Степень мутности
зависит от количества содержащихся
сперматозоидов,
если
количество
сперматозоидов снижено, то эякулят более
прозрачен.
В
норме в эякуляте могут содержаться
желеобразные гранулы.
Исследование спермы с
помощью тест-полосок
 Капля
разжиженной спермы наносится
на соответствующую диагностическую
зону тест-полоски для исследования
мочи. Изменение окраски сравнивается с
цветной шкалой.
 Таким
образом можно определить
наличие эритроцитов и лейкоцитов в
сперме, а так же рН.
РН спермы
В
норме от 7,2 – 8.0 – это щелочная
среда.
 Постоянная рН обеспечивает активную
подвижность сперматозоидов.
 При воспалении предстательной железы
рН становится резкощелочной, а при
заболевании
семенных
пузырьков
сдвигается в кислую сторону.
 Если рН меньше 6, то сперматозоиды
теряют подвижность.
Определение фруктозы

Фруктоза образуется в семенных пузырьках из глюкозы. Норма
0,25-7 мг/мл.

Концентрация фруктозы в сперме тесно связана с концентрацией
тестостерона в организме. Снижение концентрации тестостерона
сопровождается уменьшением фруктозы в сперме.

В сперме сперматозоиды перерабатывают фруктозу в молочную
кислоту. При этом образуется энергия, являющаяся источником их
подвижности.

Высокие показатели фруктозы отмечены у пациентов, страдающих
гипогонадизмом и сахарным диабетом, а низкие показатели - при
заболеваниях предстательной железы и семенных пузырьков и у
пожилых.
Определение лимонной кислоты

Лимонная кислота вырабатывается исключительно
предстательной железой.

В норме ее должно быть более 20 ммоль/л.

Лимонная кислота необходима для процессов
свертывания – разжижения.
Микроскопическое
эякулята включает:
исследование

Изучение
в
нативном
препарате
сперматозоидов (кинезиограмма).

Определения наличия агглютинации и агрегации.

Определение наличия макрофагов, клеток эпителия,
лецитиновых зерен, амилоидных телец, кристаллов и др.

Подсчет количества сперматозоидов в камере Горяева.

Подсчет количества
Горяева.

Подсчет количества лейкоцитов в камере Горяева.

Изучение морфологии сперматозоидов.

Обнаружение в окрашенных препаратах трихомонад и
грамотрицательных диплококков
клеток
подвижности
сперматогенеза
в
камере
Метод приготовления
нативного препарата.

На предметное стекло наносится капля тщательно
размешанного эякулята.

Для создания тонкого слоя объем капли должен быть
10 мкл, размер покровного стекла 24х24 мм.

Под тяжестью покровного стекла образуется препарат
стандартной толщины — около 20 мкм.

Стабилизация препарата происходит в течение 1
минуты.

Нативный препарат просматривается при малом и
большом увеличении микроскопа.
агглютинация
 Агглютинация — склеивание подвижных
сперматозоидов между собой головками или
хвостами.

В норме отсутствует.

Появление
агглютинации
позволяет
предположить
наличие
иммунологического
фактора бесплодия. Появление агглютинации
само по себе не снижает вероятность зачатия
естественным путем, но оно почти всегда ведет к
снижению подвижности сперматозоидов.
Полуколичественная оценка
агглютинации.
«-»
«+»
отсутствие агглютинации
слабо выраженная (в нативном препарате до 10
скоплений сперматозоидов, по 4-6 в каждом).
«++»
скоплений
значительная (в нативном препарате более 20
сперматозоидов).
«+++»
резко выраженная (в нативном препарате более 20
скоплений сперматозоидов, при этом
в каждом более
20 сперматозоидов).
«++++»
тяжелая степень агглютинации, при которой все
подвижные
сперматозоиды
находятся
в
состоянии
агглютинации.
Агрегация
Агрегация (псевдоагглютинация) хаотическое скопление неподвижных
сперматозоидов, нагромождение их на
комочки и тяжи слизи.
Лецитиновые зерна

Это
мелкие
блестящие
зернышки, содержащиеся в
нормальной сперме в большом
количестве.

При простатите их количество
уменьшается.

При длительном воспалении
они исчезают.
Амилоидные тельца

Округлой формы образования
разных размеров с характерной
слоистостью, напоминающей спил
дерева.

Являются
элементами
застоя
секрета предстательной железы
Кристаллы спермина

Бесцветные,
удлиненной
формы с заостренными или
прямоугольными концами.

Образуются при охлаждении
спермы, а так же при
длительном стоянии спермы
Концентрация сперматозоидов

Для подсчета концентрации
сперматозоидов используется
камера
Горяева
для
разведенных образцов и

камера Маклера для подсчета
сперматозоидов
без
предварительного разведения.

При
толщине
нативного
препарата 20 мкм
в нем
проводят
предварительную
оценку
концентрации
сперматозоидов

При 400-кратном увеличении
микроскопа
объем
поля
зрения варьирует от 1 до 2,5
нл
Раствор
Барбагалло
для
обездвиживания сперматозоидов
7
мл 40% формалина
 93 мл 0,85% раствора NaCl
Процедура подсчета в камере
Горяева

Если
сперма
богата
сперматозоидами, то ее разводят
раствором Барбагалло в 20 раз и
заполняют камеру.

Согласно рекомендациям ВОЗ
подсчет проводят в двух камерах
и результат определяют как
среднее двух определений.

Сперматозоиды подсчитывают в 5
больших квадратах по диагонали.

Считают
только
те
сперматозоиды, головки которых
лежат внутри квадратов.

Расчет
ведут
по
формуле
Х=Ах1000, где А — количество
сперматозоидов в 5 квадратах.
Процедура подсчета в камере
Горяева (продолжение)

Если
сперматозоидов
очень мало (единичные в
поле зрения при х400), то
их тоже обездвиживают,
добавляя в 1 мл спермы 2
капли реактива Барбагалло.

Заполняют камеру.

Сперматозоиды
подсчитывают
в
больших квадратах.

100
Расчет ведут по формуле
Х=Ах2500,
где
А
—
количество сперматозоидов
в 100 квадратах.
 Общее
количество сперматозоидов во
всем эякуляте рассчитывают, умножая
количество сперматозоидов в 1 мл на
объем выделенной спермы.

Например объем выделенной спермы —
5мл, количество сперматозоидов 30 млн/
мл
30 х 5 = 150 миллионов сперматозоидов
во всем эякуляте.
В
норме в 1 мл эякулята должно
содержаться
не
менее
20
млн.
сперматозоидов.
 И,
соответственно общее количество
сперматозоидов в эякуляте не должно
быть меньше 40 млн., так как нижняя
граница нормы объема эякулята - 2мл.
Олигозооспермия
—
в
1
мл
содержится менее 20 млн. сперматозоидов.
эякулята
Криптозооспермия —
обнаружены единичные
сперматозоиды в препарате, однако концентрацию их
подсчитать невозможно.
Азооспермия
—
сперматозоиды
при
микроскопическом исследовании в нативном препарате
и
осадке
эякулята,
полученном
после
центрифугирования,
не
обнаружены.
Могут
присутствовать клетки сперматогенеза.
Аспермия — нет
эякулята.
Исследование морфологии
сперматозоидов
Для морфологически нормального
сперматозоида характерна
овальная форма головки. Длина ее
составляет 5-6 мкм, ширина 2,5-3,5
мкм, акросома занимает 40-70%
площади головки, при этом
отсутствуют аномалии шейки,
хвоста и серединного отдела
Исследование морфологии
сперматозоидовВ окрашенных по Романовскому

препаратах проводят последовательный
подсчет
200
сперматозоидов
с
увеличением микроскопа окуляр х7 или
х10 с масляной иммерсией.

Поданным ВОЗ количество нормальных
сперматозоидов не должно быть меньше
50%.

Снижение количества нормальных форм
сперматозоидов
носит
название
тератозооспермия.
Это
часто
наблюдается
при
токсических
и
радиационных
поражениях
органов
мошонки, реже при воспалительных или
перенесенных
инфекционных
заболеваниях.
На
морфологию
сперматозоидов
сильное
влияние
оказывает
экология
в
регионе
проживания мужчины.
Патологические формы
сперматозоидов
 Дефекты
головки
(большие,
маленькие,
конические, грушевидные, круглые, аморфные, головки с
маленькой акросомальной частью, нессиметрично расположенной
акросомой, двойные и множественные головки, «булавочные»
головки).
 Дефекты
шейки
 Дефекты
хвоста
и средней части
(«склонененная» шейка (шейка и хвост образуют угол 90
градусов), ассиметричное прикрепление средней части к головке,
утолщенная или неравномерная средняя часть, патологически
тонкая средняя часть).
(короткие, множественные, в виде
шпильки, сломанные, неравномерной толщины, с закрученным
хвостом).
Подсчет кинезиограммы
Подвижность каждого сперматозоида
классифицируется по категориям А, В, С и D.

Подвижность класса А — быстрые прямолинейные движения
сперматозоидов со скоростью не менее 0,025 мм/с (то есть не менее половины
собственной длины в секунду). Это здоровые, «молодые» сперматозоиды,
недавно сформировавшиеся в яичках.

Класс В — спермии с медленным прямолинейным движением, их скорость
менее 0,025 мм/с, но траектория движения все-таки прямая.

Класс С — сперматозоиды, которые движутся непрямолинейно (например,
ходят кругами или еле барахтаются на месте), движение практически на месте.

Класс D — полностью неподвижные сперматозоиды. Как правило, это
умершие или умирающие «от старости» сперматозоиды. Поэтому, чем меньше
воздержание перед семяизвержением, тем меньше неподвижных
сперматозоидов
в
эякуляте.
Подсчет кинезиограммы
(продолжение)

В окуляр х10 вкладывают ограничитель Фонио и с объективом х40
подсчитывают 200 сперматозоидов.

В первые 3-5 секунд регистрируют проходящие через окошко активноподвижные сперматозоиды (А).

Следующие 3-5 секунд — малоподвижные с поступательным движением
(В).

Затем отмечают сперматозоиды с непоступательным движением
(маятникообразным и манежным) (С).

И наконец с помощью движений микровинта регистрируются лежащие на
нижнем уровне препарата неподвижные сперматозоиды (D).

Препарат резко передвигают и сперматозоиды регистрируют в новом
поле зрения в том же порядке.

Если сперматозоидов мало, подсчет проводят без ограничителя Фонио.

Ответ выдается в %.
Нормальная кинезиограмма
Более 25% категории А
Или более 50% категории А + категории В

На подвижность сперматозоидов влияет множество факторов, в
том числео температура: при температуре тела (около 37°С)
скорость движения максимальна, при комнатной температуре она
снижается, а при температуре менее 10°С сперматозоиды почти
не движутся.

Астенозооспермия - подвижность сперматозоидов меньше 25%
категории "а" или 50% категории "а+в"; при этом количество и
соотношение морфологических форм в норме.
Исследование нативного препарата на
наличие клеточных элементов.
В сперме эритроциты
выглядят точно так же и
в других биологических
материалах (например в
моче). В норме в сперме
эритроцитов нет.
Появление их в эякуляте
называется гемоспермия.
Клетки эпителия

В сперме можно встретить
клетки
плоского
и
переходного эпителия.

В нативном препарате клетки
плоского
эпителия
—
бесцветные, крупные круглые
или полигональной формы
клетки с маленьким круглым
ядром. В окрашенном по
Романовскому
—
крупные
клетки, диаметром 35-55 мкм,
полигональной формы
с
гиперхромным ядром 4-6 мкм,
цитоплазма
этих
клеток
окрашена слабо, сероватоголубого или серого цвета.
Клетки эпителия
(продолжение).

Клетки
переходного
эпителия
попадают
в
сперму
из
простатической
части уретры,
семяизвергающих
каналов
и
простатических ходов.

В нативном препарате — это
клетки округлой или неправильной
округлой формы. Могут содержать
1-3
ядра.
Цитоплазма
с
признаками
грубозернистой,
вакуольной
или
жировой
дегенерации.

В окрашенном по Романовскому
препарате — это клетки округлой
или
полигональной
формы.
Цитоплазма
окрашена
в
насыщенные голубые тона. Ядра
Клетки
сперматогенеза

В нативном препарате это клетки
правильной круглой формы, разных
размеров (размером с лейкоцит или в 2-3
раза
больше),характеризующиеся
плотной
гомогенной
консистенцией
цитоплазмы, на фоне которой иногда
просматриваются
1
или
несколько
круглых ядер.

Клетки считают в камере Горяева в тех
же полях зрения, что и считали
сперматозоиды.

Рсчет проводят по формуле С=NxS/100
(С-концентрация клеток сперматогенеза,
N-количество
подсчитанных
клеток
сперматогенеза,
S-концентрация
сперматозоидов в млн/мл.

Рультат — в млн/мл.
Подсчет количества
лейкоцитов в камере

В норме в сперме содержится менее 1
млн лейкоцитов в 1 мл.

В нативном препарате — это круглые
сероватые, мелкозернистые клетки
диаметром 14-16 мкм (в щелочной
среде спермы лейкоциты выглядят
несколько крупнее, чем, например, в
моче)

Сперму разводят в 10 раз реактивом
Барбагалло

Лейкоциты считают в 100 больших
квадратах камеры Горяева. Расчет
ведут по формуле L=a х 25000, где а
— количество сперматозоидов в 100
больших квадратах.
Трихомонада в сперме
Анализатор качества спермы
SQA — II CP

Как
и
многие
другие
существующие
анализаторы
определяет
несколько
параметров в сперме —
концентрацию, морфологию,
подвижность сперматозоидов.

Принцип
состоит
в
фотометрировании
тонкого
слоя спермы, размещенного в
специальном аспирационном
капилляре.
Компьютерный анализатор
спермы

Система состоит из:
оптической системы;
фазово-контрастной

втоматического
предметного столика;

высокопроизводительного компьютера;

алитического программного обеспечения

Принцип
работы:
анализатор
IVOS
производит
множество
"мгновенных
снимков" за короткое время (напр. 30
снимков за 0.5 секунды);

отслеживает
перемещение
клеток от снимка к снимку;

программное
обеспечение
позволяет
рассчитать концентрацию сперматозоидов
в
эякуляте,
процент
подвижных
и
прогрессивно подвижных клеток, скорости,
концентрации, параметры движения и т.д.
подогреваемого
подвижных