На правах рукописи ЕПИФАНОВА АЛСУ АМИРОВНА РЕГИОНАЛЬНЫЕ ИММУНОГЕНЕТИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ
реклама
На правах рукописи ЕПИФАНОВА АЛСУ АМИРОВНА РЕГИОНАЛЬНЫЕ ИММУНОГЕНЕТИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ ДОНОРСКОЙ КРОВИ 14.03.10 - клиническая лабораторная диагностика Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Саратов - 2012 Работа выполнена в Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Самарский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации. Научный руководитель: доктор медицинских наук, Сидорова Ирина Флуровна. Официальные оппоненты: Захарова Наталия Борисовна - доктор медицинских наук, профессор кафедры клинической лабораторной диагностики, заведующая ЦНИЛ ГБОУ ВПО Саратовский ГМУ им. В.И. Разумовского Минздравсоцразвития России; Девдариани Зураб Леванович - доктор медицинских наук, профессор, заведующий лабораторией иммунодиагностики ФКУЗ РосНИПЧИ «Микроб». Ведущая организация: Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Российский национальный исследовательский медицинский университет имени Н.И. Пирогова» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации. Защита состоится «_____»____________________ 2012 г. в______часов на заседании диссертационного совета Д 208.094.04 при ГБОУ ВПО Саратовский ГМУ им. В.И. Разумовского Минздравсоцразвития России по адресу: 410012, г. Саратов, ул. Большая Казачья, 112. С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГБОУ ВПО Саратовский ГМУ им. В.И. Разумовского Минздравсоцразвития России. Автореферат разослан «___»__________________2012 г. Ученый секретарь диссертационного совета, доктор медицинских наук, профессор Музурова Л.В. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность исследования. На каждом этапе развития медицины с учетом технического оснащения диагностического процесса и качества здоровья, характера заболеваемости и возможностей санологической и предиктивной медицины формируются актуальные направления исследований. В настоящее время необходимым условием обеспечения безопасности гемотрансфузий, трансплантации органов и тканей является создание базы принципиально новых данных по иммуногенетическим особенностям донорских ядерных и безъядерных клеток. Форменные элементы крови с экспрессированными на мембране полиморфной системой антигенов выполняют многообразные жизненно важные функции (Suh I.B. et al., 2003; Reid M.E., Lomas-Francis C., 2004; Combs M.R.et al., 2005; Schonewille H. et al., 2006; Hosseini-Maaf B. et al.,2007; SeltsamA.et al., 2007;Kamphuis M. et al., 2008; Daniels G.L., 2009; Lomas-Francis C. et al., 2009). АВО-система групп крови, образованная антиген-антительным представительством, открытая К.Ландштейнером в 1901 году, играет важную роль в жизнедеятельности человека как биологического вида (Рагимов А.А., 2001; Кулагина О.И. с соавт., 2006; Taylor D.O. et al., 2004; Hosseini-Maaf B.et al., 2007; Nagervadze M. et al., 2009). Групповые антигены А и В помимо клеток содержатся в биологических жидкостях (Донсков С.И., Мороков В.А., 2011). Системы АВО и резус являются полиаллельными и насчитывают десятки антигенов (А2, А3, Аx, Au, Am, Аcl, Аend, В3, Вx, Вm, Du, Cu, Cx, Eu и другие (Дерюгина Е.И., 1990; Boven D.J., 2003; Velliquette R.W. et al., 2007; Ye L.et al.,2009). В настоящее время изучено 250 антигенных детерминант эритроцитарных мембран, образующих три уровня «антигенных этажей» (Vitala J., Jarnefelt J., 1985; Strobel E.et al., 2004; Daniels G.L. et al., 2007), препятствующих износу эритроцитов при трении о стенки капилляров (Белкина Е.В., 1994; Ruypers F. et al., 1984; Blay C. et al., 1988; Cherif-Zahar B. et al., 1990; Agree P., Cartron J.P., 1991; Lutz P., Dzik W.H., 1992). Они выполняют помимо иммунологической функции роль в защите и обеспечении гомеостаза клеток крови: участвуют в транспорте воды, глюкозы, мочевины, электролитов через клеточную мембрану, служат рецепторами эндогенных лигандов, вирусов, бактерий, паразитов, осуществляют ферментативную и структурную функции, участвуют в адгезии различных молекул (Минеева Н.В., 2004, 2010; Westhoff C.M. et al.,2004; Kormoczi G.F. et al., 2009). Важным звеном межклеточного, межмолекулярного взаимодействия, лежащим в обеспечении гемостаза, репарации ткани, являются рецепторы тромбоцитов к тромбину, фактору Виллебранда, Toll-like рецепторы, к тромбопоэтину, тромбоспондину, витронектину, к фактору некроза опухоли и другие (Harrison P., Cramer C.M., 1993; Ruggeri L.M., 2002; Butler J. et al., 2005; Palacajornsuk P. et al., 2005; Yabe R. et al., 2006; Lee-Stroka H. et al.,2008; Duscher A. et al., 2009). Наиболее широко экспрессирована в организме HLA система (Human Leukocyte Antigen – лейкоцитарные антигены человека) (Hori T.A. et al., 2010). МНС обеспечивает соматическую индивидуальность и иммунореактивность организма, наиболее полиморфна. Она отвечает за распознавание своих и чужеродных клеток, координирует клеточный и гуморальный иммунитет, участвует в неиммунных функциях, включая процессы дифференцировки, регуляции местной воспалительной реакции, вазоконстрикции. МНС представлена семейством генов в сегменте р 21.3 короткого плеча шестой хромосомы. Эта область генома наследуется целым комплексом в качестве гаплотипа (Zou Y., Stastny P., 2009; Naugler C., Liwski R., 2009; Thaunat O. еt al., 2009; Juliwulandari R. еt al., 2009; Kwock J. еt al., 2010; Tait B.D., 2011). Выясняются взаимосвязь и патогенетическая роль HLA I и II типов и HLA гаплотипов с различными заболеваниями (Кошкин С.В., Зайцева Г.А., 2007; Полеско И.В., 2007; Селицкая М.Н. с соавт., 2009; PospelovL.E. et al., 2007; Feitsma A.L. et al., 2007; Gritsch H.A. et al., 2008; Vojvodic S. 2008; Talkes J. еt al., 2008; QueiroR. еt al., 2008; Bodienkova G.M., Rukavishnikov U.S., 2009; Misri R. еt al., 2009; Um S.W. et al., 2009; Fallerhoff B., Wank R., 2009; Ozgur B.C. et al., 2009; Albanidou-Farmaki E. еt al., 2009; Gesetal.., 2010; Majorana A. еt al., 2010). Выяснение в перспективе связи между различными заболеваниями и антигенами HLA позволяет выделить группы повышенного риска развития болезни, в ряде случаев определить прогноз заболеваний и оптимальную тактику лечения, предупредить посттрансфузионные осложнения (Grey D.et al.,2003; Siegenthaler M.A. et al.,, 2005; Li L., et al., 2007; Lee-Stroka H. et al.,2008; Danielsт G.L. et al., 2009; Hustinx H.et al., 2009; Hue-RoyeK. et al., 2009).Установлена связь между HLA аллелями с более чем пятьюстами патологиями, чаще аутоиммунного, воспалительного, инфекционного характера (Zeimo H. еt al., 2010). Антигенные системы клеток крови играют важную роль в развитии посттрансфузионных осложнений, среди которых иммунозависимая резистентность тромбоцитов, лихорадочная негемолитическая трансфузионная реакция, острое поражение легких и посттрансфузионная болезнь «трансплантат против хозяина» (Davis A. et al., 2008; Jewell D, 2008; Glotz D., 2008; Han M. et al., 2009; Stasthy P. et al., 2009). Актуально для предупреждения посттрансфузионных осложнений проведение идентичного подбора донора и реципиента с учетом их иммуногенетической совместимости; для этих целей необходимы идентификация доноров каждого региона по антигенным системам ядерных и безъядерных клеток крови, создание регистра доноров в целом по России. Настоящее исследование выполнено в рамках Федеральной программы научно-исследовательских работ: «Новые возможности индивидуализации донозологической диагностики и оптимизации лечебных мероприятий с учетом молекулярно-генетических особенностей и алиментарных факторов» (номер госрегистрации 0120.0809697). Цель исследования: охарактеризовать региональные иммуногенетические особенности эритроцитов, лейкоцитов, тромбоцитов для формирования базы доноров. Задачи: 1. Исследовать системы антигенов АВО эритроцитов и антител к ним в крови доноров. Определить частоту встречаемости антигенов А, В, АВ. Выяснить группоспецифические особенности взаимосвязи с фенотипами системы резус. Определить частоту встречаемости естественных антител против антигенов системы АВО. 2. Охарактеризовать фенотипы системы резус среди доноров, процент встречаемости с учетом гендерной принадлежности, наличие антигена D. Оценить распространенность редких фенотипов крови. 3. Изучить антигены системы Keлл; частоту встречаемости при различных фенотипах системы резус. Определить частоту встречаемости антител против антигенов системы Келл, МНС, Левис, Даффи, резус. 4. Молекулярно-генетическими методами провести HLA типирование ядросодержащих клеток крови и проанализировать частоту встречаемости антигенов, распространенность и частоту встречаемости аллелей гаплотипов главного комплекса гистосовместимости. Оценить ассоциированность различных аллелей HLA I и II класса с антигенами А, В, АВ. 5. Исследовать тромбоцитспецифические антигены тромбоцитов, частоту встречаемости аллельных вариантов антигенов тромбоцитов при различной АВО - групповой принадлежности. 6. Представить результаты биологической идентификации доноров Оренбургской области по характеру распределения и частоте встречаемости антигенов для формирования базы доноров клеток крови, создания регистра неродственных доноров костного мозга. Научная новизна. Впервые представлена база данных об иммуногенетических особенностях клеток крови доноров г. Оренбурга, антигенных системах эритроцитов (АВО, Rh, Kell), лейкоцитов (HLA I и II класса), тромбоцитов (HPA), содержании антиэритроцитарных антител (Rh, Kell, Lewis, Duffy, MNSs), что послужило научным обоснованием формирования базы доноров. Новыми являются сведения о региональной специфике распределения фенотипов системы резус с разной частотой встречаемости, о связи фенотипов системы резус с антигенами системы АВО и системы Кell. Обнаружено уменьшение полиморфизма антигенов системы резус от О(I) к АВ(IV) группе крови за счет редких фенотипов. При наличии антигена К в системе Kell наблюдается меньший полиморфизм фенотипов системы резус. Представлены ранее неизвестные данные о спектре тромбоцитспецифических антигенов в крови доноров региона и связи между антигенами систем НРА и АВО: отрицательная слабая корреляционная связь между О (I) группой крови и аллелем НРА5а и между А (II) группой крови и аллелем НРА2b, положительная корреляционная связь между АВ (IV) группой крови и аллелем НРА1а. Новыми являются сведения о степени иммуногенности систем антигенов эритроцитов. Обнаружены изоиммунные антитела к антигенам системы резус: в порядке убывания к D, Е, Cw, е антигенам. Определены антитела к антигенам системы Lewis, Кell, реже - к антигенам системы MNS и Daffi. Впервые представлены региональные особенности HLA-системы крови клинически здоровых лиц, характеризующие специфичные варианты локусов HLA-А, HLA-В, HLA-DRВ1. Наиболее часто встречаемым гаплотипом у доноров является HLA А*02 B*35 DRB1* 01. Научно-практическая значимость. Полученные результаты имеют теоретическое и практическое значение. Вкладом в фундаментальную науку являются сведения о сопряженности антигенных систем клеток крови. При отсутствии антигенов А и В у лиц с 0 (I) группой крови и при отсутствии антигена К системы Кell доноров отмечается более выраженный полиморфизм фенотипов системы резус. Характерно наличие корреляционной связи тромбоцитспецифических антигенов и антигенов систем АВО. Практически важными являются результаты биологической идентификации доноров Оренбургской области по характеру распределения и частоте антигенов ядросодержащих и безъядерных клеток крови и антител к ним; определен наиболее часто встречаемый гаплотип системы HLA – А*02 B*35 DRB1* 01, что необходимо для формирования базы доноров клеток крови, создания регистра неродственных доноров костного мозга . Составлена шкала приоритета трансфузионно опасных антигенов в регионе D>E>K>CW>Lea>c,Fya,M, что необходимо для обеспечения иммунологической безопасности гемотрансфузий. Положения, выносимые на защиту: 1. Иммуногенетические особенности ядросодержащих и безъядерных клеток крови клинически здорового населения региона, частота встречаемости фенотипов системы резус, гаплотипов системы HLA, системы антигенов тромбоцитов, что послужило научным обоснованием формирования базы доноров. Оценка иммуногенности систем антигенов эритроцитов. Изоиммунные антитела к антигенам ситемы резус: в порядке убывания к D, E, Cw, e антигенам. Определены антитела к антигенам системы Levis, Kell, реже - к антигенам системы MNS и Daffi. 2. Региональная специфика распределения фенотипов системы резус у доноров. Наиболее часто обнаружены фенотипы С+с+Cw-D+E-e+; С+с-CwD+E-e+; С+с+Cw-D+E+e+; С-с+Cw-D+E+e+ . С частотой менее 5% встречаются С-с+Cw-D+E+e-; С-с+Cw-D+E-e+; С+с-Cw+D+E-e+; С+с+Cw+D+E-e+; С+с+Cw+D+E+e+. Редкими с частотой менее 1% являются фенотипы С+с-Cw-D+E+e+; С+с+Cw-D+E+e-; С-с+Cw+D+E+e+; С- с+Cw+D+E-e+; С+с-Cw+D+E+e+. Наиболее редкий - антиген Cw, антитела к нему определены у 6%. Уменьшение полиморфизма антигенов системы резус от О(I) к АВ(IV) группе крови за счет редких фенотипов. 3. Частота встречаемости антигенов системы Кell и особенности распределения фенотипов системы резус при наличии и отсутствии антигена К системы Кell. При наличии антигена К системы Кell меньше полиморфизм фенотипов системы резус. Выраженная иммуногенность антигенов системы Кell, антитела к ним определены у 12% доноров. 4. Региональные особенности HLA-системы крови клинически здоровых лиц. Аллельные варианты локусов HLA-А, HLA-В, HLA-DRВ1. Наиболее часто встречаемым гаплотипом у доноров является HLA А*02 B*35 DRB1* 01. 5. Спектр тромбоцитспецифических антигенов в крови доноров. Связь между антигенами систем АВО и НРА: отрицательная слабая корреляционная связь между О (I) группой крови и аллелем НРА5а и между А (II) группой крови и аллелем НРА 2b, положительная корреляционная связь между АВ (IV) группой крови и аллелем НРА 1а. Апробация работы. Результаты диссертационной работы представлены на международной научной конференции «Здоровье семьиXXI век» (Испания, 2011); Российской научно-практической конференции «Медицинская биохимия и клиническая лабораторная диагностика в аспекте модернизации системы научных исследований» (Омск, 2011); международной научно-практической конференции «Постгеномные методы анализа в биологии, лабораторной и клинической медицине» (Новосибирск, 2011); международном конгрессе «Здоровье и образование в XXI веке» (Москва, 2011); на Национальных днях лабораторной медицины России-2011 (Москва, 2011); научно-практической конференции «Обеспечение доступности современных клинических лабораторных исследований: аналитические возможности, клинические потребности, организационноэкономические условия» (Москва, 2011); на совместном заседании кафедры фундаментальной и клинической биохимии с лабораторной диагностикой и кафедры общей, бионеорганической и биоорганической химии Самарского государственного медицинского университета; Самарского регионального отделения Всероссийского общества молекулярных биологов и биохимиков; Ассоциации специалистов по клинико-лабораторной диагностике Самарской области (Самара, 2012). Внедрение результатов в практику. Результаты работы внедрены в практику ГБУЗ «Оренбургская областная станция переливания крови», в лекционный материал на последипломном уровне обучения для клинических интернов, клинических ординаторов, аспирантов, врачей клиникодиагностических лабораторий кафедры фундаментальной и клинической биохимии с лабораторной диагностикой ГБОУ ВПО «Самарский государственный медицинский университет» Минздравсоцразвития России. Публикации. По материалам диссертации опубликовано 11 работ, из них 6 – в рецензируемых журналах, рекомендованных ВАК Министерства образования и науки РФ. Объем и структура диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, главы, посвященной объекту и методам исследования, трех глав собственных данных, заключения, выводов, практических рекомендаций и списка литературы. Работа изложена на 146 страницах, иллюстрирована 10 рисунками, содержит 32 таблицы. В работе использовано 204 литературных источника, из них 27 отечественных и 177 зарубежных. СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Объект и методы исследования Исследования проводили в ГБУЗ «Оренбургская областная станция переливания крови» (главный врач - заслуженный врач РФ, канд. мед. наук. Р.Г. Гильмутдинов ) и на кафедре фундаментальной и клинической биохимии с лабораторной диагностикой ГБОУ ВПО «Самарский государственный медицинский университет» Минздравсоцразвития России (зав. кафедрой – заслуженный деятель науки РФ, д-р мед. наук, профессор Ф.Н. Гильмиярова). Под наблюдением находились 5673 донора, среди которых 2954 мужчины и 2719 женщин; 17 % составили первичные доноры, 68 % - доноры резерва с частотой донаций не более 2-3 раз, 15% - активные доноры с частотой донаций более 3 раз. Доноры проходили первичное медицинское освидетельствование, осмотр у врача-терапевта. Далее проводили скрининг гемотрансмиссивных инфекций, таких как ВИЧ-инфекция, вирусы гепатитов B и С, сифилис. С помощью автоматического гематологического анализатора Micros изучали показатели общего анализа крови. Оценивали антигенные системы эритроцитов (АВО, Rh, Kell), лейкоцитов (HLA I и II класса), тромбоцитов (HPA), содержание антиэритроцитарных антител (Rh, Kell, Lewis, Duffy, MNSs). Определяли антигены эритроцитов, антиэритроцитарные антитела на автоматическом комплексе для иммуногематологических исследований «Хемос СП» «Biorad laboratories» с программным обеспечением HEMOS MR методом агглютинации и гельфильтрации в полиакриламидном геле с помощью 96 луночной микропланшетной и гелевой технологии Scangel Bio-rad со специфическими моноклональными антителами и антиглобулиновым реагентом с использованием коммерческих реактивов Trans Clone Anti-AB01 (A), Trans Clone Anti-AB02 (B), Trans Clone Anti-AB03 (AB) (BIO-Rad, США). Микропланшеты с внесенными образцами, реагентами и стандартными эритроцитами шейкировали на перемешивающем устройстве PSU-2T. Полученные результаты реакции гемагглютинации в лунках регистрировали с помощью фотометра для микропланшетов PR 310. Наряду с определением антигенов системы АВО (прямая реакция), выявлялись агглютинины с помощью стандартных эритроцитов Reverscan A1,B (перекрестная реакция). Генотипирование систем антигенов лейкоцитов (HLA) и тромбоцитов (HPA) проводили молекулярно-генетическим методом ПЦР, включающим SSO-генотипирование (Sequence specific oligonucleotides), блотгибридизацию на приборе Bee Blot 48 (Invitrogen). Выделение ДНК осуществляли на магнитных частицах с использованием магнита МРС-Т4 (Invitrogen), производили лизис клеток и адсорбцию ДНК на поверхности магнитных шариков Dynabeads, магнитную сепарацию ДНК, ПЦРамплификацию. Контроль количества ДНК проводили спектрофотометрически с помощью спектрофотометра WPA Biochrom (Invitrogen). Полученные результаты оценивали с помощью компьютерной программы Reli SSO PMP. В случае получения неоднозначных результатов выполняли SSP-HLA- типирование c целью получения разрешения от низкого к высокому и проведения HPA-типирования. Для определения HLA -специфичности использовали программу UniMatch. Статистическая обработка результатов исследования проводилась с помощью статистической программы STATISTICA 8. Получаемые распределения значений изучаемых признаков (распределение групповой принадлежности, фенотипов, гаплотипов) отличались от классического нормального или Гауссовского распределения; для сравнения статистик двух выборочных распределений применяли непараметрические методы сравнения: Хи-квадрат Пирсона, критерий Колмогорова-Смирнова, Uкритерий Уилкоксона с модификациями (Уилкоксона-Манна-Уитни). В настоящем исследовании значительное число переменных были измерены в дихотомической шкале. Для сравнения долей строили таблицы сопряженности. Наличие связей между двумя дихотомическими признаками определяли с помощью критерия хи-квадрат Пирсона. Для анализируемых связей признаков оценивали коэффициенты корреляции с помощью непараметрического коэффициента корреляции Спирмена и методов многомерного статистического анализа, таких как кластерный анализ, который применялся для создания типологии по фенотипам и гаплотипам (Жамбю М., 1988; Екимов А.К. с соавт., 2006). РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ Распределение доноров Оренбургской области по системе АВО системе резус (рис.1) показало, что доминирует группа крови А(II) наличием резус-фактора, встречающаяся у мужчин в 35,5% случаев и женщин - в 33,4 %. О(I) Rh (+) группа крови выявлена у 28,5% мужчин 30,5% женщин. Далее следуют В (III): 18,3% - у мужчин и 19,2% женщин и АВ(IV) - у 7,1% мужчин и 8,2% женщин. и с у и у 40,0% 33,4% 35,5% 30,5% 28,5% 20,0% 19,2% 18,3% 2,8% 3,6% 2,9% 3,4% 8,2% 2,0%7,1% 1,0% 2,4% 1,3% Мужчины 0,0% 0(I) Rh+ 0(I) Rh- A(II) Rh+ A(II) Rh- B(III) Rh+ Мужчины B(III) AB(IV) AB(IV) RhRh+ RhЖенщины Рис. 1. Частота встречаемости антигенов системы ABO и системы резус у мужчин и женщин Выявлено, что наиболее часто у доноров обнаруживается антиген С системы резус – 66,9% , антиген с - 80,5 %; антиген D – 81,4% и антиген e– 96,1%. По данным литературы, встречаемость этих антигенов иная : C-70%, E-30%, c-85%, e-97% (Донсков С.И., Мороков В.А., 2011). С фенотипом сcddee было 16,9% человек, с наличием антигенов E и С – 1,3% человек. Другую часть доноров мы расценивали как доноров с наличием антигена D, которые составили 81,8% . Доля резус-отрицательных доноров складывается из доноров с фенотипами сcddee, Сcddee и сcddЕe и составляет 18,2 % (рис.2). 18,2% 81,8% Резус-положительные доноры Резус-отрицательные доноры Рис.2. Распределение доноров Оренбургской области по наличию антигенов системы резус Выявлено, что среди доноров наиболее часто встречаются фенотипы системы резус (рис. 3): С+с+Cw-D+E-e+ - 35,15 %; С+с-Cw-D+E-e+ - 21,60 %; С+с+Cw-D+E+e+ - 17,27%; С-с+Cw-D+E+e+ - 13,07 %. Другие фенотипы встречаются с частотой менее 5 %: С-с+Cw-D+E+e- - в 4,59 % случаев, С+с+Cw+D+E-e+ - в 2,45 % случаев, С-с+Cw-D+E-e+ - в 2,01 % случаев, С+с- Cw+D+E-e+ - в 2,23 % случаев. Редкими являются фенотипы, частота которых менее 1%: С+с-Cw-D+E+e+ – 0,1%, С+с+Cw-D+E+e- – 0,09%. Антиген Cw выявлен у 4,79% доноров, которые должны быть отстранены от донаций эритроцитсодержащих гемокомпонентов в связи с высокой иммуногенностью антигена Cw. 40 35,15 35 30 21,6 25 17,27 13,07 20 15 10 4,59 5 2,45 2,23 2,01 1,23 0,11 0,11 0,09 0,04 0,04 С+с-Cw+D+E+e+ С-с+Cw+D+E-e+ С+с+Cw-D+E+e- С-с+Cw+D+E+e+ С+с-Cw-D+E+e+ С+с+Cw+D+E+e+ С-с+Cw-D+E-e+ С+с-Cw+D+E-e+ С+с+Cw+D+E-e+ С-с+Cw-D+E+e- С-с+Cw-D+E+e+ С+с+Cw-D+E+e+ С+с-Cw-D+E-e+ С+с+Cw-D+E-e+ 0 Проценты Рис. 3. Частота встречаемости различных фенотипов системы резус у доноров У доноров с различной АВО-групповой принадлежностью обнаружено отличие в частоте встречаемости антигенов системы резус (табл.1). Проведенные исследования выявили ряд группоспецифических особенностей. Обнаружено, что полиморфизм антигенов системы резус уменьшается от О(I) к АВ(IV) группе крови за счет редких форм. Для лиц О (I) группы крови характерен наиболее выраженный полиморфизм антигенов системы резус; выделены 17 фенотипов, 6 из которых редкие, с частотой встречаемости 0,1 %. У доноров А(II) группы крови число фенотипов системы резус меньше -15, редких форм - 4. Фенотип w С+c+C +D+E+e+ встречается реже, чем у лиц с О(I), В(III), АВ(IV) группами крови. У доноров В(III) группы крови число фенотипов системы резус - 14, редких форм – 3.Фенотип С+c+Cw-D-E-e+встречается реже, чем у лиц с другими группами крови. У доноров АВ(IV) группы крови выявлено 13 фенотипов системы резус, редких форм – 2. Таблица 1 Частота встречаемости антигенов системы резус у доноров при различной групповой принадлежности по системе ABО № Фенотип С+c+Cw-D+E-e+ С+c-Cw-D+E-e+ С-c+Cw-D-E-e+ 0(I) n % 549 30,3 313 17,3 300 16,5 A(II) n % 567 29,4 347 18,0 305 15,8 B(III) n % 332 26,0 236 18,5 231 18,0 AB(IV) n % 176 28,3 119 19,1 102 16,4 1 2 3 4 С+c+Cw-D+E+e+ 247 13,6 270 14,0 196 15,3 85 13,7 5 6 С-c+Cw-D+E+e+ С-c+Cw-D+E+e- 176 79 9,7 4,4 220 75 11,4 3,9 139 10,9 40 3,1 69 18 11,1 2,9 7 8 С+c+Cw+D+E-e+ С+c-Cw+D+E-e+ 37 33 2,2 1,8 33 32 1,7 1,7 31 23 2,4 1,8 12 15 1,9 2,4 9 С-c+Cw-D+E-e+ 30 1,7 33 1,7 21 1,6 9 1,4 21 19 2 1,2 1,0 0,1 16 24 0 0,8 1,2 0 13 12 0 1,0 0,9 0 7 7 2 1,1 1,1 0,3 2 1 1 1 1 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 1 0 2 1 4 0,1 0 0,1 0,1 0,2 1 0 2 0 1 0,1 0 0,2 0 0,1 1 0 0 0 0 0,2 0 0 0 0 w 10 С+c+C +D+E+e+ 11 С+c+Cw-D-E-e+ 12 С+c+Cw-D+E+e13 14 15 16 17 С+c-Cw-D+E+e+ С+c+Cw+D-E-e+ С-c+Cw+D+E+e+ С-c+Cw+D+E-e+ С-c+Cw-D-E+e+ Вариант антигена Rh0 (D)-Du встречается в 1,5% случаев среди резусположительных лиц. По данным литературы, фактор Du в комбинации с двумя другими антигенами – С Du е, с Du Е – встречается у 1,5% лиц, а фенотип с Du е - у 0,5% (Рагимов А.А., Дашкова Н.Г., 2004). Выявлена связь антигенов системы АВО с антигеном Du (табл.2). Таблица 2 Частота встречаемости антигена D системы резус при различной АВО- групповой принадлежности u Фенотип w u C+c+C -D - E-e+ C+c-Cw-Du- E-e+ C-c+Cw-Du- E+e+ Всего 0 (I) A (II) B (III) n % n % n % 11 100,0 8 80,0 5 100,0 0,0 2 20,0 0,0 0,0 0,0 0,0 11 100,0 10 100,0 5 100,0 n 2 1 3 AB (IV) % 66,7 0,0 33,3 100,0 Обнаружено, что фенотип C+c+Cw-Du- E-e+ наблюдается у представителей любой группы крови по системе АВО. Фенотип C+c-Cw-Du- E-e+ выявлен лишь у лиц с A (II) группой крови, а C-c+Cw-Du- E+e+ только среди доноров с принадлежностью крови к AB (IV). В наших исследованиях обнаружено различное распределение фенотипов системы резус при наличии или отсутствии антигенов системы Келл (табл.3). Таблица 3 Частота встречаемости фенотипов системы резус с учетом антигена cистемы Келл К- Фенотип w С+с+C -D+E-e+ С+с-Cw-D+E-e+ С+с+Cw-D+E+e+ С-с+Cw-D+E+e+ С-с+Cw-D+E+eС-с+Cw-D+E-e+ С+с+Cw-D+E+eС+с-Cw-D+E+e+ С+с-Cw+D+E-e+ С+с+Cw+D+E-e+ С+с+Cw+D+E+e+ С-с+Cw+D+E+e+ С-с+Cw+D+E-e+ С+с-Cw+D+E+e+ С-с+Сw- D-E-e+ C+c+Cw-D-E-e+ C-c+Cw- D-E+e+ C+c+Cw+D-E-e+ C-c+Cw- D-E+e- 1568 970 765 588 207 90 4 5 99 109 51 5 2 1 932 83 9 1 1 28,6% 17,7% 13,9% 10,7% 3,8% 1,6% 0,1% 0,1% 1,8% 2,0% 0,9% 0,1% 0,0% 0,0% 17,0% 1,5% 0,1% 0,0% 0,0% К+ 58 28 33 16 5 3 0 0 4 4 6 0 0 0 22 4 0 0 0 31,7% 15,3% 18,0% 8,7% 2,7% 1,6% 0,0% 0,0% 2,2% 2,2% 3,3% 0,0% 0,0% 0,0% 12,0% 2.1% 0,0% 0,0% 0,0% Всего 1626 998 798 604 212 93 4 5 103 113 57 5 2 1 954 87 9 1 1 28,7% 17,6% 14,1% 10,6% 3,7% 1,6% 0,1% 0,1% 1,8% 2,0% 1,0% 0,1% 0,0% 0,0% 16,8% 1,5 % 0,1% 0,0% 0,0% Всего 5490 100,0% 183 100,0% 5673 100,0% Показано, что фенотип С+с+Cw-D+E-e+ встречается у 28,6% доноров при отсутствии антигена К системы Kell, а также практически с той же частотой (31,7%) и при наличии антигена К системы Kell. Такие фенотипы, как С+с+Cw-D+E+e-; С+с-Cw-D+E+e+; С-с+Cw+D+E+e+; С-с+Cw+D+E-e+; С+с-Cw+D+E+e+; C-c+Cw-E+e+; C-c+Cw-D-E+e+; C+c+Cw+D-E-e+; C-c+Cw-DE+e- не выявлялись среди лиц с наличием антигена К системы Kell. Проведена оценка содержания антител в крови доноров. Естественные антитела в титре 1:64-1:128 встречались в 8 – 11% случаев, которые, как известно, представляют собой полные холодовые изогемагглютинины, относящиеся к классу IgM. Изоиммунные антитела к антигенам системы резус обнаружены в 36,4% случаев к D-антигену, в 27,3% - к Е-антигену, в 6,1% – к Cw-антигену и в 3% – к е-антигену. Антитела к антигену К системы Kell встречаются у 12,1% обследованных, к антигенам системы Lewis – в 9,1%, к антигенам системы MNS и Daffi – у 3% доноров (табл. 4), что свидетельствует о их высокой иммуногенности. В связи с этим при планировании неоднократных гемотрансфузий необходимо провести фенотипирование реципиента по минорным антигенам. Таблица 4 Частота встречаемости антител против антигенов системы резус, Келл, Lewis, MNS ,Daffi Антигены Собственные данные Данные литературы Доноры (Донсков С.И. с соавт., 2008) % % D 36,4 66 E 27,3 1,9 Cw 6,1 0,45 е 3,0 0,3 С 0 - с 0 - Kell 12,1 - Lea 9,1 - Fy a 3,0 - M 3,0 - Далее была проведена оценка системы лейкоцитарных антигенов. Наиболее известной является система HLA, которая контролируется генами главного комплекса гистосовместимости (МНС), являясь полиморфной системой. К I классу антигенов HLA относятся А, В и С-антигены, ко II классу - антигены DR, DQ, и DP. Нами изучена антигенная система лейкоцитов у 788 доноров с характеристикой вариантов специфичности локусов А и В - антигенов I класса и DRB1 II класса. Данные, характеризующие полиморфизм антигена А среди доноров, представлены на рисунке 4. 30,0% 28,3% 25,0% 20,0% 15,0% 13,3% 10,9% 10,7% 10,0% 6,1% 5,5% 5,8% 5,0% 2,4% 1,3% 2,4% 3,6% 3,4% 3,0% 2,5% 0,1% 0,7% 0,2% 0,0% '01 '02 '03 '11 '23 '24 '25 '26 '29 '30 '31 '32 '33 '34 '66 '68 '69 Рис. 4. Частота встречаемости аллельных вариантов локуса А I класса cистемы HLA Наиболее часто среди доноров встречаются антигены А*02 и А*24, при различной АВО-групповой принадлежности крови обнаруживается вариант А*02 (табл. 5),самая высокая его распространенность наблюдается у обследованных с 0(I) группой крови – 29,5%, а наименьшая – при B(III) группе крови - 26,3%. Антиген А*69 не встречается у лиц с 0(I) и B(III) группами крови. Таблица 5 Частота встречаемости аллельных вариантов антигена А I класса cистемы HLA при различной АВО-групповой принадлежности крови п\п 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 Всего А 01 02 03 11 23 24 25 26 29 30 31 32 33 34 66 68 69 n 51 141 54 23 16 49 29 35 4 15 14 18 12 0 3 14 0 478 0(I) % 10,7 29,5 11,3 4,8 3,3 10,3 6,1 7,3 0,8 3,1 2,9 3,8 2,5 0,0 0,6 2,9 0,0 100,0 A(II) n 58 166 76 36 16 58 42 27 10 13 19 22 16 0 4 17 2 582 % 10,0 28,5 13,1 6,2 2,7 10,0 7,2 4,6 1,7 2,2 3,3 3,8 2,7 0,0 0,7 2,9 0,3 100,0 B(III) n % 42 12,6 88 26,3 50 15,0 24 7,2 4 1,2 40 12,0 12 3,6 14 4,2 6 1,8 8 2,4 14 4,2 7 2,1 10 3,0 1 0,3 3 0,9 11 3,3 0 0,0 334 100,0 AB(IV) n % 20 11,0 51 28,0 29 15,9 8 4,4 2 1,1 21 11,5 13 7,1 11 6,0 1 0,5 2 1,1 9 4,9 6 3,3 2 1,1 0 0,0 1 0,5 5 2,7 1 0,5 182 100,0 Частота встречаемости вариантов антигена В отражена на рисунке 5. Редкими формами антигена В с частотой встречаемости менее 1% явились варианты В*37, В*45, В*46, В*47, В*54, В*55, В*73. 12,0% 11,0% 10,4% 9,9% 10,0% 8,0% 6,0% 4,0% 7,8% 7,1%6,9% 5,2% 5,6% 5,0% 5,3% 3,8% 2,9% 2,7% 1,9% 2,0% 0,5% 2,6% 1,9% 1,0% 1,2% 0,2%0,4%0,4% 2,1% 1,7% 1,5% 0,9% 0,2% 0,1% 0,0% '07 '08 '13 '14 '15 '18 '27 '35 '37 '38 '39 '40 '41 '44 '45 '46 '47 '48 '49 '50 '51 '52 '54 '55 '56 '57 '58 '73 Рис.5. Частота встречаемости аллельных вариантов антигена В I класса cистемы HLA Данные о частоте встречаемости аллельных вариантов антигенов В I класса среди донорского контингента при различной АВО-групповой принадлежности крови представлены в таблице 6. С наибольшей частотой встречается аллельный вариант В*35 антигена В I класса HLA-cистемы. У лиц с 0(I) группой крови в 9,7% случаев обнаружен В*44; среди доноров A(II) и B(III) групп крови преобладает вариант В*35 (11,7% и 13,0% соответственно); у 13,2% лиц с AB(IV) встречается В*07. Вариант В*35 имеет наибольшую распространенность среди доноров A(II) и B(III) групп крови. Таблица 6 Частота встречаемости аллельных вариантов антигена В I класса cистемы HLA при различной принадлежности крови по системе АВО В 0(I) A(II) B(III) AB(IV) № п\п n % n % n % n % 1 07 45 9,5 58 10,1 36 10,8 24 13,2 2 08 36 7,6 34 5,9 28 8,4 13 7,1 3 13 29 6,1 46 8,0 24 7,2 8 4,4 4 14 16 3,4 16 2,8 9 2,7 5 2,7 5 15 21 4,4 31 5,4 17 5,1 12 6,6 6 18 38 8,0 44 7,7 28 8,4 12 6,6 7 27 28 5,9 25 4,4 13 3,9 12 6,6 8 35 42 8,9 67 11,7 43 13,0 20 11,0 9 37 2 0,4 1 0,2 2 0,6 3 1,6 10 38 17 3,6 24 4,2 12 3,6 6 3,3 11 39 11 2,3 8 1,4 6 1,8 4 2,2 12 40 27 5,7 33 5,8 18 5,4 9 4,9 13 41 13 2,7 16 2,8 7 2,1 6 3,3 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 44 45 46 47 48 49 50 51 52 54 55 56 57 58 Всего 46 1 1 1 5 12 5 28 15 1 5 10 11 7 473 9,7 0,2 0,2 0,2 1,1 2,5 1,1 5,9 3,2 0,2 1,1 2,1 2,3 1,5 100,0 65 1 3 2 4 9 10 35 9 1 6 8 10 7 573 11,3 0,2 0,5 0,3 0,7 1,6 1,7 6,1 1,6 0,2 1,0 1,4 1,7 1,2 100,0 27 0 2 2 3 6 2 12 10 1 3 6 5 10 332 8,1 0,0 0,6 0,6 0,9 1,8 0,6 3,6 3,0 0,3 0,9 1,8 1,5 3,0 100,0 17 1 0 1 3 2 1 8 6 0 0 2 7 0 182 9,3 0,5 0,0 0,5 1,6 1,1 0,5 4,4 3,3 0,0 0,0 1,1 3,8 0,0 100,0 Частота встречаемости аллельных вариантов антигена DRB1 II класса cистемы HLA отражена на рисунке 6. С частотой менее 3%, среди донорского контингента наблюдались варианты DRB1*09, DRB1*10, DRB1*12, DRB1*14.Установлена наибольшая распространенность антигена DRB1*15 среди мужчин и DRB1*01 среди женщин. 16,0% 14,2% 13,3% 14,0% 13,3% 13,1% 12,3% 12,0% 9,9% 10,0% 9,0% 8,0% 6,0% 4,1% 3,3% 4,0% 2,4% 1,8% 2,0% 2,4% 1,0% 0,0% 01 03 04 07 08 09 10 11 12 13 14 15 16 Рис. 6. Частота встречаемости аллельных вариантов антигена DRB1 II класса cистемы HLA При анализе частоты встречаемости аллельных вариантов антигена DRB1-II класса с учетом АВО-групповой принадлежности крови оказалось, что у 14,9% лиц с 0(I) группой крови наиболее часто встречается антиген DRB1*13; у обследованных с A(II) – DRB1*01 (14,6%); у доноров с B(III) – DRB1*15 (15,5%); лица с AB(IV) имеют варианты антигена DRB1*01 и DRB1*15 с частотой по 15,4%. Варианты DRB1*09, DRB1*10 являются редкими (табл.8). Таблица 8 Частота встречаемости аллельных вариантов антигена DRB1-II класса cистемы HLA при различнойАВО- групповой принадлежности крови п\п 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 Всего DRB1* 01 03 04 07 08 09 10 11 12 13 14 15 16 0(I) n 65 42 48 55 15 2 7 61 13 69 18 59 10 464 % 14,0 9,1 10,3 11,9 3,2 0,4 1,5 13,1 2,8 14,9 3,9 12,7 2,2 100,0 A(II) n % 84 14,6 4 8,0 61 10,6 83 14,4 26 4,5 14 2,4 4 0,7 74 12,8 16 2,8 66 11,5 9 1,6 65 11,3 28 4,9 576 100,0 B(III) n % 43 13,0 35 10,6 28 8,5 43 13,0 15 4,5 9 2,7 3 0,9 35 10,6 3 0,9 48 14,5 8 2,4 51 15,5 9 2,7 330 100,0 AB(IV) n % 28 15,4 16 8,8 16 8,8 25 13,7 8 4,4 3 1,6 2 1,1 21 11,5 5 2,7 23 12,6 3 1,6 28 15,4 4 2,2 182 100,0 По результатам HLA-типирования было установлено, что по локусам HLA-А, В, DRВ1 выявлено 17 аллельных вариантов локуса HLA-А, 28 аллельных вариантов локуса HLA-В, 13 аллельных вариантов локуса HLADRВ1.Частотой встречаемости более 10 % обладают следующие аллельные варианты антигена А: А*02 – 28,3%, А*03 – 13,0%, А*01 – 10,9%, с частотой встречаемости менее 10 %: А*24 – 10,7%, А*25 – 6,01%, A*11 – 5,5%. Частотой встречаемости более 10 % обладают следующие аллельные варианты антигена В: B*35-11 %, B*07-10,4 %, B*44-9,9 %, с частотой встречаемости менее 10 %: B*18 – 7,8 %, B*08 – 7,10%, B*13 – 6,9%, B*51 – 5,3%.Частотой встречаемости более 10 % обладают следующие аллельные варианты DRB1: DRB1*01 – 14,2%, DRB1* 15 – 13,1%, DRB1 *13 – 13,3%, DRB1*07 – 13,3%, DRB1* 11 – 12,3%. По частоте встречаемости аллельных вариантов антигена А I класса HLAcистемы с наибольшей частотой среди лиц обоего пола и представителей любой группы крови обнаруживается вариант А*02. Что касается антигена В I класса HLA-cистемы, с наибольшей частотой среди донорского контингента встречается аллельный вариант В*35. Среди антигена DRB1 II класса HLA-cистемы наиболее часто наблюдается DRB1*01. Наиболее часто встречаемым гаплотипом у доноров является: HLA А*02 B*35 DRB1* 01. Нами изучены 7 тромбоцитспецифических антигенов из 18 известных(Carl et.al., 2000), частоты встречаемости которых имеет региональные особенности (табл. 9). Таблица 9 Частота встречаемости тромбоцитспецифических антигенов системы тромбоцитов п\п Антиген Аллель 1 HPA-1 1a 2 1b 3 4 5 6 7 8 9 10 11 HPA-2 HPA-3 HPA-4 n 85 5 % 74,56 4,39 п\п 12 13 1ab 2a 2b 24 102 0 21,05 89,47 0 14 15 16 2ab 3a 3b 12 74 28 10,53 64,91 24,56 17 18 19 3ab 4a 4b 12 114 0 10,53 100 0 20 21 22 Антиген Аллель 4ab HPA-5 5a n 0 102 HPA-6 5b 5ab 6a 4 8 112 HPA-15 6b 6ab 15a 1 1 107 15b 15ab 7 0 % 0 89,4 7 3,51 7,02 98,2 5 0,88 0,88 93,8 6 6,14 0 По результатам корреляционного анализа обнаружены статистически значимые связи между тромбоцитспецифическими антигенами и антигенами системы АВО. Было установлены слабые отрицательные связи между О(I) группой крови и аллелем НРА5а rs= -0,194 (р<0,05), A(II) группой крови и аллелем НРА2b rs= -0,172 (р<0,05) и положительная связь между AB(IV) группой крови и аллелем НРА1а rs= 0,225 (р<0,05). Эти результаты были подтверждены с использованием непараметрического критерия Хи-квадрат и иерархического кластерного анализа (Жамбю М., 1988; Екимов А.К. и соавт., 2006). Проведенный анализ аллельных вариантов системы HLA при различной АВО- групповой принадлежности выявил различные комбинации антигенов системы HLAпри О(I)- АВ(IV) группах крови (табл.10). Таблица 10 Группы крови O (I) A (II) B (III) AB (IV) Всего Соотношение вариантов специфичности системы HLA и антигенов АВО- системы A B AB n Часть n Часть n Часть 478 1,0 473 0,99 464 0,97 582 1,0 573 0,98 576 0,99 334 1,0 332 0,99 330 0,98 182 1,0 182 1,0 182 1,0 1576 1,0 1560 0,99 1552 0,98 При О(I) группе крови частота встречаемости DRB1наименьшая, тогда как при АВ(IV) группе крови аллели А, В и DRB1 встречаются одинаково часто, что свидетельствует о взаимосвязи антигенов системы АВО клеток крови и системы НLA, которая преимущественно, по данным литературы, находится на ядерных клетках крови . Таким образом, в работе представлена база данных об иммуногенетических особенностях клеток крови доноров г. Оренбурга с частотой встречаемости в регионе систем антигенов эритроцитов систем АВО, резус, Кell, Lewis, MNS, Daffi, тромбоцитов, гаплотипов системы HLA, что послужило научным обоснованием формирования базы доноров. Результаты проведенного исследования имеют практическое значение для обеспечения иммунологической безопасности гемокомпонентной терапии и производства панелей стандартных эритроцитов для выявления и идентификации антиэритроцитарных антител. ВЫВОДЫ 1.Охарактеризованы геногеографические, иммуногенетические особенности ядросодержащих и безъядерных клеток крови клинически здорового населения региона; выявлены специфика распределения и частота встречаемости фенотипов системы резус, гаплотипов системы HLA, системы антигенов тромбоцитов, что послужило научным обоснованием формирования базы доноров клеток крови, создания регистра неродственных доноров костного мозга. 2.Установлена региональная особенность распределения фенотипов системы резус у доноров. Наиболее часто обнаружены следующие фенотипы: С+с+Cw-D+E-e+ - 35,15 %; С+с-Cw-D+E-e+ - 21,60 %; С+с+Cw-D+E+e+ 17,27%; С-с+Cw-D+E+e+ - 13,07 %. С частотой менее 5% встречаются : Сс+Cw-D+E+e- - в 4,59 % случаев, С+с+Cw+D+E-e+ - в 2,45 % случаев, Сс+Cw-D+E-e+ - в 2,01 % случаев, С+с- Cw+D+E-e+ - в 2,23 % случаев, С+с+Cw+D+E+e+ - 1,2% случаев. Редкими являются следующие фенотипы, частота которых менее 1%: С+с-Cw-D+E+e+ – 0,1%; С+с+Cw-D+E+e- – 0,09%; С-с+Cw+D+E-e+ -0,04%; С+с-Cw+D+E+e+ - 0,04%. Наиболее редкий антиген Cw - у 4,8% доноров, антитела к нему определены у 6%. Изоиммунные антитела к антигенам системы резус встречаются в 36,4% случаев к D-антигену, в 27,3% случаев – к Е антигену, в 3% – к е - антигену. Антитела к антигенам системы Lewis обнаружены в 9,1% случаев, к антигенам системы MNS и Daffi – у 3% доноров. 3.Определены группоспецифические особенности распределения фенотипов системы резус, обнаружено изменение полиморфизма антигенов от О(I) к АВ(IV) группе крови за счет уменьшения частоты редких фенотипов: - для лиц с О(I) группой крови характерен наиболее выраженный полиморфизм антигенов, выделены 17 фенотипов, 6 из которых редкие с частотой встречаемости 0,1 %; - у доноров с А (II) группой крови число фенотипов -15; редких форм - 4; реже встречается фенотип С+c+Cw+D+E+e+; - у доноров с В (III) группой крови число фенотипов - 14, редких форм –3; реже обнаружен фенотип С+c+Cw-D-E-e+; - у лиц с АВ(IV) группой крови число фенотипов -13, редких форм- 2. 4. Определены антигены системы Кell у 3,2% доноров, у Кellположительных доноров не обнаружено 9 фенотипов системы резус: С+с+Cw-D+E+e-, С+с-Cw-D+E+e+, С-с+Cw+D+E+e+, С-с+Cw+D+E-e+, С+сCw+D+E+e+, C-c+Cw-E+e+, C-c+Cw-E+e+, C+c+Cw+E-e+, C-c+Cw-E+e-. Антигены системы Кell отличаются значительной иммуногенностью, антитела к антигенам системы Кell обнаружены у 12% доноров. 5. Определены региональные особенности HLA-системы крови у клинически здоровых лиц. Выявлены специфичные варианты локусов HLAА - 17, HLA-В – 28, HLA-DRВ1 - 13. Частота встречаемости более 10 % характерна для А*02 – 28%, А*03 – 13%, А*01 – 11%, А*24 – 11%, B*35-11 %, B*07-10 %, B*44- 10 %. Частота встречаемости менее 10 % отмечена для А*25 – 6%, A*11 – 5,5%, B*18 – 8 %, B*08 – 7%, B*13 – 7%, B*51 – 5%. Среди антигена DRB1 II класса HLA-cистемы наблюдается DRB1*01 - 14%, реже DRB1* 15 – 13%, DRB1 *13 – 13%, DRB1*07 – 13%, DRB1* 11 – 12%. Наиболее часто встречаемым гаплотипом у доноров является HLA А*02 B*35 DRB1* 01. 6.Обнаружено 7 тромбоцитспецифических антигенов в крови доноров, частота встречаемости которых имеет региональную специфику: НРА -6 6а– 98%, НРА -15 - 15а– 94%, НРА -5 - 5а– 89%, НРА -2 - 2а– 89%, НРА -1 1а– 74%, НРА -3 - 3а– 65%, НРА -3 – 3b– 25%, НРА -1 - 1а b – 21%, НРА -3 3а b – 11%, НРА -2 - 2а b – 11%, с частотой менее 10% - НРА -1 - 1 b – 4,4%, НРА -5 - 5 b – 3,5%, НРА -5 - 5а b – 7%, НРА -6 - 6 b – 0,9%, НРА -6 - 6а b – 0,9%. Выявлена связь между антигенами систем АВО и НРА: отрицательная слабая корреляционная связь - между О (I) группой крови и аллелем НРА5а (р<0,05) и между А (II) группой крови и аллелем НРА2b (р<0,05), а также положительная корреляционная связь между АВ (IV) группой крови и аллелем НРА1а (р<0,05). ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ 1.С целью обеспечения иммунологической безопасности гемотрансфузий рекомендуется внедрить в практику службы крови и клиникодиагностических лабораторий лечебных учреждений подбор донора и реципиента с учетом фенотипа системы резус и антигенов минорных эритроцитарных систем; учитывать при этом шкалу приоритета W a трансфузионно опасных антигенов в регионе - D>E>K>C >Le >c,Fya,M. 2.При составлении регистра неродственных доноров костного мозга целесообразно учитывать региональные иммуногенетические особенности клеток крови. Наиболее часто встречаемым гаплотипом у доноров в регионе является: HLA А*02 B*35 DRB1* 01. Рекомендуется не использовать в качестве доноров клеток крови лиц, имеющих антиген Сw, обладающий высокой иммуногенностью. 3. Целесообразно включить в перечень обязательных лабораторных исследований в КДЛ ЛПУ, которые проводятся пациентам, нуждающимся в гемотрансфузиях, определение антигенов систем АВО, антигена D, w u С,с,Е,е,С ,D , антиэритроцитарные антитела. Пациентам, нуждающимся в многократных гемотрансфузиях, в обязательный перечень иммуногематологического обследования рекомендуется включить генотипирование антигенов системы HLA 1 и 2-го классов, системы антигенов тромбоцитов HPA . 4.Для проведения фенотипирования наиболее целесообразно использовать высокочувствительные моноклональные антитела, гелевые карты. Для детекции и сохранения полученных результатов эффективно использование современных автоматизированных комплексов для иммуногематологических исследований. Рекомендуется осуществлять скрининг антиэритроцитарных антител методом непрямой реакции Кумбса, используя гелевую технологию. СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. Отличительные признаки антигенов системы АВО - основа индивидуального ответа на различные стимулы / Ф.Н. Гильмиярова, В.М. Радомская , А.А.Епифанова и др. // Клиническая лабораторная диагностика. - 2011.- №10. – С.3-4. Фенотипические особенности показателей гуморального иммунитета больных хроническим генерализованным пародонтитом с различной группой крови / Ф.Н Гильмиярова, В.М. Радомская , А.А. Епифановаи др. // Биомедицинская химия. –2011.- Т. 57.- Вып. 6.- С.650-656 . Питьевой режим – формирующий фактор функционального состояния организма / Е.А. Рыскина, А.В.Бабичев, А.А. Епифанова и др. // Вопросы биологической, медицинской и фармакологической химии.- 2011. - № 10.-С.57-61. Влияние питьевого режима на показатели гомеостаза ротовой жидкости / Ф.Н.Гильмиярова, В.М. Радомская, А.А. Епифанова и др. // Здоровье семьи –ХХI век: Материалы Международной научной конференции. – Испания,Торремолинос, 2011.- С. 121-124. Метаболическое зондирование и компьютерное моделирование в изучении структурно-функциональных особенностей антигенов НАВ / Ф.Н. Гильмиярова, В.М. Радомская, А.А. Епифанова и др. // Медицинская биохимия и клиническая лабораторная диагностика в аспекте модернизации системы научных исследований: Материалы Российской научно-практической конференции . – Омск, 2011. – С.7475. Пренатальная диагностика хромосомной патологии плода / О.И. Мелешкина, М.В. Буданова, А.А. Епифанова // Клиническая лабораторная диагностика. - 2011.- №10.– С.16. Обоснование необходимости разработки новых референтных значений гематологических показателей / Н.И. Гергель, А.А. Мингачева, А.А. Епифанова и др. // Клиническая лабораторная диагностика. - 2011.№9. – С.28. Модифицирующее влияние малых молекул на белок-лигандное взаимодействие / А.А. Епифанова, Е.А. Рыскина, К.И. Колесова и др. // Постгеномные методы анализа в биологии, лабораторной и клинической медицине: Материалы Международной научнопрактической конференции. – Новосибирск, 2011. - С.211. Полиморфизм и полифункциональность антигенов АВ0 системы крови / Е.А. Рыскина , Н.Н.Чернов, А.А. Епифанова // Вестник РУДН. –2011.№4.-С.31-36. Группоспецифические особенности лигандного взаимодействия под влиянием силистронга / Е.А. Шахнович, Н.А. Колотьева, А.А. 11. Епифанова и др. // Здоровье и образование в XXI веке: Сборник научных статей и тезисов XII международного конгресса.- М., 2011.С.510-511. Прогнозируемая биологическая активность антигенных детерминант АВ0 системы крови (Predicted Biological Activity of Antigenic Determinants of AB0 BloodSystem)/ Ф.Н.Гильмиярова, В.М.Радомская, А.А. Епифанова и др. // Науки о жизни (Life Sciences): Альманах «Жизнь плюс наука». - Вып 7. Интернализация и инновация .-2011.№7.-С. 24-28. Подписано в печать Тираж 100 . Объем -1 печ.л. Заказ № Отпечатано в типографии по адресу:
