70 Áþëëåòåíü ýêñïåðèìåíòàëüíîé áèîëîãèè è ìåäèöèíû, 2008, ïðèëîæåíèå ¹ 1 ÈÌÌÓÍÎÌÎÐÔÎËÎÃÈ×ÅÑÊÎÅ ÈÑÑËÅÄÎÂÀÍÈÅ ÊËÅÒÎÊ ËÀÍÃÅÐÃÀÍÑÀ  ÊÎÆÅ ÁÎËÜÍÛÕ ÀÒÎÏÈ×ÅÑÊÈÌ ÄÅÐÌÀÒÈÒÎÌ Î.Â.Ïîòàïîâà, Í.Ã.Ëóçãèíà, Â.À.Øêóðóïèé ÃÓ Íàó÷íûé öåíòð êëèíè÷åñêîé è ýêñïåðèìåíòàëüíîé ìåäèöèíû ÑÎ ÐÀÌÍ, Íîâîñèáèðñê  ðåçóëüòàòå èììóíîìîðôîëîãè÷åñêîãî èññëåäîâàíèÿ êëåòîê Ëàíãåðãàíñà â ëîêóñàõ ïîðàæåííîé êîæè ó áîëüíûõ àòîïè÷åñêèì äåðìàòèòîì â ñòàäèè óìåðåííî-âûðàæåííîãî îáîñòðåíèÿ è ðåìèññèè âûÿâëåíî óâåëè÷åíèå ÷èñëåííîé ïëîòíîñòè êëåòîê Ëàíãåðãàíñà ïî ñðàâíåíèþ ñ òàêîâîé ó çäîðîâûõ ëþäåé (äîáðîâîëüöåâ), èçìåíåíèå èõ ìîðôîëîãè÷åñêèõ ñâîéñòâ è íàðóøåíèå òîïîãðàôè÷åñêîãî ðàñïîëîæåíèÿ. Êëþ÷åâûå ñëîâà: àòîïè÷åñêèé äåðìàòèò, êîæà, êëåòêè Ëàíãåðãàíñà, èììóíîìîðôîëîãè÷åñêîå è ìîðôîìåòðè÷åñêîå èññëåäîâàíèÿ Ðîëü ýïèäåðìàëüíûõ äåíäðèòíûõ êëåòîê êëåòîê Ëàíãåðãàíñà (ÊË) â ïàòîãåíåçå àòîïè÷åñêîãî äåðìàòèòà (ÀÄ), íåñìîòðÿ íà ìíîãî÷èñëåííûå èññëåäîâàíèÿ, îñòàåòñÿ íåÿñíîé. Ïðè ÀÄ îñíîâíàÿ ôóíêöèÿ ÊË çàõâàò àíòèãåíîâ è èõ ïðåäñòàâëåíèå Ò-ëèìôîöèòàì ìîæåò ïðîèñõîäèòü íå òîëüêî â Ò-çàâèñèìûõ çîíàõ ëèìôàòè÷åñêèõ óçëîâ, íî è íåïîñðåäñòâåííî â ýïèäåðìèñå è äåðìå [7]. Íà èõ ïîâåðõíîñòè âûÿâëåíû Fcε-ðåöåïòîðû äëÿ IgE [8]. ÊË èìåþò âûñîêóþ ñåêðåòîðíóþ àêòèâíîñòü, ïðîäóöèðóÿ ðÿä èíòåðëåéêèíîâ, êîëîíèåñòèìóëèðóþùèå ôàêòîðû, ÈÔÍ-γ [2,4,12], àäãåçèâíûå ôàêòîðû [3,6,7], òåì ñàìûì îêàçûâàÿ ðåãóëèðóþùåå âëèÿíèå íà ðàçâèòèå âîñïàëèòåëüíûõ ïðîöåññîâ. Ðàçíîîáðàçèå ôóíêöèé ïðåäïîëàãàåò âîçìîæíîñòü èçìåíåíèÿ ðÿäà ìîðôîëîãè÷åñêèõ ñâîéñòâ ÊË â ðàçëè÷íûå ñòàäèè ÀÄ. Êðîìå òîãî, íå èçó÷åíà âçàèìîñâÿçü òèïè÷íûõ ëîêàëèçàöèé è ïðîÿâëåíèé ïàòîëîãè÷åñêèõ âûñûïàíèé ïðè ÀÄ ñî ñòðóêòóðíî-ìîðôîëîãè÷åñêèìè îñîáåííîñòÿìè ïîðàæåííûõ ó÷àñòêîâ. Öåëü èññëåäîâàíèÿ èçó÷èòü èììóíîìîðôîëîãè÷åñêèå ñâîéñòâà è êîëè÷åñòâåííóþ äèíàìèêó ÊË â ëîêóñàõ ïîðàæåííîé êîæè ó áîëüíûõ ÀÄ. ÌÅÒÎÄÈÊÀ ÈÑÑËÅÄÎÂÀÍÈß Îáúåêòîì èññëåäîâàíèÿ áûëè áîëüíûå ÀÄ â âîçðàñòå 14-36 ëåò ñ ýðèòåìàòî-ñêâàìîçíîé ôîðìîé çàáîëåâàíèÿ ñ ëèõåíèôèêàöèÿìè ðàçëè÷íîé ñòåÀäðåñ äëÿ êîððåñïîíäåíöèè: luzgina@mail.ru. Ëóçãèíà Í.Ã. ïåíè âûðàæåííîñòè â ñòàäèÿõ óìåðåííî-âûðàæåííîãî îáîñòðåíèÿ (2-ÿ ãðóïïà; n=20) è ðåìèññèè (3-ÿ ãðóïïà; n=14). Êîíòðîëåì ñëóæèëè îáðàçöû êîæè çäîðîâûõ ïàöèåíòîâ (äîáðîâîëüöåâ) 1-é ãðóïïû (n=7). Âñå ïàöèåíòû ïîëó÷àëè ïîäðîáíóþ èíôîðìàöèþ î ïðîâîäèìîì èññëåäîâàíèè è äàâàëè íà íåãî èíôîðìèðîâàííîå ñîãëàñèå, êðîìå òîãî, ó áîëüíûõ â âîçðàñòå äî 18 ëåò ñîãëàñèå íà ïðîâåäåíèå ìèêðîáèîïñèè êîæè ïîëó÷àëè ó ðîäèòåëåé. Îáðàçöû òêàíè ïîëó÷àëè èç îáëàñòè ëîêòåâûõ ÿìîê íàèáîëåå òèïè÷íîé ëîêàëèçàöèè ïàòîëîãè÷åñêèõ ýëåìåíòîâ â êîæå ïðè ÀÄ. Äëÿ ñâåòîîïòè÷åñêîãî èññëåäîâàíèÿ ïîëó÷åííûé ìàòåðèàë ïîñëå ôèêñàöèè â 10% âîäíîì ðàñòâîðå íåéòðàëüíîãî ôîðìàëèíà è îáåçâîæèâàíèè â ñåðèè ñïèðòîâ âîçðàñòàþùåé êîíöåíòðàöèè îðèåíòèðîâàëè íà ïàðàôèíîâûõ áëîêàõ äëÿ ïîëó÷åíèÿ ñðåçîâ, ïåðïåíäèêóëÿðíûõ ïîâåðõíîñòè êîæè. Ñðåçû òîëùèíîé 5 ìì îêðàøèâàëè ãåìàòîêñèëèíîì è ýîçèíîì, ïî âàí Ãèçîíó. Äëÿ âèçóàëèçàöèè è èçó÷åíèÿ ÊË âûïîëíÿëè èììóíîãèñòîõèìè÷åñêîå èññëåäîâàíèå íà äåïàðàôèíèçèðîâàííûõ ñåðèéíûõ ñðåçàõ ñ ïîñëåäóþùåé äåìàñêèðîâêîé àíòèãåíîâ â ÑÂ×-ïå÷è. Îïðåäåëÿëè ìîëåêóëÿðíî-áèîëîãè÷åñêèé ìàðêåð (Novocastra) Lag+ (Ñà2+-çàâèñèìûé ëåêòèí II òèïà, ýêñïðåññèðóåìûé òîëüêî ÊË è ó÷àñòâóþùèé â ôîðìèðîâàíèè öèòîïëàçìàòè÷åñêèõ ãðàíóë Áèðáåêà [11]). Äëÿ âèçóàëèçàöèè ïðèìåíÿëè ñèñòåìó äåòåêöèè Envision (Dako). Âðåìÿ èíêóáàöèè ïðåïàðàòîâ êîæè ñ àíòèòåëîì ñîñòàâèëî 60 ìèí ïðè êîìíàòíîé òåìïåðàòóðå. Ïîñëå èíêó- 71 ÝÊÑÏÅÐÈÌÅÍÒÀËÜÍÛÅ ÌÅÒÎÄÛ ÊËÈÍÈÊÅ áèðîâàíèÿ ñðåçû äîêðàøèâàëè ãåìàòîêñèëèíîì. Ïîëîæèòåëüíàÿ ðåàêöèÿ íà Lag+ ïðîÿâëÿëàñü â âèäå êîðè÷íåâîãî îêðàøèâàíèÿ öèòîïëàçìû ÊË. Îïðåäåëÿëè ÷èñëåííóþ ïëîòíîñòü ÊË â 1 ìì2 ñðåçà êîæè [1], êîëè÷åñòâî öèòîïëàçìàòè÷åñêèõ îòðîñòêîâ, ïðèõîäÿùèõñÿ íà îäíó êëåòêó (ó÷èòûâàëè òîëüêî êëåòêè îòðîñò÷àòîé ôîðìû). Ðàçìåðû êëåòîê ñîîòâåòñòâîâàëè ñðåäíèì äèàìåòðàì òåë ÊË (îòðîñò÷àòîé è îêðóãëîé ôîðìû) áåç ó÷åòà äëèíû èõ îòðîñòêîâ. Îöåíèâàëè òîïîãðàôè÷åñêîå ïîëîæåíèå ÊË ïî îòíîøåíèþ ê áàçàëüíîé ìåìáðàíå è ñëîÿì ýïèäåðìèñà. Âåðîÿòíîñòü äîñòîâåðíîñòè ðàçëè÷èé ñðàâíèâàåìûõ ñðåäíèõ âåëè÷èí îöåíèâàëè ïî t êðèòåðèþ Ñòüþäåíòà, äîñòîâåðíûìè ñ÷èòàëè ðàçëè÷èÿ ïðè ð<0.05. ÐÅÇÓËÜÒÀÒÛ ÈÑÑËÅÄÎÂÀÍÈß Â ýïèäåðìèñå áîëüíûõ 2-é ãðóïïû âåëè÷èíà ïîêàçàòåëÿ ÷èñëåííîé ïëîòíîñòè ÊË áûëà íà 35.8% âûøå, ÷åì âåëè÷èíà ñîîòâåòñòâóþùåãî ïàðàìåòðà ó ïàöèåíòîâ 1-é ãðóïïû (òàáëèöà).  èññëåäîâàííûõ çîíàõ êîæè çäîðîâûõ ëþäåé ÊË ðàñïîëàãàëèñü îòíîñèòåëüíî ðàâíîìåðíî â áàçàëüíîì è íèæíèõ ðÿäàõ øèïîâàòîãî ñëîåâ ìíîãîñëîéíîãî ïëîñêîãî ýïèòåëèÿ ìåæäó ýïèòåëèîöèòàìè, íå îáðàçóÿ ñ íèìè ìåæêëåòî÷íûõ ñîåäèíåíèé, â òî âðåìÿ êàê ó áîëüíûõ ÀÄ â ñòàäèþ óìåðåííî âûðàæåííîãî îáîñòðåíèÿ â ëîêóñàõ ïîðàæåíèÿ êîæè íàáëþäàëè ñìåùåíèå ÊË â ïîâåðõíîñòíûå ñëîè øèïîâàòîãî è çåðíèñòîãî ñëîåâ. ÊË ðàñïîëàãàëèñü íåðàâíîìåðíî, ãðóïïàìè îò 3 äî 12 â ïîëå çðåíèÿ, ÷åðåäóÿñü ñ ó÷àñòêàìè, â êîòîðûõ äàííûå êëåòêè îòñóòñòâîâàëè. Ðàçìåðû ÊË â îáðàçöàõ êîæè áîëüíûõ 2-é ãðóïïû áûëè ìåíüøèìè ïî ñðàâíåíèþ ñ òàêîâûìè ó ïàöèåíòîâ 1-é ãðóïïû íà 18% (òàáëèöà) è çíà÷èòåëüíî âàðüèðîâàëè â ïðåäåëàõ áèîïòàòà ó êàæäîãî áîëüíîãî (15.6-20.8 ìêì). Ïðè ýòîì 22.6% êëåòîê îò îáùåãî ÷èñëà ÊË èìåëè íàèìåíüøèé ðàçìåð è îêðóãëóþ ôîðìó áåç õàðàêòåðíûõ öèòîïëàçìàòè÷åñêèõ îòðîñòêîâ. 77.4% ÊË èìåëè îòðîñò÷àòóþ ôîðìó, îòðîñòêè áûëè íàïðàâëåíû ïðåèìóùåñòâåííî âåðòèêàëüíî, ÷àñòü èç íèõ óõîäèëà ãëóáîêî â äåðìó, êîíòàêòèðóÿ ñî ñòåíêîé ãåìîêàïèëëÿðîâ. Åäèíè÷íûå ëàòåðàëüíî íàïðàâëåííûå îòðîñòêè áûëè óêîðî÷åíû è íå àíàñòîìîçèðîâàëè äðóã ñ äðóãîì.  ýïèäåðìèñå ïàöèåíòîâ 1-é ãðóïïû 93.6% ÊË áûëè îòðîñò÷àòîé ôîðìû ñ ëàòåðàëüíûì (áîêîâûì) íàïðàâëåíèåì öèòîïëàçìàòè÷åñêèõ îòðîñòêîâ, êîíòàêòèðóþùèõ ìåæäó ñîáîé. Êîëè÷åñòâî îòðîñòêîâ, ïðèõîäÿùèõñÿ íà îäíó ÊË, â äàííîé ãðóïïå áûëî áîëüøèì, ÷åì ó áîëüíûõ 2-é ãðóïïû (òàáëèöà). Ó áîëüíûõ 3-é ãðóïïû ÷èñëåííàÿ ïëîòíîñòü ÊË â ýïèäåðìèñå óìåíüøèëàñü ïî ñðàâíåíèþ ñ âåëè÷èíîé òîãî æå ïîêàçàòåëÿ ó ïàöèåíòîâ 2-é ãðóïïû íà 24.7%, íî áûëà íà 15% áîëüøåé, ÷åì â 1-é ãðóïïå (òàáëèöà). Áîëüøàÿ ÷àñòü êëåòîê (90.5%) èìåëè îòðîñò÷àòóþ ôîðìó è ðàñïîëàãàëèñü â áàçàëüíîì, íèæíèõ è ñðåäíèõ ðÿäàõ øèïîâàòîãî ñëîåâ. Òàêèå ïàðàìåòðû, êàê ðàçìåðû ÊË è êîëè÷åñòâî èõ îòðîñòêîâ, ó áîëüíûõ 3-é ãðóïïû áûëè áëèçêè ê âåëè÷èíàì äàííûõ ïîêàçàòåëåé ó ïàöèåíòîâ 1-é ãðóïïû (òàáëèöà). Ó÷èòûâàÿ ïîëó÷åííûå äàííûå, ìîæíî ïðåäïîëîæèòü, ÷òî â êîæå áîëüíûõ ÀÄ ïðèñóòñòâóþò ÊË, íàõîäÿùèåñÿ â äâóõ ôóíêöèîíàëüíûõ ñîñòîÿíèÿõ, îáóñëîâëèâàþùèõ ðàçëè÷èÿ èõ ìîðôîëîãè÷åñêèõ ñâîéñòâ.  ñòàäèþ îáîñòðåíèÿ çàáîëåâàíèÿ ðåãèñòðèðîâàëè óâåëè÷åíèå êîëè÷åñòâà ÊË, ðàñïîëîæåííûõ â ïîâåðõíîñòíûõ ñëîÿõ ýïèäåðìèñà, êîòîðûõ îòëè÷àëè ìåíüøèå ðàçìåðû, îêðóãëàÿ ôîðìà, îòñóòñòâèå öèòîïëàçìàòè÷åñêèõ îòðîñòêîâ. Âåðîÿòíî, óâåëè÷åíèå êîëè÷åñòâà ÊË ïðè îáîñòðåíèè ÀÄ ñâÿçàíî ñ ðåêðóòèðîâàíèåì íîâûõ äåíäðèòíûõ êëåòîê èç êîñòíîìîçãîâûõ ïðåäøåñòâåííèêîâ [3,5,9]. Äëÿ ÊË äðóãîãî ôóíêöèîíàëüíîãî òèïà, èììóíîôåíîòèïèðîâàííûõ â êîæå çäîðîâûõ ïàöèåíòîâ è ó áîëüíûõ ÀÄ (â ñòàäèÿõ îáîñòðåíèÿ è ðåìèññèè), áûëà õàðàêòåðíà îòðîñò÷àòàÿ ôîðìà êëåòîê è íàëè÷èå öèòîïëàçìàòè÷åñêèõ îòðîñòêîâ, íàïðàâëåíèå êîòîðûõ ìåíÿëîñü â ñòàäèþ îáîñòðåíèÿ çàáîëåâàíèÿ ñ ëàòåðàëüíîãî íà âåðòèêàëüíîå. Ðåçóëüòàòû ìîðôîìåòðè÷åñêîãî èññëåäîâàíèÿ ýïèäåðìàëüíûõ ÊË â êîæå ÷åëîâåêà â îáëàñòè ëîêòåâîé ÿìêè (M±m) Ãðóïïà ×èñëåííàÿ ïëîòíîñòü ÊË â 1 ìì2 êîæè Ðàçìåðû ÊË, ìêì Êîëè÷åñòâî öèòîïëàçìàòè÷åñêèõ îòðîñòêîâ íà 1 ÊË 1-ÿ 300.58±3.50 21.20±0.26 2.600±0.045 2-ÿ 468.26±6.20* 17.34±0.20* 2.100±0.062* 3-ÿ 352.63±4.1*+ 20.58±0.18*+ 2.530±0.035+ Ïðèìå÷àíèå. p<0.05 ïî ñðàâíåíèþ *ñ 1-é ãðóïïîé, +ñî 2-é ãðóïïîé. 72 Áþëëåòåíü ýêñïåðèìåíòàëüíîé áèîëîãèè è ìåäèöèíû, 2008, ïðèëîæåíèå ¹ 1 Òàêèå êëåòêè áûëè ðàñïîëîæåíû ïðåèìóùåñòâåííî â áàçàëüíîì è øèïîâàòîì ñëîÿõ ýïèäåðìèñà. Ó÷èòûâàÿ, ÷òî íà âíåøíåé êëåòî÷íîé ìåìáðàíå öèòîïëàçìàòè÷åñêèõ îòðîñòêîâ ÊË ýêñïðåññèðóþòñÿ ìîëåêóëû II êëàññà ãëàâíîãî êîìïëåêñà ãèñòîñîâìåñòèìîñòè (HLA-DR) [3,10], òî äàííûé òèï ÊË, âîçìîæíî, âûïîëíÿåò ôóíêöèþ ïðåäñòàâëåíèÿ àíòèãåíîâ CD4+Ò-ëèìôîöèòàì [3]. Òàêèì îáðàçîì, â ëîêóñàõ ïîðàæåííîé êîæè áîëüíûõ â ñòàäèþ îáîñòðåíèÿ ÀÄ ïîâûøåíà ÷èñëåííàÿ ïëîòíîñòü ÊË, êëåòêè ñìåùåíû â ïîâåðõíîñòíûå ñëîè ýïèäåðìèñà, ïðè ýòîì ÊË íàõîäÿòñÿ â ðàçíûõ ôóíêöèîíàëüíûõ ñîñòîÿíèÿõ, ÷òî ñîïðÿæåíî ñ èçìåíåíèåì èììóíîôåíîòèïè÷åñêèõ ñâîéñòâ, òàêèõ êàê ðàçìåð, ôîðìà, íàëè÷èå öèòîïëàçìàòè÷åñêèõ îòðîñòêîâ è èõ íàïðàâëåíèå. ËÈÒÅÐÀÒÓÐÀ 1. Àâòàíäèëîâ Ã.Ã. Ìåäèöèíñêàÿ ìîðôîìåòðèÿ. Ì., 1990. 2. Êîçëîâà Í.Í., Ïðîêîïåíêî Â.Ä. // Èììóíîäåðìàòîëîãèÿ. 2006. ¹ 4. Ñ. 34-40. 3. Ìàêàðåíêîâà Â.Ï., Êîñò Í.Â., Ùóðèí Ì.Ð. // Èììóíîëîãèÿ. 2002. ¹ 2. Ñ. 68-76. 4. Mÿäåëåö Î.Ä., Ïîë÷àíèíîâà Â.Â., Ôåäîðåíêî È.È. // Ìîðôîëîãèÿ. 1999. ¹ 6. Ñ. 58-63. 5. Inaba K., Inaba M., Naito M., Steinman R.M. // J. Exp. Med. 1993. Vol. 178, N 2. P. 479-488. 6. Le Varlet B., Dezutter-Dambuyant C., Staquet M.J. et al. // J. Invest. Dermatol. 1991. Vol. 96, N 4. P. 518-522. 7. Le Varlet B., Staquet M.J., Dezutter-Dambuyant C. et al. // J. Leukoc. Biol. 1992. Vol. 51, N 4. P. 415-420. 8. Metzger H., Alcaraz G., Hohman R. åt al. // Annu. Rev. Immunol. 1986. N 4. P. 419-470. 9. Sallusto F., Cella M., Danielli C., Lanzavecchia A. // J. Exp. Med. 1995. Vol. 182, N 2. P. 389-400. 10. Trautmann A., Akids M., Kleemann D. et al. // J. Clin. Invest. 2000. Vol. 106, N 1. P. 25-35. 11. Valladeau J., Ravel O., Dezutter-Dambuyant C. et al. // Immunity. 2000. Vol. 12, N 1. P. 71-81. 12. Wollf K., Stingl G. // Triangle. 1987. Vol. 26, N 3-4. P. 139-153.