Набор реагентов для определения холинэстеразы с дибукаином

Набор
реагентов
для
холинэстеразы с дибукаином
КОД
определения
981382 10 х 10 мл
Назначение
Набор предназначен для определения in vitro
«дибукаинового числа» холинэстеразы путем
измерения
активности
холинэстеразы
с
ингибированием и без ингибирования дибукаином в
сыворотке или плазме крови человека с помощью
анализаторов Konelab. Все результаты анализов
следует интерпретировать с учетом клинических
данных.
Общие сведения (1,2)
В тканях человека присутствуют два типа фермента,
способных гидролизовать ацетилхолин. Один из них
–
ацетилхолинэстераза,
которую
называют
истинной холинэстеразой. Истинная холинэстераза
присутствует в эритроцитах, в легочной ткани,
селезенке, нервных окончаниях и в сером веществе
головного мозга. ХЭ гидролизует ацетилхолин,
выделяющийся
в
нервных
окончаниях
и
способствует прохождению нервного импульса
через синапс. Также в организме присутствует
ацилхолинацилгидролаза
(ПХЭпсевдохолинэстераза
=
сывороточная
холинэстераза). Этот фермент есть в печени,
поджелудочной железе, сердце, белом веществе
головного мозга и в сыворотке.
Увеличение
содержания
холинэстеразы
в
сыворотке может служить индикатором возможного
отравления инсектицидами, также применяется для
выявления носителей атипичных форм этого
фермента или в качестве теста функции печени.
Сукцинилхолин (сукциметоний), лекарственный
препарат, используемый в хирургии в качестве
миорелаксанта,
также
гидролизуется
холинэстеразой. Удобство использования этого
препарата для наркоза состоит в том, что его
фармакологический эффект длится ровно столько,
сколько требуется для проведения хирургической
операции, и окончание введения препарата ведет за
собой быстрый выход из наркоза. У лиц с низким
уровнем активности фермента ХЭ или с вариантами
фермента слабой активности фармакологический
эффект продлевается, эти лица могут войти в
состояние
длительного
апноэ,
требующего
механической вентиляции легких до прекращения
действия препарата.
Ген,
контролирующий
синтез
ПХЭ,
может
существовать в виде множества аллельных форм.
Четыре
наиболее
распространенных
формы
u
a
f
s
обозначаются в виде Е1 , Е1 , Е1 и Е1 . Существует
не менее 25 других форм. Нормальный наиболее
распространенный фенотип обозначается в виде
u
u
а
Е1 Е1 . Ген Е1 называется атипичным геном;
сыворотка у лиц, гомозиготных по этому гену,
обладает лишь слабой активностью по отношению к
f
большинству субстратов холинэстеразы. Ген Е1
вызывает появление слабоактивного фермента,
обладающего
повышенной
устойчивостью
к
ингибированию фторидами. Ген Е1s (молчащий)
также связан с отсутствием фермента или с
наличием белка с минимальной или отсутствующей
каталитической активностью.
В присутствие местного анестетика дибукаина
активность нормальной ПХЭ ингибируется в
большей степени по сравнению с атипичными
вариантами
ПХЭ.
Пациенты
могут
быть
распределены в по трем следующим группам,
основываясь на степени ингибирования:
- ингибирование > 70%: это лица, гомозиготные по
обоим генам, дающим нормальную ПХЭ.
- ингибирование 40 - 70%: эти лица гетерозиготны и
имеют один ген, дающий нормальную ПХЭ, и один
ген, дающий атипичную ПХЭ.
- ингибирование < 30%: это лица, гомозиготные по
обоим генам, дающим атипичную ПХЭ.
Методика определения (2,3,4)
В
этой
процедуре
в
качестве
субстрата
используется бензоилхолин.
Реагенты содержат дибукаин в качестве ингибитора
для различения «нормальной» и «атипичной» форм
холинэстеразы.
ХЭ
Бензоилхолин+Н2О
----->холин+бензойная к-та
холиноксидаза
холин + О2 -------------------------> бетаин + 2 Н2О2
пероксидаза
Н2О2 +фенол + 4-АФА --------------------> хинон
Образование хинона фиксируется при 510 нм.
Форма выпуска
Реагент А
10 х 10 мл
реагент В
10 х 10 мл
Состав (восстановленные реагенты):
Фосфатный буфер
100 ммоль/л
фенол
10 ммоль/л
бензоилхолин
1 ммоль/л
4-аминофеназон (4-АФА)
0,4 ммоль/л
холиноксидаза
1300 ед./л
пероксидаза
150 ед./л
дибукаин
0,35 ммоль/л
Меры предосторожности
Только для диагностики in vitro. При работе со
всеми лабораторными реагентами необходимо
соблюдать стандартные меры предосторожности.
Приготовление
Растворить реагент В в реагенте А. Перед
использованием дать отстояться не менее 30 минут.
Примечание: перед установкой реагента на борт
анализатора Konelab необходимо удостоверится в
отсутствии пузырьков во флаконе и на поверхности
реагента.
Хранение и стабильность
Невскрытые реагенты стабильны при температуре
2...8°C до срока годности, указанного на этикетке
флакона (коробки). Информация о стабильности
реагентов на борту анализатора Konelab указана в
руководстве по эксплуатации прибора.
1
Восстановленный реагент сохраняет стабильность в
течение 5 дней при 2...8 °C.
SV - объем образца в мл
6,89 - коэффициент экстинкции хинона при 510 нм
Р – длина оптич. пути
ОТБОР ПРОБ
Тип образца
Сыворотка или гепаринизированная плазма.
Не использовать пробирки, содержащие фториды,
так как они ингибируют холинэстеразу. (2)
Меры предосторожности
Исследовать, хранить и утилизировать образцы
сыворотки и плазмы крови человека следует как
потенциально инфекционно-опасные материалы.
Хранение (5)
Образцы можно хранить в течение 1 недели при
температуре 20-25 °C или при температуре 4-8 °C,
или в течение 12 месяцев при температуре -20 °C.
Коэффициент пересчета мккат/л = (МЕ/л)/60
Число дибукаина вычисляется по следующей
формуле:
число дибукаина = активность в присутствии
дибукаина/ активность в отсутствие дибукаина х 100
ОГРАНИЧЕНИЯ МЕТОДА
Данный анализ предназначен для определения
числа
дибукаина.
Количество
дибукаина,
ингибировавшего
активность
холинэстеразы
указывать не следует.
Интерференция
Критерий: попадание в пределы +/- 10% от
первоначального значения.
Связанный
билирубин:
интерференция
не
наблюдается до концентрации 800 мкмоль/л (47
мг/дл билирубина).
Гемолиз: интерференция не наблюдается до
концентрации гемоглобина 10 г/л в продукте
гемолиза.
Липемия: интерференция не обнаружена до
концентрации
11,3
ммоль/л
(1000
мг/л)
триглицеридов. Имеется слабая корреляция между
мутностью и содержанием триглицеридов.
ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА
См. справочное руководство и примечания к
применению для автоматизированной процедуры
вашего
анализатора
Konelab.
На
любое
применение, которое не было утверждено Thermo
Fisher Scientific, гарантия работы прибора не
распространяется, поэтому оно должно быть
проверено пользователем.
Материалы, входящие в набор
Реагенты в соответствии с приведенным выше
описанием.
Необходимые материалы, которые не входят в
набор
Средства контроля в соответствии с приведенным
ниже описанием.
Комплект анализа холинэстеразы (код: 981370) для
определения
активности
холинэстеразы
без
ингибирования дибукаином.
Калибровка
Величина абсорбции (dА/мин) преобразуется в
результат с помощью коэффициента пересчета
(фактора).
Или используйте калибратор eCal (981830) в
соответствии с инструкциями, вложенными в
упаковку.
Контроль качества
Используйте образцы для контроля качества не
реже одного раза в день и после каждой
калибровки, а также каждый раз, когда используется
новый флакон с реагентом.
Имеющиеся контрольные материалы:
Nortrol, код 981043
Abtrol, код 981044
Интервалы и диапазон для контроля должны
устанавливаться
согласно
индивидуальным
требованиям лабораторий. Результаты анализа
образцов
для
контроля
качества
должны
укладываться
в
пределы,
установленные
лабораторией.
ВЫЧИСЛЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
Результаты
вычисляются
автоматически
анализатором Konelab следующим образом:
активность в МЕ/л = dА/мин х фактор
Фактор = ТV х 1000 / 6,89 х SV х Р
где:
TV - общий объем реакционной смеси в мл
ГРАНИЦЫ НОРМ
При выполнении исследования с использованием
51 образца нормальной сыворотки человека были
получены следующие результаты:
Число дибукаина
Среднее
79
Мин.
71
Макс.
83
Ст. откл.
2,1
Для
гетерозиготных
или
гомозиготных
по
атипичному гену образцов ожидаются более низкие
значения числа дибукаина.
Указанные значения служат только в качестве
справочных величин. Рекомендуется, чтобы каждая
лаборатория проверила этот диапазон или
измерила соответствующий диапазон для группы
населения, которую она обслуживает.
ДИАПАЗОН ИЗМЕРЕНИЙ
75 - 3500 ед./л (1,3 - 58 мккат/л)
Расширенный
диапазон
измерений
вторичного разбавления:
75 - 10500 ед./л (1,3 - 175 мккат/л).
после
РАБОЧАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА
Предел обнаружения
37 ед./л (0,6 мккат/л)
Предел
обнаружения
представляет
собой
минимальную
концентрацию/активность
определяемого вещества, которую можно отличить
от нулевого сигнала. Она вычисляется в виде:
концентрация образца с нулевым содержанием
исследуемого вещества + 3 ст. откл. (внутри серии,
n = 24).
2