170 Áþëëåòåíü ýêñïåðèìåíòàëüíîé áèîëîãèè è ìåäèöèíû, 2009, ¹ 8, ïðèëîæåíèå ÈÇÓ×ÅÍÈÅ ÝÔÔÅÊÒΠÏÐÅÏÀÐÀÒÀ ÑÂÅÐÕÌÀËÛÕ ÄÎÇ ÀÍÒÈÒÅË Ê S-100  ÓÑËÎÂÈßÕ ÝÊÑÏÅÐÈÌÅÍÒÀËÜÍÎÉ ÌÎÄÅËÈ ÃÅÌÎÐÐÀÃÈ×ÅÑÊÎÃÎ ÈÍÑÓËÜÒÀ Ò.À.Âîðîíèíà, È.À.Õåéôåö, Þ.Ë.Äóãèíà, Ñ.À.Ñåðãååâà, Î.È.Ýïøòåéí ÎÎÎ ÍÏÔ Ìàòåðèà Ìåäèêà Õîëäèíã, Ìîñêâà Ñâåðõìàëûå äîçû àíòèòåë ê S-100 óâåëè÷èâàþò âûæèâàåìîñòü êðûñ, ñíèæàþò íåâðîëîãè÷åñêèé äåôèöèò, óñòðàíÿþò ìèîðåëàêñàöèþ, óëó÷øàþò êîîðäèíàöèþ äâèæåíèé è êîãíèòèâíûå ôóíêöèè ó êðûñ ñ ýêñïåðèìåíòàëüíûì ãåìîððàãè÷åñêèì èíñóëüòîì, íå óñòóïàÿ íèìîäèïèíó.  îòëè÷èå îò íèìîäèïèíà, ñâåðõìàëûå äîçû àíòèòåë ê S-100 îáëàäàþò âûðàæåííûìè àíêñèîëèòè÷åñêèìè ñâîéñòâàìè. Êëþ÷åâûå ñëîâà: ãåìîððàãè÷åñêèé èíñóëüò, íèìîäèïèí, àíòèòåëà ê áåëêó S-100, ñâåðõìàëûå äîçû Ãåìîððàãè÷åñêèé èíñóëüò (ÃÈ) íàèáîëåå òÿæåëûé è èíâàëèäèçèðóþùèé âèä èíñóëüòà, ñîñòàâëÿþùèé 10-15% îò îáùåãî ÷èñëà èíñóëüòîâ. Ëåòàëüíîñòü ïðè ÃÈ ñîñòàâëÿåò 25-80%, ïðè÷åì 35-50% ïàöèåíòîâ óìèðàþò â òå÷åíèå ïåðâûõ 30 ñóò ïîñëå öåðåáðàëüíîé ãåìîððàãèè (ïîëîâèíà â òå÷åíèå ïåðâûõ 2 ñóò) [3]. Ëå÷åíèå ÃÈ âêëþ÷àåò êîìïëåêñ ìåðîïðèÿòèé, íàïðàâëåííûõ, â ïåðâóþ î÷åðåäü, íà óäàëåíèå ãåìàòîìû è ïðåäîòâðàùåíèå ðàçâèòèÿ îòåêà ìîçãà â ïåðâûå ÷àñû ïîñëå èíñóëüòà.  äàëüíåéøåì îñíîâíîé öåëüþ ïðîâîäèìîé òåðàïèè ÿâëÿåòñÿ âîññòàíîâëåíèå íàðóøåííûõ ôóíêöèé ìîçãà (ñ ïîìîùüþ íåéðîïðîòåêòîðíûõ è íîîòðîïíûõ ïðåïàðàòîâ) è ïðåäîòâðàùåíèå âòîðè÷íîãî èíñóëüòà (ñ ïîìîùüþ àíãèîïðîòåêòîðîâ, áëîêàòîðîâ Ca2+-êàíàëîâ, àíòèàãðåãàíòíûõ ïðåïàðàòîâ è äð.) [7]. Ðàíåå ïîêàçàíî, ÷òî àíòèòåëà ê áåëêó S-100 â ñâåðõìàëûõ äîçàõ (ÑÌÄ àíòè-S100) îáëàäàþò íåéðîïðîòåêòîðíîé àêòèâíîñòüþ â óñëîâèÿõ èøåìè÷åñêîãî èíñóëüòà [4]. Öåëüþ íàñòîÿùåãî èññëåäîâàíèÿ ÿâèëîñü èçó÷åíèå ýôôåêòîâ ÑÌÄ àíòè-S100 â óñëîâèÿõ ýêñïåðèìåíòàëüíîé ìîäåëè ÃÈ. ÌÅÒÎÄÈÊÀ ÈÑÑËÅÄÎÂÀÍÈß ÃÈ ìîäåëèðîâàëè íà áåñïîðîäíûõ áåëûõ êðûñàõñàìöàõ ìàññîé 200-250 ã [2]. Ó êðûñ, íàðêîòèçèðîâàííûõ íåìáóòàëîì (40 ìã/êã âíóòðèìûøå÷íî), óäàëÿëè ìÿãêèå òêàíè è íàäêîñòíèöó â òåìåííî- öåíòðàëüíîé îáëàñòè ÷åðåïà.  ëåâîé ãåìèñôåðå ÷åðåïíîé êîñòè íà ðàññòîÿíèè 1.5-1.8 ìì íàçàä îò áðåãìû è 2.5-3.0 ìì â ñòîðîíó îò ñàãèòòàëüíîãî øâà ïðîñâåðëèâàëè îòâåðñòèå äèàìåòðîì 1 ìì.  ýòî îòâåðñòèå íà ãëóáèíó 4 ìì îïóñêàëè ìàíäðåí è îñóùåñòâëÿëè äåñòðóêöèþ ìîçãîâîé òêàíè â îáëàñòè âíóòðåííåé êàïñóëû ñ ïîñëåäóþùèì (÷åðåç 2-3 ìèí) ââåäåíèåì â ìåñòî ïîâðåæäåíèÿ êðîâè, âçÿòîé èç-ïîä ÿçûêà æèâîòíîãî (0.02-0.03 ìë). Ñîãëàñíî äàííûì ìîðôîëîãè÷åñêèõ èññëåäîâàíèé ïðè ýòîì áûë äîñòèãíóò ëîêàëüíûé èíñóëüò â îáëàñòè âíóòðåííåé êàïñóëû (äèàìåòð 2 ìì, ãëóáèíà 3 ìì) áåç ñóùåñòâåííûõ ïîâðåæäåíèé ñòðóêòóð ìîçãà, ðàñïîëîæåííûõ âûøå (â ÷àñòíîñòè, íåîêîðòåêñà). ÑÌÄ àíòè-S100 (2.5 ìë/êã), áëîêàòîð Ca2+-êàíàëîâ íèìîäèïèí (0.1 ìã/êã) èëè äèñòèëëèðîâàííóþ âîäó (2.5 ìë/êã) ââîäèëè âíóòðèæåëóäî÷íî â òå÷åíèå 14 ñóò. Ïåðâîå ââåäåíèå îñóùåñòâëÿëè ÷åðåç 4 ÷ ïîñëå ìîäåëèðîâàíèÿ ÃÈ.  êà÷åñòâå êîíòðîëÿ èñïîëüçîâàëè ëîæíîîïåðèðîâàííûõ æèâîòíûõ, êîòîðûì ïðîâîäèëè ñêàëüïèðîâàíèå êîæè â òåìåííî-öåíòðàëüíîé îáëàñòè ÷åðåïà è ïðîñâåðëèâàëè îòâåðñòèå, íå ðàçðóøàÿ ìîçãîâûõ ñòðóêòóð.  òå÷åíèå 14 ñóò ïîñëå îïåðàöèè îöåíèâàëè âûæèâàåìîñòü êðûñ; íà 1, 3, 7 è 14-å ñóòêè ïðîâîäèëè òåñòèðîâàíèå íåâðîëîãè÷åñêîãî è ýìîöèîíàëüíîãî ñòàòóñà, ìûøå÷íîãî òîíóñà, êîîðäèíàöèè äâèæåíèé, à òàêæå êîãíèòèâíûõ ôóíêöèé æèâîòíûõ. 171 Íåâðîëîãè÷åñêèé äåôèöèò îöåíèâàëè ïî øêàëå McGrow (â ìîäèôèêàöèè [1]). Ïîäñ÷èòûâàëè êîëè÷åñòâî êðûñ ñ ëåãêîé (0.5-2.5 áàëëà) è òÿæåëîé (3-10 áàëëîâ) íåâðîëîãè÷åñêîé ñèìïòîìàòèêîé. Êîîðäèíàöèþ äâèæåíèé ó êðûñ èçó÷àëè ñ ïîìîùüþ òåñòà âðàùàþùåãîñÿ ñòåðæíÿ [6,9]. Íåñïîñîáíîñòü æèâîòíûõ óäåðæèâàòü ðàâíîâåñèå â òå÷åíèå 2 ìèí íà ñòåðæíå äèàìåòðîì 4 ñì, âðàùàþùåìñÿ ñî ñêîðîñòüþ 3 îá/ìèí, ðàññìàòðèâàëè êàê ïðîÿâëåíèå íàðóøåíèÿ êîîðäèíàöèè äâèæåíèé. Äëÿ îïðåäåëåíèÿ íàðóøåíèé ìûøå÷íîãî òîíóñà áûë èñïîëüçîâàí òåñò ïîäòÿãèâàíèÿ íà ãîðèçîíòàëüíîé ïåðåêëàäèíå, íàòÿíóòîé íà âûñîòå 20-30 ñì îò ïîëà [5]. Êîãíèòèâíûå ôóíêöèè êðûñ îöåíèâàëè â òåñòå óñëîâíîãî ðåôëåêñà ïàññèâíîãî èçáåãàíèÿ (ÓÐÏÈ) [5,8]. Êðûñó ïîìåùàëè íà ÿðêî îñâåùåííóþ ïëàòôîðìó (25½7 ñì) õâîñòîì ê êâàäðàòíîìó îòâåðñòèþ (6½6 ñì), âåäóùåìó â êàìåðó ñ ýëåêòðîäíûì ïîëîì (40½40½40 ñì). Âñëåäñòâèå íîðêîâîãî ðåôëåêñà ïîñëå íàõîæäåíèÿ âõîäà â òåìíóþ êàìåðó êðûñà ïåðåõîäèëà â íåå è ïðîâîäèëà òàì áîëüøóþ ÷àñòü âðåìåíè. Ñ ìîìåíòà ïîìåùåíèÿ æèâîòíîãî â ýêñïåðèìåíòàëüíóþ êàìåðó â òå÷åíèå 180 ñ ðåãèñòðèðîâàëè ëàòåíòíûé ïåðèîä ïåðâîãî çàõîäà â çàòåìíåííîå îòäåëåíèå è ñóììàðíîå âðåìÿ ïðåáûâàíèÿ êðûñû â íåì. Ïî èñòå÷åíèè ýòîãî âðåìåíè â ìîìåíò, êîãäà êðûñà îêàçûâàëàñü â òåìíîé êàìåðå, îòâåðñòèå çàêðûâàëè è íàíîñèëè æèâîòíîìó íåèçáåãàåìîå ýëåêòðîáîëåâîå ðàçäðàæåíèå (10 óäàðîâ ñ ñèëîé òîêà 0.45 ìÀ, äëèòåëüíîñòüþ èìïóëüñà 1 ñ, èíòåðâàëîì ìåæäó èìïóëüñàìè 2 ñ). Óðîâåíü òðåâîæíîñòè êðûñ îöåíèâàëè â ïðèïîäíÿòîì êðåñòîîáðàçíîì ëàáèðèíòå (ÏÊË) [5,6,11] â òå÷åíèå 5 ìèí ïî êîëè÷åñòâó çàõîäîâ â îòêðûòûå ðóêàâà è âðåìåíè, ïðîâåäåííîìó â íèõ. Äîñòîâåðíîñòü ðàçëè÷èé ìåæäó ãðóïïàìè îïðåäåëÿëè ñ ïîìîùüþ t êðèòåðèÿ Ñòüþäåíòà. ÐÅÇÓËÜÒÀÒÛ ÈÑÑËÅÄÎÂÀÍÈß Ýêñïåðèìåíòàëüíûé ÃÈ ïðèâîäèë ê ãèáåëè 50% æèâîòíûõ ê 14-ì ñóòêàì ïîñëå îïåðàöèè. ÑÌÄ àíòè-S100 äîñòîâåðíî óâåëè÷èâàëè âûæèâàåìîñòü êðûñ (íà 20%, p<0.05) â îòëè÷èå îò íèìîäèïèíà, ÷üå âëèÿíèå íà âûæèâàåìîñòü êðûñ áûëî íåäîñòîâåðíûì. ÃÈ ïðèâîäèë ê âîçíèêíîâåíèþ íåâðîëîãè÷åñêèõ íàðóøåíèé ó 100% êðûñ, ìèîðåëàêñàöèè ó 50% è íàðóøåíèþ êîîðäèíàöèè äâèæåíèé ó 30% (òàáëèöà).  òå÷åíèå 14 ñóò òÿæåñòü íåâðîëîãè÷åñêîãî äåôèöèòà ïîñòåïåííî ñíèæàëàñü, îäíàêî ñèìïòîìû ëåãêèõ (âÿëîñòü äâèæåíèé, ñëàáîñòü êîíå÷íîñòåé) è òÿæåëûõ (ìàíåæíûå äâèæåíèÿ, ïàðåçû êîíå÷íîñòåé, ïàðàëè÷è) íàðóøåíèé Âëèÿíèå íèìîäèïèíà è ÑÌÄ àíòè-S100 íà íåâðîëîãè÷åñêèé ñòàòóñ, ìèîðåëàêñàöèþ è êîîðäèíàöèþ äâèæåíèé êðûñ ïîñëå ÃÈ (%) Ïîêàçàòåëü Òÿæåëûå íåâðîëîãè÷åñêèå íàðóøåíèÿ Ëåãêèå íåâðîëîãè÷åñêèå íàðóøåíèÿ Æèâîòíûå, íå ïîäòÿíóâøèåñÿ íà ãîðèçîíòàëüíîé ïåðåêëàäèíå Æèâîòíûå, íå óäåðæàâøèåñÿ íà âðàùàþùåìñÿ ñòåðæíå Ãðóïïà Äíè ïîñëå îïåðàöèè 1-é 3-é 7-é 14-é Êîíòðîëü 0 0 0 0 ÃÈ+äèñòèëëèðîâàííàÿ âîäà 44* 12 0 20 ÃÈ+íèìîäèïèí 20 24 14 0 ÃÈ+ÑÌÄ àíòè-S100 30 33 + 14 14 Êîíòðîëü 60 40 20 20 ÃÈ+äèñòèëëèðîâàííàÿ âîäà 100* 100* 86* 60* ÃÈ+íèìîäèïèí 50+ 50 43+ 43+ ÃÈ+ÑÌÄ àíòè-S100 60 66 50+ 43+ Êîíòðîëü 20 10 10 10 ÃÈ+äèñòèëëèðîâàííàÿ âîäà 30 50* 43* 50* ÃÈ+íèìîäèïèí 20 50* 71* 50* ÃÈ+ÑÌÄ àíòè-S100 10 10 24 25 10 + + Êîíòðîëü 10 0 10 ÃÈ+äèñòèëëèðîâàííàÿ âîäà 30 25 29 20 ÃÈ+íèìîäèïèí 20 25 43* 17 ÃÈ+ÑÌÄ àíòè-S100 9+ 18 12 12 Ïðèìå÷àíèå. p<0.05 ïî ñðàâíåíèþ ñ: *êîíòðîëåì, +ãðóïïîé ÃÈ+äèñòèëëèðîâàííàÿ âîäà. 172 Áþëëåòåíü ýêñïåðèìåíòàëüíîé áèîëîãèè è ìåäèöèíû, 2009, ¹ 8, ïðèëîæåíèå Ðèñ. 1. Âëèÿíèå íèìîäèïèíà è ÑÌÄ àíòè-S100 íà êîãíèòèâíûå ôóíêöèè êðûñ ïîñëå ÃÈ â òåñòå ÓÐÏÈ. Çäåñü è íà ðèñ. 2: 1 èíòàêòíûå; 2 êîíòðîëü; 3 ÃÈ+äèñòèëëèðîâàííàÿ âîäà; 4 ÃÈ+íèìîäèïèí; 5 ÃÈ+ÑÌÄ àíòè-S100. p<0.05 ïî ñðàâíåíèþ ñ: *êîíòðîëåì, +ãðóïïîé ÃÈ+ äèñòèëëèðîâàííàÿ âîäà. ñîõðàíÿëèñü ó 60% è 20% êðûñ ñîîòâåòñòâåííî. È íèìîäèïèí, è ÑÌÄ àíòè-S100 óìåíüøàëè íåâðîëîãè÷åñêèå ïðîÿâëåíèÿ ÃÈ âî âñå ñðîêè èññëåäîâàíèÿ (òàáëèöà). Íà 14-å ñóòêè ïîñëå ÃÈ íèìîäèïèí è ÑÌÄ àíòè-S100 ñíèæàëè êîëè÷åñòâî æèâîòíûõ ñ ëåãêèìè íàðóøåíèÿìè â 1.4 è 1.8 ðàçà (p<0.05) ñîîòâåòñòâåííî; íèìîäèïèí ïîëíîñòüþ óñòðàíÿë òÿæåëûå íàðóøåíèÿ, ÑÌÄ àíòèS100 ñíèæàëè èõ ÷àñòîòó â 1.5 ðàçà. Ïðè ýòîì, â îòëè÷èå îò íèìîäèïèíà, ÑÌÄ àíòè-S100 ñíèæàëè òàêæå êîëè÷åñòâî êðûñ ñ íàðóøåíèÿìè êîîðäèíàöèè äâèæåíèé è ìèîðåëàêñàöèåé â 1.7 è 2 ðàçà ñîîòâåòñòâåííî (p<0.05; òàáëèöà). ×åðåç 7 è 14 ñóò ïîñëå ÃÈ ó êðûñ çíà÷èòåëüíî (â 2 ðàçà; p<0.05) óõóäøèëîñü âîñïðîèçâåäåíèå ÓÐÏÈ, ÷òî ñâèäåòåëüñòâîâàëî î ðàçâèâøèõñÿ íàðóøåíèÿõ êîãíèòèâíûõ ôóíêöèé. È íèìîäèïèí, è ÑÌÄ àíòè-S100 ïîëíîñòüþ âîññòàíàâëèâàëè âîñïðîèçâåäåíèå ÓÐÏÈ íà 7-å ñóòêè, îäíàêî íà 14-å ñóòêè ýòîò ýôôåêò ñîõðàíÿëñÿ òîëüêî ó êðûñ, ïîëó÷àâøèõ ÑÌÄ àíòè-S100 (ðèñ. 1). Êðîìå íåéðîïðîòåêòîðíîãî äåéñòâèÿ ïðåïàðàò ÑÌÄ àíòè-S100 îáëàäàë àíêñèîëèòè÷åñêèì ýôôåêòîì: â òåñòå ÏÊË ïðåïàðàò íå òîëüêî óñòðàíÿë ïðîÿâëåíèÿ òðåâîæíîñòè æèâîòíûõ, âîçíèêøèå â ðåçóëüòàòå ÃÈ, íî è äîñòîâåðíî óâåëè÷èâàë âðåìÿ, ïðîâåäåííîå â îòêðûòûõ ðóêàâàõ, ïî ñðàâíåíèþ ñ èíòàêòíûìè æèâîòíûìè â 1.6 ðàçà (p<0.05; ðèñ. 2). Òàêèì îáðàçîì, ïðåïàðàò ÑÌÄ àíòè-S100 îáëàäàåò ñïîñîáíîñòüþ ïîâûøàòü âûæèâàåìîñòü è óñòðàíÿòü íåâðîëîãè÷åñêèå íàðóøåíèÿ, âîçíè- Ðèñ. 2. Âëèÿíèå íèìîäèïèíà è ÑÌÄ àíòè-S100 íà ïîâåäåíèå êðûñ ïîñëå ÃÈ â òåñòå ÏÊË. à âðåìÿ, ïðîâåäåííîå â îòêðûòûõ ðóêàâàõ; á âðåìÿ, ïðîâåäåííîå íà öåíòðàëüíîé ïëàòôîðìå. êàþùèå ó êðûñ ïîñëå ÃÈ. Ïðèíèìàÿ âî âíèìàíèå ïîëîæèòåëüíûå ðåçóëüòàòû, ïîëó÷åííûå ðàíåå ïðè èññëåäîâàíèè ïðîòèâîèøåìè÷åñêîãî äåéñòâèÿ ïðåïàðàòà íà ìîäåëè èøåìè÷åñêîãî èíñóëüòà [6], ïðåïàðàò ìîæíî ðàññìàòðèâàòü êàê ïîòåíöèàëüíîå ñðåäñòâî ëå÷åíèÿ êàê èøåìè÷åñêîãî èíñóëüòà, òàê è ÃÈ. ËÈÒÅÐÀÒÓÐÀ 1. Ãàííóøêèíà È.Â. // Æóðí. íåâðîë. è ïñèõèàòð. 1996. ¹ 1. Ñ. 14-18. 2. Ìàêàðåíêî À.Í., Êîñèöûí Í.Ñ., Ïàñèêîâà Í.Â. // Æóðí. âûñø. íåðâí. äåÿò. 2002. Ò. 52, ¹ 6. Ñ. 765-768. 3. Ïèðàäîâ Ì.À. // Íåðâíûå áîëåçíè. 2005. ¹ 1. Ñ. 17-19. 4. Ðîìàíîâà Ã.À., Âîðîíèíà Ò.À., Äóãèíà Þ.Ë. è äð. // Áþë. ýêñïåð. áèîë. 2005. Ò. 139, ¹ 4. Ñ. 395-399. 5. Ðóêîâîäñòâî ïî ýêñïåðèìåíòàëüíîìó (äîêëèíè÷åñêîìó) èçó÷åíèþ íîâûõ ôàðìàêîëîãè÷åñêèõ âåùåñòâ / Ïîä ðåä. Ð.Ó.Õàáðèåâà. Ì., 2005. 6. Ñåðåäåíèí Ñ.Á., Âîðîíèíà Ò.À., Íåçíàìîâ Ã.Ã., Æåðäåâ Â.Ï. Ôåíàçåïàì. 25 ëåò â ìåäèöèíñêîé ïðàêòèêå. Ì., 2007. Ñ. 9-132. 173 7. Ñêîðîõîäîâ À.Ï. // Ìåä. êàôåäðà. 2005. ¹ 3. Ñ. 144-150. 8. Ader R., Weijnen W., Moleman P. // Psychon. Sci. 1972. Vol. 26. P. 125-128. 9. Dunham N.W., Miya T.S. // J. Am. Pharm. Assoc. Am. Pharm. Assoc. (Baltim.). 1957. Vol. 46, N 3. P. 208-209. ·· B.W. // Front Biosci. 10. Heizmann C.W., Fritz G., Schafer 2002. N 7. P. d1356-d1368. 11. Ðellow S., File S.E. // Pharmacol. Biochem. Behav. 1986. Vol. 24, N 3. P. 525-529. 12. Rothermundt M., Arolt V., Wiesmann M. et al. // J. Affect. Disord. 2001. Vol. 66. N 1. P. 89-93.