254 Áþëëåòåíü ýêñïåðèìåíòàëüíîé áèîëîãèè è ìåäèöèíû, 2009, Òîì 148, ¹ 9 ÎÁÙÀß ÏÀÒÎËÎÃÈß È ÏÀÒÎËÎÃÈ×ÅÑÊÀß ÔÈÇÈÎËÎÃÈß ÑÎÊÐÀÒÈÒÅËÜÍÀß ÔÓÍÊÖÈß ÑÅÐÄÖÀ È ÑÎÑÒÎßÍÈÅ ÍÅÊÎÒÎÐÛÕ ÇÂÅÍÜÅ ËÈÏÈÄÍÎÃÎ ÌÅÒÀÁÎËÈÇÌÀ ÏÐÈ ÎÑÒÐÎÉ ÄÈÔÒÅÐÈÉÍÎÉ ÈÍÒÎÊÑÈÊÀÖÈÈ Ì.Ë.Áëàãîíðàâîâ, Å.À.Äåìóðîâ, Â.À.Ôðîëîâ, Ì.Â.Îíóôðèåâ Êàôåäðà îáùåé ïàòîëîãèè è ïàòîëîãè÷åñêîé ôèçèîëîãèè (çàâ. Â.À.Ôðîëîâ) ÐÓÄÍ, Ìîñêâà Ó êðîëèêîâ ìîäåëèðîâàëè îñòðóþ äèôòåðèéíóþ èíòîêñèêàöèþ îäíîêðàòíûì âíóòðèâåííûì ââåäåíèåì íàòèâíîãî äèôòåðèéíîãî òîêñèíà (0.3 ìèíèìàëüíîé ëåòàëüíîé äîçû íà 1 êã ìàññû). ×åðåç 1, 3 è 5 ñóò îò íà÷àëà ïðîöåññà îöåíèâàëè ñîêðàòèòåëüíóþ ôóíêöèþ ëåâîãî è ïðàâîãî æåëóäî÷êîâ (ïèêîâîå ñèñòîëè÷åñêîå äàâëåíèå â óñëîâèÿõ ðåàëüíîé ãåìîäèíàìèêè, à òàêæå ïðè 5-ñåêóíäíîé îêêëþçèè àîðòû è ëåãî÷íîãî ñòâîëà ñîîòâåòñòâåííî) è èíòåíñèâíîñòü ÏÎË ìåòîäîì îïðåäåëåíèÿ ñîäåðæàíèÿ â ìèîêàðäå ëåâîãî æåëóäî÷êà ÒÁÊ-ðåàêòèâíûõ ïðîäóêòîâ.  ïðîöåññå èíòîêñèêàöèè ïðîèñõîäèëî óõóäøåíèå ñîêðàòèòåëüíîé ôóíêöèè îáîèõ æåëóäî÷êîâ ñåðäöà. Ñîäåðæàíèå ÒÁÊ-ðåàêòèâíûõ ïðîäóêòîâ â ìèîêàðäå ëåâîãî æåëóäî÷êà äîñòîâåðíî óìåíüøàëîñü íà 1-å ñóòêè, à íà ïîñëåäóþùèõ ñðîêàõ íîðìàëèçîâàëîñü. Òàêèì îáðàçîì, ñíèæåíèå ñîêðàòèòåëüíîé ôóíêöèè ëåâîãî æåëóäî÷êà íà ðàííèõ ñòàäèÿõ äèôòåðèéíîé èíòîêñèêàöèè, ïî-âèäèìîìó, íå îïîñðåäóåòñÿ àêòèâàöèåé ñâîáîäíîðàäèêàëüíîãî îêèñëåíèÿ ëèïèäîâ â êàðäèîìèîöèòàõ. Êëþ÷åâûå ñëîâà: äèôòåðèéíàÿ èíòîêñèêàöèÿ, ìèîêàðä, ëåâûé æåëóäî÷åê, ïåðåêèñíîå îêèñëåíèå  íàñòîÿùåå âðåìÿ â ñâÿçè ñ øèðîêèì èñïîëüçîâàíèåì âàêöèíû ÀÊÄÑ òàêîå îïàñíîå äëÿ æèçíè èíôåêöèîííîå çàáîëåâàíèå, êàê äèôòåðèÿ âñòðå÷àåòñÿ êðàéíå ðåäêî. Îäíàêî â 1990-õ ãã. âîçíèêëà ýïèäåìèÿ äèôòåðèè â ñòðàíàõ áûâøåãî Ñîâåòñêîãî Ñîþçà. Òàê, ñ 1990 ïî 1999 ãã. íà äàííîé òåððèòîðèè áûëî çàðåãèñòðèðîâàíî 158 000 ñëó÷àåâ äèôòåðèè, ñðåäè êîòîðûõ 4000 çàêîí÷èëèñü ëåòàëüíûì èñõîäîì [3]. Ñàìûì îïàñíûì îñëîæíåíèåì äèôòåðèè ÿâëÿåòñÿ ðàçâèòèå äèôòåðèéíîãî ìèîêàðäèòà, ÿâëÿþùåãîñÿ îäíîé èç ãëàâíûõ ïðè÷èí ñìåðòè ïðè ýòîé èíôåêöèè. Èìåííî ñèíäðîì äèôòåðèéíîãî ñåðäöà, à íå ïîñòäèôòåðèéíûå ïàðàëè÷è ñëåäóåò ðàññìàòðèâàòü êàê ñåðüåçíóþ ïðè÷èíó ëåòàëüíîãî èñõîäà [2]. Èçâåñòíî, ÷òî òîêñèí Corynebacterium diphtheriae ïðåäñòàâëÿåò ñîáîé áåëêîâóþ ÷àñòü öèòîõðîìà B äèôòåðèéíûõ áàêòåðèé è êîíêóðåíòíî ïîäàâëÿåò â êëåòêàõ ïîðàæåííîãî îðãàíèçìà áèîÀäðåñ äëÿ êîððåñïîíäåíöèè: blagonravovm@mail.ru. Áëàãîíðàâîâ Ì.Ë. ñèíòåç àíàëîãè÷íîãî ôåðìåíòà äûõàòåëüíîé öåïè ìèòîõîíäðèé [5], ÷òî ñîïðîâîæäàåòñÿ èíãèáèðîâàíèåì òêàíåâîãî äûõàíèÿ è ïîäàâëåíèåì ñèíòåçà áåëêîâ [4]. Óæå íà ñàìûõ ðàííèõ ñòàäèÿõ äèôòåðèéíîãî ìèîêàðäèòà (â ïðåäåëàõ 1-3 ñóò îò íà÷àëà ïàòîëîãè÷åñêîãî ïðîöåññà) íà÷èíàþò ðàçâèâàòüñÿ ãðóáûå íàðóøåíèÿ îáìåíà ëèïèäîâ, çàêëþ÷àþùèåñÿ ãëàâíûì îáðàçîì â ðåçêîì óâåëè÷åíèè âûñâîáîæäåíèÿ ôîñôîëèïèäîâ èç ðàçðóøàþùèõñÿ ìåìáðàí ìèòîõîíäðèé è ôîðìèðîâàíèè â ìèîêàðäå èç ýòèõ ôîñôîëèïèäîâ ìàññèâíûõ âíóòðèêëåòî÷íûõ ëèïèäíûõ âêëþ÷åíèé [2]. Õîòÿ ìåõàíèçì äåéñòâèÿ äèôòåðèéíîãî ýêçîòîêñèíà õîðîøî èçó÷åí, ìíîãèå ñòîðîíû ïàòîãåíåçà äèôòåðèéíîãî ìèîêàðäèòà è, â ÷àñòíîñòè, âçàèìîñâÿçü íàðóøåíèÿ ñîêðàòèòåëüíîé ôóíêöèè ìèîêàðäà ñ íåêîòîðûìè çâåíüÿìè ìåòàáîëèçìà ëèïèäîâ, íàïðèìåð, òàêèìè, êàê ëèïèäíàÿ ïåðîêñèäàöèÿ â ìèîêàðäå, äî ñèõ ïîð íå ÿñíû. Öåëü äàííîé ðàáîòû èçó÷èòü íà ðàííèõ ñòàäèÿõ ðàçâèòèÿ äèôòåðèéíîé èíòîêñèêàöèè äèíàìèêó ñîêðàòèòåëüíîé ôóíêöèè ïðàâîãî (ÏÆ) 255 ÎÁÙÀß ÏÀÒÎËÎÃÈß È ÏÀÒÎËÎÃÈ×ÅÑÊÀß ÔÈÇÈÎËÎÃÈß è ëåâîãî æåëóäî÷êîâ (ËÆ) ñåðäöà è åå âçàèìîñâÿçü ñî ñòåïåíüþ ðàçâèòèÿ îêèñëèòåëüíîãî ñòðåññà â ñåðäå÷íîé ìûøöå. ÌÅÒÎÄÈÊÀ ÈÑÑËÅÄÎÂÀÍÈß Â ýêñïåðèìåíòå èñïîëüçîâàëè 20 êðîëèêîâ-ñàìöîâ ïîðîäû øèíøèëëà ìàññîé 3.0-3.5 êã, êîòîðûå áûëè ðàçäåëåíû íà 4 ãðóïïû ïî 5 æèâîòíûõ: 1-ÿ ãðóïïà êîíòðîëü (èíòàêòíûå æèâîòíûå), 2-ÿ, 3-ÿ, 4-ÿ ãðóïïû êðîëèêè ñ äèôòåðèéíîé èíòîêñèêàöèåé ñðîêîì 1, 3 è 5 ñóò ñîîòâåòñòâåííî. Äèôòåðèéíóþ èíòîêñèêàöèþ ìîäåëèðîâàëè îäíîêðàòíûì âíóòðèâåííûì ââåäåíèåì íàòèâíîãî äèôòåðèéíîãî òîêñèíà èç ðàñ÷åòà 0.3 ìèíèìàëüíîé ëåòàëüíîé äîçû (ÌËÄ) íà 1 êã ìàññû æèâîòíîãî. Ïðåäâàðèòåëüíîå òèòðîâàíèå äèôòåðèéíîãî òîêñèíà ïðîâîäèëè íà ìîðñêèõ ñâèíêàõ: çà 1 ÌËÄ ïðèíèìàëè òàêîå åãî êîëè÷åñòâî, êîòîðîå ïðè îäíîêðàòíîì âíóòðèáðþøèííîì ââåäåíèè âûçûâàëî â ïåðâûå 3 ñóò ãèáåëü áîëåå 50% æèâîòíûõ ïðè êðîâîèçëèÿíèÿõ â íàäïî÷å÷íèê. Íà 1-å, 3-è è 5-å ñóòêè ðåãèñòðèðîâàëè äàâëåíèå â ïîëîñòÿõ ñåðäöà íà àïïàðàòíî-ïðîãðàììíîì êîìïëåêñå ÌÈÊÀÐÄ, ïðåäñòàâëÿþùåì ñîáîé ñîâìåùåííûé ñ ïåðñîíàëüíûì êîìïüþòåðîì àíàëîãîâî-öèôðîâîé ïðåîáðàçîâàòåëü ñ ýëåêòðîìàíîìåòðè÷åñêèìè äàò÷èêàìè. Äëÿ ýòîãî ó êðîëèêîâ ïîä îáùèì íàðêîçîì (2% ðàñòâîð ðîìåòàðà) âñêðûâàëè ãðóäíóþ êëåòêó, ïîñëå ÷åãî ÷åðåç ñòåíêó æåëóäî÷êîâ ââîäèëè â èõ ïîëîñòè êàòåòåðû, ñîåäèíåííûå ñ ýëåêòðîìàíîìåòðè÷åñêèìè äàò÷èêàìè, è çàïèñûâàëè êðèâûå ðåàëüíîãî (ïèêîâîãî ñèñòîëè÷åñêîãî) âíóòðèæåëóäî÷êîâîãî äàâëåíèÿ ËÆ è ÏÆ (ÂÄðËÆ è ÂÄðÏÆ ñîîòâåòñòâåííî). Äëÿ îöåíêè ïîòåíöèàëüíîé ðàáîòîñïîñîáíîñòè ìèîêàðäà ðåãèñòðèðîâàëè ìàêñèìàëüíî ðàçâèâàåìîå âíóòðèæåëóäî÷êîâîå äàâëåíèå ËÆ è ÏÆ (ÂÄìËÆ è ÂÄìÏÆ) âî âðåìÿ 5-ñåêóíäíîé îêêëþçèè âîñõîäÿùåé àîðòû (äëÿ ËÆ) è ëåãî÷íîãî ñòâîëà (äëÿ ÏÆ) [1]. Âñå êðèâûå îáðàáàòûâàëè ñ ïîìîùüþ ñïåöèàëüíîé ïðîãðàììû. Òêàíü ìèîêàðäà ËÆ ãîìîãåíèçèðîâàëè â ãîìîãåíèçàòîðå Ïîòòåðà (1500 îá/ìèí) â òå÷åíèå 3 ìèí â 2 îáúåìàõ áóôåðà (20 ìÌ HEPES pH 7.4). Äëÿ îïðåäåëåíèÿ ñîäåðæàíèÿ ÒÁÊ-ðåàêòèâíûõ ïðîäóêòîâ îäíó ÷àñòü ãîìîãåíàòà ðàçáàâëÿëè â ñîîòíîøåíèè 1:2 áóôåðîì 20 ìÌ HEPES pH 7.4, îñòàâøèéñÿ ãîìîãåíàò öåíòðèôóãèðîâàëè â òå÷åíèå 10 ìèí (1500g ïðè 4îÑ) äëÿ ïîëó÷åíèÿ ñóïåðíàòàíòà. Ñîäåðæàíèå ÒÁÊ-ðåàêòèâíûõ ïðîäóêòîâ îïðåäåëÿëè ïî ìåòîäó [6]. Äëÿ ýòîãî ê 50 ìêë ãîìîãåíàòà èëè ñóïåðíàòàíòà (êîíå÷íàÿ êîíöåíòðàöèÿ áåëêà 1 ìã/ìë) èëè ãîìîãåíèçàöèîííîãî áóôåðà (õîëîñòàÿ ïðîáà) äîáàâëÿëè 50 ìêë 8.1% ðàñòâîðà äîäåöèëñóëüôàòà íàòðèÿ, 0.375 ìë 30% ÑÍ3ÑÎÎÍ ðÍ 3.0-3.5 è 0.375 ìë 0.8% ðàñòâîðà ÒÁÊ, èíêóáèðîâàëè ïðè 96-100îÑ íà âîäÿíîé áàíå â òå÷åíèå 60 ìèí äî ïîÿâëåíèÿ æåëòî-ðîçîâîãî îêðàøèâàíèÿ. Çàòåì ïðîáèðêè îõëàæäàëè è óáèðàëè äåíàòóðèðîâàííûå áåëêè 10-ìèíóòíûì öåíòðèôóãèðîâàíèåì ïðè 1500g. Ñïåêòðîôîòîìåòðè÷åñêóþ îöåíêó íàäîñàäî÷íîé æèäêîñòè ïðîâîäèëè íà ñïåêòðîôîòîìåòðå Ultrospec II (LKB) ïðè äëèíàõ âîëí 535 íì è 560 íì ïðîòèâ õîëîñòîé ïðîáû. ÐÅÇÓËÜÒÀÒÛ ÈÑÑËÅÄÎÂÀÍÈß Â ïðîöåññå ðàçâèòèÿ äèôòåðèéíîé èíòîêñèêàöèè, ñóäÿ ïî âåëè÷èíå äàâëåíèÿ, èçìåðÿâøåãîñÿ â ËÆ è ÏÆ â óñëîâèÿõ ðåàëüíîé ãåìîäèíàìèêè è ïðè ïîëíîì ïåðåæàòèè âîñõîäÿùåé àîðòû è ëåãî÷íîãî ñòâîëà, ðàçâèâàëîñü âûðàæåííîå ñíèæåíèå ñîêðàòèòåëüíîé ôóíêöèè ñåðäöà, ðàñïðîñòðàíÿâøååñÿ êàê íà ËÆ, òàê è íà ÏÆ (òàáë. 1). Òàê, â 1-å ñóòêè íàáëþäåíèÿ îòìå÷àëîñü äîñòîâåðíîå ñíèæåíèå ÂÄðËÆ è ÂÄìËÆ íà 20 è 23% ñîîòâåòñòâåííî. Íà 3-è ñóòêè äèôòåðèéíîé èíòîêñèêàöèè ÂÄìËÆ äîñòèãàëî ìàêñèìàëüíî íèçêîãî óðîâíÿ (ñíèæåíèå ïî ñðàâíåíèþ ñ êîíòðîëåì íà 37%) è îñòàâàëîñü ñíèæåííûì íà 5-å ñóòêè ýêñïåðèìåíòà. Ñõîäíàÿ äèíàìèêà îòìå÷àëàñü è äëÿ ÂÄðÏÆ è ÂÄìÏÆ, çà èñêëþ÷åíèåì òîãî, ÷òî íà 5-å ñóòêè íàáëþäåíèÿ ýòè ïîêàçàòåëè âîçâðàùàëèñü ê èñõîäíûì çíà÷åíèÿì. Èçìåíåíèÿ ïàðàìåòðîâ ñèñòåìíîé ãåìîäèíàìèêè ñâèäåòåëüñòâóþò î ãëóáîêîì íàðóøåíèè ñîêðàòèòåëüíîé ôóíêöèè ñåðäöà â ïðîöåññå ðàçâèòèÿ îñòðîé äèôòåðèéíîé èíòîêñèêàöèè. Íà ôîíå ïîäîáíîé äåïðåññèè ãåìîäèíàìè÷åñêîé ôóíêöèè ñåðäå÷íîé ìûøöû åñòåñòâåííî áûëî áû îæèäàòü âîçðàñòàíèÿ ñîäåðæàíèÿ ÒÁÊ-ðåàêòèâíûõ ïðîäóêòîâ â ìèîêàðäå, îòðàæàþùåãî îïðåäåëåííóþ àêòèâàöèþ ïðîöåññîâ ëèïèäíîé ïåðîêñèäàöèè, ñîïðîâîæäàþùèõ ïàòîãåííîå äåéñòâèå íà ìèîêàðä äèôòåðèéíîãî òîêñèíà. Îäíàêî ïîäîáíîãî èçìåíåíèÿ â íàøèõ ýêñïåðèìåíòàõ âûÿâèòü íå óäàëîñü (òàáë. 2). Íàïðîòèâ, ÷åðåç 24 ÷ îò íà÷àëà äèôòåðèéíîé èíòîêñèêàöèè ïðîèñõîäèëî äîñòîâåðíîå ñíèæåíèå ñîäåðæàíèÿ ÒÁÊðåàêòèâíûõ ïðîäóêòîâ â ñóïåðíàòàíòå, êîòîðîå âîññòàíàâëèâàëîñü ê 3-ì ñóòêàì ýêñïåðèìåíòà. Ïðè ýòîì â ãîìîãåíàòå îïðåäåëÿåòñÿ âûðàæåííàÿ òåíäåíöèÿ ê ñíèæåíèþ ýòîãî ïîêàçàòåëÿ òàêæå íà 1-å ñóòêè, íî îòëè÷èå íå ÿâëÿåòñÿ ñòàòèñòè÷åñêè äîñòîâåðíûì.  ïîñëåäóþùèå ñðîêè ñîäåðæàíèå ÒÁÊ-ðåàêòèâíûõ ïðîäóêòîâ âîçâðàùàåòñÿ ê íîðìàëüíîìó çíà÷åíèþ. Äàííûå íàáëþäåíèÿ 256 Áþëëåòåíü ýêñïåðèìåíòàëüíîé áèîëîãèè è ìåäèöèíû, 2009, Òîì 148, ¹ 9 Òàáëèöà 1. Ñîêðàòèòåëüíàÿ ñïîñîáíîñòü ìèîêàðäà ËÆ è ÏÆ ñåðäöà â äèíàìèêå äèôòåðèéíîé èíòîêñèêàöèè (M±m) Ïîêàçàòåëü Êîíòðîëü Èíòîêñèêàöèÿ 1-å ñóòêè 3-è ñóòêè 5-å ñóòêè ÂÄðËÆ, ìì ðò. ñò. 139.6±1.3 113.7±1.5* 114.2±1.7* 123.4±2.1* ÂÄìËÆ, ìì ðò. ñò. 231.4±6.5 178.3±4.7* 146.3±3.2* 187.3±4.4* ÂÄðÏÆ, ìì ðò. ñò. 36.4±1.2 28.7±0.7* 29.7±0.8* 33.9±1.0 ÂÄìÏÆ, ìì ðò. ñò. 53.5±1.8 41.9±1.3* 35.4±1.0* 51.4±2.2 Ïðèìå÷àíèå. Çäåñü è â òàáë. 2: *p≤0.05 ïî ñðàâíåíèþ ñ êîíòðîëåì. Òàáëèöà 2. Ñîäåðæàíèå ÒÁÊ-ðåàêòèâíûõ ïðîäóêòîâ â ìèîêàðäå ËÆ è ÏÆ ñåðäöà â äèíàìèêå äèôòåðèéíîé èíòîêñèêàöèè (M±m) Ïîêàçàòåëü Êîíòðîëü Èíòîêñèêàöèÿ 1-å ñóòêè 3-è ñóòêè 5-å ñóòêè Ãîìîãåíàò (îïò. ïë/ã òêàíè) 58.3±3.4 49.68±3.31 63.82±4.95 56.76±5.40 Ñóïåðíàòàíò (îïò. ïë/ìã áåëêà) 2.44±0.11 1.8±0.2* 2.76±0.28 2.62±0.33 ïîçâîëÿþò ïðåäïîëîæèòü, ÷òî íàèáîëåå àêòèâíî ïðîöåññû ÏÎË ïðè äèôòåðèéíîé èíòîêñèêàöèè ðàçâèâàþòñÿ â òå÷åíèå 1-õ ñóòîê, ÷òî ïðèâîäèò, ïî-âèäèìîìó, ê ðåçêîìó óìåíüøåíèþ ñîäåðæàíèÿ â òêàíè ìèîêàðäà ñóáñòðàòîâ ÏÎË è, êàê ñëåäñòâèå, ñíèæåíèþ èíòåíñèâíîñòè ñâîáîäíîðàäèêàëüíîãî îêèñëåíèÿ ê èñõîäó 1-õ ñóòîê. Îäíàêî â äàëüíåéøåì, íåñìîòðÿ íà ïðîäîëæàþùóþñÿ èíòîêñèêàöèþ è âûçâàííîå åþ ñíèæåíèå ñîêðàòèòåëüíîé ôóíêöèè ìèîêàðäà, ïðîèñõîäèò âîññòàíîâëåíèå íîðìàëüíîé èíòåíñèâíîñòè ïåðåêèñíîãî îêèñëåíèÿ. Òàêèì îáðàçîì, ìîæíî ïðåäïîëîæèòü, ÷òî ñíèæåíèå ñîêðàòèòåëüíîé ôóíêöèè ìèîêàðäà íà ðàííèõ ñòàäèÿõ äèôòåðèéíîé èíòîêñèêàöèè íå îïîñðåäóåòñÿ àêòèâàöèåé ñâîáîäíîðàäèêàëüíîãî îêèñëåíèÿ ëèïèäîâ êàðäèîìèîöèòîâ. ËÈÒÅÐÀÒÓÐÀ 1. Ìååðñîí Ô.Ç. Ìèîêàðä ïðè ãèïåðôóíêöèè, ãèïåðòðîôèè è íåäîñòàòî÷íîñòè ñåðäöà. Ì., 1965. 2. Ôðîëîâ Â.À., Äàëèí Ì.Â. Äèôòåðèéíîå ñåðäöå. Ì., 1996. 3. Ýìèðîãëó Í. // Êëèí. ìèêðîáèîë. è àíòèìèêðîá. õèìèîòåð. 2001. Ò. 3, ¹ 3. Ñ. 274-279. 4. Holmes R.K. // J. Infect. Dis. 2000. Vol. 181, Suppl. 1. P. S156-S167. 5. Kato M. // Jpn. J. Med. Sci. Biol. 1972. Vol. 25, N 3. P. 230-235. 6. Ohkawa H., Ohishi N., Yagi K. // Analyt. Biochem. 1979. Vol. 95, N 2. P. 351-358. Ïîëó÷åíî 27.05.09