ÃÎÑÒ 10444.1594 Ì Å Æ Ã Î Ñ Ó Ä À Ð Ñ Ò Â Å Í Í Û É Ñ Ò À Í Ä À Ð Ò ÏÐÎÄÓÊÒÛ ÏÈÙÅÂÛÅ ÌÅÒÎÄÛ ÎÏÐÅÄÅËÅÍÈß ÊÎËÈ×ÅÑÒÂÀ ÌÅÇÎÔÈËÜÍÛÕ ÀÝÐÎÁÍÛÕ È ÔÀÊÓËÜÒÀÒÈÂÍÎ-ÀÍÀÝÐÎÁÍÛÕ ÌÈÊÐÎÎÐÃÀÍÈÇÌΠÌÅÆÃÎÑÓÄÀÐÑÒÂÅÍÍÛÉ ÑÎÂÅÒ ÏÎ ÑÒÀÍÄÀÐÒÈÇÀÖÈÈ, ÌÅÒÐÎËÎÃÈÈ È ÑÅÐÒÈÔÈÊÀÖÈÈ Ìèíñê ÃÎÑÒ 10444.1594 Ïðåäèñëîâèå 1. ÐÀÇÐÀÁÎÒÀÍ Âñåðîññèéñêèì íàó÷íî-èññëåäîâàòåëüñêèì èíñòèòóòîì êîíñåðâíîé è îâîùåñóøèëüíîé ïðîìûøëåííîñòè (ÂÍÈÈÊÎÏ) è Òåõíè÷åñêèì êîìèòåòîì ïî ñòàíäàðòèçàöèè ÒÊ 93 «Ïðîäóêòû ïåðåðàáîòêè ïëîäîâ è îâîùåé» ÂÍÅÑÅÍ Ãîññòàíäàðòîì Ðîññèè 2 ÏÐÈÍßÒ Ìåæãîñóäàðñòâåííûì Ñîâåòîì ïî ñòàíäàðòèçàöèè, ìåòðîëîãèè è ñåðòèôèêàöèè (ïðîòîêîë ¹ 6 îò 21 îêòÿáðÿ 1994 ã.) Çà ïðèíÿòèå ïðîãîëîñîâàëè: Íàèìåíîâàíèå ãîñóäàðñòâà Àçåðáàéäæàíñêàÿ Ðåñïóáëèêà Ðåñïóáëèêà Áåëîðóññèÿ Ðåñïóáëèêà Àðìåíèÿ Ãðóçèÿ Ðåñïóáëèêà Êàçàõñòàí Êèðãèçñêàÿ Ðåñïóáëèêà Ðîññèéñêàÿ Ôåäåðàöèÿ Ðåñïóáëèêà Óçáåêèñòàí Ðåñïóáëèêà Ìîëäîâà Óêðàèíà Íàèìåíîâàíèå íàöèîíàëüíîãî îðãàíà ïî ñòàíäàðòèçàöèè Àçãîññòàíäàðò Ãîññòàíäàðò Áåëîðóññèè Àðìãîññòàíäàðò Ãðóçñòàíäàðò Ãîññòàíäàðò Ðåñïóáëèêè Êàçàõñòàí Êèðãèçñòàíäàðò Ãîññòàíäàðò Ðîññèè Óçãîññòàíäàðò Ìîëäîâàñòàíäàðò Ãîññòàíäàðò Óêðàèíû 3 Ïîñòàíîâëåíèåì Êîìèòåòà Ðîññèéñêîé Ôåäåðàöèè ïî ñòàíäàðòèçàöèè, ìåòðîëîãèè è ñåðòèôèêàöèè 21 ôåâðàëÿ 1995 ã. ¹ 77 ìåæãîñóäàðñòâåííûé ñòàíäàðò ÃÎÑÒ 10444.1594 ââåäåí â äåéñòâèå íåïîñðåäñòâåííî â êà÷åñòâå ãîñóäàðñòâåííîãî ñòàíäàðòà Ðîññèéñêîé Ôåäåðàöèè ñ 1 ÿíâàðÿ 1996 ã. 4 ÂÇÀÌÅÍ ÃÎÑÒ 10444.1575 5. ÏÅÐÅÈÇÄÀÍÈÅ II ÃÎÑÒ 10444.1594 ÑÎÄÅÐÆÀÍÈÅ 1 Îáëàñòü ïðèìåíåíèÿ . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2 Íîðìàòèâíûå ññûëêè . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3 Ñóùíîñòü ìåòîäîâ . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4 Îòáîð è ïîäãîòîâêà ïðîá . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 5 Àïïàðàòóðà, ìàòåðèàëû, ðåàêòèâû è ïèòàòåëüíûå ñðåäû . . . . . . . . . . . . . . . . 6 Ïðîâåäåíèå èñïûòàíèé . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 7 Îáðàáîòêà ðåçóëüòàòîâ . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . III 106 . . . . . . . . . . . . . .. . . .. . . . . . . .. . . . . . . . .. . .. . . . . . . .. . . . . . . . . . .. . . . . . . .. . . . . . . . .. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 1 1 2 2 2 3 ÃÎÑÒ 10444.1594 Ì Å Æ Ã Î Ñ Ó Ä À Ð Ñ Ò Â Å Í Í Û É Ñ Ò À Í Ä À Ð Ò ÏÐÎÄÓÊÒÛ ÏÈÙÅÂÛÅ Ìåòîäû îïðåäåëåíèÿ êîëè÷åñòâà ìåçîôèëüíûõ àýðîáíûõ è ôàêóëüòàòèâíî-àíàýðîáíûõ ìèêðîîðãàíèçìîâ Food products. Methods for determination of quantity of mesophilic aerobes and facultative anaerobes Äàòà ââåäåíèÿ 19960101 1 ÎÁËÀÑÒÜ ÏÐÈÌÅÍÅÍÈß Íàñòîÿùèé ñòàíäàðò ðàñïðîñòðàíÿåòñÿ íà ïèùåâûå ïðîäóêòû è óñòàíàâëèâàåò ìåòîäû îïðåäåëåíèÿ êîëè÷åñòâà ìåçîôèëüíûõ àýðîáíûõ è ôàêóëüòàòèâíî-àíàýðîáíûõ ìèêðîîðãàíèçìîâ (áàêòåðèé, äðîææåé è ïëåñíåâûõ ãðèáîâ): ìåòîä ïîñåâà â àãàðèçîâàííûå ïèòàòåëüíûå ñðåäû è ìåòîä íàèáîëåå âåðîÿòíîãî ÷èñëà (ÍÂ×). Ìåòîä îïðåäåëåíèÿ êîëè÷åñòâà ìåçîôèëüíûõ àýðîáíûõ è ôàêóëüòàòèâíî-àíàýðîáíûõ ìèêðîîðãàíèçìîâ ïîñåâîì â àãàðèçîâàííûå ïèòàòåëüíûå ñðåäû ïðåäíàçíà÷åí äëÿ ïèùåâûõ ïðîäóêòîâ, ñîäåðæàùèõ â 1 ã òâåðäîãî ïðîäóêòà áîëåå 150 èëè â 1 ñì3 æèäêîãî ïðîäóêòà áîëåå 15 êîëîíèåîáðàçóþùèõ åäèíèö (ÊÎÅ) ìåçîôèëüíûõ àýðîáíûõ è ôàêóëüòàòèâíî-àíàýðîáíûõ ìèêðîîðãàíèçìîâ. Ìåòîä îïðåäåëåíèÿ íàèáîëåå âåðîÿòíîãî ÷èñëà ìåçîôèëüíûõ àýðîáíûõ è ôàêóëüòàòèâíî-àíàýðîáíûõ ìèêðîîðãàíèçìîâ ïðåäíàçíà÷åí äëÿ ïèùåâûõ ïðîäóêòîâ, ñîäåðæàùèõ â 1 ã òâåðäîãî ïðîäóêòà áîëåå 150 èëè â 1 ñì3 æèäêîãî ïðîäóêòà ìåíåå 15 ÊÎÅ ìåçîôèëüíûõ àýðîáíûõ è ôàêóëüòàòèâíî-àíàýðîáíûõ ìèêðîîðãàíèçìîâ. 2 ÍÎÐÌÀÒÈÂÍÛÅ ÑÑÛËÊÈ Â íàñòîÿùåì ñòàíäàðòå èñïîëüçîâàíû ññûëêè íà ñëåäóþùèå ñòàíäàðòû: ÃÎÑÒ 667275 Ñòåêëà ïîêðîâíûå äëÿ ìèêðîïðåïàðàòîâ. Òåõíè÷åñêèå óñëîâèÿ ÃÎÑÒ 928475 Ñòåêëà ïðåäìåòíûå äëÿ ìèêðîïðåïàðàòîâ. Òåõíè÷åñêèå óñëîâèÿ ÃÎÑÒ 10444.184 Êîíñåðâû. Ïðèãîòîâëåíèå ðàñòâîðîâ ðåàêòèâîâ, êðàñîê, èíäèêàòîðîâ è ïèòàòåëüíûõ ñðåä, ïðèìåíÿåìûõ â ìèêðîáèîëîãè÷åñêîì àíàëèçå ÃÎÑÒ 2410488 Âåñû ëàáîðàòîðíûå îáùåãî íàçíà÷åíèÿ è îáðàçöîâûå. Îáùèå òåõíè÷åñêèå óñëîâèÿ ÃÎÑÒ 2666885 Ïðîäóêòû ïèùåâûå è âêóñîâûå. Ìåòîäû îòáîðà ïðîá äëÿ ìèêðîáèîëîãè÷åñêèõ àíàëèçîâ ÃÎÑÒ 2666985 Ïðîäóêòû ïèùåâûå è âêóñîâûå. Ïîäãîòîâêà ïðîá äëÿ ìèêðîáèîëîãè÷åñêèõ àíàëèçîâ ÃÎÑÒ 2667091 Ïðîäóêòû ïèùåâûå. Ìåòîäû êóëüòèâèðîâàíèÿ ìèêðîîðãàíèçìîâ ÃÎÑÒ 3042597 Êîíñåðâû. Ìåòîä îïðåäåëåíèÿ ïðîìûøëåííîé ñòåðèëüíîñòè 3 ÑÓÙÍÎÑÒÜ ÌÅÒÎÄΠÌåòîä îïðåäåëåíèÿ êîëè÷åñòâà ìåçîôèëüíûõ àýðîáíûõ è ôàêóëüòàòèâíî-àíàýðîáíûõ ìèêðîîðãàíèçìîâ ïîñåâîì â àãàðèçîâàííûå ïèòàòåëüíûå ñðåäû îñíîâàí íà âûñåâå ïðîäóêòà èëè ðàçâåäåíèÿ íàâåñêè ïðîäóêòà â ïèòàòåëüíóþ ñðåäó, èíêóáèðîâàíèè ïîñåâîâ, ïîäñ÷åòå âñåõ âûðîñøèõ âèäèìûõ êîëîíèé. 107 1 ÃÎÑÒ 10444.1594 Ìåòîä îïðåäåëåíèÿ ÍÂ× ìåçîôèëüíûõ àýðîáíûõ è ôàêóëüòàòèâíî-àíàýðîáíûõ ìèêðîîðãàíèçìîâ îñíîâàí íà âûñåâå ïðîäóêòà è (èëè) ðàçâåäåíèé íàâåñêè ïðîäóêòà â æèäêóþ ïèòàòåëüíóþ ñðåäó, èíêóáèðîâàíèè ïîñåâîâ, ó÷åòå âèäèìûõ ïðèçíàêîâ ðîñòà ìèêðîîðãàíèçìîâ, ïåðåñåâå, ïðè íåîáõîäèìîñòè, êóëüòóðàëüíîé æèäêîñòè íà àãàðèçîâàííûå ïèòàòåëüíûå ñðåäû äëÿ ïîäòâåðæäåíèÿ ðîñòà ìèêðîîðãàíèçìîâ, ïîäñ÷åòå èõ êîëè÷åñòâà ñ ïîìîùüþ òàáëèöû ÍÂ×. 4 ÎÒÁÎÐ È ÏÎÄÃÎÒÎÂÊÀ ÏÐÎÁ Îòáîð è ïîäãîòîâêà ïðîá ïî ÃÎÑÒ 26668, ÃÎÑÒ 26669. 5 ÀÏÏÀÐÀÒÓÐÀ, ÌÀÒÅÐÈÀËÛ, ÐÅÀÊÒÈÂÛ È ÏÈÒÀÒÅËÜÍÛÅ ÑÐÅÄÛ 5.1 Äëÿ ïðîâåäåíèÿ èñïûòàíèÿ ïðèìåíÿþò àïïàðàòóðó, ìàòåðèàëû è ðåàêòèâû ïî ÃÎÑÒ 10444.1 ñî ñëåäóþùèìè äîïîëíåíèÿìè: âåñû ëàáîðàòîðíûå îáùåãî íàçíà÷åíèÿ ñ ìåòðîëîãè÷åñêèìè õàðàêòåðèñòèêàìè ïî ÃÎÑÒ 24104* ñ íàèáîëüøèì ïðåäåëîì âçâåøèâàíèÿ 200 ã, 2-ãî êëàññà òî÷íîñòè (äëÿ âçâåøèâàíèÿ ðåàêòèâîâ); âåñû ëàáîðàòîðíûå îáùåãî íàçíà÷åíèÿ ñ ìåòðîëîãè÷åñêèìè õàðàêòåðèñòèêàìè ïî ÃÎÑÒ 24104* ñ íàèáîëüøèì ïðåäåëîì âçâåøèâàíèÿ 1 êã, 4-ãî êëàññà òî÷íîñòè (äëÿ âçâåøèâàíèÿ ïðîäóêòà); ëóïà ñ óâåëè÷åíèåì 510×; ìèêðîñêîï ñâåòîâîé áèîëîãè÷åñêèé ñ óâåëè÷åíèåì 9001000×; ïåòëÿ áàêòåðèîëîãè÷åñêàÿ; ñòåêëà ïðåäìåòíûå ïî ÃÎÑÒ 9284; ñòåêëà ïîêðîâíûå ïî ÃÎÑÒ 6672; òåðìîñòàò ñ äèàïàçîíîì ðàáî÷èõ òåìïåðàòóð 2855 °Ñ, ïîçâîëÿþùèé ïîääåðæèâàòü çàäàííóþ òåìïåðàòóðó ñ äîïóñòèìîé ïîãðåøíîñòüþ ±1 °Ñ. 5.2 Äëÿ ïðîâåäåíèÿ èñïûòàíèÿ ïðèìåíÿþò ïèòàòåëüíûå ñðåäû ïî ÃÎÑÒ 10444.1; ãëþêîçî-òðèïòîííûé àãàð (áóëüîí); ìÿñî (ðûáî)-ïåïòîííûé àãàð (áóëüîí); ìÿñî (ðûáî)-ïåïòîííûé àãàð (áóëüîí) ñ ãëþêîçîé; ìÿñî (ðûáî)-ïåïòîííûé àãàð (áóëüîí) ñ ãëþêîçîé è äðîææåâûì ýêñòðàêòîì; ïëîòíóþ ñðåäó Õîòòèíãåðà ñ ãëþêîçîé è äðîææåâûì ýêñòðàêòîì; ñðåäó èç ñóõîãî ïèòàòåëüíîãî àãàðà; ñðåäó èç ñóõîãî ïèòàòåëüíîãî àãàðà ñ ãëþêîçîé; ñðåäó èç ñóõîãî ïèòàòåëüíîãî àãàðà Ä (ñ äðîææåâûì ýêñòðàêòîì). 6 ÏÐÎÂÅÄÅÍÈÅ ÈÑÏÛÒÀÍÈß 6.1 Èç íàâåñêè ïðîäóêòà ãîòîâÿò èñõîäíîå è ðÿä äåñÿòèêðàòíûõ ðàçâåäåíèé ïî ÃÎÑÒ 26669 òàê, ÷òîáû ìîæíî áûëî îïðåäåëèòü â ïðîäóêòå ïðåäïîëàãàåìîå êîëè÷åñòâî ìåçîôèëüíûõ àýðîáíûõ è ôàêóëüòàòèâíî-àíàýðîáíûõ ìèêðîîðãàíèçìîâ èëè êîëè÷åñòâî, óêàçàííîå â íîðìàòèâíî-òåõíè÷åñêîé äîêóìåíòàöèè íà êîíêðåòíûé ïðîäóêò. 6.2 Ïðè îïðåäåëåíèè êîëè÷åñòâà ìåçîôèëüíûõ àýðîáíûõ è ôàêóëüòàòèâíî-àíàýðîáíûõ ìèêðîîðãàíèçìîâ ïîñåâîì â àãàðèçîâàííûå ïèòàòåëüíûå ñðåäû èç ïðîäóêòà è (èëè) èç êàæäîãî ñîîòâåòñòâóþùåãî ðàçâåäåíèÿ ïî 1 ñì3 âûñåâàþò â äâå ïàðàëëåëüíûå ÷àøêè Ïåòðè. Ïîñåâû çàëèâàþò ïî ÃÎÑÒ 26670 îäíîé èç àãàðèçîâàííûõ ñðåä ïî ï. 5.2. Åñëè îæèäàþò ïîëçó÷èé ðîñò ìèêðîîðãàíèçìîâ èç ðîäîâ Bacillus èëè Proteus, ïîñåâû çàëèâàþò ïî ÃÎÑÒ 26670 âòîðûì ñëîåì ïèòàòåëüíîé ñðåäû èëè ãîëîäíîãî àãàðà (ïðèáëèçèòåëüíî 4 ñì3). 6.3 Ïðè îïðåäåëåíèè êîëè÷åñòâà ìåçîôèëüíûõ àýðîáíûõ è ôàêóëüòàòèâíî-àíàýðîáíûõ ìèêðîîðãàíèçìîâ ïî ìåòîäó ÍÂ× âûñåâàþò òðè ïîñëåäîâàòåëüíûå íàâåñêè ïðîäóêòà è (èëè) åãî ðàçâåäåíèÿ, îòëè÷àþùèåñÿ ïî êîëè÷åñòâó âûñåâàåìîãî ïðîäóêòà â 10 ðàç. Êàæäóþ íàâåñêó ïðîäóêòà è (èëè) åãî ðàçâåäåíèÿ â òðåõêðàòíîé ïîâòîðíîñòè âûñåâàþò â êîëáû èëè ïðîáèðêè ñ îäíîé èç æèäêèõ ïèòàòåëüíûõ ñðåä ïî ï. 5.2. Ñîîòíîøåíèå ìåæäó êîëè÷åñòâîì âûñåâàåìîãî ïðîäóêòà èëè åãî ðàçâåäåíèåì è êîëè÷åñòâîì ïèòàòåëüíîé ñðåäû îò 1 : 5 äî 1 : 7. * Ñ 01.07.2002 ã. ââîäèòñÿ â äåéñòâèå ÃÎÑÒ 241042001. 2 108 ÃÎÑÒ 10444.1594 6.4 Ïîñåâû ïî ïï. 6.2 è 6.3 èíêóáèðóþò ïðè òåìïåðàòóðå (30±1) °Ñ â òå÷åíèå (72±3) ÷ â àýðîáíûõ óñëîâèÿõ. 6.5 Ïîñëå èíêóáèðîâàíèÿ ïîñåâîâ ïîäñ÷èòûâàþò êîëè÷åñòâî êîëîíèé, âûðîñøèõ íà ÷àøêàõ Ïåòðè. Äëÿ ïîäñ÷åòà îòáèðàþò ÷àøêè Ïåòðè, íà êîòîðûõ âûðîñëî îò 15 äî 300 êîëîíèé.  æèäêèõ ïèòàòåëüíûõ ñðåäàõ îòìå÷àþò íàëè÷èå èëè îòñóòñòâèå âèäèìûõ ïðèçíàêîâ ðîñòà (ãàçîîáðàçîâàíèå, ïîÿâëåíèå ìóòè, îñàäîê). Åñëè ðîñò ìèêðîîðãàíèçìîâ â æèäêèõ ïèòàòåëüíûõ ñðåäàõ âûðàæåí íåäîñòàòî÷íî ÷åòêî, òî ïðîâîäÿò ìèêðîñêîïèðîâàíèå ïîñåâîâ ìåòîäîì ðàçäàâëåííîé èëè âèñÿ÷åé êàïëè ñ îäíîâðåìåííûì ïîäòâåðæäåíèåì âîçìîæíîñòè ðîñòà ìèêðîîðãàíèçìîâ ïóòåì ïåðåñåâà êóëüòóðàëüíîé æèäêîñòè ïî ÃÎÑÒ 26670 âíóòðü èëè íà îäíó èç àãàðèçîâàííûõ ñðåä ïî ï. 5.2. 6.6 Ïðè óñòàíîâëåíèè ïðîìûøëåííîé ñòåðèëüíîñòè ïîëíûõ êîíñåðâîâ, ïðè âûÿñíåíèè ïðè÷èí âîçíèêíîâåíèÿ èõ äåôåêòîâ, åñëè íåò ñïåöèàëüíûõ óêàçàíèé â íîðìàòèâíî-òåõíè÷åñêîé äîêóìåíòàöèè, óñòàíàâëèâàþò ìîðôîëîãèþ âûðîñøèõ ìèêðîîðãàíèçìîâ. Ïðè íåîáõîäèìîñòè èç êîëîíèé ãîòîâÿò ìàçêè, îêðàøèâàþò ïî Ãðàìó (ïî ÃÎÑÒ 30425) è ìèêðîñêîïèðóþò, îïðåäåëÿþò íàëè÷èå êàòàëàçû (ïî ÃÎÑÒ 30425). 7 ÎÁÐÀÁÎÒÊÀ ÐÅÇÓËÜÒÀÒΠ7.1 Ðåçóëüòàòû îöåíèâàþò ïî êàæäîé ïðîáå îòäåëüíî. 7.2 Ðåçóëüòàòû ïîäñ÷åòà êîëè÷åñòâà êîëîíèé ïî ï. 6.5 ïåðåñ÷èòûâàþò íà 1 ã (ñì3) ïðîäóêòà ïî ÃÎÑÒ 26670. Ïðè àíàëèçå êîíñåðâîâ, ïðè íåîáõîäèìîñòè, óêàçûâàþò ðåçóëüòàòû äîïîëíèòåëüíûõ èñïûòàíèé ïî îïðåäåëåíèþ ìîðôîëîãèè âûðîñøèõ ìèêðîîðãàíèçìîâ. 7.3 ÍÂ× ìåçîôèëüíûõ àýðîáíûõ è ôàêóëüòàòèâíî-àíàýðîáíûõ ìèêðîîðãàíèçìîâ îïðåäåëÿþò ïî êîëè÷åñòâó ïîëîæèòåëüíûõ êîëá (ïðîáèðîê) ïî ÃÎÑÒ 26670. 7.4 Ðåçóëüòàòû îïðåäåëåíèÿ êîëè÷åñòâà ìåçîôèëüíûõ àýðîáíûõ è ôàêóëüòàòèâíî-àíàýðîáíûõ ìèêðîîðãàíèçìîâ çàïèñûâàþò ïî ÃÎÑÒ 26670. 109 3 ÃÎÑÒ 10444.1594 ÌÊÑ 07.100.30 Í59 ÎÊÑÒÓ 9109 Êëþ÷åâûå ñëîâà: àýðîáíûå è ôàêóëüòàòèâíî-àíàýðîáíûå ìèêðîîðãàíèçìû, èíêóáèðîâàíèå ïîñåâîâ, ïèòàòåëüíûå ñðåäû, ïëåñíåâûå ãðèáû, äðîææè, ìèêðîñêîïèðîâàíèå, êàòàëàçà 4