ÐÎÑÑÈÉÑÊÀß ÔÅÄÅÐÀÖÈß RU (19) (11) 2 339 952 (13) C1 (51) ÌÏÊ G01N 33/53 (2006.01) ÔÅÄÅÐÀËÜÍÀß ÑËÓÆÁÀ ÏÎ ÈÍÒÅËËÅÊÒÓÀËÜÍÎÉ ÑÎÁÑÒÂÅÍÍÎÑÒÈ, ÏÀÒÅÍÒÀÌ È ÒÎÂÀÐÍÛÌ ÇÍÀÊÀÌ (12) ÎÏÈÑÀÍÈÅ ÈÇÎÁÐÅÒÅÍÈß Ê ÏÀÒÅÍÒÓ (21), (22) Çà âêà: 2007120082/15, 29.05.2007 (24) Äàòà íà÷àëà îòñ÷åòà ñðîêà äåéñòâè ïàòåíòà: 29.05.2007 (45) Îïóáëèêîâàíî: 27.11.2008 Áþë. ¹ 33 C 1 C 1 R U 2 3 3 9 9 5 2 (54) ÑÏÎÑÎÁ ÄÈÔÔÅÐÅÍÖÈÀËÜÍÎÉ ÄÈÀÃÍÎÑÒÈÊÈ ÏÑÅÂÄÎÒÓÁÅÐÊÓËÅÇÀ È ÊÈØÅ×ÍÎÃÎ ÈÅÐÑÈÍÈÎÇÀ È ÄÈÀÃÍÎÑÒÈ×ÅÑÊÈÉ ÍÀÁÎÐ ÄËß ÅÃÎ ÎÑÓÙÅÑÒÂËÅÍÈß (57) Ðåôåðàò: Èçîáðåòåíèå îòíîñèòñ ê îáëàñòè ìåäèöèíû, â ÷àñòíîñòè ê ñïîñîáó ñåðîëîãè÷åñêîé äèàãíîñòèêè èåðñèíèîçîâ (ïñåâäîòóáåðêóëåçà è êèøå÷íîãî èåðñèíèîçà), âûçûâàåìûõ Yersinia pseudotuberculosis è Yersinia enterocolitica. Ñïîñîá îñíîâàí íà îïðåäåëåíèè ñïåöèôè÷åñêèõ àíòèòåë ê âîçáóäèòåë ì çàáîëåâàíèé â ñûâîðîòêå êðîâè áîëüíîãî ìåòîäîì òâåðäîôàçíîãî èììóíîôåðìåíòíîãî àíàëèçà, ãäå â êà÷åñòâå àíòèãåíîâ èñïîëüçóþòñ îäíîìîìåíòíî äâà âèäîñïåöèôè÷åñêèõ ïîðîîáðàçóþùèõ áåëêà íàðóæíîé ìåìáðàíû (ÍÌ) Y. pseudotuberculosis è èç Y. enterocolitica. Çà äèàãíîñòè÷åñêèå òèòðû â ÈÔÀ ïðèí òû ðàçâåäåíè ñûâîðîòîê 1:800 äë ïîðèíà ÈÌ Y. pseudotuberculosis è 1:1600 äë ïîðèíà ÍÌ Y.enterocolitica. Äèàãíîñòè÷åñêèé íàáîð íà ïñåâäîòóáåðêóëåç è êèøå÷íûé èåðñèíèîç ñîäåðæèò ïëàíøåò ñ èììîáèëèçîâàííûìè àíòèãåíàìè âèäîñïåöèôè÷åñêèìè áåëêàìè-ïîðèíàìè íàðóæíîé ìåìáðàíû Y. pseudotuberculosis è Y. enterocolitica, îáðàçöû êîíòðîëüíûõ (ïîëîæèòåëüíîé è îòðèöàòåëüíîé) ñûâîðîòîê êðîâè è âòîðûõ îáùåâèäîâûõ àíòèòåë, åìêîñòè ñ ãîòîâûìè äë óïîòðåáëåíè èíàêòèâèðóþùèì è ñòîï-ðåàãåíòàìè, ñóáñòðàòîì è áóôåðíûìè ñèñòåìàìè. Èñïîëüçîâàíèå ñïîñîáà ïîçâîë åò ïðîâîäèòü äèôôåðåíöèàëüíóþ äèàãíîñòèêó ïñåâäîòóáåðêóëåçà îò êèøå÷íîãî èåðñèíèîçà è âû âë òü ñëó÷àè ñìåøàííîé ôîðìû èåðñèíèîçíîé èíôåêöèè. 2 í.ï. ô-ëû, 3 èë. Ñòðàíèöà: 1 RU 2 3 3 9 9 5 2 Àäðåñ äë ïåðåïèñêè: 690022, ã.Âëàäèâîñòîê, ïð-êò 100-ëåòè Âëàäèâîñòîêó, 159, Òèõîîêåàíñêèé èíñòèòóò áèîîðãàíè÷åñêîé õèìèè ÄÂÎ ÐÀÍ, ïàòåíòíûé îòäåë, Í.È. Ñòàäíè÷åíêî (73) Ïàòåíòîîáëàäàòåëü(è): Òèõîîêåàíñêèé èíñòèòóò áèîîðãàíè÷åñêîé õèìèè Äàëüíåâîñòî÷íîãî îòäåëåíè Ðîññèéñêîé àêàäåìèè íàóê (ÒÈÁÎÕ ÄÂÎ ÐÀÍ) (RU), Ãîñóäàðñòâåííîå îáðàçîâàòåëüíîå ó÷ðåæäåíèå âûñøåãî ïðîôåññèîíàëüíîãî îáðàçîâàíè "Âëàäèâîñòîêñêèé ãîñóäàðñòâåííûé ìåäèöèíñêèé óíèâåðñèòåò Ôåäåðàëüíîãî àãåíòñòâà ïî çäðàâîîõðàíåíèþ è ñîöèàëüíîìó ðàçâèòèþ" (ÃÎÓ ÂÏÎ ÂÃÌÓ Ðîñçäðàâà) (RU) R U (56) Ñïèñîê äîêóìåíòîâ, öèòèðîâàííûõ â îò÷åòå î ïîèñêå: CHART H, CHEASTY Ò The serodiagnosis of human infections with Yersinia enterocolitica and Yersinia pseudotuberculosis, FEMS Immunol Med Microbiol. 2006 Aug; 47(3):391-7, PMID: 16872375 [PubMed - indexed for MEDLINE]. RU 2153172 C1, 02.12.1998. RU 2101342 C1, 10.01.1998. ÏÎÐÒÍßÃÈÍÀ Î.Þ. è äð. Áàêòåðèàëüíûå ïîðèíû êàê ïåðñïåêòèâíûå àíòèãåíû äë (ñì. ïðîä.) (72) Àâòîð(û): Âîñòðèêîâà Îëüãà Ïàâëîâíà (RU), Ïîðòí ãèíà Îëüãà Þðüåâíà (RU), Ìàëàøåíêîâà Âëàäëåíà Ãåîðãèåâíà (RU), Õîìåíêî Âàëåíòèíà Àëåêñàíäðîâíà (RU), Íîâèêîâà Îëüãà Äàíèèëîâíà (RU), Ãîðäååö Àëüâèíà Âàñèëüåâíà (RU), Ñîëîâüåâà Òàìàðà Ôåäîðîâíà (RU) R U (56) (ïðîäîëæåíèå): äèàãíîñòèêè è âàêöèíîïðîôèëàêòèêè èíôåêöèîííûõ çàáîëåâàíèé. Âåñòíèê ÄÂÎ ÐÀÍ, 2004, ¹3, ñ.35-44. ÍÎÂÈÊÎÂÀ Î.Ä. è äð. Èñïîëüçîâàíèå ïîðèíà èç âíåøíåé ìåìáðàíû Yersinia pseudotuberculosis äë ñåðîäèàãíîñòèêè ïñåâäîòóáåðêóëåçà. Áþëë. ýêñï. áèîë. ìåä., 2005, ¹8, ñ.199-202. R U 2 3 3 9 9 5 2 C 1 C 1 2 3 3 9 9 5 2 Ñòðàíèöà: 2 RUSSIAN FEDERATION (19) RU (11) 2 339 952 (13) C1 (51) Int. Cl. G01N 33/53 (2006.01) FEDERAL SERVICE FOR INTELLECTUAL PROPERTY, PATENTS AND TRADEMARKS (12) ABSTRACT OF INVENTION (21), (22) Application: 2007120082/15, 29.05.2007 (24) Effective date for property rights: 29.05.2007 (45) Date of publication: 27.11.2008 Bull. 33 2 3 3 9 9 5 2 (54) METHOD FOR DIFFERENTIAL DIAGNOSTICS OF PSEUDO-TUBERCULOSIS AND INTESTINAL YERSINIOSIS AND DIAGNOSTIC SET FOR ITS REALISATION (57) Abstract: FIELD: medicine. SUBSTANCE: determine specific antibodies to activators of diseases in blood serum of the patient using the method of solidphase enzyme multiplied immunoassay where as antigenes are used in one stage two species-specific poreforming proteins outside membranes (NM) Y. pseudotuberculosis and from Y. enterocolitica. As diagnostic titres in EIA delutions of serum 1:800 for porin NM are accepted. pseudotuberculosis and 1:1600 for porin NM Y.enterocolitica. The diagnostic set on a pseudotuberculosis and intestinal yersiniosis contains a tablet with the immobilized antigens - species-specific proteinsporins of external membrane Y. pseudotuberculosis and Y. enterocolitica, samples control (positive and negative) blood sera and the second common- species antibodies, capacity with ready for the use inactivating and stop reagents, substrate and buffer systems. EFFECT: possibility to carry out differential diagnostics of pseudotuberculosis from intestinal yersiniosis and to tap cases of the admixed form of yersuniosal infection. 3 dwg, 1 ex, 2 cl Ñòðàíèöà: 3 EN C 1 R U (73) Proprietor(s): Tikhookeanskij institut bioorganicheskoj khimii Dal'nevostochnogo otdelenija Rossijskoj akademii nauk (TIBOKh DVO RAN) (RU), Gosudarstvennoe obrazovatel'noe uchrezhdenie vysshego professional'nogo obrazovanija "Vladivostokskij gosudarstvennyj meditsinskij universitet Federal'nogo agentstva po zdravookhraneniju i sotsial'nomu razvitiju" (GOU VPO VGMU Roszdrava) (RU) 2 3 3 9 9 5 2 C 1 Mail address: 690022, g.Vladivostok, pr-kt 100-letija Vladivostoku, 159, Tikhookeanskij institut bioorganicheskoj khimii DVO RAN, patentnyj otdel, N.I. Stadnichenko R U (72) Inventor(s): Vostrikova Ol'ga Pavlovna (RU), Portnjagina Ol'ga Jur'evna (RU), Malashenkova Vladlena Georgievna (RU), Khomenko Valentina Aleksandrovna (RU), Novikova Ol'ga Daniilovna (RU), Gordeets Al'vina Vasil'evna (RU), Solov'eva Tamara Fedorovna (RU) RU 2 339 952 C1 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 Èçîáðåòåíèå îòíîñèòñ ê îáëàñòè ìåäèöèíû, â ÷àñòíîñòè ê ñïîñîáó ñåðîëîãè÷åñêîé äèàãíîñòèêè èåðñèíèîçîâ (ïñåâäîòóáåðêóëåçà è êèøå÷íîãî èåðñèíèîçà). Èåðñèíèîçíûå èíôåêöèè, âûçûâàåìûå ïàòîãåííûìè äë ÷åëîâåêà Yersinia pseudotuberculosis è Yersinia enterocolitica, îòíîñ òñ ê øèðîêî ðàñïðîñòðàíåííûì â ìèðå îñòðûì êèøå÷íûì çàáîëåâàíè ì. Ýòèîëîãè÷åñêîå ðîäñòâî âîçáóäèòåëåé ïñåâäîòóáåðêóëåçà è êèøå÷íîãî èåðñèíèîçà ñïîñîáñòâóåò îïðåäåëåííîìó ñõîäñòâó ýòèõ èíôåêöèîííûõ çàáîëåâàíèé. Èåðñèíèîçû õàðàêòåðèçóþòñ ïîäîáèåì êëèíè÷åñêèõ ôîðì è ïðî âë þòñ êàê â âèäå ïåðâè÷íî-î÷àãîâûõ ôîðì (ãåíåðàëèçîâàííà , êèøå÷íà , àáäîìèíàëüíà è ñìåøàííà , àíãèíîçíà , îñòðà ðåñïèðàòîðíà , íî è áîëåå ðåäêà êîæíà ), òàê è â âèäå âòîðè÷íî-î÷àãîâûõ ôîðì èåðñèíèîçîâ (ïíåâìîíè÷åñêîé, ãåïàòèòíîé, ìåíèíãî-ýíöåôàëèòè÷åñêîé, ñåïòè÷åñêîé è äð.). Ïðè ýòîì ïðèíöèïèàëüíûõ ðàçëè÷èé â êëèíè÷åñêèõ ïðèçíàêàõ ýòèõ ôîðì èåðñèíèîçíîé èíôåêöèè â çàâèñèìîñòè îò âèäà âîçáóäèòåë (Y. pseudotuberculosis èëè Y. enterocolitica) íå âû âëåíî [1-3]. Ïðè ïîñòàíîâêå ïåðâè÷íîãî äèàãíîçà «èåðñèíèîç» ïðàêòèêóþùèå âðà÷è îðèåíòèðóþòñ , êàê ïðàâèëî, íà êëèíè÷åñêèå ïðî âëåíè çàáîëåâàíè . Ïñåâäîòóáåðêóëåç (ÏÑÁ), íàïðèìåð, õàðàêòåðèçóåòñ áîëüøåé âûðàæåííîñòüþ òîêñèêî-àëëåðãè÷åñêîãî ñèíäðîìà, à êèøå÷íûé èåðñèíèîç (ÊÈ) - äèñôóíêöèåé ÆÊÒ è îðãàííûìè ïîðàæåíè ìè [1-3]. Îäíàêî ïîäîáíûå ðàçëè÷è â êëèíè÷åñêèõ ïðèçíàêàõ ìåæäó ÏÑÒ è ÊÈ ÷åòêî ïðîñëåæèâàþòñ òîëüêî ïðè ìàññîâîì ïðîâåäåíèå àíàëèçà è ìàëî ïîìîãàþò â äèôôåðåíöèàëüíîé äèàãíîñòèêå â êàæäîì êîíêðåòíîì ñëó÷àå.  ñâ çè ñ ýòèì óñòàíîâëåíèå ýòèîëîãè÷åñêîãî äèàãíîçà ïðè èåðñèíèîçàõ òîëüêî ïî åãî êëèíè÷åñêèì ïðî âëåíè ì îñîáåííî â ðàííèå ñðîêè è ïðè ñïîðàäè÷åñêîé çàáîëåâàåìîñòè ïðàêòè÷åñêè íåâîçìîæíî [1-3]. Îñîáåííî ÷àñòî äèàãíîñòè÷åñêèå îøèáêè âîçìîæíû ó äåòåé ðàííåãî âîçðàñòà, à òàêæå ïðè ò æåëîé ôîðìå çàáîëåâàíè . Îäíàêî è ïðè áîëåå ëåãêîì òå÷åíèè èíôåêöèè ó äåòåé ñòàðøåãî âîçðàñòà ïîñòàâèòü ïðàâèëüíûé äèàãíîç ñ ó÷åòîì ýòèîëîãèè çàáîëåâàíè íå óäàåòñ áåç ðåçóëüòàòîâ ëàáîðàòîðíîãî îáñëåäîâàíè [2]. Ñëîæíîñòü âåðèôèêàöèè ÏÑÒ îò ÊÈ òîëüêî ïî êëèíè÷åñêèì ïðî âëåíè ì â áîëüøèíñòâå ñëó÷àåâ íåðåäêî ïðèâîäèò ê îøèáî÷íîìó äèàãíîçó, äàæå ïðè òèïè÷íîì òå÷åíèè çàáîëåâàíè . Îñîáóþ ñëîæíîñòü ïðè äèàãíîñòèêå èåðñèíèîçíîé èíôåêöèè â çàâèñèìîñòè îò ýòèîëîãèè âîçáóäèòåë ïðåäñòàâë þò ñëó÷àè ñìåøàííîé ôîðìû èåðñèíèîçîâ, îáóñëîâëåííîé îäíîâðåìåííî Y. pseudotuberculosis è Y. enterocolitica.  ñâ çè ñ ýòèì îñîáóþ çíà÷èìîñòü ïðè äèôôåðåíöèàöèè îáîáùåííîãî äèàãíîçà «èåðñèíèîç» (ÏÑÁ è/èëè ÊÈ) ïðèîáðåòàåò íåîáõîäèìîñòü ÷åòêîãî ðàçãðàíè÷åíè äàííûõ èíôåêöèé ïðè âñïûøå÷íîé çàáîëåâàåìîñòè, êîãäà íåîáõîäèìû ìàñøòàáíûå ïðîòèâîýïèäåìè÷åñêèå ìåðîïðè òè , ñ ó÷åòîì íåêîòîðûõ ðàçëè÷èé â ìåõàíèçìå ïåðåäà÷è âîçáóäèòåëåé ÏÑÒ è ÊÈ. Îêîí÷àòåëüíûé äèàãíîç âîçìîæåí òîëüêî ñ èñïîëüçîâàíèåì ëàáîðàòîðíûõ ìåòîäîâ îáñëåäîâàíè ïàöèåíòà.  ñîîòâåòñòâèè ñ èíñòðóêòèâíûìè äîêóìåíòàìè [4] áîëüøîå çíà÷åíèå óäåë åòñ ñåðîëîãè÷åñêèì ìåòîäàì äèàãíîñòèêè, íàïðàâëåííûì íà âû âëåíèå ñïåöèôè÷åñêèõ àíòèòåë ê âîçáóäèòåë ì èåðñèíèîçîâ - Y. pseudotuberculosis è Y. enterocolitica. Ðåçóëüòàòû èññëåäîâàíè êðîâè áîëüíûõ íà íàëè÷èå àíòèòåë ê îïðåäåëåííîìó âèäó âîçáóäèòåë ïîçâîë þò îðèåíòèðîâàòü êëèíèöèñòà â òàêòèêå âåäåíè áîëüíîãî è â îïðåäåëåííîé ñòåïåíè ïðîãíîçèðîâàòü òå÷åíèå çàáîëåâàíè . Èñïîëüçóåìûå â ïðàêòèêå ëå÷åáíûõ ó÷ðåæäåíèé ñåðîëîãè÷åñêèå ìåòîäû, îñíîâàííûå íà ðåàêöèè àããëþòèíàöèè (ÐÀ), ðàçðàáîòàíû äë äèàãíîñòèêè êàê ÏÑÒ, òàê è ÊÈ è îáåñïå÷èâàþò âåðèôèêàöèþ ëèáî ÏÑÒ, ëèáî - ÊÈ [5, 6].  ñâ çè ñ ýòèì äèôôåðåíöèàëüíà äèàãíîñòèêà èåðñèíèîçîâ ñ ó÷åòîì ýòèîëîãèè òðåáóåò ïîñëåäîâàòåëüíîãî èñïîëüçîâàíè ðàçëè÷íûõ òèïîñïåöèôè÷åñêèõ äèàãíîñòèêóìîâ: ñíà÷àëà äë îïðåäåëåíè ñïåöèôè÷åñêèõ àíòèòåë ê Y. pseudotuberculosis, çàòåì - ê Y. enterocolitica. Ïîäîáíà ñõåìà àíàëèçà ïðîâîäèòñ ïîýòàïíî: äë âû âëåíè àíòèòåë ê èåðñèíè ì âíà÷àëå ñòàâ ò ðàçâåðíóòóþ ðåàêöèþ ñ äèàãíîñòèêóìàìè ê íàèáîëåå ÷àñòî âñòðå÷àþùèìñ ñåðîâàðàì Y. pseudotuberculosis (1 Â) èëè ê Y. enterocolitica (0:9 è 0:3). Çàòåì, åñëè âîçíèêíåò â ýòîì íåîáõîäèìîñòü, ÐÀ ñòàâ ò ñ äèàãíîñòèêóìàìè ê äðóãèì ñåðîâàðèàíòàì Y. pseudotuberculosis (III, IV) èëè Y. enterocolitica (0:5,27, 0:8, 0:6 è äð.). Òàêèì Ñòðàíèöà: 4 DE RU 2 339 952 C1 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 îáðàçîì, ïðåäëàãàåìà ñõåìà ñåðîëîãè÷åñêîé äèàãíîñòèêè èåðñèíèîçîâ ìíîãîýòàïíà, òðóäîåìêà è äëèòåëüíà. Êðîìå òîãî, ïîñêîëüêó â êà÷åñòâå àíòèãåíà â ÐÀ èñïîëüçóþòñ æèâûå êóëüòóðû èåðñèíèé, à ðåàêöè òèïîñïåöèôè÷åñêà , òî íåîáõîäèìî èìåòü êóëüòóðû èåðñèíèé ðàçíûõ ñåðîëîãè÷åñêèõ âàðèàíòîâ, íàèáîëåå ÷àñòî âûçûâàþùèõ çàáîëåâàíè . Ê íåäîñòàòêàì ìåòîäîâ ìîæíî îòíåñòè òàêæå ðåòðîñïåêòèâíîñòü ðåçóëüòàòîâ àíàëèçà, òàê êàê àíòèòåëà â äèàãíîñòè÷åñêèõ òèòðàõ âû âë þòñ òîëüêî íà 2-3 íåäåë õ áîëåçíè. Ñïîñîáû äèàãíîñòèêè èåðñèíèîçîâ, îñíîâàííûå íà ðåàêöèè íåïð ìîé ãåìàããëþòèíàöèè (ÐÍÃÀ), ðàçðàáîòàíû äë äèàãíîñòèêè êàê ÏÑÒ, òàê è äë - ÊÈ. Íåñìîòð íà îïðåäåëåííûå óñïåõè ïî óñîâåðøåíñòâîâàíèþ ýòèõ äèàãíîñòèêóìîâ, ÷òî ïîçâîëèëî íàëàäèòü èõ ïðîìûøëåííûé âûïóñê, îíè èìåþò òàêæå ñóùåñòâåííûå íåäîñòàòêè [7, 8]. Ïðåäëàãàåìûå ñïîñîáû õàðàêòåðèçóþòñ íåâûñîêîé ñïåöèôè÷íîñòüþ, ïîñêîëüêó â ðåàêöèè èñïîëüçóþòñ òèïîñïåöèôè÷åñêèå àíòèãåíû - ëèïîïîëèñàõàðèäû Y. pseudotuberculosis 1B è Y. enterocolitica 0:3 è 0:9 ñåðîâàðèàíòîâ, ÷òî íå ïîçâîë åò âû âë òü ñëó÷àè çàáîëåâàíèé, âûçâàííûõ äðóãèìè ñåðîâàðèàíòàìè ýòèõ ìèêðîîðãàíèçìîâ. Êðîìå òîãî, îáùåïðèí òûé ìíîãîñòàäèéíûé ïîäõîä ê äèàãíîñòèêå èåðñèíèîçîâ áåç ó÷åòà ýòèîëîãèè âîçáóäèòåë îòëè÷àåòñ äëèòåëüíîñòüþ àíàëèçà, ïåðåðàñõîäîì ñûâîðîòêè êðîâè áîëüíîãî, íåîáõîäèìûõ ðåàãåíòîâ, ìàòåðèàëîâ è äð. Äë äèàãíîñòèêè èåðñèíèîçîâ â ïîñëåäíèå ãîäû èíòåíñèâíî ðàçðàáàòûâàåòñ èììóíîôåðìåíòíûé àíàëèç (ÈÔÀ) ñ èñïîëüçîâàíèåì àíòèãåíîâ ðàçëè÷íîé ïðèðîäû [9-12], îäíàêî ïðåäëàãàåìûå âàðèàíòû ÈÔÀ íå ïîçâîë þò ïðîâîäèòü îäíîìîìåíòíî äèôôåðåíöèðîâàíèå ÏÑÒ è ÊÈ, à òðåáóþò ïîýòàïíîãî èõ èñïîëüçîâàíè , áîëüøèõ çàòðàò âðåìåíè è íåîáõîäèìûõ ìàòåðèàëîâ. Ïðåäëîæåí ñïîñîá äèàãíîñòèêè èåðñèíèîçîâ ñ ïîìîùüþ ÈÔÀ íà îñíîâå ïðîòåèíîâîãî àíòèãåíà, ñâîáîäíî ñåêðåòèðóåìîãî â êóëüòèâèðóåìóþ ñðåäó ðàçíûìè âèäàìè èåðñèíèé, â ÷àñòíîñòè Y. pseudotuberculosis 1B ñåðîâàðèàíòà [12]. Îäíàêî ýòîò ñïîñîá íå îáåñïå÷èâàåò äèôôåðåíöèàëüíîé äèàãíîñòèêè èåðñèíèîçîâ ñ ó÷åòîì ýòèîëîãèè âîçáóäèòåë . Èçâåñòåí ñïîñîá äèôôåðåíöèàëüíîé äèàãíîñòèêè èåðñèíèîçîâ ñ èñïîëüçîâàíèåì â ÈÔÀ òèïîñïåöèôè÷åñêîãî àíòèãåíà - ëèïîïîëèñàõàðèäà (ËÈÑ) èç Y. pseudotuberculosis 1 B ñåðîâàðèàíòà èëè ËÏÑ èç Y. enterocolitica 0:3 è 0:9 ñåðîòèïîâ [13]. Îäíàêî ïðåäëàãàåìûé ìåòîä ââèäó åãî òèïîñïåöèôè÷íîñòè íå ïîçâîë åò äèàãíîñòèðîâàòü çàáîëåâàíè , âûçâàííûå Y. pseudotuberculosis II, III, IV ñåðîâàðèàíòàìè, è Y. enterocolitica 0:5, 0:6, 0:7, 0:8 è äðóãèõ ñåðîòèïîâ. Êðîìå òîãî, äë âåðèôèêàöèè ÏÑÒ îò ÊÈ íåîáõîäèìî ïîýòàïíîå èñïîëüçîâàíèå òèïîñïåöèôè÷åñêèõ äèàãíîñòèêóìîâ, íàïðèìåð, ñíà÷àëà íà ÏÑÒ, çàòåì - íà ÊÈ. Äë ïðîâåäåíè òàêîãî àíàëèçà òðåáóþòñ î÷èùåííûå àíòèãåíû èç ðàçëè÷íûõ ñåðîëîãè÷åñêèõ âàðèàíòîâ Y. pseudotuberculosis è Y. enterocolitica, íà ïîëó÷åíèå êîòîðûõ çàòðà÷èâàåòñ çíà÷èòåëüíîå âðåì , ÷òî óñëîæí åò äèàãíîñòèêó. Ýòîò ñïîñîá âêëþ÷àåò ñëåäóþùèå ýòàïû: 1) ïîñàäêà àíòèãåíà íà ïîëèñòèðîëîâûé ïëàíøåò, â êà÷åñòâå àíòèãåíà èñïîëüçóåòñ èíàêòèâèðîâàííûé êîðïóñêóë ðíûé àíòèãåí èç Y. enterocolitica 0:3 è 0:9 ñåðîâàðèàíòîâ; 2) îòìûâêà ïëàíøåòà; 3) íàíåñåíèå èññëåäóåìîé ñûâîðîòêè â äèàãíîñòè÷åñêîì ðàçâåäåíèè; 4) îòìûâêà ïëàíøåòà; 5) íàíåñåíèå êîíúþãàòà; 6) îòìûâêà ïëàíøåòà; 7) íàíåñåíèå ñóáñòðàòíîé ñìåñè; 8) ðåãèñòðàöè ðåçóëüòàòîâ ðåàêöèè.  íàñòî ùåå âðåì ïðîìûøëåííûé âûïóñê èììóíîôåðìåíòíûõ äèàãíîñòèêóìîâ (ÈÔÀ òåñò-ñèñòåì) íà èåðñèíèîçû â íàøåé ñòðàíå íå îñóùåñòâë åòñ . Ìåòîäû äèôôåðåíöèàëüíîé äèàãíîñòèêè èåðñèíèîçîâ, ïðåäëàãàåìûå ðàçíûìè àâòîðàìè [9-12], íå îñíàùåíû íåîáõîäèìûìè íàáîðàìè ðåàãåíòîâ äë ïðîâåäåíè èììóíîäèàãíîñòèêè èåðñèíèîçà. Ñòðàíèöà: 5 RU 2 339 952 C1 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 Ïðåäëàãàåìûå ÈÔÀ òåñò-ñèñòåìû õàðàêòåðèçóþòñ íåâûñîêîé ñïåöèôè÷íîñòüþ è ÷óâñòâèòåëüíîñòüþ ê âû âëåíèþ èåðñèíèîçîâ, îáóñëîâëåííûõ ðàçíûìè ñåðîëîãè÷åñêèìè âàðèàíòàìè Y. pseudotuberculosis (II, III, IV) è Y. enterocolitica (0:5, 0:6, 0:7, 0: 8 è äðóãèå), íàèáîëåå ÷àñòî âûçûâàþùèõ çàáîëåâàíè , è íå îáåñïå÷èâàþò äèôôåðåíöèàëüíîé äèàãíîñòèêè èåðñèíèîçîâ â çàâèñèìîñòè îò ýòèîëîãèè âîçáóäèòåë . Çàäà÷à èçîáðåòåíè - ñîâåðøåíñòâîâàíèå äèôôåðåíöèàëüíîé äèàãíîñòèêè ïñåâäîòóáåðêóëåçà è êèøå÷íîãî èåðñèíèîçà çà ñ÷åò îäíîâðåìåííîãî îïðåäåëåíè ýòèõ èíôåêöèé, âûçûâàåìûõ ðàçíûìè ñåðîëîãè÷åñêèìè âàðèàíòàìè âîçáóäèòåëåé èåðñèíèîçîâ, è ðàçðàáîòêà äèàãíîñòè÷åñêîãî íàáîðà.  ðåçóëüòàòå ðåøåíè ïîñòàâëåííîé çàäà÷è ðàçðàáîòàí ñïîñîá äèôôåðåíöèàëüíîé äèàãíîñòèêè ïñåâäîòóáåðêóëåçà è êèøå÷íîãî èåðñèíèîçà, âêëþ÷àþùèé îïðåäåëåíèå ñïåöèôè÷åñêèõ àíòèòåë ê âîçáóäèòåë ì â ñûâîðîòêå êðîâè áîëüíîãî ìåòîäîì òâåðäîôàçíîãî èììóíîôåðìåíòíîãî àíàëèçà, ïðåäóñìàòðèâàþùåãî íàíåñåíèå àíòèãåíîâ íà ïëàíøåò, â êîòîðîì ñîãëàñíî èçîáðåòåíèþ íà îäíó ïîëîâèíó ïëàíøåòà íàíîñ ò âèäîñïåöèôè÷åñêèé áåëîê-ïîðèí íàðóæíîé ìåìáðàíû Yersinia pseudotuberculosis, çà äèàãíîñòè÷åñêèé òèòð ïðèíèìàþò ðàçâåäåíèå ñûâîðîòêè 1:800, à íà äðóãóþ ïîëîâèíó ïëàíøåòà íàíîñ ò âèäîñïåöèôè÷åñêèé áåëîê-ïîðèí íàðóæíîé ìåìáðàíû Yersinia enterocolitica, çà äèàãíîñòè÷åñêèé òèòð ïðèíèìàþò ðàçâåäåíèå ñûâîðîòêè 1:1600 è âåðèôèêàöèþ ïñåâäîòóáåðêóëåçà îò êèøå÷íîãî èåðñèíèîçà îñóùåñòâë þò ñðàâíåíèåì çíà÷åíèé îïòè÷åñêîé ïëîòíîñòè ðàñòâîðà ðåàêöèé ñûâîðîòêè êðîâè áîëüíîãî ñ àíòèãåíàìè èç Y. pseudotuberculosis (ÎÏY.ps.) è èç Y. enterocolitica (ÎÏY.å.), ïðè âåëè÷èíå îòíîøåíè ÎÏY.ps./ÎÏY.å. áîëüøå èëè ðàâíîé 2,0 äèàãíîñòèðóþò ïñåâäîòóáåðêóëåç, ïðè âåëè÷èíå îòíîøåíè ÎÏY.å./ÎÏY.ps áîëüøå èëè ðàâíîé 2,0 äèàãíîñòèðóþò êèøå÷íûé èåðñèíèîç, ïðè âåëè÷èíàõ îòíîøåíèé ÎÏY.ps./ÎÏY.å. è ÎÏY.å./ÎÏY.ps. áëèçêèõ èëè ðàâíûõ 1,0, äèàãíîñòèðóþò ñìåøàííóþ ôîðìó èåðñèíèîçíîé èíôåêöèè. Äèàãíîñòè÷åñêèé íàáîð íà ïñåâäîòóáåðêóëåç è êèøå÷íûé èåðñèíèîç ñîäåðæèò ïëàíøåò ñ èììîáèëèçîâàííûìè àíòèãåíàìè - âèäîñïåöèôè÷åñêèìè áåëêàìè-ïîðèíàìè íàðóæíîé ìåìáðàíû Yersinia pseudotuberculosis è Yersinia enterocolitica, îáðàçöû êîíòðîëüíûõ (ïîëîæèòåëüíîé è îòðèöàòåëüíîé) ñûâîðîòîê êðîâè è âòîðûõ îáùåâèäîâûõ àíòèòåë, åìêîñòè ñ ãîòîâûìè äë óïîòðåáëåíè èíàêòèâèðóþùèì è ñòîï-ðåàãåíòàìè, ñóáñòðàòîì è áóôåðíûìè ñèñòåìàìè. Òåõíè÷åñêèé ðåçóëüòàò, îáåñïå÷èâàåìûé ãðóïïîé èçîáðåòåíèé, çàêëþ÷àåòñ â ïîâûøåíèè ñïåöèôè÷íîñòè è ÷óâñòâèòåëüíîñòè èììóíîôåðìåíòíîé äèàãíîñòèêè èåðñèíèîçîâ. Çà âë åìûé ñïîñîá ïîçâîë åò ïðîâîäèòü äèôôåðåíöèàëüíóþ äèàãíîñòèêó ïñåâäîòóáåðêóëåçà îò êèøå÷íîãî èåðñèíèîçà è âû âë òü ñëó÷àè ñìåøàííîé ôîðìû èåðñèíèîçíîé èíôåêöèè, îáóñëîâëåííîé îäíîâðåìåííî Y. pseudotuberculosis è Y. enterocolitica. Ñïîñîá âë åòñ áîëåå ïðîñòûì, ò.ê. îáåñïå÷èâàåò îäíîìîìåíòíîå ïðîâåäåíèå ñèñòåìíîãî àíàëèçà èç îäíîãî îáðàçöà ñûâîðîòêè êðîâè áîëüíîãî íà èåðñèíèîç ñ ó÷åòîì ýòèîëîãèè âîçáóäèòåë , ÷òî óëó÷øàåò èììóíîäèàãíîñòèêó èåðñèíèîçîâ, ñîêðàùàåò âðåì ïðîâåäåíè è ñòîèìîñòü àíàëèçà. Ïîðîîáðàçóþùèå áåëêè íàðóæíîé ìåìáðàíû (ÍÌ) ãðàìîòðèöàòåëüíûõ áàêòåðèé âë þòñ èììóíîëîãè÷åñêèìè ìàðêåðàìè, õàðàêòåðíûìè äë âèäà èëè ðîäà ìèêðîîðãàíèçìîâ, è îòíîñ òñ ê âûñîêîèììóíîãåííûì êîìïîíåíòàì áàêòåðèàëüíîé êëåòêè, è îïðåäåëåíèå àíòèòåë ê íèì èñïîëüçóåòñ äë äèàãíîñòèêè èíôåêöèîííûõ çàáîëåâàíèé [14]. Àâòîðû çà âë åìîãî ñïîñîáà óñòàíîâèëè, ÷òî ïîðèíû èç ÍÌ Y. pseudotuberculosis è Y. enterocolitica âë þòñ âèäîñïåöèôè÷åñêèìè àíòèãåíàìè âîçáóäèòåëåé ïñåâäîòóáåðêóëåçà è êèøå÷íîãî èåðñèíèîçà, àíòèòåëà ê êîòîðûì îáíàðóæèâàþòñ íåçàâèñèìî îò ñåðîëîãè÷åñêîãî âàðèàíòà âîçáóäèòåëåé êàê â àíòèñûâîðîòêàõ ëàáîðàòîðíûõ æèâîòíûõ, èììóíèçèðîâàííûõ ëèçàòàìè êëåòîê Y. pseudotuberculosis è Y. enterocolitica, òàê è â ñûâîðîòêàõ êðîâè áîëüíûõ ïñåâäîòóáåðêóëåçîì è êèøå÷íûì èåðñèíèîçîì. Ñïîñîá îñóùåñòâë åòñ ñëåäóþùèì îáðàçîì: äèàãíîñòèêó ïðîâîä ò ïî ìåòîäèêå âû âëåíè ñïåöèôè÷åñêèõ àíòèòåë ê âîçáóäèòåë ì â ñûâîðîòêå êðîâè áîëüíîãî, èñïîëüçó Ñòðàíèöà: 6 RU 2 339 952 C1 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 ñòàíäàðòíûé òâåðäîôàçíûé èììóíîôåðìåíòíûé àíàëèç (ÈÔÀ, íåïð ìîé, íåêîíêóðåíòíûé àíàëèç àíòèòåë) [15].  êà÷åñòâå àíòèãåíîâ èñïîëüçóþòñ îäíîìîìåíòíî äâà âèäîñïåöèôè÷åñêèõ ïîðîîáðàçóþùèõ áåëêà èç ÍÌ Y. pseudotuberculosis è èç ÍÌ Y. enterocolitica, âûäåëåííûõ â îäèíàêîâûõ óñëîâè õ è ïî îäíîé ìåòîäèêå [16]. Çà äèàãíîñòè÷åñêèå òèòðû â ÈÔÀ ïðèí òû ðàçâåäåíè ñûâîðîòîê 1:800 äë ïîðèíà ÍÌ Y pseudotuberculosis (ñîãëàñíî ïàòåíòó RU ¹2153172 Ñ1, 20.07.2000) è 1:1600 äë ïîðèíà ÍÌ Y. enterocolitica. Äèàãíîñòè÷åñêèé òèòð â ÈÔÀ òåñò-ñèñòåìå íà îñíîâå ïîðèíà èç Y. enterocolitica îïðåäåë ëè, ñðàâíèâà ñòàòèñòè÷åñêè äîñòîâåðíûå çíà÷åíè [17], ðàâíûå îòíîøåíè ì çíà÷åíèé îïòè÷åñêîé ïëîòíîñòè ðàñòâîðà ðåàêöèé ñûâîðîòîê êðîâè áîëüíûõ èåðñèíèîçîì ñ áàêòåðèîëîãè÷åñêè ïîäòâåðæäåííûì äèàãíîçîì è çäîðîâûõ ëþäåé (Ðîï/Ðçä) ïðè ðàçëè÷íûõ ðàçâåäåíè õ, ãäå Fîï=Fc+Fô Fc - çíà÷åíèå îïòè÷åñêîé ïëîòíîñòè ðàñòâîðà ñïåöèôè÷åñêîé ðåàêöèè àíòèãåí/àíòèòåëî (àíòèòåëà - ñûâîðîòêà êðîâè áîëüíîãî ñ ïîäòâåðæäåííûì äèàãíîçîì, èëè ïîëîæèòåëüíûé êîíòðîëü), Fçä - çíà÷åíèå îïòè÷åñêîé ïëîòíîñòè ðàñòâîðà ðåàêöèè ñ ñûâîðîòêîé êðîâè çäîðîâîãî äîíîðà, èëè îòðèöàòåëüíûé êîíòðîëü, Fô - çíà÷åíèå îïòè÷åñêîé ïëîòíîñòè ðàñòâîðà íåñïåöèôè÷åñêîé ôîíîâîé ðåàêöèè. Äë èññëåäóåìûõ ñûâîðîòîê (57 ñûâîðîòîê êðîâè áîëüíûõ ñ áàêòåðèîëîãè÷åñêè ïîäòâåðæäåííûì äèàãíîçîì è 86 äîíîðîâ) â ðàçâåäåíè õ 1:100, 1:200, 1:400, 1:800, 1: 1600 1:3200 ýòè âåëè÷èíû îêàçàëèñü ñîîòâåòñòâåííî ðàâíû 3,6; 4,0; 4,2; 5,5; 5,0; 4,1 (ôèã.1). Çà äèàãíîñòè÷åñêèé òèòð ïðèí ëè ðàçâåäåíèå ñûâîðîòêè, äë êîòîðîãî ñîîòíîøåíèå Fîï/Fçä îêàçàëîñü íàèáîëüøèì. Òàêèì îáðàçîì, â ÈÔÀ íà îñíîâå ïîðèíà èç Y. enterocolitica çà äèàãíîñòè÷åñêèé òèòð ïðèí òî ðàçâåäåíèå 1:800-1:1600. Àíàëèç ñûâîðîòîê êðîâè áîëüíûõ èåðñèíèîçîì ñ ïîìîùüþ äàííîé òåñò-ñèñòåìû íà îñíîâå ïîðèíà ïîêàçàë, ÷òî óðîâåíü ñïåöèôè÷åñêèõ àíòèòåë çàðåãèñòðèðîâàí â ïðåäåëàõ 0,64-2,0 åäèíèö îïòè÷åñêîé ïëîòíîñòè ðàñòâîðà ôåðìåíòàòèâíîé ðåàêöèè, ÷òî äîñòîâåðíî îòëè÷àëîñü îò êîíòðîëüíûõ çíà÷åíèé (0,1-0,3 åäèíèö îïòè÷åñêîé ïëîòíîñòè ðàñòâîðà ðåàêöèè). Äë ïîäòâåðæäåíè ñïåöèôè÷íîñòè è ÷óâñòâèòåëüíîñòè ÈÔÀ íà îñíîâå ïîðèíà èç Y. enterocolitica íàìè áûëî îáñëåäîâàíî 657 ñûâîðîòîê êðîâè áîëüíûõ ñ õàðàêòåðíûìè êëèíè÷åñêèìè ïðèçíàêàìè èåðñèíèîçà (357 äåòåé â âîçðàñòå îò 1 ãîäà äî 14 ëåò è 200 ñûâîðîòîê êðîâè âçðîñëûõ ïàöèåíòîâ). Êðîìå òîãî, ó÷èòûâà ïîëèìîðôèçì èåðñèíèîçíîé èíôåêöèè, áûëè ïðîàíàëèçèðîâàíû 256 ñûâîðîòîê êðîâè áîëüíûõ ñ îñòðûìè êèøå÷íûìè èíôåêöè ìè, íå îáóñëîâëåííûõ Y. enterocolitica (ïñåâäîòóáåðêóëåç - 134, ñàëüìîíåëëåç - 54, îñòðûå âèðóñíûå ãåïàòèòû (À è Â) - 68). Âåðèôèêàöè óêàçàííûõ çàáîëåâàíèé ïðîâîäèëàñü ñ ó÷åòîì êëèíèêî-ýïèäåìèîëîãè÷åñêèõ, áàêòåðèîëîãè÷åñêèõ è/èëè ñïåöèôè÷åñêèõ ñåðîëîãè÷åñêèõ èññëåäîâàíèé. Êîíòðîëüíóþ ãðóïïó ñîñòàâèëè 86 ïðàêòè÷åñêè çäîðîâûõ ÷åëîâåê, ñîïîñòàâèìûõ ïî âîçðàñòó è ïîëó ñ îáñëåäóåìûìè áîëüíûìè.  ðåçóëüòàòå àíàëèçà áûëî îáíàðóæåíî, ÷òî ñûâîðîòêè êðîâè áîëüíûõ ïñåâäîòóáåðêóëåçîì è ñàëüìîíåëëåçîì â äèàãíîñòè÷åñêîì òèòðå (1:800) âçàèìîäåéñòâóþò ñ ïîðèíîì. Îäíàêî çíà÷åíè îïòè÷åñêîé ïëîòíîñòè ðàñòâîðà ðåàêöèè ýòèõ ñûâîðîòîê â 2-3 ðàçà ìåíüøå çíà÷åíè îïòè÷åñêîé ïëîòíîñòè ðàñòâîðà ïðè âçàèìîäåéñòâèè ïîðèíà ñ ñûâîðîòêàìè êðîâè áîëüíûõ èåðñèíèîçîì. Ïðè ðàçâåäåíèè ýòèõ ñûâîðîòîê 1:1600 àíòèòåëà ê ïîðèíó èç Y. enterocolitica áûëè îïðåäåëåíû íà óðîâíå îòðèöàòåëüíîãî êîíòðîë . Ïðè àíàëèçå ñûâîðîòîê êðîâè áîëüíûõ ãåïàòèòàìè àíòèòåë ê ïîðèíó èç Y. enterocolitica íå îáíàðóæåíî íè â îäíîì èç ñëó÷àåâ (ôèã.2). Ñëåäîâàòåëüíî, ðàçâåäåíèå ñûâîðîòîê êðîâè 1:1600 â áîëüøåé ñòåïåíè ñîîòâåòñòâóåò äèàãíîñòè÷åñêîìó òèòðó â ÈÔÀ íà îñíîâå ïîðèíà èç Y. enter ocolitica ïðè âåðèôèêàöèè êèøå÷íîãî èåðñèíèîçà. Ïîëó÷åííûå ðåçóëüòàòû ñâèäåòåëüñòâóåò î òîì, ÷òî ïðåäëàãàåìà òåñò-ñèñòåìà ïîçâîë åò ýôôåêòèâíî è äîñòîâåðíî îñóùåñòâë òü äèôôåðåíöèàëüíóþ äèàãíîñòèêó èåðñèíèîçà îò äðóãèõ îñòðûõ êèøå÷íûõ çàáîëåâàíèé. Ñëåäîâàòåëüíî, ÈÔÀ íà îñíîâå ïîðèíà èç Y. enterocolitica âë åòñ ÷óâñòâèòåëüíûì ìåòîäîì äèàãíîñòèêè èåðñèíèîçà, îáëàäàåò Ñòðàíèöà: 7 RU 2 339 952 C1 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 âûñîêîé ñïåöèôè÷íîñòüþ è íå äàåò ïåðåêðåñòíûõ ðåàêöèé ñ àíòèòåëàìè ê âîçáóäèòåë ì çàáîëåâàíèé, ñõîäíûõ ïî êëèíèêå ñ èåðñèíèîçîì. Äë îñóùåñòâëåíè äèôôåðåíöèàëüíîé äèàãíîñòèêè ïñåâäîòóáåðêóëåçà è êèøå÷íîãî èåðñèíèîçà ïîëèñòèðîëîâûé 96-ëóíî÷íûé ïëàíøåò («Dynatech», Øâåéöàðè èëè «Costar», ÑØÀ) ñåíñèáèëèçèðóþò àíòèãåíàìè, íà îäíó ïîëîâèíó ïëàíøåòà íàíîñ ò âèäîñïåöèôè÷åñêèé áåëîê-ïîðèí ÍÌ Y. pseudotuberculosis, à íà äðóãóþ ïîëîâèíó ïëàíøåòà - âèäîñïåöèôè÷åñêèé áåëîê-ïîðèí ÍÌ Y. enterocolitica è ïðîâîä ò àíàëèç ïî ñäàíäàðòíîé ìåòîäèêå. Àíàëèç ñîñòîèò èç ñëåäóþùèõ ýòàïîâ: 1) ïîñàäêà àíòèãåíîâ íà òâåðäûé íîñèòåëü (96 ëóíî÷íûé ïîëèñòèðîëîâûé ïëàíøåò) (êîíöåíòðàöè êàæäîãî àíòèãåíà - 5 ìêã/ìë â êàðáîíàò-áèêàðáîíàòíîì áóôåðå ñ ðÍ 9.0); 2) îòìûâêà ïëàíøåòà îò íåñâ çàâøèõñ êîìïîíåíòîâ 3-5 ðàç ïî 5 ìèí áóôåðîì "Â", ñîñòî ùèì èç ôîñôàòíî-ñîëåâîãî áóôåðà ðÍ 7,4 (áóôåð "À") + 0,05% òâèí-20 (èëè òâèí-80); 3) èíàêòèâàöè ïëàíøåòà (ïðåäîòâðàùåíèå íåñïåöèôè÷åñêîãî ñâ çûâàíè àíòèãåíà ñ àíòèòåëàìè) áóôåðîì "Ñ", ñîñòî ùèì èç ôîñôàòíî-ñîëåâîãî áóôåðà ðÍ 7,4 (áóôåð "À") + 0,1% òâèí-20; 4) íàíåñåíèå èññëåäóåìîé ñûâîðîòêè â äâóõ ïàðàëëåë õ ñ êàæäûì èç àíòèãåíîâ â äèàãíîñòè÷åñêèõ ðàçâåäåíè õ (1:800 äë ïîðèíà èç Y. pseudotuberculosis è 1:1600 äë ïîðèíà èç Y. enterocolitica) ãîòîâèòñ ñ èñïîëüçîâàíèåì áóôåðà "Â"; 5) îòìûâêà ïëàíøåòà; 6) íàíåñåíèå êîíúþãàòà (âòîðûå îáùåâèäîâûå àíòèòåëà, ìå÷åííûå ïåðîêñèäàçîé õðåíà): ðàáî÷åå ðàçâåäåíèå (1:1000) ãîòîâèòñ â áóôåðå "Ñ"; 7) îòìûâêà ïëàíøåòà; 8) íàíåñåíèå ñóáñòðàò-èíäèêàòîðíîãî ðàñòâîðà: 0.04% î-ôåíèëåíäèàìèí â öèòðàòíîôîñôàòíîì áóôåðå (ðÍ 5.0) + 10 ìêë 33% Í2Î2 (â ðàñ÷åòå íà 10 ìë áóôåðà); 9) íàíåñåíèå ñòîï-ðåàãåíòà: 0,5Ì ðàñòâîð ñåðíîé êèñëîòû (H2SO4) ãîòîâèòñ ïðè ðàçáàâëåíèè 1 ìë êîíöåíòðèðîâàííîé H2SO4 â 15 ìë äèñòèëëèðîâàííîé âîäû; 10) ðåãèñòðàöè ðåçóëüòàòîâ ðåàêöèè. Äë èññëåäîâàíè äèàãíîñòè÷åñêèõ êà÷åñòâ è ñïåöèôè÷íîñòè ïðåäëàãàåìîé ÈÔÀ òåñòñèñòåìû íà îñíîâå ïîðèíîâ èç ÍÌ Y. pseudotuberculosis è Y. enterocolitica îáñëåäîâàíî 194 áîëüíûõ â âîçðàñòå îò 1 ãîäà äî 14 ëåò; èç íèõ - 146 áîëüíûõ èåðñèíèîçîì è ïñåâäîòóáåðêóëåçîì, 48 áîëüíûõ - ñ ýòèîëîãè÷åñêè ðàñøèôðîâàííîé êèøå÷íîé èíôåêöèåé (ñàëüìîíåëëåç). Äèàãíîñòèêà óêàçàííûõ çàáîëåâàíèé ïðîâîäèëàñü ñ ó÷åòîì êëèíèêîýïèäåìèîëîãè÷åñêèõ, áàêòåðèîëîãè÷åñêèõ è/èëè ñïåöèôè÷åñêèõ ñåðîëîãè÷åñêèõ èññëåäîâàíèé. Êîíòðîëüíóþ ãðóïïó ñîñòàâèëè 27 ïðàêòè÷åñêè çäîðîâûõ ÷åëîâåê, ñîïîñòàâèìûõ ïî âîçðàñòó è ïîëó ñ îáñëåäóåìûìè áîëüíûìè. Ñ ïîìîùüþ ÈÔÀ íà îñíîâå ïîðèíîâ èç Y. pseudotuberculosis è Y. enterocolitica ïðè àíàëèçå ñûâîðîòîê êðîâè áîëüíûõ ñ ïåðâè÷íûì äèàãíîçîì «èåðñèíèîç» óñòàíîâëåíî, ÷òî ñûâîðîòêè êðîâè áîëüíûõ èåðñèíèîçàìè âçàèìîäåéñòâóþò â äèàãíîñòè÷åñêèõ òèòðàõ (1:800 äë ÏÑÒ è 1:1600 äë ÊÈ) ñ ïîðèíàìè èç îáîèõ ìèêðîîðãàíèçìîâ. Ïðè ñðàâíåíèè ñòàòèñòè÷åñêè äîñòîâåðíûõ ñðåäíèõ çíà÷åíèé îïòè÷åñêîé ïëîòíîñòè ðàñòâîðà ïîëîæèòåëüíûõ ðåàêöèé ñ èñïîëüçîâàíèåì îáîèõ àíòèãåíîâ [17] â 73% ñëó÷àåâ óñòàíîâëåíî, ÷òî çíà÷åíè îïòè÷åñêîé ïëîòíîñòè ðàñòâîðà â ðåàêöèè ñ ïîðèíîì èç Y. enterocolitica (ÎÏY.å.) â 2 ðàçà áîëüøå ïîäîáíîãî ïîêàçàòåë ðåàêöèè ñ ïîðèíîì èç Y. pseudotuberculosis (ÎÏY.ps.) (ÎÏY.å./ÎÏY.ps.>2,0), ÷òî ïîäòâåðæäàåò ýòèîëîãèþ çàáîëåâàíè , âûçâàííîãî Y. enterocolitica (ôèã.1à).  22,3% ñëó÷àåâ óñòàíîâëåíî, ÷òî çíà÷åíèå îïòè÷åñêîé ïëîòíîñòè ðàñòâîðà â ðåàêöèè ñûâîðîòîê êðîâè â äèàãíîñòè÷åñêîì òèòðå (1: 800) ñ ïîðèíîì èç Y. pseudotuberculosis â 2 ðàçà áîëüøå ïîäîáíîãî ïîêàçàòåë ðåàêöèè ïðè âçàèìîäåéñòâèè ýòèõ æå ñûâîðîòîê â äèàãíîñòè÷åñêîì òèòðå (1:1600) ñ ïîðèíîì èç Y. enterocolitica (ÎÏY.å./ÎÏY.ps.>2,0), ÷òî ïîäâåðæäàåò ýòèîëîãèþ ïñåâäîòóáåðêóëåçíîé èíôåêöèè (ôèã.1á).  4,7% ñëó÷àåâ ñ ïîìîùüþ ÈÔÀ òåñò-ñèñòåìû áûëà îáíàðóæåíà ñìåøàííà ôîðìà èåðñèíèîçíîé èíôåêöèè. Òàê, ïðè âçàèìîäåéñòâèè ñûâîðîòîê (â äèàãíîñòè÷åñêîì òèòðå 1:800) ñ ïîðèíîì èç Y. pseudotuberculosis çíà÷åíèå îïòè÷åñêîé Ñòðàíèöà: 8 RU 2 339 952 C1 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 ïëîòíîñòè ðàñòâîðà â ðåàêöèè áûëî áëèçêèì (èëè ðàâíûì) çíà÷åíèþ îïòè÷åñêîé ïëîòíîñòè ðàñòâîðà ðåàêöèè ïðè âçàèìîäåéñòâèè ýòèõ æå ñûâîðîòîê (â ðàçâåäåíèè 1:1600) ñ ïîðèíîì èç Y. enterocolitica (ÎÏY.ps.=ÎÏY.å.å) (ôèã.1â).  ñëó÷àå ñûâîðîòîê êðîâè áîëüíûõ ñàëüìîíåëëåçîì â äèàãíîñòè÷åñêèõ òèòðàõ (1:800 äë ÏÒÁ è 1:1600 äë ÊÈ) ïîëîæèòåëüíûõ ðåàêöèé â ÈÔÀ ñ ïîðèíàìè èåðñèíèé îáíàðóæåíî íå áûëî. Òàêèì îáðàçîì, ïðåäëàãàåìà ÈÔÀ òåñò-ñèñòåìà íà îñíîâå ïîðèíîâ ÍÌ Y. pseudotuberculosis è Y. enterocolitica âë åòñ âûñîêîñïåöèôè÷íûì, ýôôåêòèâíûì è ÷óâñòâèòåëüíûì ìåòîäîì, ïîçâîë þùèì äèôôåðåíöèðîâàòü èåðñèíèîç îò ïñåâäîòóáåðêóëåçà è âû âë òü ñìåøàííûå ôîðìû èåðñèíèîçíîé èíôåêöèè, îáóñëîâëåííûå îäíîâðåìåííî Y. pseudotuberculosis è Y. enterocolitica. Èçîáðåòåíèå èëëþñòðèðóåòñ ñëåäóþùèìè ÷åðòåæàìè: Íà ôèã.1 ïðåäñòàâëåíî îïðåäåëåíèå óðîâí ñïåöèôè÷åñêèõ àíòèòåë ê ïîðèíó èç Y. enterocolitica â ñûâîðîòêàõ êðîâè áîëüíûõ èåðñèíèîçîì ñ ïîäòâåðæäåííûì äèàãíîçîì (ð ä 1) è çäîðîâûõ ëþäåé (ð ä 2) ïðè ðàçëè÷íûõ ðàçâåäåíè õ (1:100, 1:200, 1:400, 1:800, 1: 1600, 1:3200 - òî÷êè 1, 2, 3, 4, 5, 6 ñîîòâåòñòâåííî) ñ ïîìîùüþ ÈÔÀ íà îñíîâå ïîðèíà èç Y. enterocolitica. Íà ôèã.2 ïðåäñòàâëåí àíàëèç ñûâîðîòîê êðîâè áîëüíûõ (ñàëüìîíåëëåçîì, èåðñèíèîçîì, ïñåâäîòóáåðêóëåçîì, ãåïàòèòàìè) è äîíîðîâ â ðàçâåäåíèè 1:800 (ð äû 1, 2, 3, 4, 5) è 1: 1600 (ð äû 7, 8, 9, 10, 11) ñ ïîìîùüþ ÈÔÀ òåñò-ñèñòåìû íà îñíîâå ïîðèíà èç Y. enterocolitica. Íà ôèã.3 (à, á, â) ïðåäñòàâëåíî îïðåäåëåíèå àíòèòåë ê ïîðèíàì ÍÌ Y. pseudotuberculosis è Ó enterocolitica â ñûâîðîòêàõ êðîâè áîëüíûõ ïñåâäîòóáåðêóëåçîì (ÏÑÒ) è êèøå÷íûì èåðñèíîçîì (ÊÈ) ñ ïîìîùüþ ÈÔÀ ñ ó÷åòîì ýòèîëîãèè çàáîëåâàíè : 1 ÏÑÒ (ðàçâåäåíèå ñûâîðîòêè 1:800), 2 - ÊÈ (ðàçâåäåíèå ñûâîðîòêè 1:1600): à) âåðèôèêàöè êèøå÷íîãî èåðñèíèîçà: ñðåäíåå çíà÷åíèå îïòè÷åñêîé ïëîòíîñòè ðàñòâîðà â ðåàêöèè ñ ïîðèíîì èç Ó enterocolitica (ÎÏY.å.) â 2 ðàçà áîëüøå ñðåäíåãî çíà÷åíè îïòè÷åñêîé ïëîòíîñòè ðàñòâîðà â ðåàêöèè ñ ïîðèíîì èç Y. pseudotuberculosis (ÎÏY.ps.) - ÎÏY.ps.>2,0; á) âåðèôèêàöè ïñåâäîòóáåðêóëåçà: ñðåäíåå çíà÷åíèå îïòè÷åñêîé ïëîòíîñòè ðàñòâîðà â ðåàêöèè ñ ïîðèíîì èç Y. pseudotuberculosis (ÎÏY.ps.) â 2 ðàçà áîëüøå ñðåäíåãî çíà÷åíè îïòè÷åñêîé ïëîòíîñòè ðàñòâîðà â ðåàêöèè ñ ïîðèíîì èç Y. enterocolitica (ÎÏY.å.) - ÎÏY.ð5./ ÎÏY.å.>2,0; â) âåðèôèêàöè ñìåøàííîé ôîðìû èåðñèíèîçíîé èíôåêöèè: ñðåäíåå çíà÷åíèå îïòè÷åñêîé ïëîòíîñòè ðàñòâîðà â ðåàêöèè ñ ïîðèíîì èç Y. enterocolitica (ÎÏY.å..) ðàâíî (èëè áëèçêî) ñðåäíåìó çíà÷åíèþ îïòè÷åñêîé ïëîòíîñòè ðàñòâîðà â ðåàêöèè ñ ïîðèíîì èç Y. pseudotuberculosis (ÎÏY.ps.) - ÎÏY.å.=ÎÏY.ps., à ÎÏY.å./ÎÏY.ps. è ÎÏY.ps./ÎÏY.å. áëèçêè èëè ðàâíû 1,0. Èçîáðåòåíèå èëëþñòðèðóåòñ ñëåäóþùèì ïðèìåðîì: Ïîëèñòèðîëîâûé ïëàíøåò (96-ëóíî÷íûé ïîëèñòèðîëîâûé ïëàíøåò ôèðìû «Dynatech», Øâåéöàðè èëè «Costar», ÑØÀ) ñåíñèáèëèçèðóþò àíòèãåíàìè, íà îäíó ïîëîâèíó ïëàíøåòà íàíîñ ò âèäîñïåöèôè÷åñêèé áåëîê-ïîðèí ÍÌ Y. pseudotuberculosis, a íà äðóãóþ ïîëîâèíó ïëàíøåòà - âèäîñïåöèôè÷åñêèé áåëîê-ïîðèí ÍÌ Y. enterocolitica â êîíöåíòðàöèè 5 ìêã/ìë â êàðáîíàò-áèêàðáîíàòíîì áóôåðå ñ ðÍ 9.0 êàæäîãî èç àíòèãåíîâ è âûäåðæèâàþò ïðè 37°Ñ â òå÷åíèå - 2 ÷àñ. Äàëåå ñîäåðæèìîå ëóíîê óäàë þò ñèëüíûì âñòð õèâàíèåì, è ïëàíøåò ïðîìûâàþò 3 ðàçà áóôåðîì "Â", ñîñòî ùèì èç 0,02 Ì ôîñôàòíî-ñîëåâîãî áóôåðà ðÍ 7,4 (áóôåð "À") + 0,05% òâèí-20. Áóôåð "À" ñîäåðæèò: 5,68 ã Na2HPO4 + 6,24 ã NaH2PO4 + 11,2 ã NaCl + 2 ë Í2O. Ïðè êàæäîé ñòàäèè ïðîìûâêè ïëàíøåòà íåîáõîäèìî òùàòåëüíî óäàë òü îñòàòêè âëàãè èç ëóíîê ïîñòóêèâàíèåì ïåðåâåðíóòîãî ïëàíøåòà î ôèëüòðîâàëüíóþ áóìàãó. Çàòåì â êàæäóþ ëóíêó ïëàíøåòà âíîñ ò ïî 300 ìêë áóôåðà "Ñ", ñîñòî ùåãî èç ôîñôàòíî-ñîëåâîãî áóôåðà ðÍ 7,4 (áóôåð "À") + 0,1% òâèí-20, è ïëàíøåò èíàêòèâèðóþò â òå÷åíèå 16-18 ÷àñîâ ïðè 4°Ñ. Ïîñëå óäàëåíè èíàêòèâèðóþùåãî ðàñòâîðà, â ëóíêè ïëàíøåòà ïî äâà ïîâòîðà äë êàæäîãî àíòèãåíà âíîñ ò ïî 100 ìêë èññëåäóåìîé ñûâîðîòêè êðîâè, ïîëîæèòåëüíûõ è îòðèöàòåëüíûõ êîíòðîëåé â äèàãíîñòè÷åñêèõ òèòðàõ, Ñòðàíèöà: 9 RU 2 339 952 C1 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 îïðåäåëåííûõ äë êàæäîãî àíòèãåíà: 1:800 - äë ïîðèíà èç Y, pseudotuberculosis è 1: 1600 - äë ïîðèíà èç Y. enterocolitica. Èññëåäóåìûå ñûâîðîòêè êðîâè áîëüíûõ, ïîëîæèòåëüíûå è îòðèöàòåëüíûå êîíòðîëè ðàçâîä ò áóôåðîì "Â". Ïëàíøåò èíêóáèðóþò 2 ÷ ïðè 37°Ñ, çàòåì îòìûâàþò 3-5 ðàç ïî 5 ìèí îò íåñâ çàâøèõñ êîìïîíåíòîâ áóôåðîì "Â", òùàòåëüíî óäàë îñòàòêè âëàãè èç ëóíîê. Çàòåì â êàæäóþ ëóíêó ïëàíøåòà âíîñ ò ïî 100 ìêë êîíúþãàòà (ìå÷åííûå ôåðìåíòîì âòîðûå îáùåâèäîâûå àíòèòåëà) â ðàáî÷åì ðàçâåäåíèè (1:1000) â áóôåðå "Ñ" è èíêóáèðóþò 1,5 ÷ ïðè 37°Ñ, çàòåì ïëàíøåò îòìûâàþò, êàê îïèñàíî âûøå, äîïîëíèòåëüíî îïîëîñíóâ ïëàíøåò äèñòèëëèðîâàííîé âîäîé.  ëóíêè ïëàíøåòà âíîñ ò ïî 70 ìêë ñóáñòðàòèíäèêàòîðíîãî ðàñòâîðà, ñîäåðæàùåãî 0,04% îðòî-ôåíèëåíäèàìèíà â öèòðàòíîôîñôàòíîì áóôåðå (ðÍ 5,0) è 10 ìêë 33% H2O2 â ðàñ÷åòå íà 10 ìë èñïîëüçóåìîãî áóôåðà. Öèòðàòíî-ôîñôàòíûé áóôåð ãîòîâ ò ïðè ñìåøèâàíèè 49,3 ìë 0,2 Ì äâóçàìåùåííîãî ôîñôîðíîêèñëîãî íàòðè (1,42 ã íà 50 ìë H2O) è 50,7 ìë 0,1 Ì ëèìîííîêèñëîãî íàòðè (2,1 ã íà 100 ìë Í2O). Ïëàíøåò âûäåðæèâàþò 15-20 ìèí â òåìíîòå (äë ðàçâèòè öâåòíîé ðåàêöèè) ïðè êîìíàòíîé òåìïåðàòóðå, çàòåì äîáàâë þò â êàæäóþ ëóíêó ïî 30 ìêë 0,5 Ì H2SO4 äë îñòàíîâêè ðåàêöèè. Ðåçóëüòàòû ðåàêöèè ó÷èòûâàþò ñ ïîìîùüþ ñïåêòðîôîòîìåòðà, èçìåð îïòè÷åñêóþ ïëîòíîñòü ðàñòâîðà ïðè äëèíå âîëíû ðàâíîé 492 íì. Ïðè ïîñòàíîâêå ÈÔÀ íà ïëàíøåòå îäíîâðåìåííî èçìåð þò îïòè÷åñêóþ ïëîòíîñòü ðàñòâîðà â ëóíêàõ, ñîäåðæàùèõ êîíòðîëè: - êîíòðîëü ïîëîæèòåëüíûé (êîíòðîëè ñïåöèôè÷åñêîãî ñâ çûâàíè ñ êàæäûì èç àíòèãåíîâ â äâóõ ïàðàëëåë õ) - 100 ìêë ñûâîðîòêè êðîâè áîëüíîãî èðñèíèîçîì è 100 ìêë ñûâîðîòêè êðîâè áîëüíîãî ïñåâäîòóáåðêóëåçîì (ñûâîðîòêè ñ áàêòåðèîëîãè÷åñêè ïîäòâåðæäåííûì äèàãíîçîì) + 100 ìêë êîíúþãàòà + 70 ìêë ñóáñòðàò-èíäèêàòîðíîãî ðàñòâîðà + 30 ìêë H2SO4; - êîíòðîëü îòðèöàòåëüíûé (ñ êàæäûì èç àíòèãåíîâ) - 100 ìêë ñûâîðîòêè êðîâè çäîðîâîãî äîíîðà + 100 ìêë êîíúþãàòà + 70 ìêë ñóáñòðàò-èíäèêàòîðíîãî ðàñòâîðà + 30 ìêë H2SO4; - êîíòðîëü íåñïåöèôè÷åñêîãî ñâ çûâàíè - 100 ìêë áóôåðíîãî ðàñòâîðà + 100 ìêë êîíúþãàòà + 70 ìêë ñóáñòðàò-èíäèêàòîðíîãî ðàñòâîðà + 30 ìêë H2SO4. Ðåçóëüòàò ñ÷èòàþò ïîëîæèòåëüíûì, åñëè âåëè÷èíà, ñîîòâåòñòâóþùà îòíîøåíèþ çíà÷åíè îïòè÷åñêîé ïëîòíîñòè ðàñòâîðà â ëóíêàõ ñî ñïåöèôè÷åñêîé ñûâîðîòêîé ê çíà÷åíèþ îïòè÷åñêîé ïëîòíîñòè ðàñòâîðà â ëóíêàõ ñ íîðìàëüíîé ñûâîðîòêîé äë êàæäîãî àíòèãåíà áîëüøå èëè ðàâíà 2,1 [15]. Âåðèôèêàöè èåðñèíèîçà ñ ó÷åòîì ýòèîëîãèè âîçáóäèòåë ïðè ïîëîæèòåëüíûõ çíà÷åíè õ ðåàêöèè îñóùåñòâë åòñ ïóòåì îïðåäåëåíè âåëè÷èí, ðàâíûõ îòíîøåíèþ çíà÷åíèé îïòè÷åñêîé ïëîòíîñòè ðàñòâîðà ïðè âçàèìîäåéñòâèè îäíîé è òîé æå ñûâîðîòêè êðîâè áîëüíîãî ñ àíòèãåíîì èç Y. pseudotuberculosis (ÎÏY.ps.) è ñ àíòèãåíîì èç Y. enterocolitica (ÎÏY.å.) - ÎÏY.ps./ÎÏY.å. èëè, íàîáîðîò, ÎÏY.å./ÎÏY.ps..  ñëó÷àå, åñëè ýòà âåëè÷èíà áîëüøå èëè ðàâíà 2,0 (ÎÏY.ps./ÎÏY.å.≥2,0), òî ïîäòâåðæäàåòñ ïñåâäîòóáåðêóëåçíà ýòèîëîãè çàáîëåâàíè , è, íàîáîðîò, åñëè ÎÏY.å./ÎÏY.ps.≥2,0, òî ýòèîëîãè÷åñêèì âîçáóäèòåëåì èåðñèíèîçíîé èíôåêöèè âë åòñ Y. enterocolitica.  ñëó÷àå, åñëè çíà÷åíè ÎÏY.ps. è ÎÏY.å. áëèçêèå èëè ðàâíûå è çíà÷åíè îòíîøåíèé ÎÏY.ps./ÎÏY.å. è ÎÏY.å./ÎÏY.ps. ñîîòâåòñòâåííî áëèçêè èëè ðàâíû 1.0, òî èåðñèíèîçíà èíôåêöè îáóñëîâëåíà îäíîâðåìåííî Y. pseudotuberculosis è Y. enterocolitica. Äèàãíîñòè÷åñêèé íàáîð íà èåðñèíèîçû (ïñåâäîòóáåðêóëåç è êèøå÷íûé èåðñèíèîç) äë ïðîâåäåíè çà âë åìîãî ñïîñîáà ñ ïîìîùüþ èììóíîôåðìåíòíîãî àíàëèçà (ÈÔÀ) íà îñíîâå âèäîñïåöèôè÷åñêèõ àíòèãåíîâ - ïîðèíà íàðóæíîé ìåìáðàíû (ÍÌ) Y. pseudotuberculosis è ïîðèíà ÍÌ Y. enterocolitica ïðåäíàçíà÷åí äë îäíîìîìåíòíîãî âû âëåíè ñïåöèôè÷åñêèõ àíòèòåë ê ïîðèíàì ÍÌ Y. pseudotuberculosis è Y. enterocolitica èç îäíîé ïðîáû ñûâîðîòêè êðîâè ÷åëîâåêà è ìîæåò èñïîëüçîâàòüñ â êëèíè÷åñêèõ è ýïèäåìèîëîãè÷åñêèõ èññëåäîâàíè õ, à òàêæå ñëóæáîé êðîâè. Íàáîð ñîäåðæèò âñå íåîáõîäèìûå äë ïðîâåäåíè ÈÔÀ ðåàãåíòû, êðîìå äèñòèëëèðîâàííîé âîäû. Ñòðàíèöà: 10 RU 2 339 952 C1 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 Ñîñòàâ íàáîðà: 1) ïëàíøåò ïîëèñòèðîëîâûé 96-ëóíî÷íûé (ôèðìà «Dynatech» Øâåéöàðè èëè «Costar» ÑØÀ) ñ èììîáèëèçîâàííûìè àíòèãåíàìè (ïîðèíû) èç Y. pseudotuberculosis è Y. enterocolitica â ãåðìåòè÷íî çàêðûòîì ïàêåòå - 1 øò.; 2) ôîñôàòíî-ñîëåâîé áóôåð (êîíöåíòðèðîâàííûé ðàñòâîð áóôåðà äë èíàêòèâàöèè è îòìûâêè ïëàíøåòà äë ðàçâåäåíè ñûâîðîòîê è êîíúþãàòà) - 2 ôëàêîíà. 3) êîíúþãàò (ôðàêöè îáùåâèäîâûõ àíòèòåë ïðîòèâ ñóììàðíîé ôðàêöèè èììóíîãëîáóëèíîâ ÷åëîâåêà, ìå÷åííûõ ïåðîêñèäàçîé õðåíà) - 1 ôëàêîí; 4) ñóáñòðàò (îðòî-ôåíèëåíäèàìèí, 4 ìã) - 1 ôëàêîí; 5) öèòðàòíî-ôîñôàòíûé áóôåð - 1 ôëàêîí; 6) îòðèöàòåëüíûå è ïîëîæèòåëüíûå êîíòðîëè (ëèîôèëüíî âûñóøåííûå îáðàçöû ñûâîðîòîê êðîâè áîëüíûõ ñ ïîäòâåðæäåííûì äèàãíîçîì «ïñåâäîòóáåðêóëåç» è «êèøå÷íûé èåðñèíèîç», ñûâîðîòêè êðîâè çäîðîâûõ äîíîðîâ) - 4 ôëàêîíà; 7) äåòåðãåíò (òâèí-20 èëè òâèí-80) - 1 ôëàêîí; 8) ïåðåêèñü âîäîðîäà (Í2O2, êîíöåíòðèðîâàííûé ðàñòâîð) - 1 ôëàêîí; 9) ñòîï-ðåàãåíò (ðàñòâîð 0,5 Ì ñåðíîé êèñëîòû, Í2SO4) - 1 ôëàêîí; Íàáîð ðàññ÷èòàí íà 96 îïðåäåëåíèé, âêëþ÷à êîíòðîëè. Ïðèãîòîâëåíèå ðåàãåíòîâ äë ïðîâåäåíè àíàëèçà: 1. Áóôåð "À": ñîäåðæèìîå 1-ãî ôëàêîíà ñ êîíöåíòðàòîì ôîñôàòíî-ñîëåâîãî áóôåðà (ðÍ 7,4) (ñìåñü ñîëåé: 0,02 Ì íàòðè ôîñôîðíîêèñëîãî äâóçàìåùåííîãî 12-âîäíîãî, 0,02 Ì íàòðè ôîñôîðíîêèñëîãî îäíîçàìåùåííîãî 2-âîäíîãî è 0,1 Ì íàòðè õëîðèñòîãî) íåîáõîäèìî ðàñòâîðèòü â 1 ë äèñòèëëèðîâàííîé âîäû. 2. Áóôåð "Â" äë îòìûâêè ïëàíøåòà è ðàçâåäåíè èññëåäóåìûõ ñûâîðîòîê êðîâè áîëüíûõ, ïîëîæèòåëüíîãî è îòðèöàòåëüíîãî êîíòðîëåé: Ê 1 ë áóôåðà "À" äîáàâèòü 0,5 ìë òâèí-20 (èëè òâèí-80) è ïîëó÷àþò áóôåð "Â". Ïðåäâàðèòåëüíîå ðàçâåäåíèå ñûâîðîòîê: èññëåäóåìûå ñûâîðîòêè êðîâè áîëüíûõ, êîíòðîëüíûå (ïîëîæèòåëüíûå è îòðèöàòåëüíûå) ñûâîðîòêè êðîâè ðàçâîä ò áóôåðîì "Â" äî ðàáî÷åãî ðàçâåäåíè . 3. Áóôåð "Ñ" äë èíàêòèâàöèè ïëàíøåòà è ðàçâåäåíè êîíúþãàòà: ê 200 ìë áóôåðà "À" äîáàâë þò 0,2 ìë òâèí-20 (èëè òâèí-80) è ïîëó÷àþò áóôåð "Ñ". 4. Ñóáñòðàòíà ñìåñü ãîòîâèòñ íåïîñðåäñòâåííî ïåðåä óïîòðåáëåíèåì. Äë ïðîâåäåíè ðåàêöèè ñîäåðæèìîå ôëàêîíà ñ ñóáñòðàòîì (4 ìã îðòî-ôåíèëåíäèàìèíà) ðàñòâîð þò â 10 ìë öèòðàòíî-ôîñôàòíîãî áóôåðà (ãîòîâîãî ê óïîòðåáëåíèþ) è äîáàâë þò 10 ìêë 33% Í2Î2. 5. Ñòîï-ðåàãåíò (ðàñòâîð 0,5 Ì H2SO4) ãîòîâ ê èñïîëüçîâàíèþ. Äë ïîâûøåíè äîñòîâåðíîñòè ðåçóëüòàòîâ àíàëèçà èññëåäóåìûå è êîíòðîëüíûå îáðàçöû ñûâîðîòêè êðîâè ðåêîìåíäóþòñ ñòàâèòü äë êàæäîãî àíòèãåíà â äóáëèêàòàõ, èñïîëüçó äë êàæäîãî îáðàçöà ñûâîðîòêè äâå ëóíêè. Ïðîâåäåíèå èììóíîôåðìåíòíîãî àíàëèçà ñ ïîìîùüþ ïðåäëàãàåìîãî äèàãíîñòè÷åñêîãî íàáîðà: Ïðåäâàðèòåëüíî ãîòîâûé ïëàíøåò ñ èììîáèëèçîâàííûìè àíòèãåíàìè (ïîðèí èç Y. pseudotuberculosis è ïîðèí èç Y. enterocolitica, êàæäûé èç êîòîðûõ íàíåñåí íà ïîëîâèíó ïëàíøåòà) òðåáóåòñ ïðîèíàêòèâèðîâàòü. 1). Èíàêòèâàöè ïëàíøåòà (ïðåäîòâðàùåíèå íåñïåöèôè÷åñêîãî ñâ çûâàíè àíòèãåíà ñ àíòèòåëàìè): âíîñ ò âî âñå ëóíêè ïî 300 ìêë áóôåðà "Ñ" è èíêóáèðóþò â òå÷åíèå íî÷è (16 ÷ - 18 ÷) ïðè 6-8°Ñ. Áóôåð "Ñ" ñîñòîèò èç ôîñôàòíî-ñîëåâîãî áóôåðà ñ ðÍ 7,4 (áóôåð "À") +0,1% òâèí-20 (èëè òâèí-80). Äë ïðèãîòîâëåíè áóôåðà "À" íåîáõîäèìî ðàñòâîðèòü ñîäåðæèìîå 1-ãî ôëàêîíà (ñìåñü ñîëåé: 0,02 Ì íàòðè ôîñôîðíîêèñëîãî äâóçàìåùåííîãî 12-âîäíîãî, 0,02 Ì íàòðè ôîñôîðíîêèñëîãî îäíîçàìåùåííîãî 2-âîäíîãî è 0,1 Ì íàòðè õëîðèñòîãî) â 1 ë äèñòèëëèðîâàííîé âîäû. Äàëåå ê 200 ìë áóôåðà "À" äîáàâë þò 0,2 ìë òâèí-20 (èëè òâèí-80) è ïîëó÷àþò áóôåð "Ñ" äë èíàêòèâàöèè ïëàíøåòà è äë ðàçâåäåíè êîíúþãàòà. Ðàñòâîð íå õðàí ò. 2). Îòìûâêà ïëàíøåòà: ïîñëå èíàêòèâàöèè óäàë þò ñîäåðæèìîå ëóíîê äåêàíòèðîâàíèåì Ñòðàíèöà: 11 RU 2 339 952 C1 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 è ïðîìûâàþò èõ 3-5 ðàç ïî 5 ìèí îò íåñâ çàâøèõñ êîìïîíåíòîâ áóôåðîì "Â". Äë ïðèãîòîâëåíè áóôåðà "Â" ê 1 ë áóôåðà "À" äîáàâë þò 0,5 ìë òâèí-20 (èëè òâèí-80) è ïîëó÷àþò ðàñòâîð äë îòìûâàíè ïëàíøåòà è ðàçâåäåíè ñûâîðîòîê. Ïðè êàæäîé ïðîìûâêå âî âñå ëóíêè äîáàâë þò ïî 300 ìêë ïðîìûâî÷íîãî áóôåðà "Â". Ïðè äåêàíòèðîâàíèè íåîáõîäèìî òùàòåëüíî óäàë òü îñòàòêè æèäêîñòè èç ëóíîê ïîñòóêèâàíèåì ïëàíøåòà â ïåðåâåðíóòîì ïîëîæåíèè ïî ôèëüòðîâàëüíîé áóìàãå. 3). Íàíåñåíèå ïî 100 ìêë èññëåäóåìîé ñûâîðîòêè, ïîëîæèòåëüíîãî è îòðèöàòåëüíîãî êîíòðîëåé äë êàæäîãî àíòèãåíà â äâóõ ïàðàëëåë õ: ñûâîðîòêè íàíîñ ò â äèàãíîñòè÷åñêèõ òèòðàõ, îïðåäåëåííûõ äë êàæäîãî àíòèãåíà (1:800 äë ïîðèíà èç Y. pseudotuberculosis è 1:1600 äë ïîðèíà èç Y. enterocolitica), â áóôåðå "Â", êàê îïèñàíî âûøå. 4). Èíêóáèðîâàíèå ïëàíøåòà ïðè 37°Ñ â òå÷åíèå 2 ÷àñîâ. 5). Ïî îêîí÷àíèè èíêóáàöèè ñîäåðæèìîå ëóíîê óäàë þò è ïëàíøåò ïðîìûâàþò òùàòåëüíî 3 ðàçà áóôåðîì "Â". 6). Âíîñ ò âî âñå ëóíêè ïî 100 ìêë ðàñòâîðà êîíúþãàòà â ðàáî÷åì ðàçâåäåíèè: ðàáî÷åå ðàçâåäåíèå (1:1000) ãîòîâèòñ ïðè ðàñòâîðåíèè ñîäåðæèìîãî ôëàêîíà (ñóõîãî ïðåïàðàòà) â áóôåðå "Ñ". 7). Èíêóáèðîâàíèå ïëàíøåòà ïðè 37°Ñ â òå÷åíèå 1,5 ÷àñà. 8). Ïî îêîí÷àíèè èíêóáàöèè èç ëóíîê óäàë þò ñîäåðæèìîå è ïëàíøåò ïðîìûâàþò, êàê îïèñàíî âûøå. 9). Íàíåñåíèå ñóáñòðàòíîé ñìåñè. Ñóáñòðàò-èíäèêàòîðíûé ðàñòâîð ãîòîâèòñ íåïîñðåäñòâåííî ïåðåä óïîòðåáëåíèåì: ñóõîé ïðåïàðàò îðòî-ôåíèëåíäèàìèíà (4 ìã, 1 ôëàêîí) ðàñòâîð þò â 10 ìë 0,05 Ì öèòðàòíî-ôîñôàòíîãî áóôåðà (ðÍ 5.0) è äîáàâë þò 10 ìêë 33% Í2Î2. Äë ïðèãîòîâëåíè ðàñòâîðà öèòðàòíî-ôîñôàòíîãî áóôåðà ñîäåðæèìîå ôëàêîíà (ñìåñü ñîëåé) ðàñòâîð þò â 10 ìë äèñòèëëèðîâàííîé âîäû. Ïåðåä íàíåñåíèåì ñóáñòðàò-èíäèêàòîðíîãî ðàñòâîðà ïëàíøåò îïîëàñêèâàþò äèñòèëëèðîâàííîé âîäîé è âûñóøèâàþò. 10). Âî âñå ëóíêè ïëàíøåòà âíîñ ò ïî 70 ìêë ñóáñòðàòíîé ñìåñè è èíêóáèðóþò â òåìíîòå â òå÷åíèå 15-20 ìèí ïðè êîìíàòíîé òåìïåðàòóðå. 11). Âî âñå ëóíêè â òîé ïîñëåäîâàòåëüíîñòè, êàê è ñóáñòðàòíóþ ñìåñü, äîáàâë þò ïî 30 ìêë ñòîï-ðåàãåíòà äë îñòàíîâêè ôåðìåíòíîé ðåàêöèè. 12). Ðåãèñòðàöè ðåçóëüòàòîâ ðåàêöèè: èçìåð þò îïòè÷åñêóþ ïëîòíîñòü ðàñòâîðà ôåðìåíòàòèâíîé ðåàêöèè â ëóíêàõ ïðè äëèíå âîëíû ðàâíîé 492 íì. Ðåçóëüòàò ñ÷èòàþò ïîëîæèòåëüíûì, åñëè âåëè÷èíà, ñîîòâåòñòâóþùà îòíîøåíèþ çíà÷åíè îïòè÷åñêîé ïëîòíîñòè ðàñòâîðà â ëóíêàõ ñî ñïåöèôè÷åñêîé ñûâîðîòêîé ê çíà÷åíèþ îïòè÷åñêîé ïëîòíîñòè ðàñòâîðà â ëóíêàõ ñ íîðìàëüíîé ñûâîðîòêîé äë êàæäîãî àíòèãåíà áîëüøå èëè ðàâíà 2,1 [15]. Âåðèôèêàöè èåðñèíèîçà ñ ó÷åòîì ýòèîëîãèè âîçáóäèòåë ïðè ïîëîæèòåëüíûõ çíà÷åíè õ ðåàêöèè îñóùåñòâë åòñ ïóòåì îïðåäåëåíè âåëè÷èí, ðàâíûõ îòíîøåíèþ çíà÷åíèé îïòè÷åñêîé ïëîòíîñòè ðàñòâîðà ïðè âçàèìîäåéñòâèè îäíîé è òîé æå ñûâîðîòêè êðîâè áîëüíîãî ñ àíòèãåíîì èç Y. pseudotuberculosis (ÎÏY.ps.) è ñ àíòèãåíîì èç Y. enterocolitica (ÎÏY.å.) - ÎÏY.ps./ÎÏY.å. èëè, íàîáîðîò, ÎÏY.å./ÎÏY.ps..  ñëó÷àå, åñëè âåëè÷èíà îòíîøåíè ÎÏY.ps./ÎÏY.å. áîëüøå èëè ðàâíà 2,0 (ïðè ÎÏY.ps./ ÎÏY.å.≥2,0), òî ïîäòâåðæäàåòñ ïñåâäîòóáåðêóëåçíà ýòèîëîãè çàáîëåâàíè , è, íàîáîðîò, åñëè ÎÏY.å./ÎÏY.ps.≥2,0, òî ýòèîëîãè÷åñêèì âîçáóäèòåëåì èåðñèíèîçíîé èíôåêöèè âë åòñ Y. enterocolitica.  ñëó÷àå, åñëè çíà÷åíè ÎÏY.ps. è ÎÏY.å. áëèçêèå èëè ðàâíûå è çíà÷åíè îòíîøåíèé ÎÏY.ps./ÎÏY.å. è ÎÏY.å./ÎÏY.ps. ñîîòâåòñòâåííî áëèçêè èëè ðàâíû 1.0, òî èåðñèíèîçíà èíôåêöè îáóñëîâëåíà îäíîâðåìåííî Y. enterocolitica è Y. pseudotuberculosis. ËÈÒÅÐÀÒÓÐÀ 1. Ó÷àéêèí Â.Ô., Ãîðäååö À.Â., Áåíèîâà Ñ.Í. Èåðñèíèîçû ó äåòåé. 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Ñïîñîá äèôôåðåíöèàëüíîé äèàãíîñòèêè ïñåâäîòóáåðêóëåçà è êèøå÷íîãî èåðñèíèîçà, âêëþ÷àþùèé îïðåäåëåíèå ñïåöèôè÷åñêèõ àíòèòåë ê âîçáóäèòåë ì çàáîëåâàíèé â ñûâîðîòêå êðîâè áîëüíîãî ìåòîäîì òâåðäîôàçíîãî èììóíîôåðìåíòíîãî àíàëèçà, ïðåäóñìàòðèâàþùåãî íàíåñåíèå àíòèãåíîâ íà ïëàíøåò, îòëè÷àþùèéñ òåì, ÷òî íà îäíó ïîëîâèíó ïëàíøåòà íàíîñ ò âèäîñïåöèôè÷åñêèé áåëîê ïîðèí íàðóæíîé ìåìáðàíû Yersinia pseudotuberculosis, çà äèàãíîñòè÷åñêèé òèòð ïðèíèìàþò ðàçâåäåíèå ñûâîðîòêè 1:800, à íà äðóãóþ ïîëîâèíó ïëàíøåòà íàíîñ ò âèäîñïåöèôè÷åñêèé áåëîê ïîðèí íàðóæíîé ìåìáðàíû Yersinia enterocolitica, çà äèàãíîñòè÷åñêèé òèòð ïðèíèìàþò ðàçâåäåíèå ñûâîðîòêè 1:1600 è âåðèôèêàöèþ ïñåâäîòóáåðêóëåçà îò êèøå÷íîãî èåðñèíèîçà îñóùåñòâë þò ñðàâíåíèåì çíà÷åíèé îïòè÷åñêîé ïëîòíîñòè ðàñòâîðà â ðåàêöèè ñûâîðîòêè êðîâè áîëüíîãî ñ àíòèãåíàìè èç Y. pseudotuberculosis (ÎÏY.ps.) è èç Y. enterocolitica (ÎÏY.å.), ïðè âåëè÷èíå îòíîøåíè ÎÏY.ps./ÎÏY.å. áîëüøå èëè ðàâíîé 2,0 äèàãíîñòèðóþò Ñòðàíèöà: 13 CL RU 2 339 952 C1 5 ïñåâäîòóáåðêóëåç, ïðè âåëè÷èíå îòíîøåíè ÎÏY.å./ÎÏY.ps. áîëüøå èëè ðàâíîé 2,0 äèàãíîñòèðóþò êèøå÷íûé èåðñèíèîç, ïðè âåëè÷èíàõ îòíîøåíèé ÎÏY.ps./ÎÏY.å. è ÎÏY.å./ÎÏY.ps. ðàâíûõ 1,0 äèàãíîñòèðóþò ñìåøàííóþ ôîðìó èåðñèíèîçíîé èíôåêöèè. 2. Äèàãíîñòè÷åñêèé íàáîð íà ïñåâäîòóáåðêóëåç è êèøå÷íûé èåðñèíèîç õàðàêòåðèçóåòñ òåì, ÷òî îí ñîäåðæèò ïëàíøåò ñ èììîáèëèçîâàííûìè àíòèãåíàìè - âèäîñïåöèôè÷åñêèìè áåëêàìè-ïîðèíàìè íàðóæíîé ìåìáðàíû Yersinia pseudotuberculosis è Yersinia enterocolitica, îáðàçöû êîíòðîëüíûõ (ïîëîæèòåëüíîé è îòðèöàòåëüíîé) ñûâîðîòîê êðîâè è âòîðûõ îáùåâèäîâûõ àíòèòåë, åìêîñòè ñ ãîòîâûìè äë óïîòðåáëåíè èíàêòèâèðóþùèì è ñòîï-ðåàãåíòàìè, ñóáñòðàòîì è áóôåðíûìè ñèñòåìàìè. 10 15 20 25 30 35 40 45 50 Ñòðàíèöà: 14 RU 2 339 952 C1 Ñòðàíèöà: 15 DR RU 2 339 952 C1 Ñòðàíèöà: 16