Промежуточный отчет по Соглашению о предоставлении субсидии Минобрнауки России от 17 июня 2014 г. № 14.575.21.0016 (Доп. соглашение № 1 от 13 мая 2015 г.). Получатель субсидии БФУ им. И. Канта. Тема: Разработка тест-системы на основе технологии секвенирования следующего поколения для молекулярной диагностики митохондриальных патологий. Руководитель: Мазунин И.О. Объектом исследования являются чувствительность метода пиросеквенирования в сравнении с другими «классическими» методами детекции патогенных мутаций в мтДНК, ассоциированных с широким спектром нейромышечных и нейродегенеративных патологий. Цель работы - разработка тест-системы на основе пиросеквенирования не менее чем для четырех основных мутаций митохондриальной ДНК (m.11778G>A, m.8993T>G m.3243A>G m.8344A>G); разработка лабораторного регламента изготовления тест-системы на основе реакции пиросеквенирования для определения уровня гетероплазмии минимум четырех патогенных мутаций митохондриальной Изготовление ДНК экспериментальных (m.11778G>A, образцов m.8993T>G, тест-системы; m.3243A>G, разработка m.8344A>G); протокола оценки абсолютного количества мутантных митохондриальных ДНК с использованием технологии пиросеквенирования; Разработка протокола и проведение сопоставления метода пиросеквенирования с другими методами (анализ полиморфизмов по длине рестрикционных фрагментов, полимеразная цепная реакция в реальном времени с аллель-специфичными гидролизуемыми пробами, и «классическое» капиллярное секвенирование по Сенгеру) измерения количества мутантных вариантов митохондриальной ДНК. В процессе работы был разработан лабораторный регламент изготовления тест-системы. Был разработан протокол оценки абсолютного количества мутантных митохондриальных ДНК, используя технологию пиросеквенирования. Был разработан протокол и получены результаты сопоставления метода пиросеквенирования с другими методами. В результате исследования была разработана тест-система на основе пиросеквенирования для детекции и количественного определения уровня гетероплазмии основных патогенных мутаций митохондриальной ДНК. Область применения - последующие ОКР по теме: «Разработка тест-системы на основе реакции пиросеквенирования для молекулярной диагностики митохондриальных патологий».