Промежуточный отчет по Соглашению о предоставлении

реклама
Промежуточный отчет по Соглашению о предоставлении субсидии Минобрнауки
России от 17 июня 2014 г. № 14.575.21.0016 (Доп. соглашение № 1 от 13 мая 2015 г.).
Получатель субсидии БФУ им. И. Канта. Тема: Разработка тест-системы на основе
технологии секвенирования следующего поколения для молекулярной диагностики
митохондриальных
патологий.
Руководитель:
Мазунин
И.О.
Объектом исследования являются чувствительность метода пиросеквенирования в
сравнении с другими «классическими» методами детекции патогенных мутаций в мтДНК,
ассоциированных с широким спектром нейромышечных и нейродегенеративных патологий.
Цель работы - разработка тест-системы на основе пиросеквенирования не менее чем для
четырех основных мутаций митохондриальной ДНК (m.11778G>A, m.8993T>G m.3243A>G
m.8344A>G); разработка лабораторного регламента изготовления тест-системы на основе реакции
пиросеквенирования для определения уровня гетероплазмии минимум четырех патогенных
мутаций
митохондриальной
Изготовление
ДНК
экспериментальных
(m.11778G>A,
образцов
m.8993T>G,
тест-системы;
m.3243A>G,
разработка
m.8344A>G);
протокола
оценки
абсолютного количества мутантных митохондриальных ДНК с использованием технологии
пиросеквенирования;
Разработка
протокола
и
проведение
сопоставления
метода
пиросеквенирования с другими методами (анализ полиморфизмов по длине рестрикционных
фрагментов, полимеразная цепная реакция в реальном времени с аллель-специфичными
гидролизуемыми пробами, и «классическое» капиллярное секвенирование по Сенгеру) измерения
количества мутантных вариантов митохондриальной ДНК.
В процессе работы был разработан лабораторный регламент изготовления тест-системы.
Был разработан протокол оценки абсолютного количества мутантных митохондриальных ДНК,
используя технологию пиросеквенирования. Был разработан протокол и получены результаты
сопоставления метода пиросеквенирования с другими методами.
В результате исследования была разработана тест-система на основе пиросеквенирования
для детекции и количественного определения уровня гетероплазмии основных патогенных
мутаций митохондриальной ДНК.
Область применения - последующие ОКР по теме: «Разработка тест-системы на основе
реакции пиросеквенирования для молекулярной диагностики митохондриальных патологий».
Скачать