ЗАНЯТИЕ № 2 Тема: « МЕТОДЫ ВЫДЕЛЕНИЯ И ФРАКЦИОНИРОВАНИЯ БЕЛКОВ» Входной тест-контроль по теме «Строение, свойства и классификации белков». ВОПРОСЫ ДЛЯ ПОДГОТОВКИ К ЗАНЯТИЮ 1. Роль белков в организме. 2. Структурная организация белков. Связи, участвующие в формировании первичной, вторичной, третичной и четвертичной структуры. Доменная структура и ее роль в функционировании белков. 3. Физико-химические свойства белков (молекулярная масса, форма молекул, ИЭТ, растворимость, денатурация). Реакции осаждения белков: обратимые и необратимые. 4. Гидролиз белков, виды гидролиза (кислотный, щелочной, ферментативный), определение конца гидролиза. Отличия гидролиза от денатурации. 5. Методы выделение, фракционирования и очистки белков: этапы выделения белков из тканей (гомогенизация и перевод белков в растворенное состояние) высаливание диализ хроматография электрофорез ультрацентрифугирование ПЕРЕЧЕНЬ ЛАБОРАТОРНЫХ РАБОТ: 1. Диализ. 2. Разделение аминокислот методом распределительной хроматографии на бумаге. ЗАДАНИЯ ДЛЯ САМОСТОЯТЕЛЬНОЙ РАБОТЫ Изучите методы фракционирования и очистки белков и решите предложенные ниже задачи и тестовые задания. 1. При частичном гидролизе инсулина (В-цепи) получен тетрапептид глу-глу-ала-лей. Укажите направление движения этого пептида в электрическом поле при рН 3,0 и рН 10,5. 2. Изоэлектрическая точка гемоглобина 6,8. В каком направлении будут перемещаться молекулы гемоглобина в электрическом поле при рН 3,4? 3. Как выяснить произошло ли полное осаждение белка из биологической жидкости, в которой создано 50%-ное насыщение сульфатом аммония (после отделения осадка жидкость стала прозрачной)? 4. Найдите соответствие между методом фракционирования и очистки белков и принципом, на котором эти методы основаны: 1. Гель-фильтрация А. Различия по величине заряда 2. Ионообменная хроматография Б. Различия по молекулярной массе 3. Аффинная хроматография В. Различия по связыванию с лигандом 4. Электрофорез на бумаге Г. Различия по способности проходить через полупроницаемую мембрану 5. Диализ Д. Различия по скорости оседания белков 5. В ядерных белках – гистонах содержится большое количество аминокислотных остатков аргинина и лизина, в белке крови альбумине – много остатков глутаминовой и аспарагиновой кислот. Ответьте на вопросы: 1) в каких средах (>, < или = 7) лежит ИЭТ этих белков? 2) с каким их двух белков может взаимодействовать Са++. 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. ЛИТЕРАТУРА Т.Т.Березов, Б.Ф.Коровкин "Биологическая химия", 1998, 2007, с. 22-33, 44-71. Т.Т.Березов, Б.Ф.Коровкин "Биологическая химия", 1990, с. 19-28, 37-60. Т.Т.Березов, Б.Ф.Коровкин "Биологическая химия", 1982, с. 41-76. А.Я.Николаев "Биологическая химия", 1989, с. 9-53. Краткий словарь биохимических терминов, 2004. Сборник заданий по биохимии, 2007. Лекционные записи.