Глава 2 - Medline.ru

Глава 2. Материалы и методы.
2.1. Пациенты.
У всех пациентов, доноров и родителей детей до 15 лет было
получено информированное согласие на участие в исследовании. В
исследование включены данные по 281 пациенту, находившемуся на
лечении в различных отделениях клиник СПбГМУ им. акад.И.П.Павлова
и других медицинских учреждениях г. Санкт-Петербурга.
Группу
пациентов
с
локальной
формой
хронического
лимфопролиферативного заболевания составили больные различными
формами лимфомы кожи (ЛК) без экспансии патологических клеток в
периферическую кровь (n=41), без инфекционных осложнений и
сердечно-сосудистой и дыхательной недостаточности. Проанализирован
субпопуляционный состав лимфоцитов периферической крови больных с
различными
гистологически
подтвержденными
клинико-
морфологическими формами ЛК: эритродермическая – 5, пятнистобляшечная – 3, пойкилодермическая – 6, узловатая – 2, узелковая – 4,
грибовидный микоз – 11, без уточнения формы – 10 человек (табл.13).
Для определения стабильности субпопуляционного состава лимфоцитов
периферической крови в ходе заболевания восемнадцати больным ЛК
было проведено повторное исследование состояния иммунной системы с
интервалом не менее 30 и не более 90 дней.
Таблица 13
Общая характеристика больных лимфомой кожи
Характеристика пациентов
Диапазон
Количество больных
Возраст
M±σ
41
30-87
54,9±15,3
Соотношение мужчины/женщины
1,5
Длительность заболевания, годы
1-50
10,4±9,3
В качестве группы сопоставления для оценки субпопуляционного
состава лимфоцитов ПК в исследование включены пациенты с
доказанным
отсутствием
онкогематологических
заболеваний,
сопоставимые по полу, возрасту и длительности заболевания с взрослыми
пациентами
гематологического
профиля.
Ее
составили
больные,
длительно страдающие варикозной болезнью вен нижних конечностей
(ВБВНК) различной степени тяжести (n=30), у которых при тщательном
клинико-инструментальном обследовании не было выявлено признаков
гематологических заболеваний, инфекционной патологии, сердечнососудистой и дыхательной недостаточности (табл.14). В группе больных
ВБВНК
были
равномерно
представлены
пациенты
с
различной
выраженностью хронической венозной недостаточности и нарушения
трофики мягких тканей нижней трети голени, но без трофических язв.
Для определения стабильности субпопуляционного состава лимфоцитов
ПК
при
функциональной
нагрузке
объемом
больным
ВБВНК,
осложненной липодерматосклерозом, была проведена ортостатическая
проба путем придания больному сидячего положения с опущенными вниз
ногами на период 30 минут. Получение периферической крови (объем 5
мл) из зоны трофических нарушений кожи проводили до и после
стандартной ортостатической нагрузки, для чего была произведена
катетеризация большой подкожной вены в области медиальной лодыжки.
Таблица 14
Общая характеристика пациентов ВБВНК
Характеристика
группы
Неосложненное
Гиперпигментация и
Липо-
течение
индурация нижней
дермато-
трети голени
склероз
10
10
10
23-72
19-74
42-68
6:4
1:1
1:1
2-17
3-40
5-45
Количество больных
Возраст
(диапазон),
годы
Соотношение
мужчины/женщины
Длительность
заболевания, годы
Группу
больных
хроническими
лимфопролиферативными
заболеваниями с экспансией патологических клеток в периферическую
кровь составили 55 пациентов, госпитализированных в период с 2001 по
2003 г. в клиники СПБГМУ им.акад.И.П.Павлова и другие медицинские
учреждения Санкт-Петербурга для выяснения причин абсолютного
лимфоцитоза, при подозрении на хронический лимфоцитарный лейкоз
или другое лимфопролиферативное заболевание (ХЛПЗ), либо для
терапии в случае прогрессирования ранее выявленного ХЛПЗ. Все
пациенты принадлежали к средней и старшей возрастным группам
(табл.15).
Таблица 15
Общая характеристика больных ХЛПЗ с абсолютным лимфоцитозом
Характеристика пациентов
Диапазон
Количество больных, n
55
Соотношение мужчины/женщины
Возраст, годы
M±σ
1,17
37-79
59,3±10,7
Длительность заболевания, годы
Подавляющее
5,1±4,9
большинство
исследований
по
определению
иммунофенотипического профиля лимфоидных клеток было проведено
для установления или подтверждения диагноза. После проведения
современной
агрессивной
эффективности
были
химиотерапии
проведены
для
дополнительные
верификации
ее
обследования
в
аналогичном объеме. В связи с этим количество исследований
биологического материала от одного больного колебалось от 1 до 5 (34
пациента обследовано однократно, шесть - двукратно, четверо –
трехкратно, один - четырехкратно и двое – пятикратно) (табл. 16).
Диагноз
хронического
установлен
на
лимфопролиферативного
основании
морфологических,
заболевания
клинических
был
и
иммунофенотипических характеристик, в ряде случаев подтвержденных
молекулярно-генетическими исследованиями. В качестве контроля для
установления нормального В-клеточного фенотипа были исследованы
образцы периферической крови взрослых пациентов с доказанным
отсутствием лимфопролиферативных заболеваний.
Таблица 16
Исследования биологического материала с диагнозом направления ХЛПЗ
Биологический материал
Количество исследований,
Относительное
n
содержание, %
Периферическая кровь
63
75,9
Костный мозг
17
20,5
Ликвор
3
3,6
Всего исследований
83
100
В исследование включено 47 пациентов, поступивших в клиники
СПбГМУ им.акад.им.И.П.Павлова и другие медицинские учреждения г.
Санкт-Петербурга в период с 2001 по 2003 г. с предварительным
клиническим
(морфологическим)
диагнозом
острого
лейкоза
или
подозрением на острый лейкоз. Методом проточной цитометрии было
проведено ИФТ 40 образцов костного мозга и 7 образцов периферической
крови пациентов различных возрастных групп (табл.17). В дальнейшее
обсуждение особенностей фенотипа ОЛ не были включены данные ИФТ
больных, у которых был установлен иммунофенотипический диагноз
хронический лимфоцитарный лейкоз или лейкемизация лимфомы, а
также образцы костного мозга, в которых не было выявлено клональной
пролиферации.
Таблица 17
Характеристика больных, направленных на ИФТ при подозрении на ОЛ
Пол пациента
Возрастная группа
до 15 лет
от 15 до 21 года
старше 21 года
Мужской
7
1
14
Женский
8
2
15
0,9
0,5
0,9
15
3
29
Соотношение
мужчины/женщины
Всего пациентов
Выявление и количественная оценка гемопоэтических стволовых
клеток (ГСК) были проведены при планировании трансплантации ГСК в
различном биологическом материале (табл.18).
Таблица 18
Виды биологического материала при планировании ТГСК
Биологический
Планируемая трансплантация
материал
аллогеннная
аутологичная
Периферическая
родственная
неродственная
49
17
-
10
12
4
-
14
-
115
24
21
6
-
-
180
67
25
66,2%
24,6%
9,2%
кровь
Костный мозг
Пуповинная кровь
Аферезный продукт
Спутник афереза
Всего исследований
Аферез ГСК был осуществлен в основном для пациентов
гематологического профиля, находившихся в состоянии клиникогематологической ремиссии при планировании проведения аутологичной
трансплантации в дальнейшем (табл.19).
Таблица 19
Контингент пациентов при планировании аутологичной трансплантации
ГСК
Нозологическая группа
Количество
Количество исследований
больных
n
Болезнь
Ходжкина,
%
периферическая
продукта
кровь
афереза
27
40,9
10
23
1
1,5
1
2
неходжкинские лимфомы
Миелодиспластический
синдром
Миеломная болезнь
17
25,8
13
29
Хронический лимфоцитарный
2
3,0
2
3
лимфобластный
4
6,1
4
6
Острый миелобластный лейкоз
6
9,1
6
9
Рак молочной железы, желудка
2
3,0
2
3
Рабдомиосаркома
1
1,5
2
3
Нейробластома
5
7,6
5
11
Рассеянный склероз
1
1,5
4
3
Всего
66
100
49
92
лейкоз
Острый
лейкоз
Исследование аферезного продукта доноров было проведено при
планировании проведения аллогенной ТГСК аналогичной по составу
группе пациентов (табл.20).
Таблица 20
Реципиенты аллогенной трансплантации ГСК
Нозологическая группа
Количество больных
n
%
Болезнь Ходжкина, неходжкинские лимфомы
2
7,1
Хронический миелобластный лейкоз
5
17,9
Апластическая анемия
2
7,1
Острый лимфобластный лейкоз
14
50
Острый миелобластный лейкоз
3
10,7
Рак желудка
1
3,6
Рассеянный склероз
1
3,6
Всего
28
100
Оценка состояния иммунной системы больных после аллогенную
родственной или неродственной ТГСК была проведена многократно, в
режиме динамического наблюдения. В качестве исходных были получены
данные о субпопуляционном составе лимфоцитов периферической крови
за 7-9 дней до ТГСК (Д-7) и начала режима кондиционирования. В
качестве нулевого дня принят день проведения ТГСК. Количество
инфузированных CD34+ клеток колебалось от 2,61 до 24,30 и в среднем
составило
8,55±6,20х106/кг
массы
тела
реципиента.
Дальнейшее
наблюдение было проведено в дни +30, +50, +100 и через год после
проведения ТГСК. Уменьшение количества пациентов к окончанию срока
наблюдения связано с летальным исходом в результате осложнений
основного заболевания или реакции трансплантата против хозяина
(РТПХ).