Документ 70814


Для выполнения измерений на полуавтоматическом или автоматическом
биохимическом анализаторах следует:
8.9. Установить программу определения содержания мочевины согласно таблице:
Наименование параметра
Значение
Метод измерения
Конечная точка
580 нм (580-630)
Длина волны, нм
Измерение против
дист. вода
Температура реакции
37 ОС, комнатная температура
Единица измерения
ммоль/л
Число знаков после запятой
2
Изменение оптической плотности
Увеличивается
Соотношение рабочий реагент/проба/реагент 2
100:1:100
Концентрация калибратора, ммоль/л
8,3
Время реакции, мин
5 (37 ОС), 10 (18 –25 ОС)
Верхний предел абсорбции реагента против воды, ед. 0,2
опт. плот.
Нижний предел абсорбции реагента против воды, ед.
0
опт. плот.
Границы линейности, ммоль/л
0,2 – 49,8
Минимум нормы, ммоль/л
2,1*
Максимум нормы, ммоль/л
7,1*
* Нормальные значения в сыворотке или плазме крови взрослого человека.
8.10. Если результат измерения содержания мочевины выше 49,8 ммоль/л, следует разбавить образец
физраствором (0,9% NaCl) в 2 раза, повторно провести измерение, полученный результат умножить
на 2.
9. УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ЭКСПЛУАТАЦИИ НАБОРА
9.1. Набор реагентов «МОЧЕВИНА - UTS» должен храниться в упаковке предприятия-изготовителя
при температуре +2-8 ОС в течение всего срока годности.
9.2. Срок годности набора 18 месяцев с даты его изготовления.
9.3. Калибратор после вскрытия флакона может храниться при температуре +2–8 ОС в темном месте в
течение всего срока годности.
9.4. Для получения надежных результатов необходимо строгое соблюдение инструкции по
применению набора.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1.Kaplan A. Urea. Kaplan A at al. Clin Chem The C.V. Mosby Co. St Louis. Toronto. Princeton 1984;
1257-1260 end 437 end 418.
2. Tabacco A et al. Clin Chem 1979; 25: 336-337.
3. Fawcett J K et al. J Clin Path 1960; 13: 156-169.
4. Burtis A et al. Tietz Textbook of Clinical Chemistry, 3rd ed AACC 1999.
5. Tietz N W et al. Clinical Guide to Laboratory Tests, 3rd ed AACC 1995.
6. Young DS. Effects of disease on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC 2001.
Производится ООО «Эйлитон» по заказу ЗАО «А/О Юнимед».
По вопросам, касающимся качества набора «МОЧЕВИНА – UTS» следует обращаться в ЗАО «А/О
ЮНИМЕД» по адресу: 129301, Москва, ул. Касаткина, 3а; Тел. (495) 734-91-31,
8-800-333-91-31,
Факс: (495) 564-86-41;
E-mail: office@unimedao.ru;
http://www.unimedao.ru
УТВЕРЖДЕНА
Приказом Росздравнадзора
от 04.08. 2009 г. № 6236-Пр/09
ИНСТРУКЦИЯ
по применению набора реагентов для количественного определения содержания мочевины в сыворотке
или плазме крови и моче человека ферментативным методом
«МОЧЕВИНА - UTS»
Набор «МОЧЕВИНА – UTS» разрешен к производству, продаже и применению на территории РФ.
Регистрационное удостоверение № ФСР 2009/05467
Кат. №
Информация для заказа набора «МОЧЕВИНА – UTS»
Комплектация
МВ-09-016-100 Р1 (2 мл) + Р2 (50 мл) + Р3 (50 мл) +калибратор (1мл)
МВ-09-016-400 Р1 (2*4 мл) + (2*100 мл)+ Р3 (2*100 мл) + калибратор (2*2мл)
*v – объем фотометрической ячейки анализатора.
Количество
определений
100/v*
400/v
ВНИМАНИЕ! Изменено соотношение компонентов набора. Рабочий реагент готовить
смешиванием Реагента 1 (Р1) и Реагента 2 (Р2) в соотношении 1 : 24.
1. НАЗНАЧЕНИЕ
1.1. Набор реагентов «МОЧЕВИНА - UTS» предназначен для определения активности мочевины в
сыворотке или плазме крови и моче человека в клинико-диагностических и биохимических лабораториях
для целей диагностики заболеваний и контроля проводимого лечения пациентов.
1.2. Мочевина является конечным продуктом метаболизма белков в организме. Она синтезируется в печени
из аммиака, который образуется при дезаминировании аминокислот. Определение мочевины в сыворотке
или моче является важным показателем функции почек. Повышение уровня мочевины в сыворотке
(азотомия) может быть связано с ухудшением ренальной функции или при диетах с потреблением
большого количества белковой пищи, снижение уровня мочевины наблюдается при низкобелковой или
высокоуглеводной диетах, при беременности [1,4,5]. На этом основано клиническое значение анализа.
1.3. Потенциальный риск применения набора – класс 2а. Основной риск косвенный и связан с
возможностью получения ложного результата анализа, что может привести к неправильно поставленному
диагнозу и назначению неэффективного лечения пациента. Для снижения указанного риска необходимо в
каждой аналитической серии наборов реагентов контролировать качество результатов анализов с
применением контрольных сывороток в соответствии с ОСТ 91500.13.0001-2003.
2. ПРИНЦИП МЕТОДА
2.1. МОЧЕВИНА (NH2CONH2) в анализируемом образце ферментативно под действием уреазы
гидролизуется в аммиак (NH4+) и углекислый газ (CO2) (1). Образовавшиеся ионы аммиака вступают в
реакцию с салицилатом и гипохлоритом в присутствии катализатора нитропруссида Na c образованием
окрашенного соединения индофенола зеленого цвета (2) – метод Бертло.
NH2CONH2 + 2Н2О
Уреаза
NH4 + + Салицилат + Гипохлорит
(NH4+)2 + СО2
нитропруссид Na
Индофенол + NaCl
(1)
(2)
2.2. Фотометрическое измерение основано на наличии максимума поглощения при 600нм молекулами
индофенола [1,2,3]. Таким образом, увеличение оптической плотности реакционной смеси
пропорционально интенсивности окраски индофенола при (580-630) нм и, следовательно, прямо
пропорционально содержанию мочевины в анализируемом образце.
3. СОСТАВ НАБОРА
3.1. Поскольку рабочий реагент, содержащий все компоненты для обеспечения химических реакций
(1 и 2) не стабилен, набор реагентов «МОЧЕВИНА-UTS» поставляется в виде трех реагентов Р1,
Р2, Р3 и раствора калибратора.
Компоненты и их состав:
Наименование
Состав
Концентрация
Р1 (фермент)
Уреаза
>500 000 Е/л
Р2 (буферный раствор хромоген)
Фосфатный буфер pH 6.9
20 ммоль/л
ЭДТА
2 ммоль/л
Салицилат натрия
60 ммоль/л
Нитропруссид натрия
3,4 ммоль/л
Р3 (гипохлорит Na)
Гипохлорит Na
10 ммоль/л
Гидроксид Na
150 ммоль/л
Р4 (калибратор мочевины)
Водный раствор мочевины
8,3 ммоль/л
4. АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
4.1. Набор обеспечивает линейную область определения содержания мочевины
от 0,2 до 49,8 ммоль/л, отклонение от линейности во всем указанном диапазоне не превышает 5%.
4.2. Чувствительность – не более 0,2 ммоль/л.
4.3. Воспроизводимость - коэффициент вариации результатов определений – не более 5%.
4.4. Качество набора можно оценивать по отечественным или зарубежным контрольным сывороткам,
аттестованным данным методом.
4.5. Для калибровки автоматизированных фотометрических систем рекомендуется использовать
сывороточные калибраторы, аттестованные по значению активности мочевины данным методом.
4.6. Коэффициент пересчета концентрации: 1 ммоль/л = 1 мг/дл × 0,1665.
4.7. Нормальные величины содержания мочевины в сыворотке или плазме взрослого человека
составляют 2,1–7,1 ммоль/л; в моче 430–710 ммоль/24ч [4,5].
4.8. Правильность определения можно проверить по контрольным сывороткам, аттестованным
методом Бертло.
5. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
5.1. Реагент 2 содержит нитропруссид натрия, Реагент 3 гипохлорит Na. Следует избегать попадания
реагентов на кожу и слизистые. В случае попадания их на кожу и слизистые оболочки необходимо
промыть поражённые участки большим количеством проточной воды.
5.2. При выполнении лабораторного исследования необходимо соблюдать «Правила устройства,
техники безопасности, производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной
гигиены при работе в лабораториях (отделениях, отделах) санитарно-эпидемиологических
учреждений системы Министерства здравоохранения СССР» (Москва, 1981 г.).
5.3. При работе с биологическими пробами следует надевать одноразовые резиновые или
пластиковые перчатки, т.к. образцы крови человека следует рассматривать как потенциально
инфицированные, способные длительное время сохранять и передавать ВИЧ, вирусы гепатита или
любой другой возбудитель вирусной инфекции.
6. ОБОРУДОВАНИЕ И РЕАГЕНТЫ
6.1. Для выполнения анализа по определению содержания мочевины с применением набора
реагентов «МОЧЕВИНА-UTS» рекомендуется использовать фотометр, фотоэлектроколориметр
полуавтоматический или автоматический биохимический анализаторы, позволяющие выполнять
измерение оптической плотности при длине волны 580 (580-630) нм (режим по конечной точке), и
обеспечивающий термостатирование фотометрической ячейки при температуре +(37±0,5) ОС.
6.2. Общелабораторное оборудование.
7. АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ
7.1. Негемолизированная сыворотка или плазма крови.
7.1. Внимание! 1. Не использовать соли аммония или фториды в качестве антикоагулянтов.
2. Стеклянная посуда и дистиллированная вода не должны содержать следы
аммиака и солей аммония.
7.2. Сыворотку или плазму крови следует отделить от форменных элементов не позднее 1 часа после взятия
крови.
7.3. Образцы сыворотки или плазмы стабильны 1 сутки при комнатной температуре, 3-5 дней при
+2..8 ОС или 2-3 месяца при –20 ОС [5]. .
7.4. Образцы мочи стабильны 5 дней при +2..8 ОС. Значение рН в образцах мочи должно составлять
< 4,0.
7.5. Суточную мочу перед определением следует развести дистиллированной водой в 50 раз. (результат
определения перемножить на 50 фактор разведения, см. п.8.8.).
8. ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА
 Проведение ручного анализа с использованием фотометра или фотоэлектроколориметра.
Приготовление рабочего раствора.
8.1. Смешайте один объем реагента Р1 и 24 объема реагента Р2. Закрыть флакон и тщательно перемешать,
не встряхивая. Хранить раствор в темном месте.
8.2. Раствор стабилен 4 недели при температуре +2..8 ОС или 7 дней при комнатной температуре.
8.3. Отобрать компоненты реакционной смеси с использованием пипеточных дозаторов в объемах,
указанных в таблице:
Внести в кювету, мкл
Холостая проба
Калибровочная
Анализируемый
проба
образец
Рабочий раствор
1000
1000
1000
Калибратор
10
Сыворотка, плазма крови или 10
разведенная моча
Пробы тщательно перемешать, инкубировать 5 мин при 37 ОС или 10 мин при комнатной
температуре (18–25 ОС), добавить:
Реагент 3
1000
1000
1000
8.4. Пробы перемешать, инкубировать 5 мин при +(37±0,5) ОС или 10 мин при комнатной температуре
(18 –25 ОС).
8.5. Измерить оптическую плотность анализируемого образца (Аобр) и калибровочной пробы (Акал) против
холостой пробы при длине волны 600 нм (580-620) нм. Окраска растворов стабильна в течение 30 минут
при комнатной температуре в защищенном от света месте..
8.6. Содержание мочевины в сыворотке или плазме крови в ммоль/л определить по формуле:
С
Аобр
Акал
 8,33
где: С – содержание мочевины в анализируемом образце сыворотки или плазмы, ммоль/л;
Аобр – оптическая плотность анализируемого образца, ед. опт. плотн, против холостой пробы;
Акал – оптическая плотность калибровочной пробы, ед. опт. плотн, против холостой пробы;
8,3 – содержание мочевины в калибраторе, ммоль/л.
8.7. Если результат измерения содержания мочевины выше 49,8 ммоль/л, следует разбавить пробу
физраствором (0,9% NaCl) в 2 раза, повторно провести измерение, полученный результат умножить на 2.
8.8. Содержание мочевины в суточной моче (в ммоль/сутки) определить по формуле:
Ссут 
Аобр  V  50
Акал  1000
 8,33
где:
Ссут – содержание мочевины в анализируемом образце мочи, ммоль/сутки;
Аобр – оптическая плотность анализируемого образца, ед. опт. плотн;
Акал – оптическая плотность калибровочного образца, ед. опт. плотн;
V–
количество мочи, собранной за сутки, л;
8,3 – содержание мочевины в калибраторе, мкмоль/л;
50 – коэффициент разведения мочи.