Краткий отчет ОЧБ
advertisement
Краткий отчет об итогах научно-практической деятельности ФГУП «Гос.НИИ ОЧБ» ФМБА России в 2011 г. Разработка радиозащитных и антитоксических средств на основе рекомбинантных белков. Целью исследований являлось изучение иммуностимулирующего и радиозащитного действия рекомбинантного интерлейкина-1 (ИЛ-1β), разработка и изучение его новых лекарственных форм. В результате исследований получены экспериментальные данные о сохранении гемостимулирующих и радиозащитных свойств рекомбинантного интерлейкина1 бета человека при совместном применении с нестероидными противовоспалительными препаратами. Разработана жидкая лекарственная форма ИЛ-1β и доказана ее стабильность при хранении при температуре +4°С. Начаты клинические исследования безопасности и эффективности рекомбинантного интерлейкина-1 бета человека в форме мази для наружного применения Бетаприм при лечении длительно незаживающих ран на базе СПб ГУЗ «Городская больница Святого Великомученика Георгия». Показано, что мазь хорошо переносится больными, не вызывая негативных реакций или развития нежелательных явлений. В 2012 году клинические исследования препарата будут продолжены. В сотрудничестве с сотрудниками кафедры военной токсикологии и медицинской защиты Военно-медицинской академии имени С. М. Кирова разработаны Рекомендации по клиническому применению препарата ИЛ-1бета. Разработка методов неинвазивной диагностики онкологических и инфекционных заболеваний с использованием магнитных наночастиц. Синтезирован адресный контрастирующий препарат в форме конъюгатов магнитных наночастиц оксида железа с эпидермальным фактором роста человека (ЭФР), различающихся способом пришивки биолиганда. Исследована стабильность и магнитно-релаксационные свойства полученных конъюгатов в водных суспензиях и на модели гелевых фантомов. Показано сохранение в конъюгате ферримагнитной структуры нанокристалла ядра оксида железа и функции рецепторного узнавания ЭФР. Изучена седиментационная стабильность конъюгатов в высоких магнитных полях. Контрастирующие свойства полученных конъюгатов подтверждены методом МРТ в исследованиях in vitro (на модели гелевых фантомов) и in vivo (на здоровых мышах и на мышиной модели перевиваемой опухоли) после внутривенного и подкожного введения. По результатам исследований сделан вывод о возможности использования конъюгатов магнитных наночастиц оксида железа с ЭФР человека как кандидатного адресного контрастного средства для МРТ-диагностики онкологических заболеваний. Разработка препаратов для повышения неспецифической резистентности организма к действию неблагоприятных факторов физической и биологической природы на основе штаммов пробиотиков и бактериальных экзометаболитов. В работе исследован препарат нового поколения пробиотиков - препарат Витафлор-форте, созданный на основе бактериального препарата Витафлор и комплекса карбоновых кислот. В доклинических исследованиях на примере использования пробиотика для защиты лабораторных животных при заражении per os LD50 Salmonella typhimurium показано наличие у нового препарата высокого пробиотического потенциала. В проекте 2011 г. года акцент сделан на использование бактериального пробиотика для повышения сопротивляемости организма к действию мутагенов, которые могут возникать при радиационном облучении (радиотерапия онкобольных, аварийные ситуации на предприятиях атомной промышленности или вредных химических производствах). Разработана методика определения антимутагенной активности бактериально-метаболитного препарата Витафлор-форте в тестах на бактериальных культурах. Показано, что препарат может повышать неспецифическую сопротивляемость организма к мутагенам. С использованием методов микробиологического и молекулярногенетического типирования изучена динамика выживания и возможность интродукции бактериальных штаммов Витафлор-форте в микробиоценозах экспериментальных животных. Показано, что бактериальные штаммы выживают в микробиоценозе экспериментальных животных, о чем свидетельствует возможность их выявления в течение 5 дней после отмены препарата. Разработка нового лекарственного препарата, обладающего иммуностимулирующей и адъювантной активностью. Разработка способа получения и изучение свойств рекомбинантного флагеллина. Созданы три генетические конструкции, кодирующие бактериальный белок флагеллин (FliC из Salmonella enteriditis var. typhimurium), и два его делеционных варианта и получены три соответствующих штамма Escherichia coli – продуценты данных рекомбинантных белков. Выявлен наиболее продуктивный штамм Escherichia coli BL21[DE3]Star_pET151_FliC. Разработан способ очистки рекомбинантного флагеллина, включающий выращивание биомассы, ее лизис, фракционирование лизата, металлохелатную хроматографию на колонке с Ni-NTA-агарозой, диализ. В результате получен препарат очищенного рекомбинантного флагеллина FliC из Salmonella typhimurium. Определена биологическая активность рекомбинантного флагеллина по продукции клетками А549 (карцинома легкого человека), экспрессирующими рецептор TLR-5, интерлейкина-8 при инкубации с флагеллином. Показано, что полученный рекомбинантный флагеллин FliC обладает высокой биологической активностью, превосходящей активность коммерческого препарата флагеллина производства фирмы InvivoGen (США). 2 Разработка противоинфекционных и противовоспалительных лекарственных препаратов аэрозольного применения на основе рекомбинантных цитокинов. Целью исследования является создание лекарственных препаратов аэрозольного применения на основе рекомбинантного интерферона альфа-2b и рецепторного антагониста интерлейкина-1 для лечения гриппа, папилломатоза гортани, аллергического ринита, бронхиальной астмы. Завершены клинические исследования безопасности и эффективности аэрозольного препарата интерферона альфа-2b человеческого рекомбинантного Интерфераль® при лечении гриппа и других ОРВИ у взрослых на базе двух исследовательских центров (ГОУ ВПО «Уральская государственная медицинская академия» Росздрава и ФГБУ «Научноисследовательский институт гриппа» Минздравсоцразвития РФ) с участием 120 пациентов. Обобщенный отчет о результатах клинического исследования препарата Интерфераль®, аэрозоль для местного применения 100 000 МЕ, и проекты нормативной документации на препарат представлены в Департамент государственного регулирования обращения лекарственных средств Минздравсоцразвития России с целью регистрации в качестве лекарственного средства. Проведено согласование с Минздравсоцразвития России комплекта документов на проведение клинического исследования препарата Интерфераль®, аэрозоль для местного применения, 5млн МЕ, при лечении рецидивирующего респираторного папилломатоза (РРП) у взрослых (фаза I-II). Подготовлена и представлена в Минздравсоцразвития России вторая версия регистрационной документации, откорректированная в соответствии с замечаниями экспертизы. Дизайн исследования – проспективное открытое нерандомизированное сравнительное исследование в одной группе эффективности препарата Интерфераль®, аэрозоль для местного применения 5млн МЕ, при лечении рецидивирующего респираторного папилломатоза (РРП) у взрослых. Проведены пилотные исследования безопасности и эффективности препарата Интерфераль®, аэрозоль для местного применения, 5млн МЕ, на ограниченной группе больных РРП в послеоперационном периоде и без операции в качестве монотерапии, показавшие целесообразность клинические использования препарата при лечении данной патологии. Завершены исследования безопасности и эффективности аэрозольного препарата рецепторного антагониста интерлейкина-1 человеческого рекомбинантного Ралейкин® при лечении аллергического круглогодичного ринита у взрослых. Показано, что препарат Ралейкин®, аэрозоль для местного применения, 0,5%, обладает высокой клинической эффективностью при лечении больных круглогодичным ринитом, что выражается в снижении интенсивности и сокращении сроков проявления клинических симптомов. Терапия препаратом не вызывает значимых изменений общеклинических и лабораторных параметров пациентов, что свидетельствует об отсутствии токсичности препарата. 3 Разработка и проведение клинических испытаний селективных гемосорбентов для экстракорпоральной коррекции при терапии критических состояний. Целью исследования является синтез и исследование свойств гемосорбентов, представляющих собой биосовместимую матрицу с иммобилизованными пептидными и белковыми лигандами, для удаления патогенетических факторов с использованием плазмафереза при сепсисе и шоке любой этиологии. иммуносорбенты Синтезировано с несколько иммобилизованными типов антителами, гемосорбентов, аффинные включая сорбенты с иммобилизованным антибактериальным пептидом АИ-8, а также гидрофобный сорбент Сфероцелл С8-С10. Сорбенты были детально исследованы в опытах по удалению из плазмы крови трех факторов патогенеза, определяющих критическое состояние при сепсисе – фактора некроза опухолей альфа (ФНОα), интерлейкина-1 липополисахарида (ЛПС). Показана эффективность бета (ИЛ-1бета) полученных сорбентов и как в статическом, так и в динамическом режимах при пропускании плазмы крови через колонку при скорости потока - не менее 40 мл/мин. Сорбенты Анти-ФНОα- или Анти-ИЛ-1бетаСефароза 4FF позволяют снизить концентрацию цитокинов в два раза уже ко 2 минуте с начала адсорбции и практически полностью удалить белки к 10-15 минуте. Такой же эффект достигается при удалении ЛПС с помощью иммобилизованного антибактериального пептида. Показана перспективность использования сорбента Белок А-Сефароза в качестве базового универсального сорбента, на который могут быть иммобилизованы антитела, специфичные к любому фактору-мишени при очистке крови. Как показали первые исследования такой сорбент, предварительно инкубированный с полученными антителами, является наиболее эффективным среди испытанных иммуносорбентов, поскольку позволяет достигать практически стопроцентного удаления фактора-мишени за наиболее короткое время. Показана также возможность использования гидрофобного сорбента Сфероцелл С8С10 для удаления ЛПС из цельной крови. Разработанные сорбенты универсальны с точки зрения возможности использования их при лечении пациентов, страдающих тяжелыми аутоиммунными заболеваниями (ревматоидный артрит, диабет 1-го и 2-го типа), при атеросклерозе, инфаркте миокарда, а также при постинфарктных осложнениях для предотвращения ремоделирования тканей и в других случаях. Проведены доклинические токсикологические испытания. Показано, что по токсикологическим показателям исследованные сорбенты отвечают требованиям безопасности, предъявляемым к материалам для плазмо-(гемо)сорбции. Поиск молекулярных мишеней и изучение биологической активности N-концевого фрагмента белка SIRS, кандидатного лиганда для терапии псориаза и псориатического артрита. Целью исследования является поиск молекулярных мишеней на основании 4 ключевых звеньев патогенеза псориаза и псориатического артрита для разработки методов антицитокиновой и генной терапии, изучение биологической активности N-концевого фрагмента белка SIRS, кандидатного лиганда для терапии псориаза и псориатического артрита. В процессе исследования изучено влияние пептида SIRS1-21 in vitro на продукцию и функции цитокинов на первичных культурах клеток иммунной системы и перевиваемых клеточных линиях. Установлено, что исследуемый пептид стимулирует продукцию интерлейкина-2 (ИЛ-2) и оказывает ингибирующее действие на продукцию ИЛ-1, ИЛ-6, фактора некроза опухолей альфа (ФНО-) и ИЛ-17 иммунокомпетентными клетками, а также угнетает биологическую активность ИЛ-1бета, но не влияет значимо на антителообразование in vitro. Путем твердофазного синтеза получены биотин-меченые варианты пептида SIRS1-21. Пептиды охарактеризованы путем ОФ-ВЭЖХ и массспектрального анализа. Биологическая активность полученных пептидов изучена in vitro. С использованием теста подавления биологической активности ИЛ-1 на тимоцитах мыши показано, что пептид, биотинилированный по C-концевой аминокислоте, полностью сохраняет активность, тогда так активность аналога SIRS1-21, биотинилированного по Nконцевой аминокислоте, значительно ниже. С помощью проточной цитофлюориметрии исследована кинетика связывания биотинилированного по С-концевой аминокислоте аналога SIRS1-21 с тимоцитами мыши. Создание клеточных высокоэффективных линий продуцентов и генетических рекомбинантных конструкций белков в для культурах получения клеток млекопитающих. Исследования направлены на существенное увеличение продуктивности биоинженерных технологий получения терапевтических белков в культурах клеток млекопитающих, создание на основе разработанных технологий продуцентов двух рекомбинантных белков - фактора роста эндотелия сосудов (ФРЭС) и интерлейкина-7 (ИЛ-7) человека. Отработана технология адаптации клеточных линий CHO-K1 и CHOdhfr- к суспензионному культивированию, получены стабильные варианты линий, адаптированные к росту в бессывороточных средах и изучены их культуральные свойства. Создано два экспрессионных бицистронных вектора, содержащих гены устойчивости дигидрофолатредуктазу или глутаминсинтетазу. В оба вектора путем рестрикционного клонирования вставлен репортерный ген зеленого флюоресцентного белка. Созданные репортерные векторы использованы для отработки условий трансфекции клеточных линий CHO-K1 и CHOdhfr-, адаптированных к суспензионному культивированию в бессывороточных средах. Из библиотек кДНК тканей человека были выделены и клонированы гены ФРЭС и ИЛ-7, которые будут использоваться для создания штаммовпродуцентов соответствующих рекомбинантных белков. 5 Исследование влияния низкомолекулярных экзометаболитов бактерий нормофлоры на фингерпринт крови и состав выдыхаемого воздуха человека в норме и при патологии. Целью работы является установление степени влияния соединений микробного происхождения на обмен веществ у человека в норме и при патологии посредством исследования метаболического профиля крови. В работе использована современная концепция «суперорганизма», метаболизм которого основан на интеграции метаболизмов хозяина и микрофлоры. При проведении исследований осуществлен выбор штаммов нормальной микрофлоры и условно-патогенных бактерий для сравнительного анализа состава их экзометаболитов. Выбраны методы исследования состава экзометаболитов пробиотических и условно-патогенных бактерий и проведено изучение их физиологических и культуральных свойств. Исследована динамика обмена метаболитами клеток грамотрицательных и грамположительных бактерий со средой в процессе выращивания и голодания культур. Осуществлено стандартное культивирование 15 штаммов микроорганизмов, получены лиофилизированные препараты метаболитов этих штаммов. Проведен хромато-масс-спектрометрический анализ триметилсилильных производных полученных метаболитов, получены соответствующие фингерпринты, проведена первичная идентификация ряда метаболитов. Доклинические исследования лекарственного средства - гуманизированного моноклонального антитела против иммуноглобулинов Е человека для лечения аллергических заболеваний. Целью работы является создание и доклинические исследования лекарственного средства на основе гуманизированных моноклональных антител против иммуноглобулина (Ig) Е человека для лечения аллергических заболеваний. Разработана научно-методическая база создания рекомбинантных гуманизированных антител против иммуноглобулинов Е (IgE) человека. Разработаны варианты структуры молекулы рекомбинантного гуманизированного антитела против IgE человека и определена стратегия разработки лекарственного препарата на основе гуманизированного антитела против IgE. Получены моноклональные антитела против IgE человека, секретируемые мышиными гибридомами, и изучены их свойства, в том числе эпитопная специфичность. Выбрано кандидатное антитело для гуманизации, нейтрализующее IgE-зависимую активацию базофилов (клон И24). Выделены, клонированы и секвенированы гены, кодирующие вариабельные фрагменты легкой и тяжелой цепей кандидатного антитела И24. На основе полученных нуклеотидных последовательностей аминокислотные последовательности. 6 предсказаны и проанализированы Доклинические исследования лекарственного средства для лечения диабета 2-го типа на основе рекомбинантного рецепторного антагониста интерлейкина-1. Целью работы является создание и доклинические исследования лекарственного средства для лечения диабета 2-го типа на основе рекомбинантного рецепторного антагониста интерлейкина-1. Подготовлен аналитический обзор состояния проблемы терапии диабета 2-го типа. Особое внимание уделено проведенным в последние годы исследованиям иммуномолекулярных механизмов заболеваемости СД-2, что позволяет прогнозировать применение принципиально новых подходов к лечению этого заболевания. В связи с этим рассмотрены механизмы взаимодействия цитокинов семейства интерлейкина-1 (ИЛ-1): ИЛ-1бета, ИЛ1альфа и их естественного антагониста - рецепторного антагониста интерлейкина-1 (ИЛ1ра), с клеточными рецепторами на клетках Лангерганса в панкреатических островках и показана важная роль провоспалительного цитокина интерлейкина-1 бета в патогенезе СД-2. Приводится обоснование развития этого заболевания как следствия аутоактивации ИЛ-1бета и нарушения баланса между ИЛ-1бета и его рецепторным антагонистом. Рассматривается возможность лечения СД-2 и других аутовоспалительных заболеваний с помощью блокаторов ИЛ-1бета, в первую очередь, с использованием рецепторного антагониста ИЛ-1. Сделан вывод об актуальности и перспективности нового подхода лечения диабета 2-го типа с помощью лекарственного средства на основе рецепторного антагониста интерлейкина-1. Разработана лабораторная технология получения лечения диабета 2-го типа на основе рекомбинантного лекарственного средства для рецепторного антагониста интерлейкина-1. Разработаны методы тестирования лекарственного средства на основе рекомбинантного рецепторного антагониста интерлейкина-1, определения специфической биологической активности, качественного и количественного состава лекарственного средства с использованием биологических, иммунохимических и физико-химических методов анализа. Исследование иммуногенной активности клеточного и гуморального иммунитета. вакцины "ДНК-4" по показателям В соответствии с планом клинического исследования реактогенности, безопасности и иммуногенности «ДНК-4» вакцины против ВИЧ-1/СПИД были отобраны и четырехкратно иммунизированы три группы здоровых добровольцев по семь человек повышающейся дозой препарата (0,25, 0,5 и 1 мг/мл). Анализ оценки иммуногенной активности вакцины «ДНК-4» по показателям клеточного и гуморального иммунитета проведен общепринятыми методами, включающими коммерческие и некоммерческие тесты ИФА, ELISpot, ICS и LPA. Было показано, что из 21 участника испытаний Т-клеточный иммунный ответ развивался у всех, а гуморальный ответ - только у 5 человек. Причем титр ВИЧ-специфических антител не превышал 1/100. 7 Зависимости антителообразования от вводимых доз вакцины «ДНК-4» не наблюдалось. Установлено также, что снижение дозы вакцины «ДНК-4» достоверно (p<0,05) приводит к увеличению частоты выявления иммунных ответов в опытах, усилению хелперного и полиспецифического иммунитета. Доза вакцины не влияет на частоту выявления иммунных ответов и количество клеток, экспрессирующих ИФН-. При четырехкратной иммунизации по отношению к трехкратной достоверно (p<0,05) увеличивается частота выявления иммунных ответов, но снижается амплитуда специфической пролиферации и увеличивается амплитуда моноспецифичного иммунного ответа. Уровни амплитуд выявляемого Тклеточного иммунного ответа при вакцинации «ДНК-4» коррелируют с результатами, полученными в исследованиях анти-ВИЧ специфического иммунитета у экспонированных, но неинфицированных индивидуумов (ESN). Полученные данные указывают на целесообразность и перспективность дальнейшего изучения иммунологических свойств вакцины «ДНК-4». Разработка препаратов для терапии обширных термических ран, осложненных бактериальными инфекциями. Разработаны рецептуры двух препаратов аэрозольного применения для первичной обработки термических ран, осложненных бактериальной инфекцией. В качестве основы препарата предложена гипоаллергенная мицеллярно-гелевая композиция, позволяющая получить однородную маловязкую легко распыляемую микроэмульсию. Антибактериальная составляющая препарата представлена наночастицами серебра. В качестве биологически активного компонента препаратов использовали рекомбинантные супероксиддисмутазу или интерлейкин-1бета. Аэрозольный препарат наносится на рану с помощью стандартного флакона-спрея аэрозольного препарата (средневесовой медианный диаметр капель (dmmd) 200-250 мкм). При этом формируется пленкообразующее покрытие, которое защищает рану от внешнего инфицирования, подавляет рост в ране посторонней микрофлоры, создает благоприятные условия для течения репаративных процессов и выделяет в рану активные компоненты, способствующие быстрой регенерации поврежденных тканей. В ходе проведенных исследований показано, что активные компоненты сохраняют свою активность в составе композиции и в пленке, полученной в результате нанесения аэрозоля. Изучена антибактериальная активность препаратов в отношении клеток B.cereus. Проведена оптимизация состава препаратов на основании полученных данных по антибактериальной активности. 8 Итоги внедрения результатов НИР По результатам научной деятельности в 2011 году институтом получено 6 патентов, 3 товарных знака и 1 положительное решение о выдачи товарного знака: - Патент № 2437649 «Способ получения сухих липосомальных препаратов (варианты)», заявка №2009140381, приоритет 03.11.2009, Дата публикации заявки: 10.05.2011; - Патент №2425576 «Сухой пробиотически активный биопрепарат и способ получения кисломолочного напитка на его основе», заявка №2010108378, приоритет 10.03.2010, Дата публикации заявки: 10.08.2011; - Патент № 2422133 «Гидрофильный гель, способ его получения (варианты), раневое покрытие и перевязочное средство на его основе», заявка № 2009143612, приоритет 26.11.2009, дата публикации заявки: 27.06.2011; - Патент № 2415647 «Способ прогнозирования развития рубцов после перенесенной угревой болезни», заявка № 2009117807, приоритет 14.05.2009, дата публикации заявки: 20.11.2010; - Патент № 2410082 «Цитокинсодержащая аэрозольная композиция», заявка № 2009143610, приоритет 26.11.2009, дата публикации заявки: 27.01.2011; - Патент № 2412946 «Способ получения антител к белку р17 ВИЧ», заявка № 2009140376, приоритет 03.11.2009, дата публикации заявки: 27.02.2011 - Товарный знак № 430539 «Бетаприм», заявка № 2010700964, Дата подачи заявки: 19.01.2010, Дата регистрации: 18.02.2011; - Товарный знак № 430538 «Хитоскин», заявка № 2010700963, Дата подачи заявки: 19.01.2010, Дата регистрации: 18.02.2011; - Товарный знак № 44014 «Ралейкин, аэрозоль для местного применения», Дата подачи заявки: 28.09.2010, Дата регистрации: 07.09.2011; - Положительное решение по заявке на товарный знак № 2010731070 «Интерфераль, аэрозоль для местного применения», Дата подачи заявки: 28.09.2010. Поданы заявки на изобретения, товарные знаки и полезные модели: - Заявка на полезную модель №2011124802 «Контрастное средство для магнитнорезонансной томографии»; - Заявка на изобретение №2011124807 «Контрастное средство для магнитно-резонансной томографии»; - Заявка на полезную модель №2011142360 «Перевязочный материал»; - Заявка на товарный знак №2011734374 «Витафлор-форте». - Заявка на товарный знак «β-прим»; - Заявка на товарный знак «РИНКС»; - Заявка на товарный знак «RINKS»; - Заявка на изобретение «Пробиотический препарат «Витафлор-форте» и способ его получения». Получено регистрационное удостоверение на инновационный препарат Бестим, раствор для внутримышечного введения (Рег. удостоверение ЛП-000670 от 28.09.2011). 9 По результатам научной деятельности в 2011 году институтом опубликовано 27 научных статей в ведущих отечественных и зарубежных журналах, 1 монография, 17 тезисов докладов на российских и международных конференциях. Международное сотрудничество Участие в международных конференциях, симпозиумах, семинарах, и т.д. В 2011г. ведущие специалисты института международных приняли участие в работе 6 конференций и конгрессов, таких как конференции по ретровирусам и оппортунистическим инфекциям и цитокиновому семейству интерлейкина-1 (США), «Вакцина против СПИД» (Таиланд); ежегодный конгресс Европейского Респираторного общества (Нидерланды) и 24-е заседание Европейской ассоциации ученых, занимающихся изучением транспорта в желудочно-кишечном тракте (EITG 2011), Великобритания. В составе делегаций ФМБА России руководители института приняли участие в работе Биофармацевтического форума «БиоЭко-2011» с посещением Международной академии биотехнологий и медицины и ряда биотехнологических компаний г.Тяньцзинъ, КНР и 43-й специализированной выставки медицинской индустрии MEDICA 2011, г.Дюссельдорф, Германия. Один специалист института прошел обучение в рамках международного семинара по теме «Углубленный курс по биореакторному культивированию», г.Мюнхен, Германия. Состоялся визит в Национальный фармацевтический университет (г.Харьков, Украина) с целью обсуждения вопросов проведения совместных исследований. Основные задачи и направления перспективной научно-практической деятельности Перспективный план включает продолжение исследований по государственным контрактам с ФМБА России, Минпромторгом России и Минобрнауки России, Федеральным космическим агентством и ОАО «РКК «Энергия», финансируемым из средств федерального бюджета в рамках Государственного отраслевого заказа ФМБА России, ФЦП «Национальная система химической и биологической безопасности Российской Федерации (2009-2014 годы)», «Исследования и разработки по приоритетным направлениям развития НТК России на 2007-2012 годы», «Развитие фармацевтической и медицинской промышленности Российской Федерации на период до 2020 года и дальнейшую перспективу» и Федеральной космической программы России на 2006-2015 годы. Планируется также финансирование ряда перспективных проектов из фонда развития института. 10
