Министерство науки и высшего образования Российской Федерации Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования «Национальный исследовательский Томский политехнический университет» РЕФЕРАТ по теме Производство и контроль качества фармацевтических субстанций по дисциплине Контроль и безопасность химической продукции Выполнил: студент гр. 2ДМ3М Угрюмова И.Д. ___________________________ ___________________________ Проверил:_________________ ___________________________ к.х.н., доцент ОХИ ___________________________ Липских О.И. Томск, 2024 г. 1 Содержание Введение ................................................................................................................... 3 1 Требования нормативной документации при производстве фармацевтических субстанций и лекарственных препаратов ............................ 5 2 Производство фармацевтических субстанций .................................................. 8 3 Контроль качества фармацевтических субстанций ........................................ 11 3.1 Описание ....................................................................................................... 11 3.2 Растворимость .............................................................................................. 12 3.3 Температура плавления ............................................................................... 13 3.4 Прозрачность и степень мутности жидкостей .......................................... 15 3.5 Степень окраски жидкостей........................................................................ 16 3.6 Подлинность ................................................................................................. 17 3.7 Микробиологическая чистота ..................................................................... 18 3 Импорт фармацевтических субстанций ........................................................... 24 Заключение ............................................................................................................ 25 Список литературы ............................................................................................... 26 2 Введение Обеспечение населения страны лекарственными препаратами является одной из важнейших задач любого государства и вопросом национальной безопасности. Производитель лекарственных средств должен организовать их производство так, чтобы лекарственные средства гарантированно соответствовали своему назначению и предъявляемым к ним требованиям и не создавали риска для потребителей из-за нарушения условий безопасности, качества или эффективности. Ответственность за выполнение этих требований несут руководители и все работники предприятия-производителя, а также поставщики и дистрибьюторы [1]. Любое готовое изделие начинает свой путь с сырья, из которого его изготовят. В случае лекарственных препаратов сырьем выступают активные фармацевтические субстанции. Традиционно большую часть сырья, порядка 80% в мировом масштабе, производят в Индии и Китае. Зависимость от импортных поставок является проблемой для фармацевтической индустрии в любой стране, и последние годы наглядно продемонстрировали это для России, причем данная тенденция касается не только самих лекарственных препаратов, но и их непосредственных составляющих и вспомогательных материалов, таких как тара, материалы для упаковки. Рисунок 1 - Динамика объемов поставок фармакопейных и технических АФИ в Россию за январь 2021 года по апрель 2022 года и цена выпуска в свободное обращение [2] 3 Поэтому в текущей ситуации крайне важно налаживание производства фармацевтических субстанций на территории России, а также осуществление контроля над их обращением [3]. Так, еще в 2014 году была утверждена Государственная программа «Развитие фармацевтической и медицинской промышленности». Одним из направлений программы является налаживание полного цикла производства лекарственных средств в России, начиная от производства фармацевтической субстанции до выпускающего контроля готового лекарства. Несмотря на сложившуюся ситуацию, многие производители лекарств сами начали запускать собственные площадки по производству субстанций, чтобы выйти на полный цикл производства. Такие меры позволяют им не зависеть от зарубежных поставок и выпускать лекарства бесперебойно. Вовторых, государственная политика дополнительно стимулирует компании самостоятельно проводить весь производственный цикл. В начале декабря 2021 года Минпромторг России разработал проект постановления правительства: представил правило «второй лишний» для 15 лекарств из перечня стратегически значимых лекарственных средств (СЗЛС), в который входит 215 препаратов. Согласно проекту, если при государственных закупках этих лекарств будет подана заявка от поставщика, полный цикл производства которого, включая синтез субстанции, организован на территории стран – членов Евразийского экономического союза, заказчик должен отклонить все остальные заявки. Следовательно, из торгов могут быть исключены все остальные производители, если субстанция для выпускаемых ими лекарственных препаратов не локализована в ЕАЭС. При этом в министерстве отмечали, что 15 МНН – это пилотная часть проекта, а в перспективе он может быть расширен на весь перечень. Применять «второй лишний» при закупке препаратов из перечня стратегически значимых лекарственных средств будут с 1 июля 2025 года [4]. Производство лекарств в России продолжает расти, несмотря на все обстоятельства. По данным Росстата, в России с начала 2022 года выпустили почти на 30% больше лекарств по сравнению с аналогичным периодом прошлого года. Всего почти за целый 2022 год в России изготовили препаратов на 275 миллиардов рублей. Кроме того, выросло и производство лекарственных средств и материалов, применяемых в медицинских целях. Всего выпуском лекарств занимаются около 550 российских компаний, которые производят до 70% всех препаратов в упаковках и до половины от всех лекарственных средств из перечня жизненно необходимые и важнейшие лекарственные препараты (ЖНВЛП), который охватывает практически все виды медицинской помощи, предоставляемой пациентам. Он пересматривается не реже ра4 за в год комиссией Минздрава, а в конце года утверждается правительством. Препараты из него продаются по установленной государством цене, за чем следит Федеральная Антимонопольная Служба. В перечне ЖНВЛП на 2022 год — 808 медикаментов. Внимание к препаратам, которые включены в ЖНВЛП, особенно важно. По большей части туда входят лекарства, которые используются многими гражданами России каждый день, или препараты, без которых не может обойтись система здравоохранения. К 2030 эксперты прогнозируют рост объемов российского фармацевтического рынка от 3,9 до 4,5 трлн рублей [4]. К концу 2030-го года планируется увеличить долю стратегически значимых лекарственных средств, производство которых осуществляется по полному производственному циклу на территории России, до 90%. Решение указанных задач должно обеспечиваться путем предоставления бюджетных ассигнований в объекты капитального строительства для создания производства и развития производственных мощностей, а также предоставления мер поддержки, включая предоставление преимуществ в государственных закупках с учетом глубины локализации производства. 1 Требования нормативной документации при производстве фармацевтических субстанций и лекарственных препаратов Основополагающим нормативным документом, регулирующим обращение на территории России лекарственных средств, является Федеральный закон от 12.04.2010 № 61-ФЗ «Об обращении лекарственных средств» (далее – «Закон о лекарственных средствах»), в статье 4 которого приведен основной понятийный аппарат. Так, к лекарственным средствам относятся фармацевтические субстанции и лекарственные препараты. Под «лекарственными препаратами» понимаются лекарственные средства в виде лекарственных форм, применяемые для профилактики, диагностики, лечения заболевания, реабилитации, для сохранения, предотвращения или прерывания беременности [5]. Таким образом, лекарственный препарат представляет собой готовый продукт, применяемый для лечения, профилактики или диагностики заболеваний. В состав каждого лекарственного препарата входят фармацевтические субстанции, которые направлены на устранение патологических симптомов, а также вспомогательные вещества, которые используются для придания лекарственным препаратам необходимых физико-химических свойств. В свою очередь, фармацевтическая субстанция – это лекарственное средство в виде одного или нескольких обладающих фармакологической активностью действующих веществ вне зависимости от природы 5 происхождения, которое предназначено для производства, изготовления лекарственных препаратов и определяет их эффективность (ОФС.1.1.0006 [3]). Таким образом, исходя из данного законодателем определения, можно выделить следующие признаки фармацевтической субстанции: представляет собой вещество или совокупность веществ, которое может иметь разное происхождение: растительное или животное, если оно извлечено из живых организмов; минеральное, если извлечено из объектов неорганической природы; биотехнологическое, если оно получено путем переработки биологического сырья; химическое, если оно синтезировано, а в природе не встречается. обладает фармакологической активностью, т.е. совокупностью эффектов, вызванных введением данного вещества в организм и используемых при лечении или профилактике заболеваний; предназначена для изготовления или производства лекарственных препаратов. [3]. Условием предоставления лицензии на производство лекарственных средств является приложение к заявлению соискателя лицензии перечня видов фармацевтических субстанций, которые производитель лекарственных средств намерен производить (часть 2 статьи 8 Закона о лекарственных средствах). При этом в соответствии с Положением о лицензировании производства лекарственных средств, утвержденным постановлением Правительства РФ от 06.07.2012 № 686 (далее – «Постановление № 686»), подлежат лицензированию следующие производственные операции с фармацевтическими субстанциями [7]: Производство фармацевтических субстанций методом химического синтеза; Производство фармацевтических субстанций методом выделения из природных источников (раздельно по видам источников: растительного, животного, минерального происхождения, из органов (тканей) человека); Производство фармацевтических субстанций с использованием биологических процессов; Производство стерильных фармацевтических субстанций; Завершающие стадии производства фармацевтических субстанций (упаковка), испытания контроля качества, хранение и реализация. 6 Лицензирование деятельности по производству лекарственных средств для медицинского применения осуществляет Министерство промышленности и торговли Российской Федерации. Специфика фармацевтического производства такова, что к его организации предъявляются особые требования. Когда речь идет о здоровье людей, которые будут принимать выпущенные лекарства, требуются самые передовые технологии и правила производства. Основные требования к производству фармацевтических субстанций содержатся в Правилах надлежащей производственной практики (GMP) Евразийского экономического союза - Решение Совета ЕЭК № 77 «Об утверждении Правил надлежащей производственной практики Евразийского экономического союза». Они регламентируют требования к помещениям и оборудованию, используемым при производстве, персоналу, ведению документации, мерам контроля за качеством [8]. К особым требованиям к помещениям и оборудованию относятся требования к вентиляция и фильтрация воздуха, которые не допустят попадание чужеродных примесей из воздуха, требованиях к стерильности всего, с чем контактируют лекарства или сырье, влажности и даже освещению. После выпуска партии лекарственного средства установки и производственные помещения очищаются, промываются, проверяются на предмет остатков предыдущего продукта, только после этого можно приступить к выпуску новой серии. Персонал обязательно перемещается в переходной одежде, белых халатах или одноразовых комплектах. В тех цехах, где идет непосредственное производство лекарственных препаратов или контакт с ними, установлен особый уровень чистоты. Причем для непосредственного контакта с оборудованием надевается чистая технологическая одежда, которая полностью исключает контакт работника или его производственной одежды с лекарствами и веществами [8]. Требования к упаковке и маркировке фармацевтических субстанций, поступающих в обращение, установлены в части 2 статьи 46 Закона о лекарственных средствах и фармакопейной статье «Фармацевтические субстанции»[5]. Так, на первичной упаковке хорошо читаемым шрифтом на русском языке должны быть указаны наименование фармацевтической субстанции (МНН или группировочное, или химическое и торговое наименования), наименование производителя, номер серии и дата изготовления, количество в упаковке, срок годности и условия хранения. Должна присутствовать информация о назначении субстанции, мерах предосторожности. Упаковка и условия хранения должны обеспечивать качество субстанции в течение установленного срока годности. 7 2 Производство фармацевтических субстанций Производство фармацевтической субстанции включает в себя все стадии технологического процесса, позволяющие получить готовый продукт: приёмку материалов, операции по производству субстанции (стадия химической трансформации, ферментация, экстракция, очистка, выделение, перекристаллизация, высушивание, измельчение), контроль качества, выдачу разрешения на выпуск, хранение и реализацию. Стадия химической трансформации - стадия синтеза химической структуры активной фармацевтикой субстанции из молекулярных фрагментов-предшественников, (как правило, предусматривает образование или разрыв С-Х или С-С связи) [9]. В качестве примера кратко рассмотрим процесс производства субстанции лидокаина гидрохлорида. Лидокаин (2-(диэтиламино)-N-(2,6диметилфенил)ацетамид), C14H22N2O — лекарственное средство, местный анестетик и сердечный депрессант, используемый в качестве антиаритмического средства. В основе его местноанестезирующего действия лежит уменьшение проницаемости мембраны нейрона для ионов натрия. В результате этого снижается скорость деполяризации и повышается порог возбуждения, приводя к обратимому местному онемению. Обладает более интенсивным действием и более длительным эффектом, чем новокаин, хоть продолжительность его действия короче, чем у бупивакаина или прилокаина. Применяется в виде гидрохлорида C14H22N2O ∙ HCl. Применяется во всех видах местной анестезии: терминальной, инфильтрационной, проводниковой. Рассмотрим полный технологический процесс получения лидокаина гидрохлорида C14H22N2O∙HCl. Основные этапы: получение 2-хлор-2,6ацетксилидида из 2,6 – ксилидина, получение основания лидокаина, получение лидокаина гидрохлорида (Рисунок 2). 8 Рисунок 2 – Схема получения лидокаина гидрохлорида при ацилировании 2,6-ксилидина монохлоруксусным ангидридом Получение 2-хлор-2,6-ацетксилидида заключается в ацилировании 2,6ксилидина (2,6-диметиланилина) монохлоруксусным ангидридом, который образуется при взаимодействии монохлоруксусной кислоты с уксусным ангидридом. Полученный 2-хлор-N-(2,6-диметилфенил)ацетамид или 2-хлор2,6-ацетоксилидид подвергают взаимодействию с диэтиламином в мольном соотношении 1 : (2,5-3) в среде кипящего органического растворителя (чаще всего бензол, иногда толуол) в течении 4-5 ч. Температура кипения бензола составляет 80,1 °С. Получают лидокаин основание, а после лидокаина гидрохлорид действием соляной кислоты в присутствии этанола или диэтилового эфира (этоксиэтана). Выход лидокаина основания (теоретически по реакции I, рисунок 1) составляет 90-93 % от теории на 2-хлор-2,6-ацетксилидид. На рисунке 3 приведена процессуальная схема получения лидокаина гидрохлорида. 9 Рисунок 3 – Процессуальная схема получения лидокаина гидрохлорида: М1-М16 – мерники для используемых веществ; Р1- Р7 – реакторы; Т1 – теплообменник; Ц1, Ц2, Ц3, Ц4 – центрифуга; Ф1, Ф2 – друк-фильтры; СШ1, СШ2 – вакуумный сушильный шкаф; ФУ – фасовочно-упаковочный аппарат 3 Контроль качества фармацевтических субстанций Контроль качества фармацевтической субстанции проводится согласно ОФС.1.1.0006 и включает в себя отбор проб, проведение испытаний, проверки на соответствие требованиям спецификаций, а также процедуры организации, документирования и выдачи разрешения на выпуск. Фармацевтические субстанции подлежат следующим испытаниям [6]: • Описание. • Растворимость. • Подлинность. • Температура плавления. Температура затвердевания. Температура кипения, Плотность, Вязкость, Показатель преломления. Удельное вращение. Удельный показатель поглощения. • Прозрачность раствора, Цветность раствора. • pH и Кислотность или Щелочность. • Родственные примеси • Неорганические анионы (хлориды, сульфаты и др.). Неорганические катионы (железо, медь и др.). • Потеря в массе при высушивании или Вода. • Сульфатная зола. • Тяжелые металлы. Мышьяк. • Остаточные органические растворители. • Бактериальные эндотоксины или Пирогенность. • Аномальная токсичность • Гистамин и/или Депрессорные вещества • Микробиологическая чистота. Стерильность. • Количественное определение. • Упаковка и хранение. • Маркировка. Рассмотрим подробнее, как проводятся некоторые из данных испытаний. 3.1 Описание В описании фармацевтической субстанции указывают характеристики физического состояния и цвет. В необходимых случаях приводят информацию о запахе, гигроскопичности и полиморфизме. Для твердых субстанций необходимо указание формы вещества: «кристаллический», «мелкокристаллический» или «аморфный порошок». Характеристика кристал11 личности субстанции является одним из важных параметров, от которого зависит качество твердых дозированных лекарственных препаратов. В некоторых случаях может быть указан численный диапазон размера частиц, а также введено исследование формы кристаллов. Такие испытания выносят в отдельные разделы. Оценка полиморфизма субстанции обязательна в тех случаях, когда полиморфная модификация определяет фармакологическую активность лекарственного препарата и его фармако-технологические свойства [6]. 3.2 Растворимость Испытание на растворимость субстанций проводится согласно ОФС.1.2.1.0005 [10] (не путать с испытанием на растворение лекарственных препарата для определения количества действующего вещества, которое в условиях, указанных в фармакопейной статье или нормативной документации, за определенный промежуток времени должно высвобождаться в среду растворения из твердой дозированной лекарственной формы, и которое проводится в аппарате для растворения). В фармакопейном анализе понятие растворимости приводится в качестве характеристики приблизительной растворимости фармацевтических субстанций при фиксированной температуре. Испытание, если нет других указаний в фармакопейной статье, следует проводить при температуре (20 ± 2) ºC. Рекомендуется использовать растворители разной полярности (обычно три); не рекомендуется использование легкокипящих и легковоспламеняющихся (например, диэтиловый эфир) или очень токсичных (например, бензол, метиленхлорид) растворителей. Вещество считают растворившимся, если в растворе при наблюдении в проходящем свете не обнаруживаются частицы вещества. В растворе могут присутствовать следовые количества физических примесей, например, таких как волокна фильтровальной бумаги. Для веществ, образующих при растворении опалесцирующие растворы, соответствующее указание должно быть приведено в фармакопейной статье [10]. 12 Растворимость вещества (в пересчете на 1 г вещества) выражают в следующих терминах, приведенных в таблице 1. Таблица 1 – Обозначения растворимости фармацевтических субстанций и вспомогательных веществ [10] Термин Примерное количество растворителя (мл), необходимое для растворения 1 г вещества Очень легко растворим до 1 включительно Легко растворим от 1 до 10 включительно Растворим от 10 до 30 включительно Умеренно растворим от 30 до100 включительно Мало растворим от 100 до 1000 включительно Очень мало растворим от 1000 до 10 000 включительно Практически нерастворим более 10 000 Термин «смешивается с…» используется для характеристики жидкостей, смешивающихся с указанным растворителем во всех соотношениях. Если указано, что вещество растворимо в жирных маслах, то имеется в виду, что оно растворимо в любом масле, относящемся к классу жирных масел [10]. Методика определения растворимости К навеске растертого в тонкий порошок вещества прибавляют отмеренное количество растворителя и непрерывно встряхивают в течение 10 мин при (20 ± 2) ºC. Для медленно растворимых веществ, требующих для своего растворения более 10 мин, допускается нагревание на водяной бане до 30 ºC. Наблюдение производят после охлаждения раствора до комнатной температуры и энергичного встряхивания в течение 1 – 2 мин. 3.3 Температура плавления Температура плавления определяется по ОФС.1.2.1.0011 [11]. Это температура, при которой происходит переход вещества из твердого состояния в жидкое. Для определения температуры плавления в зависимости от физических свойств вещества при13 меняют капиллярный метод (метод 1), открытый капиллярный метод (метод 2), метод мгновенного плавления (метод 3) и метод каплепадения (метод 4). Для твердых веществ, легко превращаемых в порошок, применяют методы 1 и 3, для аморфных веществ, не растирающихся в порошок и плавящихся ниже температуры кипения воды (таких как жиры, воск, парафин, вазелин, смолы), – методы 2 и 4. Для веществ, не устойчивых при нагревании, определяют температуру разложения. Температурой разложения называют температуру, при которой происходит резкое изменение физического состояния или окраски вещества (вспенивание, побурение). Температура плавления, определённая капиллярным методом, представляет собой температуру, при которой последняя твёрдая частичка уплотнённого столбика вещества в капилляре переходит в жидкую фазу. Рисунок 4 – Прибор для определения температуры плавления капиллярным методом [11] В открытом капиллярном методе за температуру плавления принимают температуру, при которой вещество начинает подниматься по капилляру. В тех случаях, когда столбик вещества не поднимается в капилляре, за температуру плавления принимают температуру, при которой столбик вещества в капилляре становится прозрачным. 14 Рисунок 5 – Прибор для определения температуры плавления по методу мгновенного плавления [11] В методе мгновенного плавления определяют температуру t1, при которой вещество плавится мгновенно при соприкосновении с металлом блока прибора. Останавливают нагрев. Во время охлаждения через равные промежутки времени бросают несколько частичек вещества на поверхность блока, очищая ее после каждого испытания. Записывают температуру t2, при которой вещество прекращает мгновенно плавиться при соприкосновении с металлом. За результат принимают среднее арифметическое температур t1 и t2. 3.4 Прозрачность и степень мутности жидкостей Прозрачность и степень мутности жидкостей определяется согласно ОФС.1.2.1.0007 [12]. Прозрачность и степень мутности жидкостей определяют путем сравнения испытуемой жидкости с растворителем или эталонами визуально или инструментальным методом. Визуальное испытание проводят в одинаковых пробирках с притертой пробкой из прозрачного бесцветного и нейтрального стекла с внутренним диаметром около 15 мм. Для сравнения берут равные объемы эталона и испытуемой жидкости (5 или 10 мл). Испытание проводят при освещении электрической лампой матового стекла мощностью 40 Вт, расположенной над образцом, просматривая растворы перпендикулярно вертикальной оси пробирок на черном фоне через 5 мин после приготовления эталона. 15 Испытуемую жидкость считают прозрачной, если она по прозрачности не отличается от воды или растворителя, используемого при приготовлении испытуемой жидкости, или ее опалесценция (мутность) не превышает опалесценцию (мутность) эталона I. Эталонами служат взвеси из гидразина сульфата и гексаметилентетрамина. Для оценки прозрачности и степени мутности жидкостей допускается использование спектрофотометров или специальных приборов типа турбидиметров, нефелометров или эквивалентных, если это предусмотрено фармакопейной статьей. 3.5 Степень окраски жидкостей Степень окраски жидкостей (ОФС.1.2.1.0006) определяют визуально одним из двух методов путем сравнения с соответствующими эталонами. В статью включены методы контроля качества лекарственных средств по показателям «цветность» и «цветность раствора». Цветность является условно принятой количественной характеристикой для жидкостей, имеющих незначительную окраску [13]. Окраска двух растворов совпадает (при определенном источнике света), если их спектры поглощения и отражения идентичны и наблюдатель не замечает разницы между ними. Ахроматизм или отсутствие окраски означает отсутствие у испытуемого раствора абсорбции в видимой области спектра. Для визуальной оценки окраски жидкостей в зависимости от интенсивности в области коричневых, желтых и красных цветов используют один из двух методов, описанных в статье. Бесцветной считается жидкость, если ее окраска не отличается от воды (в случае растворов – от соответствующего растворителя) или она окрашена не более интенсивно, чем эталон В9. Сравнение степени окраски жидкости с эталонами (В, BY, Y, GY, R)1-3 обычно проводят по методу 1; в случае использования эталонов В4-9, (BY, Y, GY, R)4-7 применяют метод 2. Метод 1 Испытания проводят в одинаковых пробирках из бесцветного, прозрачного, нейтрального стекла с внутренним диаметром около 12 мм, используя равные объемы 16 – 2,0 мл испытуемой жидкости и воды, или растворителя, или эталона сравнения, описанного в статье. Сравнивают окраску при рассеянном дневном свете, горизонтально (перпендикулярно оси пробирок) на матово-белом фоне. Метод 2 Испытания проводят в одинаковых пробирках из бесцветного, прозрачного, нейтрального стекла с внутренним диаметром от 15 до 25 мм, используя равные слои высотой 40 мм испытуемой жидкости и воды, или растворителя, или эталона сравнения, описанного в статье. Сравнивают окраску при рассеянном дневном свете сверху вдоль вертикальной оси пробирок на матово-белом фоне. 3.6 Подлинность Подлинность фармацевтических субстанций определяется с помощью фармацевтического анализа. Процедура позволяет выявить соответствие образца заявленным данным в документах к нему и устанавливает пригодность ингредиента либо лекарственного препарата к медицинскому использованию. Для установления подлинности субстанции используют различные методы: Физические методы. Позволяют установить чистоту ингредиента или препарата. Они включают проверку температуры плавления, плотности, вязкости, растворимости в разных реагентах. При наличии примесей эти характеристики отличаются от заявленных данных. Для установления подлинности субстанции рекомендуются физико-химические и химические методы: инфракрасная спектрометрия, абсорбционная спектрофотометрия, ЯМР-спектроскопия, тонкослойная, газовая и высокоэффективная жидкостная хроматография и качественные химические реакции. Метод ИК-спектрометрии является приоритетным при идентификации субстанций [3]. Выбор методов исследования зависит от химических, физических и физикохимических свойств определяемых веществ, типа лекарственного средства. Основным методологическим принципом установления подлинности является комплексный подход, заключающийся в использовании нескольких методов анализа. 17 3.7 Микробиологическая чистота Субстанции могут быть контаминированы микроорганизмами. В номенклатуре лекарственных средств (НЛС) допускается лимитированное количество микроорганизмов при отсутствии определенных видов, представляющих опасность для здоровья человека. Испытание лекарственных средств на микробиологическую чистоту (согласно ОФС.1.2.4.0002) проводят в асептических условиях с помощью определенных методов и питательных сред [14]. Принцип определения микробиологической чистоты основан на посеве определённого количества образца препарата на питательные среды, инкубировании, подсчёте выросших колоний и выявлении специфических микроорганизмов, а также интерпретации полученных результатов. Некоторые методы определения микробиологической чистоты [14]: Чашечный агаровый метод. Для культивирования бактерий используют соевоказеиновый агар или сухую среду № 1, а для культивирования плесневых или дрожжевых грибов — агар Сабуро с глюкозой или сухую среду №2. Метод мембранной фильтрации. Используется для проверки водных растворов, растворимых ингредиентов, масел и их растворов, мазей, кремов и других полутвёрдых веществ с высоким антибактериальным действием. Методика подразумевает несколько стадий исследования образца: смачивание мембран, подготовка проб и фильтрация их через мембранные фильтры, отмывка мембранных фильтров, добавление отфильтрованных осадков в питательную среду с последующим культивированием. Метод определения наиболее вероятных чисел (НВЧ). Применим для исследования образцов с пониженным уровнем загрязнения или в ситуациях, когда использование иных методов невозможно. Метод допустим к использованию только для целей подсчёта общего количества микроорганизмов [14]. Для идентификации конкретных видов микроорганизмов используются диагностические и селективные питательные среды, биохимические тесты, экспресс-тесты, микробиологические анализаторы. 18 Таблица 2 – Микробиологическая чистота субстанций и вспомогательных веществ для производства лекарственных препаратов [14] Категория Субстанции, вспомогательные материалы 1.2 Субстанции для производства Рекомендуемые нормы А. Стерильных лекарственных препаратов, которые не подвергаются стерилизации Субстанции должны быть стерильными Б. Стерильных лекарственных препаратов, которые подвергаются стерилизации; Нестерильных лекарственных препаратов, относящихся к категории 2 · Общее число аэробных бактерий, дрожжевых и плесневых грибов (суммарно) не более 102 КОЕ в 1 г (мл) · Отсутствие энтеробактерий, устойчивых к желчи, в 1 г (мл) · Отсутствие Pseudomonas aeruginosa в 1 г (мл) · Отсутствие Staphylococcus aureus в 1 г (мл) 2.2 Субстанции синтетического происхождения для производства нестерильных лекарственных препаратов · Общее число аэробных микроорганизмов – не более 103 КОЕ в 1г (мл) · Общее число дрожжевых и плесневых грибов – не более 102 КОЕ в 1 г (мл) · Отсутствие Escherichia coli в 1 г (мл) 3.2 Субстанции природного происхождения (растительного, животного или минерального) для производства нестерильных лекарственных препаратов · Общее число аэробных микроорганизмов – не более 104 КОЕ в 1 г (мл) · Общее число дрожжевых и плесневых грибов – не более 102 КОЕ в 1 г (мл) · Отсутствие Escherichia coli в 1 г (мл) · Отсутствие бактерий рода Salmonella в 25 г (мл) · Отсутствие Pseudomonas aeruginosa в 1 г (мл) · Отсутствие Staphylococcus aureus в 1 г (мл) · Энтеробактерий, устойчивых к желчи, не более 102 КОЕ в 1 г (мл) 19 5.2 Субстанции для производства биологических лекарственных препаратов, включая ИЛП: А. Для производства стерильных лекарственных препаратов, которые не подвергаются стерилизации Субстанции должны быть стерильными Б. Для производства стерильных лекарственных препаратов, которые подвергаются стерилизации · Общее число аэробных микроорганизмов – не более 102 КОЕ в 1 г (мл) · Отсутствие энтеробактерий в 1 г (мл) · Отсутствие Pseudomonas aeruginosa в 1 г (мл) · Отсутствие Staphylococcus aureus в 1 г (мл) · Менее 10 дрожжевых и плесневых грибов в 1 г (мл) В. Для производства ИЛП, содержащих живые микроорганизмы: – в которых не допускаются микроорганизмыконтаминанты (живые вакцины (инъекционные препараты), бактериофаги, растворы для приема внутрь и ректально); – в которых лимитируются микроорганизмыконтаминанты (живые вакцины для приема внутрь (таблетки); бактериофаги Не допускается присутствие микроорганизмов-контаминантов (определение проводят в соответствии с ОФС «Стерильность») Г. Для производства ИЛП-пробиотиков, содержащих · Отсутствие посторонних аэробных бактерий в 200 мг живые микроорганизмы, в которых допускаются мик- · Менее 10 дрожжевых и плесневых грибов в 200 мг роорганизмы-контаминанты Д. Для производства ИЛП, содержащих инактивиро- Субстанции должны быть стерильными ванные микроорганизмы, антигены и антитела, белки, пептиды, гликопротеины и др. 20 3.8 Стерильность Фармацевтические субстанции должны быть стерильными. Данное испытание вводят для субстанций, используемых в производстве готовых стерильных лекарственных средств, которые не подвергаются процедуре стерилизации. Испытание на стерильность проводят двумя методами: методом прямого посева или методом мембранной фильтрации. Метод мембранной фильтрации используют во всех случаях, когда природа препарата, его физико-химические свойства позволяют фильтровать его через мембранные фильтры. Метод прямого посева используют для испытания на стерильность ЛС, не обладающих антимикробным действием или антимикробное действие которых можно устранить разведением или инактивированием, а также для препаратов, испытание которых невозможно выполнить методом мембранной фильтрации. При испытании на стерильность параллельно проводятся соответствующие отрицательные контроли. Испытание на стерильность проводят согласно ОФС.1.2.4.0003 в асептических условиях в ламинарных установках, чистых помещениях или изоляторах класса чистоты А [15]. Метод мембранной фильтрации. Процедура испытания на стерильность методом мембранной фильтрации состоит из следующих основных стадий: смачивание мембран, подготовка образцов и фильтрация содержимого всех емкостей через мембранные фильтры, отмывка мембранных фильтров соответствующим стерильным раствором, добавление питательной среды и инкубирование посевов. Испытание выполняют с использованием фильтрационных установок открытого или закрытого типа, позволяющих в асептических условиях переносить и фильтровать испытуемый препарат через мембранные фильтры (внешний диаметр 47 мм; диаметр пор 0,45 мкм), способные улавливать микроорганизмы. Фильтрационная установка открытого типа должна быть смонтирована таким образом, чтобы испытуемый образец можно было внести и профильтровать в условиях асептики. После окончания фильтрации мембрану асептически переносят в питательную среду. При использовании закрытой стерильной системы с мембраной, вмонтированной в канистру, после фильтрации питательную среду вносят непосредственно в канистру на мембрану. Фильтры 21 из нитратцеллюлозы используют для водных, масляных и слабых спиртовых растворов, фильтры из ацетатцеллюлозы – для концентрированных спиртовых растворов и кислот. Гидрофобный край фильтра и низкая сорбционная способность обеспечивают эффективную отмывку мембраны и сводят к минимуму адсорбцию препарата, обладающего антимикробным действием. Для препаратов, не обладающих антимикробным действием, можно использовать фильтры без гидрофобного края, смачивая их перед фильтрацией используемым разбавителем. Если испытуемый препарат не обладает антимикробным действием, в ходе испытания возможно исключить процедуру промывания фильтров. Метод прямого посева используют для испытания на стерильность субстанций, не обладающих антимикробным действием, или тех препаратов, испытание которых невозможно выполнить методом мембранной фильтрации. В том случае, если препарат обладает антимикробным действием в условиях испытания, его нейтрализуют путем добавления подходящих инактиваторов или увеличивая объем питательной среды. Добавляемый инактиватор в заданной концентрации не должен подавлять рост тест-штаммов. При необходимости инактиватор можно добавлять и в питательную среду. Испытуемые образцы засевают непосредственно в питательные среды в соотношении 1:10 или 1:20. Соотношение количества испытуемого материала и используемой питательной среды должно быть определено при проверке антимикробного действия препарата. Для субстанций, вызывающих помутнение питательной среды (препараты, содержащие сорбент, микробные клетки и др.), когда визуально нельзя определить наличие или отсутствие роста микроорганизмов или возникают сомнения при учете результатов, посев производят по указанной выше схеме, а на 5-7 сутки производят пересев на свежую питательную среду. Все посевы выдерживают при адекватной температуре до окончания инкубации (14 суток со дня первичного посева). Во время инкубации периодически просматривают посевы. Наличие роста микроорганизмов определяют визуально в проходящем свете. Если испытуемое ЛС вызывает помутнение питательной среды и визуально нельзя определить наличие или от22 сутствие микробного роста, через 14 суток после начала испытания переносят не менее 1 мл помутневшей среды в пробирки с аналогичной стерильной средой. Инкубируют исходные и повторные посевы. Общее время инкубации должно составлять не менее чем 14 + 4 суток от начала испытания. Для субстанций, вызывающих помутнение питательной среды, пересев на аналогичную питательную среду производится на 5-7 сутки с последующей инкубацией 14 суток со дня первичного посева. При отсутствии роста микроорганизмов, считают, что испытуемый препарат соответствует требованиям испытания на стерильность. При обнаружении роста микроорганизмов, определяемого визуально по наличию мутности, осадка, хлопьев и других изменений среды и подтверждаемого микроскопическим исследованием, считают, что испытуемый препарат не соответствует требованиям испытания на стерильность. В этом случае проводят расследование причин несоответствия. Результаты испытания на стерильность могут быть признаны недостоверными в случае, если выполняется одно или несколько условий, приведенных ниже: получены неудовлетворительные результаты микробиологического контроля окружающей среды (воздушной среды, поверхностей и рук персонала и др.) при проведении испытания на стерильность; выявлены ошибки, допущенные в ходе испытания; обнаружен рост микроорганизмов в отрицательном контроле (контроль стерильного растворителя/разбавителя или питательной среды); питательная среда нестерильна и/или её ростовые свойства неудовлетворительны; выявлены ошибки в ходе процесса стерилизации материалов. Если результаты испытания признаны недостоверными (в случае обнаружения ошибок в ходе анализа), тест повторяют на том же количестве образцов, что и первоначально, исключая препараты ИЛП, повторное испытание которых проводят на удвоенном количестве образцов. Если в результате повторного испытания не обнаруживают рост микроорганизмов, считают, что препарат соответствует требованиям испытания на стерильность. 23 Если в результате повторного испытания обнаруживают рост микроорганизмов, считают, что препарат не соответствует требованиям испытания на стерильность. 3 Импорт фармацевтических субстанций Правила ввоза на территорию России лекарственных средств, включая и фармацевтические субстанции, регламентирован статьей 47 Закона о лекарственных средствах и постановлением Правительства России от 01.06.2021 № 853 [7]. По общему правилу, ввозимые в Российскую Федерацию лекарственные средства должны содержаться в государственном реестре лекарственных средств. Данное правило применимо, в том числе и к фармацевтическим субстанциям. Допускается ввоз в Российскую Федерацию конкретной партии незарегистрированных фармацевтических субстанций для включения ее в ГРЛС на основании разрешения, выданного Минздравом России. Рассмотрение заявления производится в срок, не превышающий 5 (пяти) рабочих дней. Плата за выдачу указанного разрешения не взимается. Качество ввозимого товара должно быть подтверждено сертификатом производителя лекарственных средств, удостоверяющим его соответствие требованиям фармакопейных статей или иных нормативных документов. За нарушение требований к качеству не исключен риск привлечения к административной ответственности за недостоверное декларирование ввозимых товаров 24 [4]. Заключение Цель контроля качества — не допустить к реализации продукцию, не соответствующую установленным требованиям — регистрационному досье, протоколу клинических исследований и спецификации на продукцию. Для каждого промежуточного продукта и АФС должны быть подготовлены записи по производству и контролю качества, которые могут быть собраны в досье на серию продукции, включающее в себя полную информацию о производстве и контроле качества каждой серии. Записи лабораторного контроля должны включать полную информацию о данных, полученных в ходе всех испытаний, проведенных для подтверждения соответствия установленным спецификациям и стандартам, включая исследования и количественные определения. Для подтверждения постоянства процесса следует регулярно проводить обзор качества фармацевтических субстанций. Такие обзоры качества следует проводить, как правило, ежегодно с последующим документальным оформлением. Они должны включать в себя, по крайней мере, следующее: обзор результатов контроля в процессе производства по критическим точкам и испытаний АФС по критическим показателям; обзор всех серий, не соответствующих утвержденным спецификациям; обзор всех критических отклонений или несоответствий и связанных с ними расследований; обзор любых изменений, внесенных в процессы или аналитические методики; обзор результатов программы изучения стабильности; обзор всех возвратов, претензий и отзывов, связанных с качеством; обзор адекватности корректирующих действий. Необходимо анализировать результаты этого обзора и оценивать, следует ли предпринимать корректирующее действие или проводить повторную валидацию. Обоснование необходимости такого корректирующего действия должно быть оформлено документально. Согласованные корректирующие действия следует осуществлять своевременно и эффективно. 25 Список литературы 1. ГОСТ Р 52249-2009. Национальный стандарт Российской Федерации. Правила производства и контроля качества лекарственных средств (утв. и введен в действие Приказом Ростехрегулирования от 20.05.2009 N 159-ст) 2. Сетевое издание РИА Новости [Электронный ресурс] / Режим доступа: URL: https://ria.ru/20221227/farmsubstantsii_promomed-1821217314.html (дата обращения: 05.10.2024); 3. Юридическая фирма BRACE [Электронный ресурс] / Режим доступа: URL: https://brace-lf.com/informaciya/farmatsevticheskoe-i-meditsinskoe-pravo/1814farmatsevticheskie-substantsii-pravovoe-regulirovanie-vneseniya-v-grls-proizvodstvaimporta-i-inykh-aspektov-obrashcheniya (дата обращения: 05.10.2024). 4. Сетевое издание «Фарммедпром» [Электронный ресурс] / Режим доступа: URL: https://pharmmedprom.ru/news/kak-rabotaet-farmatsevticheskaya-promishlennost-vrossii-ot-idei-do-gotovogo-produkta-v-rukah-patsienta/ (дата обращения: 05.10.2024). 5. Федеральный закон N 61-ФЗ "Об обращении лекарственных средств" от 12.04.2010. 6. Государственная фармакопея Российской Федерации XV издания, ГФ РФ, ОФС.1.1.0006 Фармацевтические субстанции. 7. Правительства РФ № 686 «Об утверждении положения о лицензировании производства лекарственных средств» от 06.07.2012. 8. Решение Совета ЕЭК № 77 «Об утверждении Правил надлежащей производственной практики Евразийского экономического союза» от 03.11.2016. 9. Рекомендации Коллегии ЕЭК № 26 «О Руководстве по разработке и производству активных фармацевтических субстанций» от 22.12.2020. 10. Государственная фармакопея Российской Федерации XV издания, ГФ РФ, ОФС.1.2.1.0005 Растворимость 11. Государственная фармакопея Российской Федерации XV издания, ГФ РФ, ОФС.1.2.1.0011 Температура плавления 26 12. Государственная фармакопея Российской Федерации XV издания, ГФ РФ, ОФС.1.2.1.0007 Прозрачность и степень мутности жидкостей 13. Государственная фармакопея Российской Федерации XV издания, ГФ РФ, ОФС.1.2.1.0006 Степень окраски жидкостей 14. Государственная фармакопея Российской Федерации XV издания, ГФ РФ, ОФС.1.2.4.0002 Микробиологическая чистота 15. Государственная фармакопея Российской Федерации XV издания, ГФ РФ, ОФС.1.2.4.0003 Стерильность 27
