Билет 1. Устройство мех. части светового микроскопа Механическая система микроскопа предназначена для размещения образцов (предметный столик), управления оптикой (фокусировочный механизм, револьверное устройство, окулярная трубка) и соединения всех элементов оптического прибора (штатив, основание).Предметный столик – механическая часть микроскопа, на которую кладут образцы для исследований. На нем могут быть установлены препаратодержатели или препаратоводитель. Фокусировочный механизм предназначен для настройки резкости изображения. Револьверное устройство - оно отвечает за смену увеличений. В него устанавливаются объективы разной кратности, что позволяет регулировать мощность оптики прямо во время наблюдений. Подставка - это основание микроскопа. Тубус - цилиндр, в который сверху вставляют окуляры. Тубус подвижно соединен с головкой тубусодержателя, его фиксируют стопорным винтом в определенном положении. Ослабив стопорный винт, тубус можно снять. Револьвер предназначен для быстрой смены объективов, которые ввинчиваются в его гнезда. Тубусодержатель несет тубус и револьвер. Винт грубой наводки используют для значительного перемещения тубусодержателя, а, следовательно, и объектива с целью фокусировки объекта при малом увеличении. Билет 2. Оптическая часть светового микроскопа К оптической системе относят объективы, окуляры и осветительное устройство (конденсор с диафрагмой и светофильтром, зеркало или электроосветитель). Объектив - определяет полезное увеличение объекта. Объектив состоит из металлического цилиндра с вмонтированными в него линзами, число которых может быть различным. Увеличение объектива обозначено на нем цифрами. В учебных целях используют обычно объективы х8 и х40. Качество объектива определяет его разрешающая способность. Окуляр состоит из 2-3 линз, вмонтированных в металлический цилиндр. Между линзами расположена постоянная диафрагма, определяющая границы поля зрения. Нижняя линза фокусирует изображение объекта, построенное объективом в плоскости диафрагмы, а верхняя служит непосредственно для наблюдения. Увеличение окуляров обозначено на них цифрами: х7, х10, х15. Окуляры не выявляют новых деталей строения, и в этом отношении их увеличение бесполезно. Таким образом, окуляр, дает прямое, мнимое, увеличенное изображение наблюдаемого объекта, построенное объективом. Для определения общего увеличения микроскопа следует умножить увеличение объектива на увеличение окуляра. Осветительное устройство состоит из зеркала или электроосветителя, конденсора с ирисовой диафрагмой и светофильтром, расположенных под предметным столиком. Они предназначены для освещения объекта пучком света. Билет 3. Осветительное устройство свет микроскопа Осветительное устройство состоит из зеркала или электроосветителя, конденсора с ирисовой диафрагмой и светофильтром, расположенных под предметным столиком. Они предназначены для освещения объекта пучком света. Зеркало служит для направления света через конденсор и отверстие предметного столика на объект. Оно имеет две поверхности: плоскую и вогнутую. В лабораториях с рассеянным светом используют вогнутое зеркало. Электроосветитель устанавливается под конденсором в гнездо подставки. Конденсор состоит из 2-3 линз, вставленных в металлический цилиндр. При подъеме или опускании его с помощью специального винта соответственно конденсируется или рассеивается свет, падающий от зеркала на объект. Ирисовая диафрагма расположена между зеркалом и конденсором. Она служит для изменения диаметра светового потока, направляемого зеркалом через конденсор на объект, в соответствии с диаметром фронтальной линзы объектива и состоит из тонких металлических пластинок. С помощью рычажка их можно то соединить, полностью закрывая нижнюю линзу конденсора, то развести, увеличивая поток света. Кольцо с матовым стеклом или светофильтром уменьшает освещенность объекта. Оно расположено под диафрагмой и передвигается в горизонтальной плоскости. Билет 4. Принципиальное устройство электронного м-а Возможности световых микроскопов ограничены волновой природой света. При оптимальных условиях световые микроскопы позволяют наблюдать, вследствие явления дифракции, объекты размером не менее 1/2 - 1/3 длины световой волны. Наибольшими возможностями в смысле разрешающей способности обладают электронные микроскопы, в которых пучок света заменен пучком электронов, длина волны которых составляет 0,04-0,05А. Принципиальная оптическая схема электронного микроскопа аналогична схеме светового микроскопа, в котором все оптические элементы заменены соответствующими электрическими: источник света заменен источником электронов, стеклянные линзы - линзами электромагнитными, В электронных микроскопах просвечивающего типа различают три системы: электроннооптическую, электропитания, Электронно-оптическая система снабжена двумя конденсорными, объективной, промежуточной и проекционной линзами, обеспечивающими увеличение электронного микроскопа от 300 до 200000 крат. Промежу­точная и проекционная линзы обеспечивают плавное изменение увеличения при постоянном поле изображения. Билет 5. Микроскопия в светлом поле зрения Метод исследования окрашенных клеток и тканей, в которой для освещения объектов применяются лучи видимого спектра. Изображение создается за счет различий в степени поглощения света разными участками изучаемого окрашенного объекта. При прохождении луча через окрашенный объект происходит изменение интенсивности света, то есть изменение амплитуды световой волны. Также амплитудные изменения хорошо улавливаются глазом человека. Билет 6. Иммерсионная микроскопия. Метод микрокопирования, при котором объектив, погруженный в жидкость, нанесенную на препарат. Лучи при переходе из 1 среды в другую преломляются и рассеиваются. В результате этого изображения изучаемого объекта искажается. При иммерсионной микроскопии увеличивается четкость изображения объекта. Иммерсионная жидкость ( масло, водный растворы, синтетическая жидкость)Кедровое, миндальное, вазелиновое масло, вода, водный раствор глицерина. На объективе черной полосочкой обозначается масло ( oil), белая- водные растворы. Специальные иммерсионные объективы. На препарат наносят каплю масла и погружают в нее объектив (х90). По Граму. Билет 7. Фазово-контрастная микроскопия. Метод микрокопирования малоконтрастных объектов, не видимых при обычной световой микроскопии. При фазовоконтрастной микроскопии контрастность изображения достигается сдвигом фаз световой волны. Живые клетки микроорганизмов прозрачные и слабо поглощают свет, поэтому они изменяют фазу проходящих лучей(скорость). Ф-к микроскопия позволяет преобразовать малоконтрастное изображение различаются по плотности структур в контрастное и отчетливое изображение. В фазовом конденсоре располагается кольцевая диафрагма, имеющая прозрачное световое кольцо. Фаз. Объектив имеет внутри фазовую пластинку с кольцом. Размер светового кольца конденсора должен соответствовать размеру фазового кольца объектива. Билет 8. Темнопольная микроскопия. Объект освещается сбоку, поэтому исследователем воспринимается отраженные лучи. При таком микрокопирование можно обнаружить частицы, которые при светопольной м-и не видны (бактерии- листерии рыбы). В основе темнопольной м-и лежит в основе рассеивание света при прохождении светового пучка через оптически неоднородную среду. Для достижения этого эффекта используют специальный темнопольный конденсор, который устанавливают на место обычного конденсора. В темнопольном конденсоре внутренняя боковая поверхность зеркальная. Также такой эффект рассеивания достигается темнопольного фильтра. Это черный кружок бумаги, помещается между линзами конденсора в центр. часть линзы оставалась свободной. Билет 9. Люминесцентная микроскопия. Флюоресцентная м-я основана на явлении люминесценции. Она представляет собой способность объекта под влиянием подающего света (уф лучей) испускать лучи с большей длиной волны и др. цвета. При такой м-и используют естественную (первичную, собсвенную) л-ю микробов, так и вторичную (наведенную) л-ю. Собственная л-я наблюдается без предварительного окрашивания изучаемого объекта специальными красителями. Большинство биологических объектов имеют неяркую собственную л-ю, поэтому для их изучения используют л-ю. Вторичная возникает после окраски препарата специальными люминесцирующими красителями (флюорохромами), которые способны связываться со специфическими структурами бак. клеток. Билет 10. Правила приготовления препаратов для микроскопии микробов в живом состоянии Для изучения формы и выявления подвижности бактерий их исследуют в живом состоянии в препаратах раздавленной или висячей капли. Раздавленная капля. На предметное стекло наносят каплю бульонной культуры. При обильном росте микробов культуру предварительно разводят стерильным изотоническим раствором хлорида натрия. Нанесенную на предметное стекло каплю раздавливают. Для этого покровное стекло ставят на ребро у края капли и опускают, постепенно вытесняя воздух, находящийся между предметным и покровным стеклами, чтобы избежать образования в капле пузырьков воздуха. В правильно приготовленном препарате раздавленной капли стекла плотно склеиваются и жидкость тончайшим слоем заполняет пространство между ними, не выступая за края покровного стекла. Препарат микроскопируют, используя объективы х40 или х50. Очень хорошие результаты дает микроскопия этих препаратов в темном поле. Недостаток метода в том, что препараты быстро высыхают, поэтому следует просматривать их сразу после изготовления или помещать во влажную камеру. Висячая капля. На середину обезжиренного покровного стекла наносят небольшую каплю культуры в бульоне или физиологическом растворе, покрывают предметным стеклом с лункой таким образом, чтобы капля свободно висела в центре лунки, не касаясь ее дна. Для того чтобы создать герметизированную камеру, края лунки предварительно смазывают вазелином. После этого предметное стекло с прилипшим к нему покровным стеклом переворачивают. Висячую каплю микроскопируют с плоским зеркалом и суженной диафрагмой. При малом увеличении (х8) находят край капли, отчетливо видный в затемненном поле зрения. По одну сторону края видно множество мельчайших капелек конденсата, осевших на внутренней поверхности покровного стекла, по другую сторону края фон равномерно серого цвета – искомая капля. Найденный край капли устанавливают в центре поля зрения микроскопа при малом увеличении и, не сдвигая препарата, переходят на объектив (х40) или иммерсионную систему, слегка расширив диафрагму микроскопа. Подвижные бактерии проходят с одинаковой скоростью большие пространства, иногда через все поле зрения микроскопа, вращаясь вокруг своей оси. При микроскопировании препаратов в темном поле зрения на верхнюю поверхность конденсора наносят каплю кедрового или вазелинового масла, поверх которой очень осторожно, чтобы не образовалось пузырьков воздуха, накладывают препарат. На покровное стекло наносится вторая капля масла. Наносить масло на обе поверхности препарата необходимо для того, чтобы при микроскопировании с иммерсионной системой проходящие лучи света не преломлялись. Билет 11. Правила приготовления препаратов микроскопии микробов в окрашенном состоянии. для Исслед. мат-л распредел. слоем по поверх-ти предметного хорошо обезжир-го стекла. Мазки готовят из культур микробов, пат. мат-ла и из орг-в трупов. Этапы приготовления препаратов: 1. Приготовление препарата на обезжир-м предмет-м стекле; 2. Высушивание препаратов; 3. Фиксация мазка; 4. Окраска мазка. На чистое обезжиренное предметное стекло платиновой петлей наносят материал. Если он жидкий, то каплю, взятую петлей, непосредственно равномерно распределяют по поверхности предметного стекла тонким слоем на площади примерно в 1 см2. Если же изучается агаровая культура, то на предметное стекло предварительно наносят каплю стерильной воды, в которой тонким слоем распределяется исследуемая культура. Получается так называемый мазок. Все манипуляции по приготовлению мазка необходимо выполнять с соблюдением правил асептики (над пламенем горелки стерилизуют петли, концы сосудов с исследуемым материалом, ватные пробки и пр.). Сделав мазок, его сушат при комнатной температуре, поместив на специальный сушильный столик. Для ускорения высыхания можно осторожно подсушить мазок над пламенем горелки. Фиксация мазка. Предметное стекло с высушенным мазком, обращенным вверх от пламени горелки, проводят 34 раза, маяковидные движения. Цель фиксации - убить микробные клетки, прикрепить их к стеклу и облегчить окрашивание. Мертвые клетки гораздо лучше воспринимают краску, чем живые. Излишнего нагревания мазков нужно избегать, так как при этом сильно изменяется структура клеток, мазок будет плохо окрашиваться. При недостаточной же фиксации мазка его можно смыть при последующей окраске. Практически достаточность нагревания определяют прикладывая предметное стекло к руке. Окраска мазков. В лабораторной практике пользуются простыми и сложными методами окраски микробов. Сложные способы окраски применяются для детального изучения структуры клеток. При простой окраске препаратов на фиксированный мазок наливают несколько капель какого-либо красящего раствора (метиленовой сини, разведенного фуксина и пр.). Для получения более чистых препаратов рекомендуется красящий раствор наливать на отрезок фильтровальной бумаги, которой покрывают мазок. Раствор краски в среднем выдерживают на мазке 2-3 мин (в зависимости от вида краски). Фуксин красит интенсивно, причем окрашиваются одинаково хорошо все виды бактерий. Продолжительность окрашивания раствором фуксина 1-2 мин. Щелочную метиленовую синь оставляют для окрашивания мазка на 2-3 мин. Она красит менее сильно, но препарат получается более изящный, к тому же различные бактерии приобретают окраску различной интенсивности. При окраске метиленовой синью у крупных клеток видно ядро и цитоплазма. Раствор генцианвиолета держат для окраски 2-3 мин.По истечении указанного срока краску сливают с предметного стекла. Если на мазок помещалась фильтровальная бумага, ее нужно осторожно снять пинцетом и затем промыть мазок легкой струей дистиллированной воды (можно и водопроводной). Струю воды следует направлять на ребро предметного стекла, а не на мазок. Промытый препарат высушивают на воздухе при комнатной температуре или с помощью полосок фильтровальной бумаги. На сухой мазок наносят каплю кедрового масла. Билет 12. Простое окрашивание мазков. Для окрашивания микробов используют анилиновые красители (основные, кислые, нейтральные). М-о лучше окрашивается основными красками. Для окраски препаратов готовят спиртовые, водно-спиртовые и водные растворы. В некоторых случаях добавляют в качестве протравы карболовую кислоту, щелочь (протрава-это соединение, используемое для удержания молекул пятна на микроорганизме). Наиболее частоупотребляемые красители: синие- метиловый синий, водный синий, опаловый синий; фиолетовый- метиловый фиолетовый, кристаллический фый, генциан виолет; красные- фуксин кислый, сафранин, конго красный; зеленыемалахитовый зеленый, бриллиантовый зеленый; жетло-коричневый- хризоил, везувин. При простом методе окраски на фикс.мазок наливают неск.капель к-л спиртоводного или водного р-ра красок на 1-2 мин. Затем краску смывают дистил. водой и мазок обсуш-т между двумя полосками фильтровальной бумаги. Обычно фуксином 1:10 красят 10-30 сек., а метиленовой синькой 2-10 мин. Фуксин окраш-т мазки более интенсивно. Синька- более нежный. Мазок после обсуш-я фильтров. бумагой д/б совершенно сухим, если влажно- размазанная картина. Большинство микробов легко и быстро окрашивается водными или спиртоводными р-ми красок. Для повышения красящей способности воздействуют на краску высокой темп. до появления паров. Билет 13. Сложные методы окрашивания микробов Сущность этих методов заключается в воздействии на мазок двух красящих веществ, из которых одно является основной, главной краской, а другое дополнительной - контраст. Окрашивание по Граму. Этот метод позволяет все микроорганизмы разделить на две группы; грамположительные (гр+) и грамотрицательные (гр-). Техника окраски: 1. На фиксированный мазок кладут кусочек фильтровальной бумаги, пропитанной 1%-ым спиртовым раствором генцианвиолета. Наносят на бумажку 2-3 капли воды. Окрашивают 2-3 минуты. 2. Бумажку снимают и не промывая препарата водой, наносят раствор Люголя на 2 минуты. 3. Сливают раствор Люголя и препарат обрабатывают 96%-ным этиловым спиртом в течение 20-30 секунд. 4. Тщательно промывают мазок водой. 5. Окрашивают мазок фуксином Пфейффера в течение 2-3 минут. 6. Препарат промывают водой. 7.Высушивают и микроскопируют. Грам положительные микроорганизмы окрашиваются в фиолетовый цвет, а грамотрицательные - в розовый. Окрашивание спор бактерий проводят методами ЦиляНельсена или Ожешки. При использовании этих методов вегетативные клетки окрашиваются в синий цвет, а споры в красный цвет. При окрашивании спор по методу Ожешки на предметном стекле готовят густой мазок исследуемой культуры, высушивают его и, не фиксируя, наливают на него 0,5% раствор соляной кислоты. Препарат подогревают в течение 2 минут до появления паров. Кислоту сливают. После этого препарат промывают водой, высушивают и фиксируют. На препарат помещают полоску фильтровальной бумаги и наносят несколько капель карболового фуксина Циля. Препарат подогревают на пламени спиртовки до появления паров. Затем препарат обесцвечивают 5% серной кислотой и докрашивают дополнительно метиленовой синькой в течение 3-5 минут. Споры окрашиваются фуксином в ярко-красный цвет, а вегетативные клетки обесцвечиваются серной кислотой и окрашиваются метиленовой синькой в синий цвет. Окраска по Циль-Нильсену. 1. Фиксированный на пламени мазок покрывают полоской фильтровальной бумаги, наливают на не карболовый раствор фуксина и подогревают; при появлении паров прекращают нагревание и оставляют краску на препарате еще на несколько минут (2—3 минуты). Дав препарату остыть, удаляют пинцетом бумажку и обмывают мазок водой. 2. Обесцвечивают препарат 5—10% водным раствором серной кислоты в течение 3 5 секунд (до желтоватого оттенка мазка). Вместо серной кислоты можно применить 5% раствор азотной или 3 /о раствор соляной кислоты. 3. Мазок тщательно промывают водой. 4. Споласкивают 96°спиртом. 5. Снова промывают водой. 6. Докрашивают в течение 3—5 минут леффлеровской метиленовой синькой или водным раствором I. Ю00 малахитовой зелени или метиловой зелени. 7. Краску смывают водой и препарат высушивают. Микроскопическая картина: туберкулезные палочки - рубиново красные, остальные, за исключением возбудителя паратуберкулеза, кислото - и спиртоустойчивых сапрофитов, - синие. Билет 14. Окрашивание по Граму Этот метод позволяет все микроорганизмы разделить на две группы; грамположительные и грамотрицательные. Техника окраски: 1. На фиксированный мазок кладут кусочек фильтровальной бумаги, пропитанной 1%-ым спиртовым раствором генцианвиолета. Наносят на бумажку 2-3 капли воды. Окрашивают 2-3 минуты. 2. Бумажку снимают и не промывая препарата водой, наносят раствор Люголя на 2 минуты. 3. Сливают раствор Люголя и препарат обрабатывают 96%-ным этиловым спиртом в течение 20-30 секунд. 4. Тщательно промывают мазок водой. 5. Окрашивают мазок фуксином Пфейффера в течение 2-3 минут. 6. Препарат промывают водой. 7.Высушивают и микроскопируют. Грам положительные микроорганизмы окрашиваются в фиолетовый цвет, а грамотрицательные - в розовый. Билет 15. Какие методы окрашивания применяют для выявления капсул, спор и жгутиков бактерий? Окраска по Циль-Нильсену. 1. Фиксированный на пламени мазок покрывают полоской фильтровальной бумаги, наливают на не карболовый раствор фуксина и подогревают; при появлении паров прекращают нагревание и оставляют краску на препарате еще на несколько минут (2—3 минуты). Дав препарату остыть, удаляют пинцетом бумажку и обмывают мазок водой. 2. Обесцвечивают препарат 5—10% водным раствором серной кислоты в течение 3 5 секунд (до желтоватого оттенка мазка). Вместо серной кислоты можно применить 5% раствор азотной или 3 /о раствор соляной кислоты. 3. Мазок тщательно промывают водой. 4. Споласкивают 96°спиртом. 5. Снова промывают водой. 6. Докрашивают в течение 3—5 минут леффлеровской метиленовой синькой или водным раствором I. Ю00 малахитовой зелени или метиловой зелени. 7. Краску смывают водой и препарат высушивают. Микроскопическая картина: туберкулезные палочки - рубиново красные, остальные, за исключением возбудителя паратуберкулеза, кислото - и спиртоустойчивых сапрофитов, - синие. Окрашивание спор бактерий проводят методами Циля-Нельсена или Ожешки. При использовании этих методов вегетативные клетки окрашиваются в синий цвет, а споры - в красный цвет. При окрашивании спор по методу Ожешки на предметном стекле готовят густой мазок исследуемой культуры, высушивают его и, не фиксируя, наливают на него 0,5% раствор соляной кислоты. Препарат подогревают в течение 2 минут до появления паров. Кислоту сливают. После этого препарат промывают водой, высушивают и фиксируют. На препарат помещают полоску фильтровальной бумаги и наносят несколько капель карболового фуксина Циля. Препарат подогревают на пламени спиртовки до появления паров. Затем препарат обесцвечивают 5% серной кислотой и докрашивают дополнительно метиленовой синькой в течение 3-5 минут. Споры окрашиваются фуксином в яркокрасный цвет, а вегетативные клетки обесцвечиваются серной кислотой и окрашиваются метиленовой синькой в синий цвет. Методы окрашивания микробов 1. Метод Михина. Используется также для выявления капсулы бактерий. Фиксированный мазок окрашивают метиленовым голубым Лёффлера в течение 2-3 минут при подогревании. Краситель быстро смывают водой, мазок высушивают. При микроскопированин тела микробных клеток выглядят темносиними, капсулы светло-розовыми; 2. Окрашивание спор по Пешкову. После фиксации препарата над пламенем горелки мазок окрашивают метиленовым голубым Лёффлера в течение 15-20 секунд, подогревая над пламенем спиртовки. Препарат промывают водой. Дополнительное окрашивание проводят 0,5%-ным водным раствором нейтрального красного в течение 30 секунд. Затем препарат промывают водой и высушивают. При этом методе споры окрашиваются в голубой или синий цвет, а вегетативные формы - в розовый. 3. Окрашивание жгутиков бактерий по методу Леффлера. Взвесь бактерий вносят в каплю воды (не размазывая ее петлей), нанесенную на предметное стекло, и дают высохнуть. Для обеспечения сохранности жгутиков необходимо чрезвычайно осторожное обращение с мазком во время всех манипуляций. Обрабатывают 15-20 минут при комнатной температуре протравой следующего состава: 1 мл насыщенного спиртового раствора фуксина и смесь из 10 мл 25% водного раствора танина с 5 мл насыщенного водного раствора сернокислого железа (протраву готовят за несколько суток до употребления; перед употреблением ее отфильтровывают). Препарат тщательно промывают водой, высушивают на воздухе. Докрашивают фуксином Циля в течение 3-4 минут при легком подогревании (без образования паров). Затем препарат промывают водой, высушивают над пламенем горелки. 4. Окрашивание микробов по Романовскому-Гимзе. Краска Романовского Гимза - это смесь азура, эозина и метиленовой синьки. Раствор этой краски сине-фиолетового цвета. Она окрашивает клеточную цитоплазму в голубой цвет, а ядра клеток, зернистость, слизь, капсулы бактерий - в краснофиолетовый цвет. Окрашивание по Романовскому-Гимзе позволяет обнаружить различные структурные компоненты клеток. Непосредственно перед окрашиванием бактерий к 10 мл дистиллированной воды добавляют 10 капель краски Романовского-Гимзы и тотчас же наливают на фиксированный препарат (или погружают препарат в стаканчик с краской). Через I час краску сливают, препарат промывают водой, высушивают на воздухе и микроскопируют. Билет 16. Инфекция. Инф процесс Инфекция - это заражение живого организма (включая микроорганизмы) инфекционным агентом, процесс его размножения или развития в организме, а также реакция организма на присутствие в тканях инфекционного агента и на выделяемые им токсины. Под инфекционными агентами обычно понимают вирусы, микроорганизмы (бактерии, грибы, простейшие) и гельминты. Для инфекционной болезни характерно: 1) наличие определенного живого возбудителя; 2) заразность, т.е. возбудители могут передаваться от больного ж-го здоровым, что приводит к широкому распространению заболевания; 3) наличие определенного инкубационного периода и характерная последовательная смена периодов в течение болезни; 4) развитие характерных для данного заболевания клинических симптомов; 5) наличие иммунного ответа Инфекционный процесс - это способ приспособительных реакций макроорганизма в ответ на внедрение и размножение в нём патологических микроорганизмов. Возникновение и развитие инфекций зависит от наличия специфического возбудителя (патогенного микроорганизма), возможности его проникновения в организм восприимчивого животного, условий внутренней и внешней среды, определяющий характер взаимодействия микро и макроорганизма. Развитие инфекционного процесса зависит: 1) от свойств возбудителя; 2) от состояния макроорганизма; 3) от условий окружающей среды, которые могут влиять как на состояние возбудителя, так и на состояние макроорганизма. Билет 17. Пути распределения возбудителей инфекционных заболеваний. При сниженной реактивности организма они начинают атаковать незащищенный организм животного. В период бактерионосительства ж-е является переносчиком Инфекционные заболевания: классификация В зависимости от природы возбудителя выделяют: 1.бактериальные инфекции (стрептококковая, стафилококковая, пневмококковая, менингококковая и другие); 2.-вирусные инфекции (вирусы гриппа, герпеса, гастроэнтерита, гепатита);3 -грибковые (кандидозы);4. вызванные простейшими;5 -гельминтозы. Классификация, которая отражает место скопления возбудителя:1. зоонозные инфекции - источником являются животные (возбудители бруцеллеза, туляремии, сибирской язвы и другие); 2. -антропонозные - источник заражения человек (например, ВИЧ, дизентерия); 3. -сапронозы - заражение происходит из окружающей среды (газовая гангрена, легионеллез). По течению заболевания бывают:1.типичные или атипичные; 2. -легкие, средние и тяжелые; 3. острые, подострые, хронические. Пути распространения инфекций: Воздушно-капельный путь. При выделении больным человеком воздуха с микробами. Это происходит во время кашля, чихания или сморкания. Здоровый человек заражается, вдыхая инфицированный воздух. В основном таким способом передаются вирусные и бактериальные инфекции. Трансмиссивный. Возбудитель попадает в кровь ж-го через укус насекомого. Парентеральный. Передача возбудителя происходит через кровь. Трансплацентарный. Через плаценту от инфицированной матери к плоду. Контактно-бытовой. Через прямой контакт с инфекцией, зараженным предметом. Это могут быть инфекции кожи, гельминтозы, бруцеллез. Билет 18. Классификация инфекционных заболеваний 1. Этиологическая. Основана на классификации микроорганизмов по фенотипическим (морфологическим, физиологическим и др.) и генотипическим (структура и гибридизация ДНК) признакам. По этой классификации инфекционные болезни подразделяются на 3 основные группы: - бактериальные (колибактериоз, лептоспироз, микоплазмоз, сальмонеллез, хламидиоз и др.); - вирусные (бешенство, вирусный энтерит, инфекционный гепатит, чума и др.); - грибковые (микроспория, трихофития и др.). 2. Зооантропонозная. В зависимости от источника возбудителя инфекционные болезни разделяют на 3 группы: - антропонозы (болезни, свойственные только человеку, который является источником возбудителя инфекции); - зоонозы (болезни, присущие только животным, которые являются источником возбудителя инфекции); - зооантропонозы (болезни, общие для человека и животных; источником возбудителя инфекции могут быть животные и (или) человек). 3. Эпизоотологическая. Основана на систематизации путей проникновения возбудителя болезни в организм. По этой классификации инфекционные болезни подразделяются на 5 групп: - алиментарные (главные факторы передачи возбудителя инфекции - инфицированные корма, вода, почва и навоз); аэрогенные (воздушно-капельные инфекции); - трансмиссивные (возбудитель инфекции передается живыми переносчиками - насекомыми, клещами); - инфекции с заражением животных непосредственно через внешние покровы без участия переносчиков; 4. По локализации болезни. Классификация основана на локализации возбудителя инфекции в организме и на механизме его передачи, в соответствии с этим болезни разделяют на 4 группы: - кишечные инфекции (локализация возбудителя в основном в кишечнике); - инфекции дыхательных путей (локализация возбудителя в слизистых оболочках дыхательной системы - альвеолах, бронхах, зеве и др.); - кровяные инфекции (локализация возбудителя в кровеносной и лимфатической системах); - инфекции наружных покровов (включают болезни кожи, ее придатков, наружных слизистых оболочек, а также раневые инфекции). 5. По виду и возрасту животных. По данной классификации, положенной в основу программы курса эпизоотологии для высших и средних специальных учебных заведений России по специальности "Ветеринария", все инфекционные болезни животных подразделяют на 10 групп: - болезни, общие для всех или нескольких видов домашних животных; - болезни молодняка; - болезни жвачных; - болезни свиней; - болезни лошадей; - болезни птиц; - болезни кроликов; - болезни плотоядных; - болезни пчел; - болезни прудовых рыб. Такие классификации инфекционных болезней позволяют дополнительно выделить и учитывать специфические особенности конкретных болезней, а также источники возбудителей инфекций и пути их проникновения в организм животных; установить основные участки локализации болезни; определить вид и группы животных, наиболее подверженных определенным заболеваниям. По устойчивости к химическим дезинфицирующим средствам возбудителей основных инфекционных болезней животных разделяют на четыре группы: - малоустойчивые (возбудители болезни Ауески, лептоспироза, сальмонеллеза и др.); - устойчивые (возбудители бешенства, вирусного энтерита, трихофитии, чумы плотоядных); - высокоустойчивые (возбудители туберкулеза животных, паратуберкулезного энтерита крс); особо устойчивые (возбудители сибирской язвы, брадзота, эмкара и других споровых инфекций). Билет 19. Патогенность и вирулентность микроорганизмов Инфекционная болезнь, возникает только при наличии возбудителя, обладающего патогенностью вообще и вирулентностью в частности. Патогенность - видовой генетический признак возбудителя, его потенциальная способность вызывать при благоприятных условиях специфический инфекционный процесс. По этому признаку все существующие микроорганизмы подразделяют на патогенные, условно-патогенные и сапрофиты. Вирулентность - это степень патогенности конкретного микроорганизма, т. е. это индивидуальный признак. Ее можно измерить. За единицу измерения вирулентности условно приняты летальная и инфицирующая дозы. Минимальная смертельная доза — это наименьшее количество живых микробов или их токсинов, вызывающее за определенный срок гибель большинства взятых в опыт животных определенного вида. Но поскольку индивидуальная чувствительность животных к патогенному микробу (токсину) различна, то была введена безусловно смертельная доза -, вызывающая гибель 100 % зараженных животных. Наиболее точная единица вирулентности средняя летальная доза, т. е. наименьшая доза микробов (токсинов), убивающая половину животных в опыте. Для установления летальной дозы принимают во внимание способ введения возбудителя, возраст подопытных животных, а также массу. Высоковирулентные микроорганизмы способны вызывать болезни у животных или человека даже в минимальных дозах. Известно, что 2-3 микобактерии туберкулеза при введении в трахею морской свинки вызывают туберкулез со смертельным исходом. Вирулентные штаммы сибиреязвенной бациллы в количестве 1-2 клеток могут вызвать смерть у морской свинки, белой мыши и даже крупного животного. Билет 20. Возбудители стафилококковой инфекции Стафилококки – сферические клетки. В препаратах из гноя и молодых бульонных культур располагаются одиночно, парами или небольшими кучками; в мазках из агаровых культур – в виде отдельных скоплений неправильной формы, напоминающих гроздь винограда. Жгутиков и капсул не имеют; споры не образуют. Хорошо окрашиваются анилиновыми красителями. Факультативные анаэробы. Хорошо растут на универсальных питательных средах при 35-40 0С. Добавление к питательной среде глюкозы или крови ускоряет рост стафилококков. На МПА образуют круглые, слегка возвышающиеся над поверхностью агара колонии с ровными краями. Колонии могут быть окрашены, так как стафилококки вырабатывают нерастворимые в воде пигменты. Наиболее интенсивно пигменты образуются при росте на агаре с 10 % обезжиренного молока после 24 часовой инкубации при 37 0С и на картофеле при 20-25 0С в аэробных условиях на свету. Рост в МПБ сопровождается диффузным помутнением с последующим выпадением рыхлого хлопьевидного осадка. В столбике желатина после засева уколом через 36-48 ч наряду с обильным ростом по линии укола намечается начальное разжижение среды, которое затем увеличивается, и к 4-5 суткам образуется воронка, наполненная жидкостью. Билет 21 Возбудители стрептококковой инфекции Бактерии имеют шаровидную иди овальную форму, размер клеток варьирует у разных видов. Клетки в препарате образуют цепочки. Образование различной величины; цепочек более характерно при росте на жидких питательных средах, неподвижны. Культивируются на питательных средах с добавлением глюкозы, сыворотки или крови. Температурный оптимум роста 37°С. Стрептококки относятся к факультативным анаэробам. На кровяном arapeобразуют мелкие сероватые или бесцветные колоний. Бактерии, обладующие капсулой, отличаются образованием мукоидных колоний. По характеру роста на кровяном aгape стрептококки делят на три типа: 1) (З-гемолитические стрептококки, образующие вокруг колонии прозрачную зону гемолиза; 2) (х-гемолитические стрептококки, образующие вокруг колонии небольшую зеленоватую зону; 3) негемолитические стрептококки. В составе клеток стрептококков имеется несколько типов антигенов, позволяющих дифференцировать их друг от друга. Основой лабораторной диагностики при стрептококковых инфекциях являются бактериологический и серологический методы. Материалом для исследования служат слизь из зева, гной, отделяемое ран, кровь. Слизь из зева, гной, отделяемое из ран засевают на кровяной агар, кровь – в жидкую питательную среду или на полужидкий агар. Из бульона и полужидкого агара выросшую культуру пересевают на кровяной агар. У выделенной культуры определяют серогруппу. Серологические методы направлены на выявление у больного антител к токсинам и ферментам стрептококков. Билет 22. Нейссерии (Neisseriae) Грамотрицательные диплококки, под микроскопом напоминают кофейные зёрна. Спор не образуют, жгутиков не имеют, в макроорганизме образуют капсулу. Строгие анаэробы. Требовательны к питательным средам. Растут только на средах с добавлением сыворотки крови. На сывороточном агаре образуются колонии: прозрачные, средней величины. В сывороточном бульоне - помутнение и осадок на дне. Очень не устойчивы во внешней среде, что следует учитывать при транспортировке материалов. Менингококковая инфекция – антропоноз. Основной путь передачи – воздушно-капельный. После перенесенного заболевания формируется стойкий специфический иммунитет. Для диагностики используются различные методы исследований: бактериоскопический (мазок из осадка спинномозговой жидкости), бактериологический, иммунологический и серодиагностический. Далится на менингокковокую и гоноккоковую инфекцию – бобовидная форма, сходны с кофейными зернами. Спор и жгутиков не имеют, образуют микро капсулы, Г-, строгие анаэробы, исключительно требовательны к питательным средам – растут на средах содержащих человеческий белок или на специальных средах. Колонии мелкие, блестящие в виде капель. Гонококк –это диплококки бобовидной формы, сходные по форме с кофейными зернами. Спор и жгутиков не имеют, образуют микрокапсулу. Грамотрицательны. Строгие аэробы. Исключительно требовательны к питательным средам, растут на средах, содержащих человеческий белок (асцитагар) или специальных средах. Колонии мелкие, блестящие, в виде капель. К основным факторам вирулентности гонококков относят способность к адгезии и колонизации эпителиальных клеток слизистой оболочки мочеполового тракта и продукции экзотоксина. Источник инфекции – больные животные, основной путь передачи - половой. Различают острую и хроническую клинические формы гонореи – с неосложненным и осложненным течением. Для неосложненного течения острой гонореи типично гнойное воспаление нижних отделов урогенитального тракта. При осложненной – процесс распространяется на верхние отделы мочеполовой системы. Перенесенное заболевание не оставляет стойкого иммунитета. Материал для исследования – гнойное отделяемое уретры. При острой форме гонореи диагностика основана на бактериоскопическом исследовании и бактериологическом. При хронических формах дополнительно могут использоваться методы серодиагностики, молекулярногенетические (ПЦР). (Профилактика- вакцина) Билет 23. Грамотрицательные условно-патогенные бактерии – возбудители гнойно воспалительных заболеваний 1. Гемофильная палочка- это мелкие или средних размеров прямые палочки, неспоробразующие, неподвижные, грамотрицательные, аэробы. В организме образуют капсулу. Для культивирования требуются питательные среды, содержащие кровь (кровяной агар) или ее препараты (шоколадный агар). В окружающей среде микроорганизмы быстро погибают от действия температуры выше 55 °C, солнечных лучей, высушивания, дезинфицирующих растворов. Биохимическая активность выражена слабо. Расщепляют в основном углеводы до кислоты (без образования газа). Факторы патогенности:1) эндотоксин; 2) капсульный полисахарид, обладающий антифагоцитарной активностью. Гемофильная палочка может входить в состав нормальной микрофлоры слизистой ротоглотки и верхнх дыхательных путей, поэтому инфекция может возникать как эндогенная. При экзогенном инфицировании вызывает инфекции лор-органов и органов дыхания (отиты, пневмонии), менингит. Путь передачи воздушно-капельный. Источником инфекции являются больной или бактерионоситель (антропонозная инфекция).Диагностика: 1) бактериологическое исследование – основной метод; материал – мокрота, спинномозговая жидкость, кровь; среда – кровяной агар. Необходимо дифференцировать от сходных микроорганизмов этого же рода – представителей нормальной микрофлоры носоглотки и ротовой полости; 2) экспресс-метод – иммуноиндикация с помощью реакции иммунофлюоресценции со специфической сывороткой типа b (используют при диагностике менингитов). 2. Синегнойная палочка Относится к семейству Pseudomonadaceae, роду Pseudomonas, виду P. aerugenosa. Это прямые или слегка изогнутые палочки средних размеров, подвижные (лофотрихи или монотрихи), грамотрицательные, облигатные аэробы. Спор не образуют, имеют тонкую слизистую капсулу. Синегнойная палочка нетребовательна к питательным средам, хорошо растет на искусственных питательных средах. На мясопептонном бульоне дает рост в виде помутнения с сероватой пленкой на поверхности. На плотных питательных средах формируются крупные полупрозрачные колонии флюоресцирующего зеленоватого цвета. При этом в толщу среды диффундируют синеватозеленые водорастворимые пигменты – пиоцианин или флюоресцеин. Способность псевдомонад образовывать пигменты – наиболее характерный дифференциальнодиагностический признак. Культура синегнойной палочки при культивировании на питательных средах имеет кисловато-сладкий ароматный запах (специфический запах жасмина). Устойчива во внешней среде. Обладает естественной устойчивостью к антибиотикам. Факторы патогенности: 1) в организме может образовывать капсулоподобное вещество, имеющее защитные свойства; 2) выделяет термолабильный экзотоксин А, обладающий цитотоксическим и дермонекротическим действием; 3) выделяет эндотоксин; 5) имеет ферменты агрессии, такие как плазмокоагулаза, протеазы, антиэластазы. Диагностика: бактериологическое исследование; материал определяется клиническими проявлениями заболевания. 3. Клебсиеллы Это грамотрицательные палочки средней величины, не образующие спор. Факультативные анаэробы. В препаратах располагаются поодиночке, попарно или короткими цепочками. Не имеют жгутиков, неподвижны. Спор не образуют. Это истинно-капсульные бактерии: образуют капсулу в организме и на питательных средах. Капсула имеет полисахаридную структуру. Нетребовательны к питательным средам. На плотных питательных средах образуют характерные куполообразные мутные слизистые колонии. При росте на мясопептонном бульоне вызывают равномерное помутнение, иногда со слизистой пленкой на поверхности. Клебсиеллы устойчивы к факторам внешней среды, благодаря капсуле длительно сохраняются в воде, на предметах, в помещениях. Факторы патогенности: 1) обладают выраженными адгезивными свойствами; 2) главный фактор – капсула, защищающая микроорганизмы от фагоцитоза; 4) выделяют эндотоксин. Клебсиеллы нередко обнаруживаются на коже и слизистых оболочках, в связи с чем возможно развитие эндогенной инфекции. Но экзогенное заражение встречается чаще. Источниками инфекции могут быть больной, бактерионоситель, объекты внешней среды. Диагностика: 1) бактериологическое исследование; материал – отделяемое пораженных слизистых оболочек; 2) иммуноиндикация. 4. Протей Полиморфные грамотрицательные палочки с закругленными концами, факультативные анаэробы. Капсулообразование отсутствует. Имеют перитрихиально расположенные жгутики. Н-формы этих бактерий отличаются высокой подвижностью, хотя встречаются и неподвижные (О-формы). Нетребовательны к питательным средам. На мясопептонном агаре Н-форма протея дает характерный ползучий рост в виде нежной вуали голубовато-дымчатого цвета, затягивающий всю поверхность сплошным налетом без образования отдельных колоний. В жидкой питательной среде дает рост в виде диффузного помутнения. При культивировании характерен гнилостный запах. В окружающей среде устойчивы, могут сохранять жизнеспособность в слабых растворах дезинфектантов. Широко распространены в природе. Являются обитателями кишечника животных. Протеи в небольших количествах могут обнаруживаться в кишечнике здорового животного, поэтому протейная инфекции может развиваться как эндогенная. Основным местом их обитания являются объекты внешней среды, гниющие продукты, сточные воды, почва. Бактерии участвуют в развитии гнойно-воспалительных заболеваний мочевыводящих путей. Диагностика: основной метод – бактериологическое исследование; материал определяется локализацией очага поражения. Посев по методу Шушкевича в каплю конденсированной влаги свежескошенного мясопептонного агара; характерен рост в виде вуали по всей поверхности среды. Билет 24. Возбудители диагностика анаэробной инфекции Раневую анаэробную инфекцию у животные вызывают как спорообразующие анаэробные бактерии, так и неспорообразующие анаэробные микроорганизмы. Бактериоскопический метод. Проводится микроскопия окрашенных по Граму, Цилю-Нильсену и Гинсу-Бурри мазков, приготовленных из раневого отделяемого, отечной жидкости, некротизированной ткани. Обнаружение в препаратах крупных прямых грамположительных палочек, образующих капсулы и центрально или субтерминально расположенные споры, дает основание поставить предварительный диагноз газовой гангрены. Для экспрессдиагностики применяют прямой метод иммунофлюоресценции. Микроскопия окрашенных по Граму, Цилю-Нильсену и Гинсу-Бурри мазков, приготовленных из материала от больного с целью обнаружения крупных грамположительных палочек, образующих капсулы и центрально или субтерминально расположенные споры. Биопроба. Заражение морских свинок материалом от больного в смеси с антитоксическими сыворотками против различных видов клостридий (РН) или без них. Гибель контрольной морской свинки через 30 минут – 4 часа. В РН выживает одна морская свинка, у которой токсин нейтрализуется соответствующим видом сыворотки. Окончательную идентификацию выделенных клостридий газовой гангрены проводят с помощью биопробы (см. ниже) путем постановки реакции нейтрализации с поливалентными и моновалентными сыворотками для выявления и типирования экзотоксинов клостридий. Биопроба. Смесь исследуемого материала с моновалентными антитоксическими сыворотками против различных видов клостридий вводят подкожно морским свинкам. Контролем служит морская свинка, которой вводят исследуемый материал без сывороток. При наличии токсина контрольная морская свинка погибает через 30 минут – 4 часа после инъекции материала. В опытах нейтрализации токсина антитоксическими сыворотками выживает одна морская свинка, при этом вид сыворотки соответствует виду токсина. Билет 25. Возбудители эшерихиозов Эшерихиоз (колибактериоз, колиэнтерит, колисепсис) — остро протекающая зоонозная болезнь молодняка животных многих видов, проявляющаяся септицемией, токсемией и энтеритом, обезвоживанием организма, поражением цнс, нарастающей депрессией и слабостью, иногда пневмонией и артритами. Возбудитель болезни. Возбудитель эшерихиоза —кишечная палочка. Возбудитель Е. coli— короткая толстая с закругленными концами, чаще подвижная, грамотрицательная палочка, спор не образует, аэроб или факультативный анаэроб, хорошо растет на обычных питательных средах, в мазках располагается одиночно. Для установления родовой и видовой принадлежности культур большое значение имеет выявление биохимических свойств и культивирование на специальных средах — Эндо, Левина и др. Эшерихий довольно устойчивы. В фекалиях и слизи сохраняются до 30 дней, в воде и почве — до нескольких месяцев. К высокой температуре и дезинфицирующим средствам неустойчивы: при 100 °С погибают мгновенно, при 80 °С — за 15 мин. Губительно действуют на эшерихий 4%-ный горячий раствор гидроксида натрия. Бактериологическое исследование включает выделение и идентификацию эшерихий, определение в реакции агглютинации (РА)- связыванием антителями антигены серологической группы культуры и патогенности ее для белых мышей и цыплят. При дифференциальной диагностике эшерихиоза следует исключить сальмонеллез, псевдомоноз, стрептококкоз, пастереллез, протейную инфекцию, адено-, рота- и коронавирусные инфекции, диарею незаразного происхождения, отравления. Билет 26. Возбудители дизентерии Дизентерия свиней— остро протекающая контагиозная болезнь, характеризующаяся профузной диареей с примесью крови и слизи в фекалиях и некротическими изменениями в желудочно-кишечном тракте. Возбудитель болезни. Грамотрицательная строго анаэробная спирохета, строение которой позволяет ей двигаться поступательно-вращательно. Боррелии не растут на обычных питательных средах, хорошо окрашиваются генцианвиолетом, чувствительны к тилану, стрептомицину. От больных дизентерией свиней выделяются и другие микроорганизмы: вибрионы, клостридии и энтеровирусы. Во внешней среде (в фекалиях) сохраняется в зависимости от температуры от 6 дней до 2 мес. Диагностика и дифференциальная диагностика. Диагноз на дизентерию у свиней ставят на основании эпизоотологических, клинических, патолого-анатомических, гистологических, микробиологических (микроскопия) и люминесцентно-серологических исследований (РИФ). При бактериологических исследованиях используют темнопольную, фазово-контрастную микроскопию или микроскопию окрашенных препаратов из содержимого толстого кишечника или его слизистой оболочки. Выращивание культуры на питательных средах не проводят. Диагноз считают установленным при обнаружении в мазках спирохет характерной морфологии (более 5 в поле зрения) и положительном результате РИФ. Болезнь дифференцируют от чумы, вирусного гастроэнтерита, сальмонеллеза, эшерихиоза, анаэробной энтеротоксемии и кормовы Билет 27. В. Сальмонеллеза Сальмонеллы – мелкие палочки с закругленными концами. В мазках располагаются одиночно, беспорядочно. Подвижные спор и капсул не образуют, по Граму окрашиваются отрицательно. Культуральные свойства. Сальмонеллы – аэробы и факультативные анаэробы. Оптимальная температура роста 37 0С. Хорошо растут на обычных питательных средах МПА, МПБ, средах Эндо, Левина. На МПА образуют небольшие круглые колонии с ровными краями, серо-белого цвета с голубоватым оттенком. У некоторых видов сальмонелл по краю колонии заметен выпуклый слизистый вал. На среде Эндо колонии прозрачные, бледно-розового цвета, на среде Левина – прозрачные с голубоватым оттенком. В МПБ – слабое помутнение, на дне пробирки осадок серо-белого цвета, на поверхности среды в старых культурах иногда тонкая пленка или пристеночное кольцо. Билет 28. Возбудители кишечного иерсиниоза псевдотуберкулеза Возбудитель — грамотрицательная палочка. Спор не образует, имеет капсу¬лу, анаэроб, образует эндотоксин. При нагревании до 60°С возбудитель гибнет через 30 мин, дезинфицирующие средства (2% раствор хлорамина, растворы лизола, сулемы и др.) убивают его в течение 1 мин, кипячение — через 10 с. Псевдотуберкулезный микроб имеет соматический 0антиген и жгутиковый Н-антиген. Источником инфекции являются дикие и домаш¬ние животные. Основной путь передачи инфекции — мышевидные грызуны, они инфицируют продукты питания и воду, в которых псевдотуберкулезные микробы легко размножаются. Микробы в течение нескольких месяцев сохраняются в воде, масле, хлебе, молоке, в почве при благоприятных условиях — около года. Материалом для бактериологического исследования служат кровь, мокрота, фекалии, моча и смывы из зева. Посев материала производят как на обычные питательные среды, так и на среды обогащения, при этом используют способность иерсиний хорошо размножаться при низких температурах (условия холодильника). Посевы крови и смывы из зева следует проводить в 1-ю неделю болезни, посевы фекалий и мочи — на протяжении всего заболевания. Из серологических исследований используют реакцию агглютинации, РСК,. Для диагностики используют также метод иммунофлюоресцении и бактериального лизиса. При постановке реакции агглютинации диагностическим считается титр 1:80 и выше. Более информативной считается постановка реакции с парными сыворотками. Билет 29. Возбудители холеры Холера– острая кишечная антропонозная особо опасная карантинная инфекция. Возбудитель холеры – холерный вибрион. Это небольшие изогнутые в виде запятой грамотрицательные палочки, очень полиморфные, не образуют спор, капсул. Монотрихи, обладают высокой подвижностью, что является важным диагностическим признаком. Холерный вибрион – факультативный анаэроб, предпочитающий аэробные условия и быстро погибающий в анаэробных. К питательным средам неприхотлив. При идентификации возбудителя наиболее важным является определение ферментации маннозы, арабинозы и сахарозы. Холерные вибрионы разлагают только маннозу и. Холерные вибрионы разжижают желатин, свертывают молоко. Устойчивость невысока. При 60° погибают в течение 5 минут, при кипячении – мгновенно. Общепринятые концентрации дезинфицирующих веществ убивают их быстро. Очень чувствительны к кислотам, солнечному свету. Материалом для исследования являются испражнения рвотные массы, желчь, вода, секционный материал, смывы с объектов внешней среды. Основным в лабораторной диагностике холеры является бактериологический метод. Материал засевают на элективные среды – щелочную пептонную воду и щелочной питательный агар. При идентификации чистой культуры определяют ее гемолитические свойства; способность агглютинировать куриные эритроциты. Серологическое исследование является вспомогательным и применяется для ретроспективной диагностики холеры, выявления вибрионосителей и оценки иммунитета. Определяют агглютинины; вибриоцидные антитела и антитоксины. Билет 30. Возбудители кампилобактериоза Кампилобактериоз – инфекционная болезнь крупного рогатого скота, овец, свиней, домашних и диких птиц, комнатных животных. У млекопитающих отмечают аборты, временное бесплодие, задержание последа, метриты, тяжелые кишечные заболевания; у кур – снижение прироста массы бройлеров, яйценоскости кур-несушек и падеж цыплят. Эта болезнь регистрируется во всех странах мира. Кампилобактеры – полиморфные, тонкие, изогнутые палочки в виде запятой, летящей чайки, буквы V, спирали с одним или несколькими завитками. В старых культурах бактерии сферической или кокковидной формы. Подвижные, имеют один или два полярно расположенных жгутика; движение винтообразное. Капсул и спор не образуют. Грамотрицательные, спиртово-водные растворы анилиновых красителей воспринимают с трудом; окрашиваются разведенным 1:5 карболовым фуксином Циля. Бактерии относятся к микроаэрофилам, хотя отдельные штаммы могут расти и в анаэробных условиях. Оптимальные условия роста: наличие газовой смеси; температура 42-43 0С. Для получения культур возбудителя кампилобактериоза используют полужидкий мясопеченочный агар, приготовленные на основе экстракта мышц сердца крупного рогатого скота, готовую сухую среду – кампилобакатар. На ПЖА(полужидкий мпа) через 2-7 суток появляется рост в пробирке, около самой поверхности среды, в виде серовато-голубоватого диска; на плотной среде кампилобактеры образуют нежный мелкоросинчатый, приобретающий затем серовато-белый цвет налет или отдельные серо-голубоватые колонии. Билет 32. В. Туберкулеза Возбудитель туберкулеза. Микобактерии туберкулеза — тонкие, прямые или слегка изогнутые палочки; иногда имеют на концах вздутия . Микроорганизмы могут встречаться в форме палочек, нитей, кокков и фильтрующихся форм (Z-формы). Иногда в мазках заметна зернистость, палочки напоминают цепочку стрептококка и состоят. Как бы из отдельных зерен (зерна Муха). Микроб неподвижен, спор и капсул не образует. Принадлежит к группе кислотоустойчивых бактерий, так как содержит миколовую кислоту и липоиды (10—40 %). При окраске по Цилю- Нельсену микобактерии туберкулеза окрашиваются в красный цвет, а все тканевые элементы и посторонняя микрофлора — в синий. Возбудитель туберкулеза — строгий аэроб, может расти при 30—42, развивается медленно (10—30 сут. и более). На простых питательных средах микобактерии туберкулеза растут плохо, поэтому применяют специальные среды: яичные — среда Петрова. При развитии возбудителя на МПА с 2—3 % глицерина через 8—10 дней образуется сухой налет, постепенно приобретающий вид грубых бородавчатых образованийНа поверхности МПБ с 4—5 % глицерина микобактерии растут в виде нежной пленки, которая постепенно утолщается, становится ломкой и приобретает бугристо-морщинистый вид, бульон остается прозрачным. На плотных питательных средах отмечается диссоциация колоний. Ферментативные свойства. Микобактерии туберкулеза продуцируют протеолитические ферменты, расщепляющие белок в кислой и слабощелочной среде, а также дегидразы, лецитиназу глицерофосфатазу. Возбудитель туберкулеза весьма устойчив к воздействию различных факторов внешней среды. Долгое время остается жизнеспособным вне организма человека и животных, в почве сохраняется более 2 лет, в воде до 5—8 мес, в высушенной мокроте и пыли жилых помещений — до 10, в навозе —7 мес, в замороженном мясе — 1 год. Под влиянием прямых солнечных лучей возбудитель погибает в течение 2 ч, в рассеянном солнечном свете — через 5—10 дней. Диагностика. Животных, отправляемых на мясокомбинат, предварительно исследуют в хозяйствах на туберкулез с помощью аллергического метода. Бактериологическое исследование на туберкулез проводят в тех случаях, когда в органах и тканях животных, не реагирующих на туберкулин, обнаружены патологические изменения, характерные для туберкулеза. Для бактериологического исследования отбирают участки пораженных органов и тканей, обрабатывают 3— 10%-ным раствором серной кислоты. Затем проводят микроскопию (мазки красят по Цилю—Нельсену), посев производят на специальные (яичные или картофельные) среды и ставят биопробу. При микроскопии мазков, выделении чистой культуры и постановке биологической пробы используют метод флотации. Туберкулезные бактерии по методу Циля— Нельсена окрашиваются карболовым фуксином в красный цвет, все тканевые элементы мазка и посторонняя микрофлора — в синий. Посевы просматривают через 2 дня, а затем не реже одного раза в неделю в течение 3 мес. При наличии роста изучают биологию возбудителя. Биопробу ставят одновременно на морских свинках и кроликах. Билет 33. Возбудители КЧС КЧС – высоко контагиозная инфекционная болезнь, характеризующаяся лихорадкой, поражением кровеносной и кроветворных систем, крупозным воспалением легких и крупозно-дифтерическим воспалением толстого кишечника. Возбудитель. Вирус содержит РНК. Вирионы сферической формы содержат белковую оболочку. Способность вируса сохраняться во внешней среде различна и зависит от вируссодержащего материала, температуры, влажности и др. В крови при 60 0С возбудитель погибает через 16 ч, под действием прямых солнечных лучей – в течение 9 ч. Замораживание консервирует его на многие месяцы и годы: в мясе – на несколько лет, в охлажденном мясе – до месяца. Вирус чувствителен к эфиру. В лабораторных условиях для культивирования используют восприимчивых подсвинков. Вирус удается репродуцировать в первичной культуре клеток легких, селезенки, почек и лейкоцитов свиней без выраженного ЦПД, а также в культуре тестикул поросят с признаками ЦПД (при использовании аргинин буферной среды) и в перевиваемой линии клеток почек поросят. Антигенная активность вируса заключается в способности его вызывать образование вируснейтрализующих, комплементсвязывающих антител. Лаб. Экспресс-методы: электронная и иммуноэлектронная микроскопия. Вирусологические исследования: 1) выделение вируса в культуре клеток почки свиней и семенников поросят, на поросятах; 2) идентификация выделенного вируса. Необходимо исключить африканскую чуму, пастереллез, сальмонеллез, рожу, болезнь Ауески и грипп. Срок исследования — до 21 суток. Билет 34. возбудители туляремии Возбудитель туляремии – франциселлы – очень мелкие полиморфные бактерии. Вызывает природно-очаговую инфекционную болезнь животных – туляремию – характеризующуюся лихорадкой, параличами у молодняка, увеличением лимфатических узлов, абортами. В окрашенных мазках возбудитель туляремии имеет кокковидную или палочковидную форму, встречаются более мелкие клетки, способные проходить через бактериальные фильтры. Кокковидные формы чаще находят в культурах, палочковидные – в организме животных. В препаратах из культур наряду с типичными бактериями могут встречаться шаровидные и нитевидные формы. Микроб неподвижен, спор не образует, имеет небольшую капсулу; в культурах продуцирует слизь, легко обнаруживаемую при изготовлении мазков. Возбудитель окрашивается всеми анилиновыми красками, но заметно бледнее других бактерий, грамотрицательный. В мазках-отпечатках из органов павших животных хорошо красится по Романовскому-Гимзе, приобретая сиреневый цвет. В тканях бактерии биполярно не окрашиваются, чем и отличаются от пастерелл. Бактерия не растет на универсальных питательных средах. Туляремийная бактерия – строгий аэроб, оптимум температур 36-37 0C. На свернутой желточной среде при обильном росте микробы растут в виде блестящего тонкого налета с извилистой поверхностью; при скудном росте вырастают небольшие блестящие выпуклые колонии или группы колоний. Колонии патогенных штаммов имеют S-форму. В жидких питательных средах туляремийный микроб растет значительно хуже. Кур. Эм-ы Билет 35. возбудители бруцеллеза Бруцеллы являются возбудителями бруцеллеза – хронической инфекционной болезни животных и человека, проявляющейся абортами, эндометритами, задержанием последа. Бруцеллы – мелкие коккобактерии или палочки , в окрашенных препаратах располагаются одиночно, парами и небольшими группами. Неподвижны, спор не образуют. Хорошо окрашиваются анилиновыми красителями, грамотрицательны. Бруцеллы могут расти на обычных питательных средах при 36-38 0С, но для их культивирования используют специальные среды: мясопептонный печеночный бульон (МППБ). Выделяемые из первичного материала бруцеллы растут очень медленно, в среднем 15-30 суток, старые лабораторные культуры вырастают уже через 24-48 ч. Вирулентные типичные штаммы (S-форма) на поверхности агара образуют мелкие, 2-3 мм в диаметре, круглые, выпуклые, с гладкой поверхностью и ровными краями, прозрачные с голубоватым оттенком колонии; в бульоне – слабое равномерное помутнение и пристеночное кольцо, в дальнейшем – небольшой осадок. Бруцеллы малоустойчивы к действию различных физических и химических факторов. Агаровые культуры в пробирках сохраняются несколько недель, лиофильно высушенные – годами. Прямые солнечные лучи убивают их за 4,5 ч. В воде бруцеллы выживают и более 5 месяцев. В охлажденном молоке сохраняются 6-8 суток, в кислом молоке – 1-4. При температуре 60 0С бруцеллы погибают через 30 минут, при 80-85 0С – через 5 минут, при 100 0С – мгновенно. Пастеризацию молока проводят при 85-90 0С 30 минут. Билет 36. возбудители сибирской язвы. Возбудитель сибирской язвы –крупные неподвижные (нет жгутиков) палочки с обрубленными концами, которые расположены в цепочку, в внешней среде образуют центральную спору, в организме человека и животных образуют капсулу. грам «+». Аэробы, хорошо растут на простых питательных средах. В МПБ растут в виде комочка ваты на дне, МПБ - прозрачный. На МПА - колонии вRформе, крупные, напоминающие львиную гриву. Разжижают желатин в виде опрокинутой елочки. Характер роста на средах имеет диагностическое значение. Биохимические свойства выражены хорошо. Разлагают глюкозу, лактозу до кислоты. Свертывают молоко. Факторы патогенности:образует экзотоксин, компоненты которого вызывают отек и некроз тканей. Большая роль в вирулентности принадлежит капсуле. Устойчивость: вегетативные формы сибиреязвенных палочек малоустойчивы, зато споры - очень устойчивы, выдерживают кипячение 5-7 минут, в почве могут сохраняться десятки лет. Лаб. бактериоскопический метод из исследуемого материала готовят мазок, красят по Граму для выявления капсулы; 2) бактериологический метод делают посев материала на среды для получения чистой культуры и проводят ее идентификацию 3) биологический метод - исследуемым материалом заражают морских свинок или белых мышей подкожно или внутрибрюшинно, животные погибают на 2-3 день; 4) серологический метод ставят реакцию кольцепреципитации с целью обнаружения сибиреязвенного антигена в сырье (коже, шерсти, трупном материале), из которого трудно выделить чистую культуру (для этого: а)материал подвергают кипячению в физ. растворе, фильтруют и получают преципитиноген; б) в пробирку наливают сибиреязвенную сыворотку, на нее наслаивают преципитиноген; в) при положительной реакции на границе двух жидкостей появляется белое, мутное кольцо, что говорит о соответствии антигена антителам сыворотки, т.е. о наличии белков возбудителя сибирской язвы в материале); кожно-аллергическая проба с антраксином — внутрикожное введение аллергена. Билет 37. Возбудители сапа и мелиоидоза Сап – инфекционная болезнь цельнокопытных, протекающая преимущественно хронически. В.прямая или слегка изогнутая палочка, неподвижная, не образующая спор и капсул, грамотрицательная. При окраске по Романовскому-Гимзе и синью Леффлера выявляется зернистость. В культурах бактерии отличаются полиморфностью, вплоть до кокковидных форм. Возбудитель растет на простых питательных средах при рН 6,8-7,2 с добавлением 2-4 % глицерина. Температурный оптимум 37 0С, при значениях ниже 20 0С и выше 40 0С не развивается, аэроб. На МПА с глицерином на вторые сутки появляется слизистый вязкий серовато-белый налет с перламутровым оттенком, который постепенно приобретает коричневый цвет. В МПБ с глицерином вначале отмечается равномерное помутнение среды, образование пристеночного кольца и слизистой пленки с последующим образованием слизистого серо-белого осадка. Дифференцирующей средой служит глицериновый картофель, на котором вначале появляются мелкие полупрозрачные с желтоватым оттенком колонии в виде капелек, затем они сливаются, образуя слизистый медообразный налет. Цвет налета меняется от янтарно-желтого в первые дни до буро-коричневого и красноватого к восьмому дню. Возбудитель ферментирует глюкозу, лактозу без газа, не ферментирует сахарозу, желатин разжижает. Устойчивость. В окружающей среде возбудитель малоустойчив. В воде и гниющем материале микроб гибнет через 1-30суток, при нагревании до 80 0С – через 5 минут, при 100 0С – мгновенно, солнечные лучи убивают его через сутки. Для уничтожения возбудителя во внешней среде используют хлорную известь с содержанием не менее 5 % активного хлора, 4 % раствор гидроксида натрия, 5 % раствор лизола. Лабораторная диагностика. Основной метод лабораторной диагностики сапа – серологический. Ставят РСК. В практике широко используют аллергический метод, основанный на применении маллеина. Маллеин закапывают на конъюнктиву. Положительная реакция характеризуется воспалением конъюнктивы и истечением гнойного секрета из внутреннего угла глаза. В сомнительных случаях или при болезнях глаз применяют подкожную пробу. У зараженных животных повышается температура тела, в месте введения маллеина образуется болезненная припухлость. Бактериологическое исследование. Материалом для исследования служат пораженные органы, лимфоузлы, отделяемое язв. Из материала готовят суспензию и ставят биопробу на 2-3 золотистых хомяках или самцах морской свинки. Суспензию вводят подкожно в области шеи в дозе 0,5-1,0 мл золотистым хомякам и 3-5 мл морской свинке. На месте введения развивается процесс с формированием абсцессов. Гибель наступает через 1-2 недели. Мелиоидоз —редкая зоонозная септическая болезнь животных и человека, характеризующаяся септицемией, катарально-гнойным воспалением слизистых оболочек верхних дыхательных путей, образованием абсцессов в органах и тканях и высокой летальностью. Возбудитель мелиоидоза — мелкая полиморфная, подвижная, с закругленными концами, грамотрицательная палочка, капсул и спор не образует. По биологическим свойствам и антигенному строению микроб близок к возбудителю сапа, в отличие от которого имеет жгутики на одном из полюсов. Возбудитель мелиоидоза — факультативный аэроб, растет на обычных питательных средах. Культуры P. pseudomallei при росте формируют колонии R- и S-типов, издают затхлый запах плесени и образуют токсины, вызывающие сенсибилизацию организма животных. Возбудитель мелиоидоза устойчив к высушиванию, в почве сохраняется до 1 мес, в воде — 44 дня, быстро гибнет при кипячении, при нагревании до 56 "С — через 10 мин. 1%-ный раствор фенола обезвреживает бактерию через 24 ч, взвесь хлорной извести— через 5 ч. При бактериологическом исследовании выделяют и идентифицируют культуру возбудителя. Из лабораторных животных к возбудителю восприимчивы морские свинки, кролики, белые крысы и мыши. Биопробу проводят на морских свинках. При наличии в патматериале возбудителя мелиоидоза на месте инъекции суспензии развивается флегмозное воспаление, через 2...3 дня — некроз тканей с образованием язвы и нагноением регионарных лимфатических узлов. Через 15...21 день морские свинки погибают. При хроническом течении болезни за рубежом применяют внутрикожную аллергическую пробу. Мелиоидоз необходимо дифференцировать от сапа, эпизоотического лимфангита, стафилококкоза, стрептококкоза путем проведения бактериологических, серологических и аллергических (маллеинизация) исследований. Билет 38. возбудители африканской чумы свиней Контагиозная болезнь свиней, характеризующаяся лихорадкой, геморрагическим диатезом и некродистрофическими изменениями паренхиматозных органов. Вирус содержит ДНК. Вирионы округлой формы. Вирус исключительно устойчив в широком диапазоне температур и рН среды, включая высушивание, замораживание и гниение, поэтому длительно сохраняется во внешней среде. Большинство общеупотребительных дезинфицирующих веществ не инактивируют его. Наибольшее вирулицидное действие оказывают хлорактивные препараты при 4 часовой экспозиции. Для культивирования вируса африканской чумы свиней используют подсвинков 3-4 месячного возраста, которых заражают любым способом. К вирусу чувствительны культуры лейкоцитов крови и макрофагов костного мозга свиней. Вирус содержит комплементсвязывающий антигены, но не обладает иммуногенной активностью. Неспособность вырабатывать вируснейтрализующие антитела, вероятно, обусловлена свойствами самого вируса. Лаб. Д-ка. Экспресс-метод: РИФ(р-ия иммунофлюор.). Вирусологические исследования: 1) выделение вируса в культуре клеток лейкоцитов и костного мозга свиней, на подсвинках 2-4 месячного возраста; 2) идентификация выделенного вируса в РИФ, радиоиммунологический метод, метод рестрикционного анализа. Дифференциальный диагноз. Необходимо исключить КЧС, болезнь Ауески, пастерелез и рожу. Срок исследования – до 10 суток. Билет 39. возбудители кандидоза Кандидамикоз — грибковое заболевание животных, характеризующееся поражением слизистых оболочек пищеварительного тракта, органов и тканей с образованием беловатых творожистых наложений, а иногда возникновением гранулем во внутренних органах. Возбудители болезни. Возбудителями кандидамикоза служат дрожжеподобные грибы. Большинство этих дрожжеподобных микроорганизмов являются сапрофитами, широко распространенными в природе, развитие и размножение которых происходит во внешней среде. Грибы постоянно обитают на слизистых оболочках тела животных. Кандиды проявляют патогенные свойства при снижении естественной резистентности макроорганизма, вызывая тяжелые заболевания. Дрожжеподобные грибы типа кандида не образуют настоящего мицелия, конидий и аскоспор, чем отличаются от истинных дрожжей и актиномицетов. В окрашенных препаратах кандиды хорошо просматриваются в виде дрожжеподобных клеток фиолетового, синего или розового цвета с мелкозернистыми включениями. Для культивирования возбудителя мясопептонный агар с добавлением 2% глюкозы. Первичные посевы после инкубирования их при температуре 25—30 °С дают обычно колонии дрожжеподобных грибов уже на 2—3и сутки. Колонии мелкие, блестящие. Для определения вида возбудителя кандидамикоза колонии высевают на различные питательные среды и оценивают их культурально-морфологические признаки. Грибы хорошо выдерживают высушивание, однократное замораживание, рассеянный солнечный свет. В почве погибают через 3—7 мес, кипячение убивает клетки через 10—15 мин. Губительное действие на кандиды оказывают ультрафиолетовые лучи и комбинации химических веществ. абораторная диагностика основывается на результатах комплексного микологического исследования. Проводят микроскопию и идентификацию выделенных культур путем изучения культурально-морфологических признаков и обязательно определяют патогенность возбудителя путем заражения лабораторных животных: кроликов, морских свинок, белых мышей. В некоторых случаях проводят гистологические исследования. При дифференциальной диагностике висцерального кандидамико- за исключают различные диареи, авитаминозы, кампилобактериоз, балантидиозную дизентерию, бронхопневмонию бактериальной или вирусной природы. Билет 40. Дерматомикозы Дерматомикозы собирательный диагноз болезней кожи и ее производных. Возбудителями патологий являются патогенные и условно патогенные микроскопические грибы дерматомицеты. Болеют сельскохозяйственные животные, домашние мелкие животные, пушные звери, грызуны, болеет и человек. Этиология. Возбудителями болезней могут быть микроскопические грибы дерматофиты (Dermatophytes) и несовершенные грибы (Fungi imperfect). Статистические данные, полученные при исследовании патологии домашних животных, говорят о том, что на долю Trichophyton mentagrophytes приходится 22%, гриб Microsporumc anis поражает 8% животных и условно патогенные, такие как плесневые и дрожжеподобные грибы забирают на себя 70%. В зависимости от того каким именно грибом вызвано заболевание диагностируют трихофитию, микроспорию, фавус. Возбудители вездесущи. Их легко можно обнаружить на кожных покровах, шерсти животного, подстилке, почве, кормах. Грибы могут расти и размножаться не только на коже животного, но и в окружающей среде при оптимальных для их жизни условиях. Питательная среда для грибов должна быть бедная на белки, но богатая на углеводы. В споровом состоянии грибы могут оставаться вирулентными до 1,5 лет. Во внешней среде, под воздействием солнечны лучей грибы быстро погибают, высокая температура (80-90 °С) убивает в течение 15-20 минут. Химические вещества губительны для микрофлоры и раствор формалина убивает за 20-25 минут. На искусственных питательных средах рост наблюдают в течение 7-10 дней и культивируют при температуре 21-22 °С. Гриб Dermatophytes показывает рост в виде пористых белых колоний. Попав на кожу животного грибы могут годами не вызывать патологию. Предрасполагающим фактором является понижение иммунной защиты как следствие нарушений в работе эндокринной и пищеварительной систем. Симптомы. Инкубационный период длится от 10 до 30 дней. Болезнь проявляется образованием пятен. Форма, размер, величина зависит от возбудителя. При микроспории кожа поражённого участка гладкая, неправильной формы, участок патологии не лишён волос, а они обломаны, на несколько миллиметров от кожи. Поражения локализуются в области головы, шеи, холки, иногда на конечностях. Если в процесс втянуты глубокие слоя дермы, пятна становятся красного цвета, припухшие, на поверхности образовываются корки и слущивание эпителия. Зуд отсутствует. При фавусе поражённые участки совершенно лишены волос. Сливаясь, пятна захватывают достаточно крупные участки кожи, дерма становится красно-бардового цвета. При присоединении вторичной микрофлоры возможны гнойные процессы. При засыхании выделений образовываются корки и струпья. Местом поражений у мелких животных часто являются межпальцевое пространство лап. Первоначальное поражение округлое, ограниченное, далее сливается и покрывается корками. Зуд может быть слабо выражен или отсутствовать. При поражении грибами рода Trichophyton реакция выражена более интенсивно. Поражения плотные, резко ограниченные, безволосые, возвышенные, покрытые тёмными корочками локализуются очень часто на голове, ушах, конечностя. Болезнь продолжается достаточно долго и участок постепенно увеличивается. После выздоравливания остаются облысевшие участки, которые со временем обрастают шерстным покровом. Диагноз .Диагностика основана на клинических признаках и микроскопии соскоба, а также лабораторных методах дифференциации микроскопических грибов. В лабораторию отправляют поражённые волосы и корочки, взятые с периферии воспалительного процесса и без применения лекарственных средств. Лечение. Терапевтические мероприятия основаны на использовании фнгицидных и фунгистатических препаратов. Начальные процессы легко поддаются лечению 10% спиртовым раствором салициловой кислоты приготовленной на 5% настойке йода. Смазывание поражённых мест начинают с периферии, с захватом здоровых тканей и заканчивают в центре воспалительного процесса. Крупным животным в корм подмешивают антибиотик гризеофульвин в течение 15-20 дней, далее делают перерыв и вновь продолжают лечение до полного выздоровления. Профилактика. С профилактической целью против стригущего лишая у собак и пушных зверей применима вакцина «Ментовак», у КРС лиофилизованная вакцина -130 или ТФ 130 К, для лошадей СП-1, для овец «Триовис». На животноводческих фермах и питомниках собак проводят постоянные клинические осмотры с выделением больных животных. При выявлении патологии на хозяйства накладывается карантин. Дезинфекция проводится раствором натрия гидроокиси или 2% формальдегидом. Формирование стада вновь поступившими животными проводят только после карантинных мероприятий. При составлении рациона необходимо строго балансировать его по содержанию водорастворимых и жирорастворимых витаминов, что будет способствовать повышению резистентности кожных покровов. Билет 42. Возбудители протозойных инфекций Возбудитель амебиаза. Амебиаз — инфекционная болезнь, вызываемая Entamoeba histolytica, сопровождающаяся язвенным поражением толстой кишки; возможно образование абсцессов в различных органах; протекает хронически. Возбудитель относится к Protozoa, типу Sarcomastidophora, подтипу Sarcodina. Возбудитель существует в двух стадиях развития: вегетативной и цистной. Вегетативная стадия имеет несколько форм (тканевая, большая вегетативная, просветная и предцистная). Циста (покоящаяся стадия) имеет овальную форму; образуется из вегетативных форм в кишечнике. Инфицирование происходит при попадании цист возбудителя в кишечник, где из них образуются кишечные вегетативные формы. Просветная форма передвигается медленно, обитает в просвете толстой кишки как безвредный комменсал, но в определенных условиях становится патогенной и превращается в тканевую, или инвазионную, форму. Тканевая форма обладает подвижностью за счет формирования псевдоподий. Она может обнаруживаться в свежевыделенных фекалиях животного, проникает в стенку толстой кишки, вызывает язвенные процессы, способна фагоцитировать эритроциты (эритрофаг, или гематофаг). Резистентность. Вне организма быстро (через 30 мин) погибают тканевая и просветная формы возбудителя. Цисты устойчивы в окружающей среде, сохраняясь в фекалиях и воде при температуре 20 °С в течение месяца. В продуктах питания, на овощах и фруктах цисты сохраняются в течение нескольких дней. Микробиологическая диагностика. Основным методом является микроскопическое исследование испражнений больного, содержимого абсцессов внутренних органов. Мазки окрашивают раствором Люголя и гематоксилином. Билет 43. Методы лабораторной диагностики бактериальных инфекций. Современная медицина располагает множеством методов выделения возбудителей бактериальной инфекции: Бактериоскопический. Исследуется окрашенный специальным образом мазок. Бактериологический. Биоматериал высеивается в питательную среду, и через некоторое время специалист исследует колонию бактерий, выросшую в ней. Биологический. Направлен на определение патогенности микроорганизмов. Серологический. Выявляет антитела и антигены в сыворотке крови — особые вещества, которые вырабатываются организмом при контакте с возбудителем определенной болезни. Билет 44. Техника приготовление мазков. Приготовление мазка. На чистое обезжиренное предметное стекло платиновой петлей наносят материал . Если он жидкий, то каплю, взятую петлей, непосредственно равномерно распределяют по поверхности предметного стекла тонким слоем на площади примерно в 1 см2. Если же изучается агаровая культура, то на предметное стекло предварительно наносят каплю стерильной воды, в которой тонким слоем распределяется исследуемая культура. Получается так называемый мазок. Все манипуляции по приготовлению мазка необходимо выполнять с соблюдением правил асептики (над пламенем горелки стерилизуют петли, концы сосудов с исследуемым материалом, ватные пробки и пр.). Сделав мазок, его сушат при комнатной температуре, поместив на специальный сушильный столик. Хороший мазок после сушки должен давать едва заметный налет. Препарат с густым мазком для наблюдения малопригоден. Для ускорения высыхания можно осторожно подсушить мазок над пламенем горелки. Предметное стекло в этом случае над пламенем горелки держат так, чтобы мазок был обращен вверх. Фиксация мазка. Предметное стекло с высушенным мазком, обращенным вверх от пламени горелки, проводят 3-4 раза на границе между светлой и темной частью пламени. Цель фиксации - убить микробные клетки, прикрепить их к стеклу и облегчить окрашивание. Мертвые клетки гораздо лучше воспринимают краску, чем живые. Препарат в общей сложности не должен находиться в пламени более 2 сек. Излишнего нагревания мазков нужно избегать, так как при этом сильно изменяется структура клеток, мазок будет плохо окрашиваться. При недостаточной же фиксации мазка его можно смыть при последующей окраске. Практически достаточность нагревания определяют прикладывая предметное стекло к руке. При этом должен чувствоваться легкий ожог. Билет 45. Бактериологическая лаборатория, ее задачи. Микробиологические лаборатории как самостоятельные структурные единицы существуют при центрах госсанэпиднадзора, в инфекционных больницах, больницах общего типа, некоторых специализированных стационарах (например, в туберкулезных, ревматологических, кожно – венерологических, поликликлинических диагностических центрах. Задача бактериологической лаборатории. Бактериологические лаборатории при центрах госсанэпиднадзора осуществляют исследования на общую обсемененность, а также на зараженность условно – патогенной микрофлорой объектов внешней среды: воздуха, воды, почвы продуктов питания; проводят обследование организованных коллективов и отдельных лиц на носительство патогенных бактерий кишечной палочки, коринебактерий дифтерии, коклюша, паракоклюша, менингококка. Бактериологические лаборатории лечебно – профилактических учреждений выполняют анализы. Для этого проводят выделение возбудителя и определение иммунного ответа организма на внедрение микроорганизмов (серологическая диагностика). Кроме того, проводят выявление носителей патогенных микроорганизмов. Для постановки этиологического диагноза инфекционной болезни, что позволяет своевременно и правильно выбрать специфическое лечение. Бактериологические лаборатории при вет. исследуют: выделения больных, патологический материал (гной, кровь, слизистое отделяемое носоглотки); объекты внешней среды. Имеются лаборатории, в которых проводят вирусологические исследования. Проведение работы в бактериологических лабораториях возможно только при наличии разрешения, выданного главным государственным санитарным врачом административной территории на срок до 5 лет. Билет 46 Формы и свойства микроорганизмов. Палочковидные формы подразделяют на бактерии, бациллы и клостродии. К бактериям относятся такие палочковидные микроорганизмы, которые, как правило, не образуют спор (кишечная, брюшнотифозная, дизентерийная, туберкулезная). К бациллам и клостридиям принадлежат микробы, в большинстве образующие споры (сибиреязвенная, столбнячная палочки, возбудители анаэробных инфекций) Общими свойствами микроорганизмов являются: малые размеры ; Высокая скорость обменных процессов. Формы микроорганизмов Наиболее часто встречаются бактерии, имеющие шаровидную, палочковидную и извитую формы тела. Шаровидные бактерии принято- кокки, они имеют форму правильного шара; иногда встречаются кокки плоские, односторонне-вогнутые или несколько вытянутые, заостренные на концах и др. По признаку взаимного расположения кокки подразделяются на монококки в форме отдельных шариков; диплококки, если два шарика сцеплены вместе после деления клетки; стрептококки, если шарики образуют длинную цепочку после деления в одной плоскости; тетракокки — шарики, сцепленные по четыре, результат деления клетки в двух взаимно-перпендикулярных направлениях; сарцины — соединения 8, 16, 32 и более кокков в виде кубиков; стафилококки — беспорядочные скопления шариков, напоминающие виноградные гроздья, образуются в результате деления клетки в нескольких плоскостях. Палочковидные бактерии. Спорообразующие палочковидные бактерии подразделяют на бациллы и клостридии . По взаимному расположению палочек различают диплобактерии, или диплобациллы, — парные соединения палочек по одной линии и стрептобактерии, или стрептобациллы, — палочки, соединенные в цепочку различной длины; одиночно или беспорядочно расположенные палочки называют монобактериями. Извитые бактерии - вибрионами, если изгиб их клетки не превышает половины окружности, и спириллами, если клетки имеют несколько правильных завитков (до пяти). Спирохеты имеют изгибы, равные одному или нескольким оборотам спирали. Спириллы и вибрионы способны передвигаться с помощью жгутиков. Спирохеты имеют очень характерную морфологию. Клетка спиралевидная, как у спириллы, но не ригидная, а чрезвычайно гибкая. Строение клетки спирохет: имеются три главных компонента — протоплазматический цилиндр, осевые фибриллы и наружная оболочка. Вокруг цилиндра обвиваются нити, называемые по отдельности осевыми фибриллами, а в совокупности — аксостилем. Каждая фибрилла одним концом прикреплена вблизи конца клетки, а другой ее конец свободен. Способ передвижения у спирохет плавающий, хотя они не обладают жгутиками; в движении участвуют фибриллы. По-види- мому, фибриллы, вращаясь или же сокращаясь, обусловливают характерные для спирохет движения: эти бактерии могут изгибаться и передвигаться змееобразно или толчками. Нитчатые бактерии. В почве встречаются и многоклеточные нитчатые формы, представляющие собой длинную цепочку палочковидных клеток, объединенных вместе слизистым влагалищем. Формирование подобных структур осуществляется путем соединения отдельных клеток с помощью слизи, мостиков или специальных полисахаридных футляров. Типичным представителем являются железобактерии, принимающие участие в осаждении окислов железа и марганца из растворенных соединений. Микобактерии — наиболее низко организованные актиномицеты. Это бактерии в форме длинных палочек или нитей с боковыми выростами. Колонии на питательных средах тестообразны. «Стебельковые» бактерии имеют характерный морфологический признак — вырост (простеку) в виде стебелька — «простеко- вые бактерии». Они встречаются в водоемах, содержащих железо, затопляемых почвах. Почкующиеся и простековые бактерии. Для них характерен способ размножения клеток, типичный для дрожжей, — почкование. В отличие от бинарного деления (деления пополам) почкование представляет собой неравное деление клетки и основано на локальном росте. Дочерняя клетка (почка) обычно меньше материнской. Почкующиеся бактерии представлены гифомикробами, у которых имеется длинный вырост клетки диаметром около 0,2 мкм (гифа — простека), на конце которой образуется небольшое вздутие, превращающееся в подвижную клетку со жгутиком. Эта клетка отрывается и уплывает, а на ее месте образуется новая. Простекобактерии представлены грамотрицательными организмами с нитевидными выростами клетки. В эти выросты входит цитоплазма, и таким образом поверхность клетки и пространство перипласта существенно увеличиваются. Билет 47 Морфология бактерий При установлении видовой принадлежности оценивают форму и взаимное расположение клеток, размер, особенности строения клеточной стенки и поверхностных структур (наличие жгутиков, кап-сулы), способность к спорообразованию, окраску. Всем бактериям присущи определенная форма и размеры, которые выражаются в микрометрах. Бактерии бывают шаровидные (сферические), палочковидные (цилиндрические), извитые (спиралевидные), нитевидные и ветвящиеся. Кокки – шаровидные клетки, которые в зависимости от взаимного расположения делятся на микрококки, диплококки, стрептококки, тетракокки, сарцины, стафилококки (рис. 3). Микрококки располагаются в виде отдельных клеток, делятся в одной плоскости, сапрофиты, патогенных для человека нет. Диплококки, или парные кокки, располагаются парами (пневмококк), так как клетки после деления не расходятся. Стрептококки – клетки округлой или вытянутой формы, составляющие цепочку вследствие деления клеток в одной плоскости и сохранения связи между ними в месте деления. У тетракокков деление клеток происходит в двух взаимно перпендикулярных плоскостях с образованием тетрад. Сарцины располагаются в виде пакетов из 8 и более кокков, которые образуются при делении клеток в трех взаимно перпендикулярных областях. Особенно часто встречаются в воздухе. Стафилококки представляют собой кокки, расположенные группами (гроздьями) в результате деления в разных плоскостях. Палочковидные бактерии различаются по размерам, форме концов клетки и взаимному расположению клеток. Палочки, образующие споры, подразделяют на бациллы– аэробные спорообразующие бактерии. Палочки могут быть правильной (кишечная палочка) и неправильной формы. Наиболее мелкие палочковидные бактерии – риккетсии. Концы палочек могут быть как бы обрезанными, закругленными, заостренными или в виде утолщения, и тогда палочка похожа на. Большинство палочковидных бактерий располагается беспорядочно, так как после деления клетки расходятся. По взаимному расположению бактерии подразделяют на три группы: – монобактерии – палочки располагаются одиночно и беспорядочно, сюда относится большинство палочковидных бактерий; – диплобактерии располагаются попарно; – стрептобактерии или стрептобациллы – бактерии располагаются цепочкой. Извитые формы – спиралевидные бактерии, по количеству и характеру завитков, а также по диаметру клеток подразделяют на три группы: – вибрионы, имеют один изгиб, не превышающий четверти оборота спирали; – спириллы, имеющие вид штопорообразно извитых клеток. Нитевидные и ветвящиеся формы бактерий. Различают два типа нитевидных бактерий, которые образуют временные или постоянные нити. Временные нити с ветвлениями образуют палочковидные бактерии при нарушении регуляции клеточного деления. При восстановлении механизма регуляции деления эти бактерии восстанавливают обычные размеры. Постоянные нитевидные формы образуют палочковидные бактерии, которые соединяются в длинные цепочки или с помощью слизи, или чехлами, или мостиками. Билет 48. Простые методы окрашивания микроорганизмов. Для окрашивания микробов используют анилиновые красители (основные, кислые и нейтральные). Микроорганизмы лучше окрашиваются основными красками. Для окраски препаратов готовят спиртовые, водно-спиртовые и водные растворы. В некоторых случаях добавляют в качестве протравы карболовую кислоту, щелочь. Наиболее часто употребляемыми красителями являются следующие: Синие - метиловый синий, водный синий, опаловый синий; красные - фуксин основной, конго красный, сафранин, нейтральный красный, фуксин кислый; фиолетовые - метиловый фиолетовый, кристаллический фиолетовый, генцианвиолет; зеленые - малахитовый зеленый, бриллиантовый зеленый, светло-зеленый; желтокоричневые - хризоилин, везувин. При простом методе окраски на фиксированный мазок наливают несколько капель какого-либо спнртоводного или водного раствора красок на 1—2 минуты; чаще всего для этой цели применяется фуксин I: 10 или леффлеровская метиленовая синька. Затем краску смывают дистиллированной водой и мазок обсушивают между двумя полосками фильтровальной бумаги. Обычно Фуксином I: 10 красят 10- 30 секунд, а метиленовой синькой - 2-10 мин. Фуксин окрашивает мазки более интенсивно. Л при окраске метиленовой синькой получаются нежные, более изящные препараты. Мазок после обсушивания фильтровальной бумагой должен быть совершенно сухим, в противном случае при соприкосновении оставшейся влаги с кедровым маслом образуется эмульсия и при микроскопии получится неясное изображение. Вообще же продолжительность окраски зависит от вида и качества красящею раствора, степени восприимчивости микроба к окраске и толщины мазка. При простой окраске микробные тела воспринимают цвет применяемой краски так же интенсивно, как и ядра клеток; в то же время цитоплазма и весь фон мазка (если это не мазок из чистой культуры) окрашиваются в тот же цвет, но несколько бледнее. Фуксин и генцианвиолет относятся к более интенсивно окрашивающим краскам; метиленовая синька окрашивает значительно бледнее. Восприятие окраски зависит не только от свойств красок, но и от свойств подвергаемых окраске микробов. Большинство микробов легко и быстро окрашивается водными или спиртоводными растворами красок. Для повышения красящей способности воздействуют на краску высокой температурой (нагреванием) до появления паров (вплоть до кипения). Варьируя степень нагревания, можно получать различные степени силы окраски. Удлинение срока воздействия красящего раствора на объект также может в известной мере усилить степень окраски. Билет 49. Техника окраски мазков Методы окраски. Простые методы. 1. Применяют для изучения морфологии микроорганизмов. 2. Окрашивают одним красителем анилино-вого ряда (основным или кислым): кислый фуксин, метиленовый синий, эозин, генциановый фиолетовый. Сложные методы. 1. Применяют для изучения структуры клеток, дифференциации микроорганизмов. 2. Используют несколько красителей. Окраска по методу: Грама, Циля-Нильсена, Ожешко, Романовского-Гимза, Нейссера Гинса-Бурри и др. Преимущественно для окраски микроорганизмов используют основные красители. Краситель наливают на поверхность мазка на определенное время, затем мазок промывают до тех пор, пока струи воды не станут бесцветными, осторожно высушивают фильтровальной бумагой. Если мазок правильно окрашен и промыт, то поле зрения абсолютно прозрачно, а клетки микробов интенсивно окрашены. Окраска по Граму. Сущность метода Метод основан на способности микроорганизмов удерживать образующийся при окраске комплекс генцианового фиолетового и йода. Методика окраски по Граму. 1 На фиксированный мазок наносят карболово-спиртовой раствор генцианового фиолетового на 1-2 минуты, затем краситель сливают. 2 Наносят раствор Люголя на 1 мин. 3 Обесцвечивают препарат этиловым спиртом в течение 30-60 секунд до прекращения отхождения фиолетовых струек красителя. 4 Препарат промывают водой. 5 Мазок докрашивают водным раствором фуксина в течение 1-2 минут, промывают водой и высушивают фильтровальной бумагой. Окраска по Цилю-Нильсену. Применяют для дифференциации кислотоустойчивых и некислотоустойчивых микроорганизмов. Кислотоустойчивость бактерий обусловлена повышенным содержанием в клеточной стенке и цитоплазме липидов, воска и оксикислот. Принцип основан на том, что кислотоустойчивые бактерии за счет содержания указанных веществ прочно связывают карболовый фуксин при нагревании (т.е. окрашиваются в красный цвет) и не обесцвечиваются кислотой. Некислотоустойчивые бактерии обесцвечиваются серной кислотой и при использовании дополнительного красителя - метиленового синего – окрашиваются в синий свет. Методика окраски по ЦилюНильсену. 1 На фиксированный препарат – мазок нанести карболовый раствор фуксина через полоску фильтровальной бумаги и подогреть до появления паров в течение 3-5 мин. 2 Снять бумагу, промыть мазок водой. 3 Нанести 5 % раствор серной кислоты на 1-2 мин до обесцвечивания. 4 Промыть водой. 5 Докрасить мазок водным раствором метиленового синего в течение 3-5 мин. 6 Промыть водой, высушить, микроскопировать. Окраска по Ожешко. Метод основан на принципе окраски кислотоустойчивых бактерий. Отличие заключается в предварительной обработке микроорганизмов 0,5 % раствором соляной кислотой, что облегчает окраску спор карболовым фуксином. Споры кислотоустойчивы, поэтому красятся в красный цвет. Методика окраски по Ожешко. 1 На нефиксированный мазок нанести 0,5 % раствор соляной кислотой и подогреть на пламени в течение 2-3 мин. 2 Кислоту слить, препарат промыть водой, просушить и фиксировать над пламенем. Затем окрасить по Цилю-Нильсену. Споры бактерий приобретают красный цвет, а вегетативные формы - синий. Окраска по Романовскому-Гимзе. Краска РомановскогоГимзе состоит из метиленового синего, эозина и азура. 1 На мазок наносят рабочий раствор красителя (2 капли красителя на 1 мл дистиллированной воды) на 10-20 мин. 2 Препарат промывают водой и высушивают на воздухе. Трепонемы окрашиваются в бледно-розовый цвет, боррелии - в фиолетовый цвет, лептоспиры - в розовый цвет. Сапрофитные (непатогенные) формы окрашиваются в синий цвет. Морфологию спирохет изучают также в живом состоянии в фазово-контрастном или темнопольном микроскопе. Хорошим методом выявления спирохет является серебрение по Морозову. Билет 50. Приготовление предметных и покровных стекол. Подготовка предметных и покровных стекол. Предметные и покровные стекла, употребляемые для приготовления препаратов, должны быть чистыми и хорошо обезжиренными. Это может быть достигнуто разными способами. Стекла кипятят 15 мин в 1% растворе соды (или мыльной воде), споласкивают водой, кладут в слабую хлористоводородную кислоту и хорошо промывают водой. Или же сначала выдерживают стекла 2 ч в концентрированной серной кислоте, затем моют их в воде, кипятят в щелочи, вновь промывают водой. После 10 мин кипячения в этой смеси стекла промывают 5 мин в слабом растворе щелочи, а затем промывают водой и, наконец, спиртом. Хранят стекла в сосудах (банках) с притертыми пробками в смеси равных количеств спирта и эфира или в 96% спирте, либо промытыми и вытертыми досуха. Билет 51. Сложные методы окрашивания Сложные методы окраски основаны на особенностях физико-химического строения микробной клетки. Сущность этих методов заключается в воздействии на мазок двух красящих веществ, из которых одно является основной, главной краской, а другое дополнительной - контраст. После воздействия первой краской мазок обесцвечивают и только после этого подвергают дополнительной окраске. В качестве обесцвечивающих веществ может быть, применен целый ряд химических реагентов (кислоты, щелочи, спирт, ацетон и др.). Обмывание мазка простой водой также является в какой-то степени чисто механическим процессом обесцвечивания, но для этого необходимо продолжительное время; кроме того, обесцвечивание получается неполное. По отношению к обесцвечивающим веществам можно разбить микробов на группы легко и трудно обесцвечиваемых. Не все виды микробов одинаково относятся к обесцвечивающим реагентам; некоторые являются кислото и спиртоустойчивыми, другие только кислотоустойчивы. Наконец, некоторые, как, например, споры, энергично противостоящие воздействию всех обесцвечивающих веществ, относятся к группе краскоустойчивых. Сложные методы окраски имеют важное дифференциальнодиагностическое значение для характеристики изучаемого микроба. Окрашивание по Граму. Окрашивание спор бактерий проводят методами Циля-Нельсена или Ожешки. Билет 52. Окраска спорообразующих и капсулобразующих бактерий Окраска капсул. Тело микробной клетки покрыто рыхлым слизистым слоем. У некоторых видов микроорганизмов этот слой развивается очень сильно и тогда он называется капсулой. Капсула - муциноподобное вещество, высокомолекулярный полисахарид, является производным наружного слоя оболочки. Наличие капсулы является важным диагностическим признаком при идентификации и дифференциации возбудителей некоторых инфекций (сибирской язвы, пневмококковой пневмонии, туберкулеза). Патогенные микроорганизмы образуют капсулу в инфицированном организме. Она является фактором вирулентности и защищает бактериальную клетку от фагоцитоза и бактерицидного действия сыворотки крови. Капсульное вещество плохо окрашивается. Поэтому при приготовлении препарата для обнаружения капсулы выполняют следующие правила: а) мазок готовят из свежего материала, так как капсула быстро лизируется; б) фиксируют мазок химическим способом, для окраски применяют метохромотические краски, при использовании, которых цитоплазма окрашивается в один цвет, а капсула - в другой; в) промывать мазок кратковременно. водой следует слабо и Билет 53. Определение подвижности микроорганизмов У подвижных видов органами передвижения являются жгутики, которые осуществляют вращательные движения. Расположение их на теле микробной клетки различное. Жгутики бывают различной длины. Их диаметр настолько мал, что они невидимы в световом микроскопе (менее 0,2 мкм). У разных групп бактерий количество и расположение жгутиков неодинаково. Жгутики плохо воспринимают красители. Методы сложной окраски искажают подлинный вид жгутиков, поэтому в лабораториях окраску жгутиков не осуществляют, а исследуют бактерии в живом состоянии. В зависимости от расположения и количества жгутиков микроорганизмы подразделяют на: а) монотрихи - микроорганизмы, имеющие на одном из полюсов один жгутик. Это самые подвижные бактерии, движения активные, поступательные (псеудомонас); б) лофотрихи - микроорганизмы, имеющие на одном из полюсов пучок жгутиков, движения активные, поступательные (листерии); в) амфитрихи - микроорганизмы, имеющие жгутики на обоих полюсах микробной клетки, передвигаются беспорядочно; г) перитрихи - микроорганизмы, у которых жгутики расположены по всей поверхности клетки, передвигаются беспорядочно (кишечная палочка). Билет 54. Окрашивание по Ольту Используется для выявления капсулы бактерий. Мазок окрашивают 2-3%-ным раствором сафранина. Краситель готовят перед употреблением, растворяя его в горячей воде с последующим фильтрованием. Окрашивают при легком нагревании в течение 1-3 минут и быстро промывают водой. Препарат не высушивают, на нем должна быть вода, накрывают покровным стеклом и рассматривают иод иммерсионной системой микроскопа. Световые лучи, проходя через слой воды, усиливают разницу в преломлении лучей от капсулы и тела микробной клетки. В поле зрения микроскопа видно, что тела микробных клеток окрашены в красный цвет, капсулы в желтый; Билет 55. Подвижность бактерий методом «висячая капля». Определение подвижности бактерий. Подвижности бактерий важный видовой признак и производиться при диагностических исследованиях: результат учитывают при идентификации микроорганизмов. У подвижных видов способность самостоятельного поступательного движения обусловлена наличием жгут и ков - специальных тонких нитевидных образований. Определение подвижности бактерий методом «висячая капля». Каплю молодой (18-20 часовой) бульонной культуры бактерий бактериологической петлей наносят на покровное стекло. Специальным предметным стеклом с луночкой накрывают каплю культуры так, чтобы покровное стекло с каплей находилось в центре луночки и прилипло к предметному стеклу (края луночки предварительно слегка смазывают вазелином). Препарат перевертывают стеклом вверх, и капля «повисает» над луночкой. Препарат микроскопируют при затемненном поле зрения, сначала при малом, затем при среднем или большом увеличении. На светлом фоне микробы темносерые. Билет 56. Лабораторная посуда и её подготовка Мытье предметных и покровных стекол. Предметные и покровные стекла должны иметь абсолютно чистую поверхность и быть хорошо обезжиренными. Капля воды, нанесенная на обезжиренное стекло, растекается равномерно, а на плохо обезжиренном стекле распадается на мелкие капельки. Предметные и покровные стекла рекомендуется мыть и ополаскивать в резиновых перчатках, чтобы не загрязнять их жиром, находящимся на поверхности кожи. Стекла предметные и покровные, не бывшие в употреблении, моют в теплой мыльной воде и после споласкивания заливают смесью Никифорова. Если стекла, вынутые через 2— 3 дня из смеси Никифорова, сохраняют следы жира, их складывают в фарфоровую чашечку, заливают 2—5 % раствором гидрокарбоната натрия или едкого натра, ставят на слабый огонь и кипятят, считая от момента закипания воды, в течение 20—30 мин. После кипячения в щелочном растворе стекла ополаскивают проточной водопроводной водой, опускают на 10—15 мин в 5—10% раствор хлористо-водородной кислоты и затем промывают проточной водой. Предметные и покровные стекла, бывшие в употреблении, загрязненные краской и иммерсионным маслом: -опускают на 2 ч в концентрированную серную кислоту или хромовую смесь, затем тщательно промывают проточной водопроводной водой; -заливают 5% раствором гидрокарбоната натрия или щелочи, ставят на слабый огонь и кипятит в течение 30—40 мин. Для работы в бактериологической лаборатории используют лабораторную посуду: Чашки Петри, пробирки различного размера, пастеровские пипетки, колбы, бак петли, инструменты, предметные и покровные стекла, карандаш по стеклу, стерилизаторы, дистилляторы. Посуду моют в специально оборудованных мойках. Новую посуду кипятят в 1 %-ном растворе пищевой соды или мыльной воде в течение 15-20 мин, промывают водой, помещают на несколько часов в слабый раствор соляной кислоты, затем тщательно ополаскивают дистиллированной водой. Посуду, бывшую в употреблении, выдерживают в течение 2 ч в смеси серной кислоты с дихроматом калия, затем моют ершами в горячей воде, кипятят в мыльной воде или в 1 %ном растворе гидрокарбоната натрия и тщательно прополаскивают. Вымытую посуду помещают в сушильный шкаф. Предметные стекла после мойки протирают чистой полотняной салфеткой и хранят в склянках с притертой пробкой в смеси спирта и эфира или хорошо завернутыми в чистую бумагу. Посуду для стерилизации готовят следующим способом. Пробирки, колбы закрывают ватномарлевыми пробками, завертывают по 10— 15 шт. в бумагу. На колбы надевают бумажные колпачки, перевязывают от попадания пыли. В один конец градуированных пипеток вставляют ватный тампон, затем вращательным движением обматывают длинной тонкой полоской бумаги шириной 4-5 см. В концы пастеровских пипеток вставляют ватные тампоны, а затем по несколько штук завертывают в бумагу или помещают в специальные пеналы. Чашки Петри завертывают по 3-4 шт. в бумагу и стерилизуют в сушильном шкафу или в автоклаве. Колбы и пробирки, закрытые ватно-марлевыми пробками, мясопептонного бульона, агара и других сред помещают в стерилизующий аппарат. Лабораторную посуду, питательные среды и другие материалы стерилизуют. Билет 57. Методы приготовления и стерилизации питательных сред. Питательные среды должны: 1. Содержать необходимые для питания микроба питательные вещества. 2. Иметь реакцию рН, оптимальную для выращиваемого вида микроба. 3. Иметь достаточную влажность, так как микробы питаются по законам диффузии и осмоса. 5. Быть стерильными, обеспечивая тем самым возможность выращивания чистых культур микробов. Питательные среды подразделяются на среды общего назначения и специальные. К первой группе относятся мясо-пептонные: агар, бульон, питательный желатин. Среды общего назначения используют для выращивания многих микробов и применяют в качестве основы для приготовления специальных сред, добавляя к ним кровь, сахар, молоко, сыворотку и другие ингредиенты, необходимые для размножения того или иного вида микроба. К специальным питательным средам относятся элективные (избирательные) и дифференциальнодиагностические. Элективные (избирательные) среды. Принцип создания элективных питательных сред основан на удовлетворении основных биохимических и энергетических потребностей того вида микроба, для культивирования которого они предназначены. Определенный состав и концентрация питательных микроэлементов, ростовых факторов при строгом значении рН обеспечивают оптимальные условия для выращивания одного или нескольких видов микроорганизмов. При посеве на них материала, содержащего смесь различных микроорганизмов, раньше всего будет проявляться рост того вида, для которого данная среда будет элективной. Дифференциально- диагностические среды. Эти питательные среды используют для определения видовой принадлежности исследуемого микроба, основываясь на особенностях его обмена веществ. В состав дифференциальнодиагностических сред, предназначенных для выявления сахаролитических и окислительно-восстановительных ферментов, вводят индикаторы: нейтральную красную, метиленовый синий, лакмусовую настойку, кислый фуксин, бромтимоловый синий, водный голубой краситель и розоловую кислоту. Изменяя свою окраску при различных значениях рН, индикатор указывает на наличие или отсутствие расщепления, окисления или восстановления введенного в среду ингредиента. Сухие питательные среды. Приготовление питательных сред - один из наиболее ответственных участков работы бактериологической лаборатории. В связи с этим биопромышленность выпускает стандартные, консервированные, сухие питательные среды, различного назначения, для культивирования микроорганизмов. Готовят среды по прописи, указанной на этикетке. Постоянство состава, стандартность среды, простота и удобство в работе, легкость транспортировки и хранения являются большим преимуществом сухих питательных сред. После установления соответствующего рН среду кипятят, фильтруют, осветляют, разливают во флаконы, пробирки и стерилизуют. Следует учитывать, что после стерилизации среда становится более кислой. Стерилизация питательных сред. Стерилизацию питательных сред осуществляют различными способами в зависимости от тех ингредиентов, которые входят в их состав. 1. Синтетические среды и все агаровые среды, не содержащие в своем составе нативного белка и углеводов, стерилизуют 15-20 мин в автоклаве при температуре 115120°С. 2. Среды с углеводами и молоком (в состав которого входит лактоза), питательный желатин стерилизуют текучим паром при температуре 100°С дробно или в автоклаве при 112° С. 3. Среды, в состав которых входят белковые вещества (сыворотка крови), обеспложиваются тиндализацией или фильтрованием. 4. Для стерилизации питательных сред, содержащих в своем составе нативные белки, пользуются фильтрацией через мембранные фильтры Зейтца. Подготовленные питательные среды проверяют на стерильность. Для этого их ставят в термостат при температуре 37°С. Среды, простерилизованные в автоклаве, выдерживают в термостате 1 сут, простерилизованные текучим паром - 3 сут. Билет 58 Методы стерилизации лабораторной посуды. Перед стерилизацией лабораторную посуду моют и сушат. Пробирки, флаконы, бутыли, матрицы и колбы закрывают ватно-марлевыми пробками. Поверх пробок на каждый сосуд (кроме пробирок) надевают бумажные колпачки. Резиновые, корковые и стеклянные пробки стерилизуют в отдельном пакете, привязанном к горлышку посуды. Чашки Петри стерилизуют завернутыми в бумагу по 1— 10 штук. Пастеровские пипетки по 3—15 шт. заворачивают оберточную бумагу. В верхнюю часть каждой пипетки вкладывают кусочек ваты, предупреждающий попадание материала в рот. При завертывании пипеток нужно соблюдать большую осторожность, чтобы не обломать запаянные концы капилляров. Во время работы пипетки из пакета вынимают за верхний конец. Лабораторную посуду стерилизуют: а) сухим жаром при температуре 175°С 1 ч., б) в автоклаве при давлении 1 атм. в течение 20— 30 мин. Стерилизация шприцев.Шприцы стерилизуют в разобран­ном виде: отдельно цилиндр и поршень в 2% растворе гидрокарбоната натрия 30 мин. Стерилизация металлических инструментов. Металлические инструменты (ножницы, скальпели, пинцеты и пр.) сте­рилизуют в 2% растворе гидрокарбоната натрия, который предупреждает появление ржавчины и потерю остроты. Лез­вия скальпелей и ножниц перед погружением в раствор рекомен­дуется обертывать ватой. Стерилизация бактериальных петель. Бактериальные пет­ли, сделанные из платиновой или нихромовой проволоки, сте­рилизуют в пламени спиртовой или газовой горелки. Петлю в горизонтальном положении вносят в нижнюю, наиболее холодную, часть пламени горелки, чтобы не про­изошло разбрызгивания сжигаемого патогенного материала. После того как он сгорит, петлю переводят в вертикальное положение, накаливают докрасна вначале нижнюю, затем верхнюю часть проволоки и прожигают петледержатель. Стерилизация перчаток и других резиновых изделий. Из­делия из резины (перчатки, трубки и т. д.), загрязненные ве­гетативной формой микробов, стерилизуют кипячением в 2% растворе гидрокарбоната натрия или текучим паром в те­чение 30 мин; при загрязнении спороносной микрофло­рой—в автоклаве при давлении 1,5—2 атм. в течение 30 или 20 мин. Резиновые перчатки перед стерилизацией внутри и сна­ружи пересыпают тальком для предохранения их от склеива­ния. Между перчатками прокладывают марлю. Каждую пару перчаток завертывают отдельно в марлю и в таком виде по­мещают в биксы. Стерилизация культур микробов. Пробирки и чашки, содержащие культуры микробов, не нужные для даль­нейшей работы, складывают в металлический бак, пломбиру­ют крышку и сдают на стерилизацию. Культуры микробов, вегетативные формы, убивают в автоклаве в течение 30 мин при давле­нии 1,5 атм. Сдача баков для стерилизации в автоклавную производится специально выделенным лицом под расписку. Режим стерилизации регистрируется в специальном журнале. Билет 59 Питательные среды. Диагностика, дифференциация. Питательные среды Различают два основных типа пита­тельных сред: так называемые синтетические среды, главные составные части которых точно известны (например, глюкозо-солевая питательная среда), и эмпирически подобранные питательные среды природного происхождения, состав которых точно неизве­стен (к ним относятся пептоны, приготавливаемые из частично гидролизованного белка). По консистенции различают плотные и жидкие питательные среды. Плотные питательные среды готовят из; жидких питательных сред посредством прибавления к ним клеевых веществ агара или желатина. Требования, предъявляемые к питательным средам. Питательные среды должны:1. Содержать необходимые для питания микроба питательные вещества. 2. Иметь реакцию рН, оптимальную для выращиваемого вида микроба. 3. Иметь достаточную влажность. 5. Быть стерильными, обеспечивая тем самым возмож­ность выращивания чистых культур микробов.Питательные среды подразделяются на среды общего назначения и специальные. К первой группе относятся мясопептонные: агар, бульон, питательный желатин. Среды общего назначения используют для выращивания мно­гих патогенных микробов и применяют в качестве основы для приготовления специальных сред, добавляя к ним кровь, сахар, молоко, сыворотку и другие ингредиенты, необходи­мые для размножения того или иного вида микроба. К специальным питательнымсредам относятся элективные (избирательные) и дифференциально- днагностическне. Элективные (избирательные) среды. Принцип создания элективных питательных сред основан на удовлетворении ос­новных биохимических и энергетических потребностей того вида микроба, для культивирования которого они предназназначены. Определенный состав и концентрация питательных микроэлементов, ростовых факторов при строго значении рН обеспечивают оптимальные условия для выращивания одного или нескольких видов микроорганизмов. При посеве на них материала, содержащего смесь раз­личных микроорганизмов, раньше всего будет проявлять­ся рост того вида, для которого данная среда будет электив­ной. Дифференциально-диагностические питательные среды. Дифференциально-диагностические питательные среды ис­пользуют для определения видовой принадлежности исследуемого микроба, основываясь на особенностях его обмена веществ. В состав дифференциальнодиагностических сред, пред­назначенных для выявления сахаролитических и окислительно-восстановительных ферментов, вводят индикаторы: нейтральный красный, метиленовый синий, лакмусовую настойку, кислый фуксин, бромтимоловый синий, водный голубой краситель и розоловую кислоту. Изменяя свою окраску при различных значениях рН, индикатор указывает на наличие или отсутствие расщепления, окисления или восстановления введенного в среду ингредиента. Однако индикатор не является обязательной составной частью сред, предназначен­ных для выявления ферментов. Наличие желатиназы и других протеолитических ферментов в культуре определяют по разжижению желатина, свернутого яичного или сывороточного белка. Билет 60. Методы и техника культивирования микроорганизмов на питательных средах. Способы культивирования микроорганизмов. Поверхностное культивирование. При поверхностном культивировании микроорганизмы развиваются на поверхности питательной среды. Среды могут быть плотными, сыпучими или представлять собой тонкий слой жидкой среды. Практически метод применим только для культивирования аэробных микроорганизмов. В этом случае микроорганизмы получают кислород непосредственно из воздуха. Важным условием реализации метода является большая площадь соприкосновения поверхности питательной среды с окружающим воздухом. В жидких средах аэробные микроорганизмы часто растут, образуя на поверхности пленку. Факультативные анаэробы развиваются не только на поверхности, но и в толще жидкой среды, вызывая более или менее равномерное ее помутнение. Глубинное культивирование. Глубинный метод культивирования является более совершенным по сравнению с поверхностным. При этом микроорганизмы растут и развиваются во всем объеме питательной среды, а не только на ее поверхности. Осуществляют его, применяя жидкие питательные среды. Метод можно использовать как при культивировании аэробов, так и анаэробов. При культивировании аэробных микроорганизмов необходимо обеспечить большую поверхность соприкосновения питательной среды с кислородом воздуха, так как при глубинном культивировании в жидких средах микроорганизмы используют растворенный в среде кислород. Вместе с тем растворимость кислорода в воде невелика, поэтому для обеспечения роста аэробных микроорганизмов в толще среды, ее необходимо постоянно аэрировать - подводить кислород во всю толщу жидкой среды. В результате питательная среда насыщается кислородом воздуха и создаются благоприятные условия для развития аэробов. Периодическое культивирование. Глубинное культивирование микроорганизмов может быть периодическим и непрерывным. При периодическом режиме культивирования весь объем питательной среды засевают посевной культурой, и выращивание ведут в оптимальных условиях определенный период времени до накопления нужного количества целевого продукта. Культивирование и рост микроорганизмов Способ культивирования зависит от конечной цели культивирования (целью является либо накопление биомассы, либо получение определенного продукта жизнедеятельности – метаболита). Поверхностное культивирование заключается в выращивании аэробных микроорганизмов на поверхности жидких и сыпучих питательных сред. При этом микроорганизмы получают кислород непосредственно из воздуха. При поверхностном культивировании на жидких средах микроорганизмы растут в виде пленок. Осуществляется поверхностное культивирование в специальных ваннах – кюветах. Глубинное культивирование проводится на жидких питательных средах, в которых микроорганизмы развиваются во всем объеме питательной среды. Сочетание питательной среды и растущих в ней микроорганизмов называют культуральной жидкостью. Осуществляется глубинное культивирование в специальных аппаратах – ферментаторах, снабженных мешалками и системой подвода стерильного воздуха для обеспечения роста аэробных микроорганизмов. Аэрирование – продувание стерильного воздуха через культуральную жидкость. При периодическом культивировании весь объем питательной среды засевают чистой культурой, которую выращивают в оптимальных условиях определенный период времени до накопления нужного количества целевого продукта. Следует отметить, что, так как культивирование ведется на невозобновляемой питательной среде (в стационарных условиях), то клетки все время находятся в меняющихся условиях. Таким образом, периодическую систему можно рассматривать как замкнутую систему. При непрерывном культивировании культура находится в специальном аппарате, куда постоянно притекает питательная среда и откуда с такой же скоростью отводится культуральная жидкость. Для микроорганизма создаются неизменные условия среды, поэтому непрерывную систему можно рассматривать как открытую систему. Поверхностное культивирование может быть только периодическим, в то время как глубинное культивирование может осуществляться и периодическим, и непрерывным способом. Билет 61. Методы микроорганизмов. выделения чистых культур Методы выделения чистых культур аэробных микроорганизмов. Для того, чтобы получить изолированные колонии, при нанесении материал распределяют так, чтобы клетки бактерий были удалены друг от друга. Для получения чистой культуры используют две основные группы методов: а) методы, основанные на принципе механического разделения микроорганизмов; б) методы, основанные на биологических свойствах микроорганизмов. Методы, основанные на принципе механического разделения микроорганизмов Метод Пастера (метод разведений).Из исследуемого материала готовят ряд последовательных, чаще десятикратных серийных разведений в жидкой стерильной среде или физиологическом растворе в пробирках. Далее высевают материал газоном по 1 мл из каждой пробирки. В какой-то из пробирок останется количество микроорганизмов, поддающихся подсчету при высеве на пластинчатые среды. Этот метод дает возможность подсчитать микробное число в исследуемом материале. (Микробное число - количество колоний на последней чашке с ростом микроорганизмов, умноженное на степень разведения материала). Получение чистой культуры методом рассева в глубине среды Метод Коха (метод заливок).Исследуемый материал в небольшом количестве вносят в пробирку с расплавленным и охлажденным до 45-50°С МПА, перемешивают, затем каплю питательной среды с разведенным материалом переносят во вторую пробирку с расплавленным МПА и т.д. Количество разведений зависит от предполагаемой численности микроорганизмов в исследуемом материале. Приготовленные разведения мик­робов выливают из пробирок в стерильные чашки Петри, обозначенные номерами, соответствующими номерам про­бирок. После застудневания среды с исследуемым материалом чашки помещают в термостат. Количество колоний в чашках с питательной средой уменьшается по мере разведения мате­риала. Рассев петлей (посев штрихами). Берут одну чашку Петри с питательным агаром и делят ее на 4 сектора, проводя разграничительные линии на внешней стороне дна чашки. Исследуемый ма­териал петлей вносят в первый сектор и проводят ею па­раллельные линии по всему сектору на расстоянии одна от другой около 5 мм. Этой же петлей, не изменяя ее положения по отношению к агару, проводят такие же линии на других секторах чашки. В том месте, где на агар попало большое количество микробных клеток, рост микроорганизмов будет в виде сплошного штриха. На секторах с небольшим количеством клеток вырастают отдельные колонии. Кроме того, можно наливать разведен­ные растворы смешанной культуры на поверхность твер­дых сред в чашках. Метод фильтрации. Основан на пропускании исследуемого материала через специальные фильтры с определенным диаметром пор и разделении содержа­щихся микроорганизмов по величине. Этот метод при­меняется главным образом для очистки вирусов от бак­терий, а также при получении фагов и токсинов (в фильтрате - чистый фаг, очищенный токсин). Методы, основанные на биологических свойствах микроорганизмов Создание оптимального температурного режима для избирательного подавления размножения сопутствующей микрофлоры при низкой температуре и получения культур психрофильных или термофильных бактерий. Большинство микробов неплохо развиваются при 35-37°С, иерсинии хорошо растут при 22°С, лептоспиры культивируют при 30°С. Термофильные бактерии растут при температурах, лежащих за пределами температурных режимов прочих сопутствующих видов бактерий (так, кампилобактер культивируют при 42°С). Метод обогащения. Исследуемый материал за­севают на элективные питательные среды, способствую­щие росту определенного вида микроорганизмов. Метод прогревания. Позволяет отделить спорообразующие бациллы от неспоровых форм. Прогрева­ют исследуемый материал на водяной бане при 80°С 10—15 мин. При этом погибают вегетативные формы, а споры сохраняются и при посеве на соответствующую питательную среду прорастают. Бактериостатический метод (метод ингибирования).Основан на различном действии некоторых химических веществ и антибиотиков на микроорганизмы. Определенные вещества угнетают рост одних микроор­ганизмов и не оказывают влияния на другие. Например, небольшие концентрации пенициллина задерживают рост грамположительных микроорганизмов и не влияют на грамотрицательные. Смесь пенициллина и стрептомици­на позволяет освободить нитчатые грибы и дрожжи от бактериальной флоры. Серная кислота (5% раствор) быстро убивает боль­шинство микроорганизмов, а туберкулезная палочка вы­живает в этих условиях. Необходимо учитывать, что селективные факторы часто включены в состав среды в бактериостатических концентрациях, поэтому сопутствующие микрооорганизмы остаются жизнеспособными и при переносе колоний исследуемой культуры на обычные среды могут быть причиной получения смешанной культуры. Билет 62 Культуральные свойства микроорганизмов Рост микробов на плотной питательной среде. Для изучения свойств колоний микробы культивируют на плотных питательных средах в чашках Петри. При посеве материала стараются получить изолированный рост колоний. Чашки с посевом просматривают сначала невооруженным глазом или через лупу, затем помещают их на столик микроскопа вверх дном и просматривают колонии в проходящем свете с объективом малого увеличения и с суженной диафрагмой. Колонии характеризуют по величине, форме, контуру края, рельефу, поверхности, цвету, структуре и консистенции. Величина колонии определяется ее диаметром. В зависимости от диаметра различают колонии точечные, мелкие, средние и крупные. Форма колонии бывает правильная — круглая, неправильная — амебовидная, ризоидная — корневидная, напоминающая переплетающиеся корни деревьев. Характер контура края определяют при рассмотрении колонии под лупой или микроскопом с малым увеличением. Различают ровные края в виде четко выраженной линии и неровные. округлых или уплощенных зубцов правильной формы; 2. --волнистый край, который несколько отличается от фестончатого тем, что крупные зубцы его выражены нечетко. Рельеф (профиль) колонии характеризуется приподнятостью ее над поверхностью питательной среды и контуром формы в вертикальном разрезе . Определяется рельеф колонии невооруженным глазом или с лупой при рассматривании сверху и сбоку. Различают: 1) каплеобразные и куполообразные колонии правильной круглой формы с различно выраженной степенью выпуклости, которые в вертикальном разрезе представляют собой сегмент шара и отличаются только длиной радиуса. Колонии слабовыпуклые имеют большую длину радиуса; куполообразные — меньшую; 2) колонии плосковыпуклые с плоским верхом, пологими или круто обрывающимися краями; имеют в вертикальном разрезе форму трапеции; 3) колонии конусообразные, имеющие в вертикальном разрезе форму треугольника: 4) колонии с приподнятой в виде соска серединой и валиком по периферии; 5) колонии с вдавленным центром; 6) колонии плоские, стелющиеся по поверхности среды. Поверхность колонии изучают с помощью лупы или под микроскопом при малом увеличении. Поверхность колоний бывает матовая или блестящая с глянцем, сухая или влажная, гладкая или шероховатая. Гладкие колонии обозначают буквой S (smooth), шероховатые — буквой R (rough), что означает соответственно “гладкий” и “шероховатый”. Механизм формирования гладких и шероховатых форм колоний обусловлен различием процессов клеточного деления. Микробные клетки в колониях S-форм располагаются, соприкасаясь своими боковыми поверхностями, клетки Rформ, сохраняя при делении цитоплазматические мостики, образуют цепочки, которые, накладываясь, друг на друга, обусловливают шероховатую поверхность и неровный край колонии. Цвет колонии определяется пигментом, который продуцирует культура микробов. Преобладающее большинство патогенных бактерий пигмента не образует, вследствие чего колонии их бесцветны или молочномутного цвета, похожи на опал. В проходящем свете такие колонии в большей или меньшей степени прозрачны. Пигментообразующие виды микробов дают колонии различных цветов: кремовые, желтые, золотисто-оранжевые, синие, красные, сиреневые, черные и др. Структура колоний определяется в проходящем свете при слабом увеличении микроскопа, суженной диафрагме или при несколько опущенном конденсоре. У пигментированных колоний и колоний, не пропускающих света, она не определяется. По характеру структуры различают следующие виды колоний: 1) гиалиновые — бесцветные, прозрачные, без видимой определенной структуры; 2) зернистые, которые в зависимости от величины зерен разделяются на мелко - и грубозернистые; 3) нитевидные или волокнистые, характеризующиеся наличием длинных, густо переплетающихся нитей в толще колонии. Колонии бывают однородные и неоднородные. Строение первых одинаково во всех частях, у вторых центральная часть отличается от периферической или отдельные сектора имеют строение, неодинаковое с остальной массой. Консистенцию колонии , определяющую ее физическое состояние, исследуют посредством прикосновения или взятия из нее части материала бактериальной петлей. По характеру консистенции колонии бывают: 1) пастообразные, легко снимающиеся и размывающиеся по поверхности питательной среды наподобие сливочного масла; 2) вязкие или слизистые, прилипающие и тянущиеся за петлей; 3) волокнистые или кожистые, плотные, снимающиеся с поверхности питательной среды в виде упругой пленки, соответствующей величине и форме колонии; 4) хрупкие, сухие, рассыпающиеся при прикосновении петли. Билет 63 Рост микробов на плотной питательной среде Для изучения свойств колоний микробы культивируют на плотных питательных средах в чашках Петри. При посеве материала стараются получить изолированный рост колоний. Чашки с посевом просматривают сначала невооруженным глазом или через лупу, затем помещают их на столик микроскопа вверх дном и просматривают колонии в проходящем свете с объ¬ективом малого увеличения и с суженной диафрагмой. Колонии характеризуют по величине, форме, контуру края, рельефу, поверхности, цвету, структуре и консистенции. Величина колонии определяется ее диаметром. В зависимости от диаметра различают колонии точечные, мелкие, средние и крупные. Форма колонии бывает правильная — круглая, неправильная — амебовидная, ризоидная — корневидная, напоминающая переплетающиеся корни деревьев. Характер контура края определяют при рассмотрении колонии под лупой или микроскопом с малым увеличением. Различают ровные края в виде четко выраженной линии и неровные. 1. --фестончатый край, состоящий из крупных, слегка округлых или уплощенных зубцов правильной формы; 2. -волнистый край, который несколько отличается от фестончатого тем, что крупные зубцы его выражены нечетко; 4. --бахромчатый край, имеющий нежные ворсинки. В некоторых случаях четко выраженная линия, отграничивающая колонию от поверхности среды, отсутствует. Такой край колонии называется расплывчатым. Рельеф колонии характеризуется приподнятостью ее над поверхностью питательной среды и контуром формы в вертикальном разрезе. Определяется рельеф колонии невооруженным глазом или с лупой при рассматривании сверху и сбоку. Различают: 1. --каплеобразные и куполообразные колонии правильной круглой формы с различно выраженной степенью выпуклости, которые в вертикальном разрезе представляют собой сегмент шара и отличаются только длиной радиуса. Колонии слабовыпуклые имеют большую длину радиуса; куполообразные — меньшую; 2. --колонии плосковыпуклые с плоским верхом, пологими или круто обрывающимися краями; имеют в вертикальном разрезе форму трапеции; 3. --колонии конусообразные, имеющие в вертикальном разрезе форму треугольника: 4. --колонии с приподнятой в виде соска серединой и валиком по периферии; 5. --колонии с вдавленным центром; 6. -колонии плоские, стелющиеся по поверхности среды. Поверхность колонии изучают с помощью лупы или под микроскопом при малом увеличении. Поверхность колоний бывает матовая или блестящая с глянцем, сухая или влажная, гладкая или шероховатая. Гладкие колонии обозначают буквой S, шероховатые — буквой R. Переход S-форм в R-формы наблюдается при диссоциациираспад сложных соединений на сост-ие компоненты. Явление диссоциации у патогенных микробов наблюдается под действием антибиотико- и химиотерапии, факторов специфического иммунитета, формирующихся в течение инфекционного процесса, а также факторов внешней среды. Среди шероховатых форм колоний различают: складчатые, гирозные, по виду напоминающие исчерченную извилинами поверхность мозга; бородавчатые, концентрически или радиально исчерченные; шагреневые, т. е. мелкозернистые. Цвет колонии определяется пигментом, который продуцирует культура микробов. Преобладающее большинство патогенных бактерий пигмента не образуют, вследствие чего колонии их бесцветны или молочномутного цвета, похожи на опал. В проходящем свете такие колонии в большей или меньшей степени прозрачны. Пигментообразующие виды мик¬робов дают колонии различных цветов: кремовые, желтые, золотисто-оранжевые, синие, красные, сиреневые, черные и др. Структура колоний определяется в проходящем свете при слабом увеличении микроскопа, суженой диафрагме или при несколько опущенном конденсоре. У пигментированных колоний и колоний, не пропускающих света, она не определяется. По характеру структуры различают следующие виды колоний: 1. --гиалиновые — бесцветные, прозрачные, без видимой определенной структуры; 2. --зернистые, которые в зависимости от величины зерен разделяются на мелко- и грубозернистые; 3. --нитевидные или волокнистые, характеризующиеся наличием длинных, густо переплетающихся нитей в толще колонии. Колонии бывают однородные и неоднородные. Строение первых одинаково во всех частях, у вторых центральная часть отличается от периферической или отдельные сектора имеют строение, неодинаковое с остальной массой. Консистенцию колонии, определяющую ее физическое состояние, исследуют посредством прикосновения или взятия из нее части материала бактериальной петлей. По характеру консистенции колонии бывают: 1. --пастообразные, легко снимающиеся и размывающиеся по поверхности питательной среды наподобие сливочного масла; 2. -вязкие или слизистые, прилипающие и тянущиеся за петлей; 3. --волокнистые или кожистые, плотные, снимающиеся с поверхности питательной среды в виде упругой пленки, соответствующей величине и форме колонии; 4. --хрупкие, сухие, рассыпающиеся при прикосновении петли. Билет 64. Особенности микробного роста на жидких питательных средах На жидких питательных средах характер роста мик­робов менее разнообразен, чем на плотных питательных средах. Однако и здесь выявлены следующие формы роста бак­терий. Рост бактерий с равномерным помутне­нием среды, цвет которой остается неизмененным или из­меняется в соответствии с цветом водорастворимого пигмен­та, образующегося в культуре микроба. Такой рост харак­терен для многих патогенных бактерий, относящихся к груп­пе факультативных анаэробов. Придонный рост бактерий характеризуется обра­зованием осадка на дне пробирки с жидкой питательной сре­дой. Осадок может быть скудным или обильным, крошковидным, гомогенным, волокнистым или в виде крупных рыхлых хлопьев, по консистенции вязким, слизистым, хрупким или пастообразным. Питательная среда над осадком может быть прозрачной или мутной. Цвет осадка и среды, находящейся над ним, определяется наличием пигмента, продуцируемого культурой микробов. Если культура пигмента не образует, цвет среды не изменяется, а осадок приобретает, как прави­ло, серовато-белый или желтоватый цвет. Придонный рост специфичен для бактерий с анаэробным типом дыхания. Пристеночный рост бактерий выражается в том, что питательная среда, находящаяся в пробирке, остается совершенно прозрачной. Бактерии растут, образуя более или менее крупные рыхлые хлопья или, наоборот, компактные зерна, прикрепленные к внутренней поверхности стенок со­суда, с которых в зависимости от вида бактерий снимаются легко или с трудом. Поверхностный рост бактерий характеризуется появлением на поверхности жидкой питательной среды пленки, внешний вид и характер которой могут быть раз­личны: • --пленка тонкая, нежная, бесцветная, имеет вид едва заметного налета, исчезающего при встряхивании пробирки и взбалтывании среды; • --пленка влажная, толстая, хорошо видимая простым глазом, вязкой, слизистой консистенции, прилипает к петле и тянется за ней; • --пленка плотная, сухая, внешним видом напоминает ку­сочки кожи и при попытке взятия из нее материала сни­мается целиком в виде круглого диска, соответствующего диаметру пробирки: • --пленка плотная, сухая, со сморщенной, а иногда боро­давчатой поверхностью, краями прикрепленная к стенкам со­суда; при взбалтывании жидкости или прикосновении бакте­риальной петли разбивается на кусочки, погружающиеся в глубь жидкости. Цвет пленки, как и питательной среды, зависит от пигмен­та, вырабатываемого растущей культурой микробов. Рост бактерий в виде поверхностной пленки характерен для микробов-аэрофилов. Билет 65. Рост на полужидкой питательной среде Для выявления особенностей микробного роста на полужидкой питательной среде исследуемую культуру засевают в столбик 0,2—0,5% полужидкого агара. Для того, чтобы особенности роста про­являлись наиболее четко, прокол среды делают в непосред­ственной близости к стенке пробирки. Посев, произведенный таким образом, дает возможность выявить подвижные расы микробов и дифференцировать их от неподвижных. Подвижные микробы в столбике полужидкого агара вы­зывают выраженное помутнение, распространяющееся более или менее равномерно по всей толщине среды. Неподвижные формы микробов растут только по ходу прокола среды, напоминая сосульки цилиндрической или ко­нической формы. При этом окружающая среда остается со­вершенно прозрачной. Билет 66 Метод окрашивания по Циль-Нильсену 1. Фиксированный на пламени мазок покрывают полоской фильтровальной бумаги, наливают на не карболовый раствор фуксина и подогревают; при появлении паров прекращают нагревание и оставляют краску на препарате еще на несколько минут (2—3 минуты). Дав препарату остыть, удаляют пинцетом бумажку и обмывают мазок водой. 2. Обесцвечивают препарат 5—10% водным раствором серной кислоты в течение 3 5 секунд (до желтоватого оттенка мазка). Вместо серной кислоты можно применить 5% раствор азотной или 3 /о раствор соляной кислоты. 3. Мазок тщательно промывают водой. 4. Споласкивают 96°спиртом. 5. Снова промывают водой. 6. Докрашивают в течение 3—5 минут леффлеровской метиленовой синькой или водным раствором 7. Краску смывают водой и препарат высушивают. Микроскопическая картина: туберкулезные палочки - рубиново красные, остальные, за исключением возбудителя паратуберкулеза, кислото - и спиртоустойчивых сапрофитов, - синие. После этого мазок ополаскивают водой и докрашивают метиленовой синькой и т. д. по основной прописи. Указанным методом достигается одновременное испытание бацилл на кислото - и спиртоустойчивость. Среди видов кислотоустойчивых сапрофитов встречаются спирто-податливые разновидности, палочки же туберкулеза и паратуберкулеза всегда кислото и спиртоустойчивы. Билет 67 Техника окраски спор методом Трухильо Техника окраски спор методом Трухильо. На фиксированный мазок накладывают небольшой кусочек фильтровальной бумаги и на нее наносят водный раствор малахитовой зелени. Подогревают препарат на пламени горелки до появления паров и выдерживают в течение 3 минут, промывают водой и докрашивают 0,25%-ным водным раствором основного фуксина 1 минуту. Промывают водой и высушивают. Микрокартина: споры зеленые, а вегетативные клетки красные. Билет 68 Техника окраски методом Ожешко При использовании этих методов вегетативные клетки окрашиваются в синий цвет, а споры - в красный цвет. При окрашивании спор по методу Ожешки на предметном стекле готовят густой мазок исследуемой культуры, высушивают его и, не фиксируя, наливают на него 0,5% раствор соляной кислоты. Препарат подогревают в течение 2 минут до появления паров. Кислоту сливают. После этого препарат промывают водой, высушивают и фиксируют. На препарат помещают полоску фильтровальной бумаги и наносят несколько капель карболового фуксина Циля. Препарат подогревают на пламени спиртовки до появления паров. Затем препарат обесцвечивают 5% серной кислотой и докрашивают дополнительно метиленовой синькой в течение 3-5 минут. Споры окрашиваются фуксином в яркокрасный цвет, а вегетативные клетки обесцвечиваются серной кислотой и окрашиваются метиленовой синькой в синий цвет. Билет 69. Окрашивание спор по Пешкову Окрашивание спор по Пешкову. После фиксации препарата над пламенем горелки мазок окрашивают метиленовым голубым Лёффлера в течение 15-20 секунд, подогревая над пламенем спиртовки. Препарат промывают водой. Дополнительное окрашивание проводят 0,5%-ным водным раствором нейтрального красного в течение 30 секунд. Затем препарат промывают водой и высушивают. При этом методе споры окрашиваются в голубой или синий цвет, а вегетативные формы - в розовый. Билет 70 Окрашивание жгутиков бактерий Окрашивание жгутиков бактерий по методу Леффлера. Взвесь бактерий вносят в каплю воды (не размазывая ее петлей), нанесенную на предметное стекло, и дают высохнуть. Для обеспечения сохранности жгутиков необходимо чрезвычайно осторожное обращение с мазком во время всех манипуляций. Обрабатывают 15-20 минут при комнатной температуре протравой следующего состава: 1 мл насыщенного спиртового раствора фуксина и смесь из 10 мл 25% водного раствора танина с 5 мл насыщенного водного раствора сернокислого железа (протраву готовят за несколько суток до употребления; перед употреблением ее отфильтровывают). Препарат тщательно промывают водой, высушивают на воздухе. Докрашивают фуксином Циля в течение 3-4 минут при легком подогревании (без образования паров). Затем препарат промывают водой, высушивают над пламенем горелки.
