ГОСУДАРСТВЕННОЕ АВТОНОМНОЕ ПРОФЕССИОНАЛЬНОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ «ЛИПЕЦКИЙ МЕДИЦИНСКИЙ КОЛЛЕДЖ» Реферат По учебной дисциплине «Лабораторные гистологические исследования » Тема «Изучение мазка крови человека.» Выполнила: Таджидинова М.Р. Студентки группы: 2к лаб. Специальность 31.02.03 Лабораторная диагностика Проверил: Кирсанов Я.Н. ВВЕДЕНИЕ Кровь — жидкая соединительная ткань, циркулирующая по сосудам и выполняющая транспортную, дыхательную, регуляторную, гомеостатическую, защитную функции. Кровь составляет 5...9 % массы тела животных и состоит из форменных элементов и межклеточного вещества, или плазмы, составляющей 60 % от общего объема крови. Гистологическое изучение крови на светооптическом уровне осуществляется на мазках. Для окрашивания мазка крови часто используется стандартная краска, состоящая из смеси щелочного и кислого красителей азур – эозин (по Романовскому-Гимзе). Жидкую составную часть крови называют плазмой. Она содержит 90...92 % воды и 8...10 % сухих веществ, в составе которых около 9 % органических и 1 % минеральных веществ. Основные органические вещества плазмы крови — белки (альбумины, глобулины, фибриноген), жиры (фосфолипиды, холестерин), углеводы (глюкоза), аминокислоты и др. Плазма желтоватого цвета, слегка опалесцирующая (с оттенком перламутра). Такой цвет плазмы обеспечивается благодаря растворенным в ней веществам: газам, солям, гормонам, ферментам, витаминам, белкам, липидам, углеводам. А красный цвет самой крови определяется присутствующим в эритроцитах гемоглобину. Чем гемоглобина меньше, например, при анемиях, тем оттенок красного тусклее. Венозная и артериальная кровь также отличаются по цвету. Обусловлено это тем, что в артериальной крови присутствует насыщенный кислородом, окисленный гемоглобин (оксигемоглобин). А в венозной крови присутствует не только насыщенный гемоглобин, но и восстановленный дезокси-гемоглобин. В связи с этим венозная кровь темно-красного цвета с синеватым оттенком. Кровь доставляет тканям кислород и питательные вещества (аминокислоты, жирные кислоты, глюкозу и другие), удаляет углекислоту из тканей. Кровоток поддерживает и регулирует постоянную температуру тела. Если человек переохлаждается, то кровь оттекает от кожи, чтобы согреть внутренние органы. Эти процессы происходят опосредованно, через тканевую жидкость, доставляя все необходимое без исключения всем органам и тканям организма. Именно тканевая жидкость контактирует со всеми клетками. Кровь «передает» растворенные питательные вещества, гормоны, ферменты, газы и продукты обмена в тканевую жидкость. Из тканевой жидкости все необходимое «забирает» ткань или клетка. Все ненужное клетке или ткани передаётся в тканевую жидкость, далее в лимфу, а из лимфы в кровь. Все клетки крови находятся в плазме во взвешенном состоянии (не оседают) поскольку поверхность самих клеток имеет гидрофобные (водоотталкивающие) свойства. Такое состояние клеток поддерживается еще и благодаря тому, что они имеют отрицательный заряд и отталкиваются друг от друга. Если отрицательный заряд уменьшается, это может привести к слипанию эритроцитов между собой, с другими форменными элементами крови и с белками. Важное значение для всего организма имеет осмотическое давление крови. Это такая сила, которая заставляет переходить воду через полупроницаемую мембрану клетки в среду с большой концентрацией солей. Если в крови повышается концентрация солей, то из тканевой жидкости вода переходит в сосудистое русло, и почки начинают усиленно выводить соли. Если же в кровь поступает избыточное количество воды, то она (вода) выводится почками и поступает в ткани, клетки. Так выравнивается осмотическое давление крови. Эритроциты (от лат. erythros — красный) — форменные элементы, приспособленные для транспорта кислорода и диоксида углерода. Это самые многочисленные клетки, в 1 мкл крови эритроцитов содержится в 950..Л000 раз больше, чем лейкоцитов. Эритроциты безъядерные, имеют форму двояковогнутого диска со средним диаметром 5...7 мкм. Дисковидная форма увеличивает общую поверхность эритроцита в 1,64 раза по сравнению с поверхностью шара такого же диаметра, что способствует ускорению проникновения кислорода в эритроцит. Эритроциты обладают свойством противостоять осмотическим и механическим воздействиям и др. При значительных изменениях концентрации солей в окружающей среде, например при помещении крови в гипотонический раствор, эритроциты набухают, приобретают сферическую форму; мембрана перестает удерживать гемоглобин, который выходит в окружающую жидкость, — явление гемолиза. Выход гемоглобина из эритроцитов может происходить в организме при действии змеиного яда, токсинов, выделяемых некоторыми бактериями и возбудителями паразитарных болезней. Наличие гемоглобина в эритроцитах обусловливает выраженную оксифилию при окраске мазка крови по Романовскому— Гимзе (смесь кислого красителя эозина и основного — азура). Эритроциты при этом окрашиваются в красный цвет эозином, причем центральная часть клетки окрашивается слабее. Физиологической нормой считается, когда бледно окрашенная центральная часть составляет около трети диаметра эритроцита. При некоторых формах анемии бледно окрашенная центральная часть цитоплазмы увеличена — это гипохромные эритроциты. При окрашивании капли крови бриллиантовым крезиловым синим в мазке можно обнаружить молодые формы эритроцитов, содержащие зернисто-сетчатые структуры — это ретикулоциты, которые являются предшественниками эритроцитов. Ретикулоциты подсчитывают для получения информации о скорости образования эритроцитов. Обнаружение ретикулоцитов в крови в большем количестве по сравнению с нормой — признак усиленного эритропоэза. Лейкоциты — клетки крови, выполняющие многообразные функции, прежде всего защищают организм от чужеродного влияния путем фагоцитарной активности, формируют гуморальный и клеточный иммунитет, а также участвуют в восстановительных процессах при тканевом повреждении. Лейкоцитов в крови в 600...800 раз меньше, чем эритроцитов. Увеличение количества лейкоцитов — лейкоцитоз — характерный признак многих патологических процессов. Лейкоциты образуются в кроветворных органах, поступают в кровь и непродолжительное время находятся в сосудистом русле. Затем они мигрируют в соединительную ткань вокруг сосудов и в органы, где осуществляют свою основную функцию. Для многих лейкоцитов тканевая фаза жизни является завершающей. Особенность лейкоцитов — подвижность: в цитоплазме, непосредственно около цитоплазматической мембраны, имеется комплекс микрофиламентов, с помощью которых приводится в движение клеточная поверхность и образуются псевдоподии. Изменяя внешнюю форму, лейкоциты способны активно перемещаться между клетками эндотелия сосудов, проникать через базальные мембраны и клетки эпителия, мигрировать в основном веществе соединительной ткани. Классификация лейкоцитов основана на морфологических признаках, выявляемых при световой микроскопии мазков крови. В цитоплазме зернистых лейкоцитов, или грануло- ц и т о в, отмечают специфическую зернистость. Зрелые зернистые лейкоциты имеют сегментированное ядро, поэтому их называют сегментоядерными. Выделяют три вида клеток: нейтрофилы, их зернистость окрашивается кислыми и основными красителями; эозинофилы — кислыми; базофилы — основными красителями. Тромбоциты – клетки крови, которые «отвечают» за её свертываемость. Нормы тромбоцитов в крови: У женщин – от 150 до 380*10^9 единиц на литр; У мужчин – от 180 до 320*10^9 единиц на литр, как у взрослых мужчин, так и у мальчиков; У детей – от 100 до 420*10^9 единиц на литр. Вообще сама система свертывания крови мало изучена. Ученые выделяют в этой системе два саморегулирующихся процесса: процесс активации свертывания и процесс торможения свертывания крови. Эти процессы в организме уравновешены. Поэтому наша кровь остается в жидком состоянии. Если бы процесс свертывания не прекращался, то вся кровь могла бы свернуться. Такой непрекращающийся процесс свертывания крови может возникнуть, например, при экстремально высокой температуре – более 42 ºС, что естественно приводит к летальному исходу. Есть и другие нарушения в процессе торможения свертывания крови, когда сгустки крови – тромбы образуются не там, где это нужно, например, при тромбозах, тромбофлебите. Кровяные пластинки — безъядерные элементы сосудистой крови млекопитающих, представляют собой небольшие цитоплазматические фрагменты, отделившиеся от мегакариоцитов красного костного мозга. В 1 мкл крови содержится 250 000...350 000 кровяных пластинок. При световой микроскопии в окрашенных мазках крови отдельные пластинки имеют вид диска величиной 1...3 мкм, с гомогенной наружной частью — гиаломером (от лат. gialos — стекло, meros — часть), с окрашенными зернами — грануломерами. Кровяные пластинки обеспечивают основные этапы остановки кровотечения — гемостаза. В участке повреждения эндотелия сосуда и обнажения базальной мембраны происходит оседание и агрегация (слипание) пластинок. Пластинки становятся шаровидными и выделяют ряд соединений, содержащихся в гранулах, которые ускоряют агрегацию пластинок. В результате агрегации пластинок образуется сгусток (белый тромб), препятствующий выходу форменных элементов крови из поврежденного сосуда. Вследствие изменения поверхности кровяных пластинок активируются факторы свертывания, находящиеся в плазме крови, которые приводят к появлению нерастворимого фибрина, заполняющего пространство между коагулированными пластинками. В последующем для образования кровяного сгустка имеет значение содержащийся в пластинках тромбостенин (сократительный белок). В сосудистой крови пластинки циркулируют около 9..Л0 сут, после чего происходит фагоцитоз, главным образом макрофагами селезенки. Недостаток в крови пластинок — тромбоцитопения может быть обусловлена нарушением функции мегакариоцитов или очень быстрым удалением кровяных пластинок из крови. Тромбоцитопе- нию также наблюдают при паразитарных болезнях, инфекционной анемии лошадей, лучевой болезни. Сходные по функции с кровяными пластинками, тромбоциты рыб, амфибий, рептилий, птиц представлены овальными клетками с ядром. Во взрослом организме каждая клеточка крови будь то эритроцит, тромбоцит или лейкоцит проходит несколько этапов формирования (дифференциацию) в ходе которых появляются промежуточные клетки. И при делении клетки-прародительницы появляются совершенно другие клетки. На схеме видно, какой долгий путь проходят клетки крови, чтобы переродиться во взрослую трудоспособную клетку. ГЕМОПОЭЗ Основной процесс развития клеток крови (гемопоэз) происходит в красном костном мозге, который является инкубатором для эритроцитов, тромбоцитов и лейкоцитов. Косный мозг расположен в губчатом веществе костей и костно - мозговых полостях, состоит из красного и желтого костного мозга. Кроветворение у взрослого человека происходит в красном костном мозге. Желтый костный мозг представляет собой жировые клетки. В красном костном мозге образуются островки кроветворения – это особые структуры, группы кроветворных клеток, из которых начинают развиваться функциональные единицы крови. Существует теория о кроветворении, в которой считается, что все клетки крови происходят от одной кроветворной стволовой клетки. Как мы знаем, при делении клетки возникают две её копии. Но при делении стволовой клетки (дифференциации) могут появиться совершенно разные по структуре, качеству и функциям клетки. При этом появление любой зрелой клетки крови происходит в несколько этапов. В результате каждого этапа созревания появляется промежуточная клетка, сильно отличающаяся от своей поделившейся прародительницы. Приготовление мазков крови унифицированным методом. Мазки крови готовят на предметных стеклах, которые предварительно моют и обезжиривают. Реактивы. Хозяйственное мыло — 2 % раствор или раствор стирального порошка: 20 г растворить в 975 мл воды и добавить 20 мл пергидроля. Спирт этиловый 96%. Специальное оборудование не требуется. Ход обработки стекол. Стекла (новые и бывшие в употреблении) помещают в эмалированную посуду в 2 % раствор хозяйственного мыла или стирального порошка на 8—10 ч. Кипятят в указанном растворе 5—10 мин, старые мазки предварительно стирают ветошью или ватным тампоном. Более длительное кипячение или использование алюминиевой посуды не рекомендуют, так как стекла мутнеют. Промывают в проточной воде. Насухо вытирают и помещают в этиловый спирт на 30—60 мин. Насухо вытирают чистым полотенцем и хранят в широкогорлой чистой посуде с притертой пробкой. Чистые стекла рекомендуется брать либо пинцетом, либо за края (соприкосновение пальцев с поверхностью стекла оставляет жирные следы). ТЕХНИКА ПРИГОТОВЛЕНИЯ МАЗКОВ На сухое подготовленное описанным выше способом предметное стекло наносят мазок крови следующим образом. На стекло ближе к короткой стороне наносят стеклянной палочкой (или непосредственно из места укола пальца) небольшую каплю крови. Оставляют стекло в горизонтальном положении и размазывают каплю крови по стеклу с помощью чистого шлифованного стекла, помещая его под углом 45°; коротким ребром, подождав, пока вся кровь расплывется по нему, быстро проводят по предметному стеклу. Не следует сильно нажимать на стекло, так как при этом травмируются форменные элементы крови. Мазки высушивают на воздухе и маркируют (лучше простым карандашом). Высохший мазок должен быть равномерно тонким, желтоватого цвета, достаточной величины (располагаться на 1—1,5 см от краев, занимать почти всю длину стекла) и оканчиваться «метелочкой». Толстые (густо-розового цвета) мазки не следует использовать, так как в них морфология клеток плохо различима. Мазки крови для исследования лейкоцитарной формулы готовят следующим образом. ШАГ 1. Поместить небольшую каплю венозной крови на предметное стекло, с помощью стеклянной капиллярной пипетки, (или непосредственно из места укола пальца перенесите выступившую каплю крови на конец стерильного предметного стекла. Избегайте при этом всякого контакта между проколотым участком кожи и стеклом.) Оставляют стекло в горизонтальном положении. ШАГ 2. Размазывают каплю крови по стеклу с помощью чистого шлифованного стекла, помещая его под углом 45°; коротким ребром, подождав, пока вся кровь расплывется по нему. ШАГ 3. Как только кровь растеклась по ребру, быстрым движением от капли проводят по предметному стеклу. Не следует сильно нажимать на стекло, так как при этом травмируются форменные элементы крови. ШАГ 4. После приготовления мазки быстро сушат на воздухе до исчезновения влажного блеска. Подсушить мазок можно, подержав его над абажуром лампы или помахав им в воздухе. Хорошо сделанный мазок тонок, имеет желтоватый цвет и оканчивается «метелочкой». Густо-розовые и красноватые мазки непригодны для счета, так как они слишком толсты и клеточные элементы при этом дифференцировать невозможно.При медленном высыхании может изменяться морфология клеток. Техника мазка - слева направо: Мазок 1 - Идеальный мазок Мазок 2 – В момент размазывания мазка произошла остановка. Мазок 3 – Перекос мазка. Мазок 4 - Капля крови слишком большая. Мазок 5 - Мазок слишком короткий. ВЫВОД Имея иммунологическую память, кровь, встретившись хотя бы раз с какой-либо инфекцией, запоминает её навсегда. Клетки крови – совершенно осознанные, цивилизованные, можно сказать, обученные структуры. Их мир – это целый социум. И ведут они себя как разумные существа, даже помогают друг другу в своей деятельности. Например, тромбоциты помогают лейкоцитам в борьбе с инфекцией. Лейкоциты стимулируют кроветворение, выделяя особые вещества, помогающие созревать другим клеткам крови.
