Урок 11 Нуклеиновые кислоты 1. Нуклеиновые кислоты, их содержание в клетке, размеры молекул и молекулярная масса Нуклеиновые кислоты – природные высокомолекулярные органические соединения, полинуклеотиды, обеспечивающие хранение и передачу наследственной (генетической) информации в живых организмах. Эти органические соединения были открыты в 1869 г. швейцарским врачом И.Ф. Мишером в клетках, богатых ядерным материалом (лейкоцитах, сперматозоидах лосося). Нуклеиновые кислоты являются составной частью клеточных ядер, поэтому они и получили такое название (от лат. nucleus – ядро). Помимо ядра нуклеиновые кислоты встречаются также в цитоплазме, центриолях, митохондриях, хлоропластах. В природе существуют нуклеиновые кислоты двух типов: дезоксирибонуклеиновые (ДНК) и рибонуклеиновые (РНК). Они различаются по составу, строению и функциям. ДНК имеет двухцепочечную молекулу, а РНК – одноцепочечную. Нуклеиновые кислоты – биополимеры, достигающие огромных размеров. Длина их молекул равна сотням тысяч нанометров (1 нм = 10–9 м), это в тысячи раз больше длины белковых молекул. Особенно велика молекула ДНК. Молекулярная масса нуклеиновых кислот достигает десятков миллионов и миллиардов (105–109). Например, масса ДНК кишечной палочки равна 2,5x109, а в ядре половой клетки человека (гаплоидный набор хромосом) длина молекул ДНК составляет 102 см. 2. НК – непериодические полимеры. Типы нуклеотидов и их строение Нуклеиновые кислоты – непериодические биополимеры, полимерные цепи которых образованы мономерами, называемыми нуклеотидами. В молекулах ДНК и РНК содержится по четыре типа нуклеотидов. Состав нуклеотидов ДНК и РНК Дезоксирибонуклеотиды Рибонуклеотиды Адениловый Гуаниловый Тимидиловый Цитозиловый Адениловый Гуаниловый Уридиловый Цитозиловый (А) (Г) (Т) (Ц) (А) (Г) (У) (Ц) Рассмотрим строение нуклеотида. Нуклеотиды – сложные органические соединения, включающие в себя три компонента. В составе дезоксирибонуклеотидов обнаруживаются пиримидиновые основания тимин и цитозин, а в составе рибонуклеотидов – цитозин и урацил. Аденин и гуанин входят в состав нуклеотидов как ДНК, так и РНК. По содержащемуся азотистому основанию нуклеотиды и получили свое название. Например, нуклеотид, содержащий азотистое основание тимин называется тимидиловым, урацил – уридиловым и т.д. Азотистые основания и нуклеотиды в целом принято обозначать заглавными русскими или латинскими начальными буквами. В составе нуклеотидов ДНК содержится пентоза – дезоксирибоза, а в составе нуклеотидов РНК – рибоза. Фосфат придает нуклеиновым кислотам кислые свойства. 3. Соединение нуклеотидов в цепь Нуклеотиды соединяются между собой в ходе реакции конденсации. Цепь последовательно расположенных нуклеотидов составляет первичную структуру ДНК. Если в составе полинуклеотида, образованного четырьмя типами нуклеотидов, 1000 звеньев, то количество возможных вариантов его состава 41000 (это цифра с 6 тыс. нулей). Поэтому всего четыре типа нуклеотидов могут обеспечить огромное разнообразие нуклеиновых кислот и той информации, которая содержится в них. Нуклеотиды расположены друг от друга на расстоянии 0,34 нм, На один виток спирали их приходится 10. Диаметр молекулы ДНК составляет около 2 нм. Д.Уотсон и Ф.Крик установили, что две полинуклеотидные цепи ДНК закручены вокруг друг друга и вокруг общей оси. Цепи ДНК – антипараллельны (представьте себе двух змей скрутившихся в спираль, – голова одной к хвосту другой). Спираль обычно закручена вправо, но есть случаи образования и левой спирали. 4. Правила Чаргаффа. Сущность принципа комплементарности Еще до открытия Уотсона и Крика, в 1950 г. австралийский биохимик Эдвин Чаргафф установил, что в ДНК любого организма количество адениловых нуклеотидов равно количеству тимидиловых, а количество гуаниловых нуклеотидов равно количеству цитозиловых нуклеотидов (А=Т, Г=Ц), или суммарное количество пуриновых азотистых оснований равно суммарному количеству пиримидиновых азотистых оснований (А+Г=Ц+Т). Эти закономерности получили название «правила Чаргаффа». Образование водородных связей между комплементарными азотистыми основаниями Между аденином и тимином возникают две водородные связи (А=Т), а между гуанином и цитозином – три (Г=Ц). Из всего выше сказанного вытекает, что, зная последовательность нуклеотидов в одной спирали, можно выяснить порядок следования нуклеотидов на другой спирали. Двойная комплементарная цепь составляет вторичную структуру ДНК. Спиральная форма ДНК является ее третичной структурой. 5. РНК и ее значение Основу жизни образуют белки. Функции их в клетке очень разнообразны. Однако белки «не умеют» размножаться. А вся информация о строении белков содержится в генах (ДНК). У высших организмов белки синтезируются в цитоплазме клетки, а ДНК сокрыта за оболочкой ядра. Поэтому ДНК непосредственно не может быть матрицей для синтеза белка. Эту роль выполняет другая нуклеиновая кислота – РНК. РНК принадлежит главная наследственной информации. роль в передаче и реализации В соответствии с функцией и структурными особенностями различают несколько классов клеточных РНК. 6. Отличия молекул ДНК и РНК Признаки ДНК РНК сравнения Расположение в Ядро, клетке хлоропласты митохондрии, Ядро, рибосомы, центриоли, цитоплазма, митохондрии и хлоропласты Строение Двойной неразветвленный Одинарная макромолекулы линейный полимер, свернутый полинуклеотидная цепь в спираль Мономеры Дезоксирибонуклеотиды Рибонуклеотиды Состав нуклеотидов Пуриновые (аденин, гуанин) и пиримидиновые (тимин, цитозин) азотистые основания; дезоксирибоза (С5); остаток фосфорной кислоты Пуриновые (аденин, гуанин) и пиримидиновые (урацил, цитозин) азотистые основания; рибоза (С5); остаток фосфорной кислоты Функции Хранитель информации наследственной Посредник в реализации генетической информации 7. Репликация ДНК Одним из уникальных свойств молекулы ДНК является ее способность к самоудвоению – воспроизведению точных копий исходной молекулы. Благодаря этому осуществляется передача наследственной информации от материнской клетки дочерним во время деления. Процесс самоудвоения молекулы ДНК называется репликацией (редупликацией). В результате репликации образуются две двойные «дочерние» спирали, каждая из которых сохраняет (консервирует) в неизменном виде одну из половин исходной «материнской» ДНК. Вторые цепи «дочерних» молекул синтезируются из нуклеотидов заново. Это получило название полуконсервативности ДНК. 8. Синтез РНК в клетке Считывание РНК с матрицы ДНК называется транскрипцией (от лат. transcriptio – переписывание). Транскрипция также является примером реакции матричного синтеза. Цепочка РНК очень похожа на цепочку ДНК: также состоит из нуклеотидов (рибонуклеотидов, весьма похожи на дезоксирибонуклеотиды). РНК считывается с участка ДНК, в котором она закодирована, в соответствии с принципом комплементарности: напротив аденина ДНК становится урацил РНК, напротив гуанина – цитозин, напротив тимина – аденин и напротив цитозина – гуанин. Примеры решения задач по молекулярной биологии Задача. Молекула ДНК состоит из двух цепей – основной, на которой синтезируется иРНК, и комплементарной. Запишите порядок нуклеотидов в синтезируемой иРНК, если порядок следования нуклеотидов в основной (рабочей) цепи ДНК следующий: Ц-Г-Ц-Т-Г-А-Т-А-Г. Решение Пользуясь принципом комплементарности, определяем порядок расположения нуклеотидов в иРНК, синтезируемой по рабочей цепи ДНК: ГЦ-Г-А-Ц-У-А-У-Ц. Ответ: Г-Ц-Г-А-Ц-У-А-У-Ц Задача. Химический анализ показал, что 28% от общего числа нуклеотидов данной иРНК приходится на аденин, 6% – на гуанин, 40% – на урацил. Каков должен быть нуклеотидный состав соответствующего участка двухцепочечной ДНК, информация с которого «переписана» данной иРНК? Решение 1. Зная, что цепь молекулы РНК и рабочая цепь молекулы ДНК комплементарны друг другу, определяем содержание нуклеотидов (в %) в рабочей цепи ДНК: в цепи иРНК Г=6%, значит в рабочей цепи ДНК Ц=6%; в цепи иРНК А=28%, значит в рабочей цепи ДНК Т=28%; в цепи иРНК У =40%, значит в рабочей цепи ДНК А=40%; 2. Определяем содержание в цепи иРНК (в %) цитозина. суммируем содержание трех других типов нуклеотидов в цепи иРНК: 6% + 28% + +40% = 74% (Г+А+У); определяем долю цитозина в цепи иРНК: 100% – 74% = 26% (Ц); если в цепи иРНК Ц=26%, тогда в рабочей цепи ДНК Г=26%. Ответ: Ц=6%; Т=28%; А=40%; Г=26% Задача. На фрагменте одной цепи ДНК нуклеотиды расположены в последовательности: А-А-Г-Т-Ц-Т-А-А-Ц-Г-Т-А-Т. Нарисуйте схему структуры двухцепочечной молекулы ДНК. Какова длина этого фрагмента ДНК? Сколько (в %) содержится нуклеотидов в этой цепи ДНК? Решение 1. По принципу комплементарности выстраивает вторую цепь данной молекулы ДНК: Т-Т-Ц-А-Г-А-Т-Т-Г-Ц-А-Т-А. 2. Зная длину одного нуклеотида (0,34 нм) определяем длину данного фрагмента ДНК (в ДНК длина одной цепи равна длине всей молекулы): 13х0,34 = 4,42 нм. 3. Рассчитываем процентное содержание нуклеотидов в данной цепи ДНК: 13 нуклеотидов – 100% 5 А – х%, х=38% (А). 2 Г – х%, х=15,5% (Г). 4 Т – х%, х=31% (Т). 2 Ц – х%, х=15,5% (Ц). Ответ: Т-Т-Ц-А-Г-А-Т-Т-Г-Ц-А-Т-А; 4,42 нм; А=38; Т=31%; Г=15,5%; Ц=15,5%. Задача. В лаборатории исследован участок одной из цепочек молекулы ДНК. Оказалось, что он состоит из 20 мономеров, которые расположены в такой последовательности: Г-Т-Г-Т-А-А-Ц-Г-А-Ц-Ц-Г-А-Т-А-Ц-Т-Г-Т-А. Что можно сказать о строении соответствующего участка второй цепочки той же молекулы ДНК? Решение Зная, что цепи молекулы ДНК комплементарны друг другу, определим последовательность нуклеотидов второй цепи той же молекулы ДНК: Ц-А-ЦА-Т-Т-Г-Ц-Т-Г-Г-Ц-Т-А-Т-Г-А-Ц-А-Т. Задача. На фрагменте одной цепи ДНК нуклеотиды расположены в последовательности: А-А-Г-Т-Ц-Т-А-Ц-Г-Т-А-Т... 1. Нарисуйте схему структуры второй цепи данной молекулы ДНК. 2. Какова длина в нм этого фрагмента ДНК, если один нуклеотид занимает около 0,34 нм? 3. Сколько (в %) содержится нуклеотидов в этом фрагменте молекулы ДНК? Решение 1. Достраиваем вторую цепь данного фрагмента молекулы ДНК, пользуясь правилом комплементарности: Т-Т-Ц-А-Г-А-Т-Г-Ц-А-Т-А. 2. Определяем длину данного фрагмента ДНК: 12х0,34=4,08 нм. 3. Рассчитываем процентное содержание нуклеотидов в этом фрагменте ДНК. 24 нуклеотида – 100% 8А – х%, отсюда х=33,3%(А); т.к. по правилу Чаргаффа А=Т, значит содержание Т=33,3%; 24 нуклеотида – 100% 4Г – х%, отсюда х=16,7%(Г); т.к. по правилу Чаргаффа Г=Ц, значит содержание Ц=16,6%. Ответ: Т-Т-Ц-А-Г-А-Т-Г-Ц-А-Т-А; 4,08 нм; А=Т=33, 3%; Г=Ц=16,7% Задача. Каков будет состав второй цепочки ДНК, если первая содержит 18% гуанина, 30% аденина и 20% тимина? Решение 1. Зная, что цепи молекулы ДНК комплементарны друг другу, определяем содержание нуклеотидов (в %) во второй цепи: т.к. в первой цепи Г=18%, значит во второй цепи Ц=18%; т.к. в первой цепи А=30%, значит во второй цепи Т=30%; т.к. в первой цепи Т=20%, значит во второй цепи А=20%; 2. Определяем содержание в первой цепи цитозина (в %). суммируем содержание трех других типов нуклеотидов в первой цепи ДНК: 18% + 30% + 20% = 68% (Г+А+Т); определяем долю цитозина в первой цепи ДНК: 100% – 68% = 32% (Ц); если в первой цепи Ц=32%, тогда во второй цепи Г=32%. Ответ: Ц=18%; Т=30%; A=20%; Г=32% Задача. В молекуле ДНК насчитывается 23% адениловых нуклеотидов от общего числа нуклеотидов. Определите количество тимидиловых и цитозиловых нуклеотидов. Решение 1. По правилу Чаргаффа находим содержание тимидиловых нуклеотидов в данной молекуле ДНК: А=Т=23%. 2. Находим сумму (в %) содержания адениловых и тимидиловых нуклеотидов в данной молекуле ДНК: 23% + 23% = 46%. 3. Находим сумму (в %) содержания гуаниловых и цитозиловых нуклеотидов в данной молекуле ДНК: 100% – 46% = 54%. 4. По правилу Чаргаффа, в молекуле ДНК Г=Ц, в сумме на их долю приходится 54%, а по отдельности: 54% : 2 = 27%. Ответ: Т=23%; Ц=27% Задача. Дана молекула ДНК с относительной молекулярной массой 69 тыс., из них 8625 приходится на долю адениловых нуклеотидов. Относительная молекулярная масса одного нуклеотида в среднем 345. Сколько содержится нуклеотидов по отдельности в данной ДНК? Какова длина ее молекулы? Решение 1. Определяем, сколько адениловых нуклеотидов в данной молекуле ДНК: 8625 : 345 = 25. 2. По правилу Чаргаффа, А=Г, т.е. в данной молекуле ДНК А=Т=25. 3. Определяем, сколько приходится от общей молекулярной массы данной ДНК на долю гуаниловых нуклеотидов: 69 000 – (8625х2) = 51 750. 4. Определяем суммарное количество гуаниловых и цитозиловых нуклеотидов в данной ДНК: 51 750:345=150. 5. Определяем содержание гуаниловых и цитозиловых нуклеотидов по отдельности: 150:2 = 75; 6. Определяем длину данной молекулы ДНК: (25 + 75) х 0,34 = 34 нм. Ответ: А=Т=25; Г=Ц=75; 34 нм. Задача. По мнению некоторых ученых общая длина всех молекул ДНК в ядре одной половой клетки человека составляет около 102 см. Сколько всего пар нуклеотидов содержится в ДНК одной клетки (1 нм = 10–6 мм)? Решение 1. Переводим сантиметры в миллиметры и нанометры: 102 см = 1020 мм = 1 020 000 000 нм. 2. Зная длину одного нуклеотида (0,34 нм), определяем количество пар нуклеотидов, содержащихся в молекулах ДНК гаметы человека: (102 х 107) : 0,34 = 3 х 109 пар. Ответ: 3х109 пар. Домашнее задание 1. Выучить конспект 2. Решить задачи Вариант 1 1. Даны фрагменты одной цепи молекулы ДНК: Ц-А-А-А-Т-Т-Г-Г-А-ЦГ-Г-Г. Определите содержание (в %) каждого вида нуклеотидов и длину данного фрагмента молекулы ДНК. 2. В молекуле ДНК обнаружено 880 гуаниловых нуклеотидов, которые составляют 22% от общего количества нуклеотидов этой ДНК? Определите, сколько содержится других нуклеотидов (по отдельности) в этой молекуле ДНК. Какова длина этой ДНК? Вариант 2 1. Даны фрагменты одной цепи молекулы ДНК: А-Г-Ц-Ц-Г-Г-Г-А-А-ТТ-А. Определите содержание (в %) каждого вида нуклеотидов и длину данного фрагмента молекулы ДНК. 2. В молекуле ДНК обнаружено 250 тимидиловых нуклеотидов, которые составляют 22,5% от общего количества нуклеотидов этой ДНК. Определите, сколько содержится других нуклеотидов (по отдельности) в этой молекуле ДНК. Какова длина этой ДНК? 3. Распределить тезисы по вариантам. Вариант 1 – ДНК; вариант 2 – РНК. 1. Одноцепочечная молекула. 2. Двухцепочечная молекула. 3. Содержит аденин, урацил, гуанин, цитозин. 4. Содержит аденин, тимин, гуанин, цитозин. 5. В состав нуклеотидов входит рибоза. 6. В состав нуклеотидов входит дезоксирибоза. 7. Содержится в ядре, хлоропластах, митохондриях, центриолях, рибосомах, цитоплазме. 8. Содержится в ядре, хлоропластах, митохондриях. 9. Участвует в хранении, воспроизведении и передаче наследственной информации. 10. Участвует в передаче наследственной информации.