Стратегии применения быстрых тестов в мировой практике Дробченко А.Е ЗАО «Биоград», Санкт-Петербург, http://www.biograd.ru © ЗАО «Биоград», 2015 г. 1 Алгоритм тестирования (СП 3.1.5.2826-10) «4.4.1. На первом этапе (скрининговая лаборатория). Если получен положительный результат в ИФА, анализ проводится последовательно еще 2 раза (с той же сывороткой и в той же тест-системе, вторая сыворотка запрашивается только в случае невозможности направления для дальнейшего исследования первой сыворотки). Если получены два положительных результата из трех постановок в ИФА сыворотка считается первично-положительной и направляется в референс-лабораторию (Лаборатория диагностики ВИЧинфекции центра по профилактике и борьбе со СПИД) для дальнейшего исследования.» … © ЗАО «Биоград», 2011г. Алгоритм тестирования (СП 3.1.5.2826-10) «4.4.2. На втором этапе (референс-лаборатория). Первично положительная сыворотка повторно исследуется в ИФА во второй тест-системе другого производителя, отличающейся от первой по составу антигенов, антител или формату тестов, выбранной для подтверждения. При получении отрицательного результата сыворотка повторно исследуется в третьей тест-системе другого производителя, отличающейся от первой и второй по составу антигенов, антител или формату тестов. В случае получения отрицательного результата (во второй и третьей тест-системах) выдается заключение об отсутствии антител к ВИЧ. » … © ЗАО «Биоград», 2011г. Алгоритм тестирования (СП 3.1.5.2826-10) « При получении положительного результата (во второй и/или третьей тест-системе) сыворотку необходимо исследовать в иммунном или линейном блоте. Результаты, полученные в подтверждающем тесте, интерпретируются как положительные, неопределенные и отрицательные. 4.4.3. Положительными (позитивными) считаются пробы, в которых обнаруживаются антитела к 2 из 3 гликопротеинов ВИЧ (env, gag, pol). 4.4.4. Отрицательными (негативными) считаются сыворотки, в которых не обнаруживается антитела ни к одному из антигенов (белков) ВИЧ или имеется слабое реагирование с белком р 18.» … © ЗАО «Биоград», 2011г. Алгоритм тестирования (СП 3.1.5.2826-10) «4.4.5. Неопределенными (сомнительными) считаются сыворотки, в которых обнаруживаются антитела к одному гликопротеину ВИЧ и/или каким-либо протеинам ВИЧ. При получении неопределенного результата с белковым профилем, включающим белки сердцевины (gag) р 25, проводится исследование для диагностики ВИЧ-2. 4.4.6. При получении отрицательного и сомнительного результата в иммунном или линейном блоте рекомендуется исследовать сыворотку в тест-системе для определения р24 антигена или ДНК/РНК ВИЧ. Если был выявлен антиген р24 или ДНК/РНК ВИЧ, повторное обследование в иммунном или линейном блоте проводится через 2, 4, 6 недель после получения первого неопределенного результата. » … © ЗАО «Биоград», 2011г. Критерии положительного результата Критерии положительного результата (Western Blot): СП 3.1.5.2826-10 «Профилактика антитела к 2 из 3 гликопротеинов ВИЧ-инфекции» ВИЧ (env, gag, pol). ВОЗ (рекомедованы в письме два env (gp41, gp160, gp120) Минздравсоцразвития N 4174-РХ от 4.08.2006 г.) CDC любые два из: p24, gp41, gp 160/120 Американский Красный Крест по одной полосе из env, gag и pol CRSS Консорциум по стандартизации ретровирусной серологии gag или pol И env (p24 или p31) И (gp41 или gp120/160) © ЗАО «Биоград», 2011г. Отчет ВОЗ № 17 (2013 год) Приведены алгоритмы диагностики, в которых тесты делятся по уровню использования на тесты первого, второго и третьего уровня. Быстрые тесты рекомендованы для случаев, когда необходимо ставить <40 анализов в день Классические ИФА тест-системы рекомендованы для проведения более чем 40 анализов в день, при возможности «удержания» пациента © ЗАО «Биоград», 2014 г. Отчет ВОЗ № 17 (2013 год) алгоритм тестирования высокая распространенность (>5%) © ЗАО «Биоград», 2014 г. Отчет ВОЗ № 17 (2013 год) алгоритм тестирования низкая распространенность (<5%) © ЗАО «Биоград», 2014 г. Программы скрининга групп высокого риска, Сан-Франциско США 2003-2008 © ЗАО «Биоград», 2015 г. Point of Care (POC) тесты © ЗАО «Биоград», 2015 г. Отчет ВОЗ № 17 (2013 год) (HIV Assays Operational Characteristics – HIV rapid diagnostic tests (detection of HIV-1/2 antibodies) Report 17) Тесты для диагностики ВИЧ подразделены на - Быстрые (Rapid) - Простые (Simple) - ИФА (EIA) - Дополнительные тесты (вестерн и лайн-блоты) - Молекулярные тесты (NAT) © ЗАО «Биоград», 2015г. Отчет ВОЗ № 17 (2013 год) Быстрые: - Иммунохроматографические (lateral-flow) - Мембранные, иммунофильтрация (flow-through) Простые: - Иммуноферментные гребни (combs) - Агглютинационные (latex agglutination) © ЗАО «Биоград», 2015 г. Отчет ВОЗ № 17 (2013 год) Классификация серологических тестов (ИФА и быстрые тесты) по поколениям в зависимости от применяемых антигенов и конъюгатов: Первое поколение – антигены из вирусного лизата Второе поколение – синтетические пептиды Третье поколение – рекомбинантные антигены / меченые рекомбинантные антигены в конъюгате («сэндвич» антиген-антитело-антиген) Четвертое поколение – одновременное определение антител и антигена p24 (Аг-Ат) Отчет по четвертому поколению еще не © ЗАО «Биоград», 2014 г. опубликован Бесприборные (быстрые и простые тесты четвертого поколения): Простые: -Иммуноферментные гребни (combs) ImmunoComb II HIV 1&2 TriSpot Ag-Ab Быстрые: -Иммунохроматографические (lateral-flow) Alere Determine HIV-1/2 Ag/Ab Combo © ЗАО «Биоград», 2014 г. Иммуноферментные гребни (combs) 1 1. Проявочная ванна (3 шт) 2. Пластиковый гребень в алюминиевом пакете (3 шт) 3 2 4 3. Положительный и отрицательный контрольные образцы 4. Перфоратор ______________ 5 5. Шкала КомбСкейл © ЗАО «Биоград», 2015 г. ImmunoComb II HIV 1&2 TriSpot Ag-Ab: сероконверсия Порядок точек: 1) 2) 3) 4) контрольная антиген p24 антитела к ВИЧ-2 антитела к ВИЧ-1 0 7 9 14 19 21 26 Дней с первого образца панели © ЗАО «Биоград», 2015 г. ИммуноКомб II ВИЧ 1+2 КомбФирм ImmunoComb® II HIV 1&2 CombFirm Наименование ImmunoComb® II HIV 1&2 CombFirm рекомбинантный иммуноблот Определяемые антитела: к Env к Gag к Pol к Env ВИЧ 1 ВИЧ 1 ВИЧ 1 ВИЧ 2 gp120, p24 p31 gp36 gp 41 gp120 gp41 • Время анализа – 1 час • Не требует разведения реагентов (реагенты готовы к применению) gp36 Внутренний контроль p24 p31 © ЗАО «Биоград», 2011г. 18 • Тест ИммуноКомб КомбФирм разрешен для подтверждения наличия антител к ВИЧ (приказ МЗ РФ № 292 от 30.07.2001). • Результаты мультицентровых испытаний (Израиль, Франция, Бельгия, Бразилия, Сенегал) * - включая 15 положительных по ВИЧ-1 группы О Без учета неопределенных: чувствительность 100%, © ЗАО «Биоград», специфичность 100% 2011г. 19 Схема постановки анализа 1. Для индивидуального тестирования гребень можно согнуть и отломить необходимое количество зубцов. 4. Гребень перемещается из ряда в ряд проявочной ванны в соответствии с инструкцией (промывки и связывание с конъюгатом). 2. В ряд А проявочной ванны вносятся образцы (сыворотка, плазма или цельная кровь) и контроли. 5. Цветная реакция в ряду F. 3. Гребень вставляется в ряд А и инкубируется (реакция антиген-антитело). 6. Результат анализа в виде окрашенных точек. Верхняя точка: внутренний контроль. Нижняя точка и (или) средняя точки появляются в случае наличия антител или антигенов. © ЗАО «Биоград», 2014 г. Иммуноферментные бесприборные тест-системы • ИммуноКомб II HIV 1&2 Bispot – скрининговый, 36 мин • Полноценный ИФА за 36 минут • ИммуноКомб II HIV 1&2 TriSpot Ag-Ab – АГ-АТ, 84 мин • ИФА четвертого поколения (антиген-антитело) • Дифференцированный результат по антителам и антигену p24 • ИммуноКомб II HIV 1&2 CombFirm – подтверждающий (иммуноблот), 66 мин • Рекомбинантный иммуноблот (подтверждающий тест) • Определяет антитела к 5 различным антигенам ВИЧ (Для каждого анализа используется по 2 зубца) © ЗАО «Биоград», 2015 г. Считывание результата на приборе КомбСкан • Автоматизированный количественный учет результатов • Хранение результатов анализа • Хранение изображений сканируемого гребня, включая все пометки • Стоимость, доступная для лаборатории любого уровня Зарегистрирован Росздравнадзором © ЗАО «Биоград», 2015 Технология ИммуноКомб позволяет диагностировать широкий спектр инфекций: ВИЧ, HTLV, Гепатиты А, В, С, ЦМВ, Токсоплазмоз, Хламидиоз, Краснуху, Хеликобактериоз, тропические инфекции. © ЗАО «Биоград», 2014 г. 23 Иммунохроматографические: Alere Determine HIV-1/2 Ag/Ab Combo Контр. p24 Aг Ат 43 47 50 54 57 61 64 70 72 Дней с первого образца панели © ЗАО «Биоград», 2015 г. 77 Alere Determine HIV-1/2 Ag/Ab Combo - исследования Тест Alere Determine HIV-1/2 Ag/Ab Combo прошел преквалификацию ВОЗ в 2012 году. Отчет об испытаниях теста и инспекциях производственных мощностей опубликован на сайте ВОЗ. В том числе в отчете было отмечено, что данный тест правильно определял все образцы первой Международной Референс Панели (код NIBSC 02/210), включая все протестированные субтипы ВИЧ -1 (А, B, C, CRF01 AE) ВИЧ1 группы О и ВИЧ-2. Стандартный образец антигена p24 (код NIBSC 90/636) Alere Determine HIV-1/2 Ag/Ab Combo определял в разбавлениях до 1:320, что соответствует 3,125 МЕ. При этом референстест Vironostika HIV Ag/Ab (bioMérieux) определял данный образец в концентрациях только до 12,5 МЕ. © ЗАО «Биоград», 2015 г. Alere Determine HIV-1/2 Ag/Ab Combo – исследования (1) Evaluation of a 4th generation rapid HIV test for earlier and reliable detection of HIV infection in pregnancy. J Clin Virol. 2012 Jun;54(2):180-4. doi: 10.1016/j.jcv.2012.02.021. Epub 2012 Mar 22. Chetty V, Moodley D, Chuturgoon A. Womens Health and HIV Research Unit, Department of Obstetrics and Gynaecology, Nelson R Mandela School of Medicine, University of KwaZulu-Natal, South Africa (ЮАР) © ЗАО «Биоград», 2015 г. Чувствительность при определении острой фазы ВИЧ-инфекции (1) Обследовано 32 образца от беременных женщин, у которых была определена сероконверсия при последующих визитах. В 18 из образцов определялась вирусная нагрузка. Тест Determine HIV-1/2 Ag/Ab Combo выявил 16 из 18 образцов, в которых выявлялась вирусная нагрузка, чувствительность – 88,9%, общая чувствительность на всех 32 образцах – 59,4%. В целом по исследованию (включая 32 образца с подозрением на острую ВИЧ-инфекцию и 189 образцов с установленной ВИЧ-инфекцией) Determine HIV-1/2 Ag/Ab Combo определил 94% образцов с ВИЧ-инфекцией, в то время как тесты 3-го поколения – 85%. © ЗАО «Биоград», 2015 г. Alere Determine HIV-1/2 Ag/Ab Combo – исследования (2) Rapid HIV screening: missed opportunities for HIV diagnosis and prevention. Patel P, Bennett B, Sullivan T, Parker MM, Heffelfinger JD, Sullivan PS; CDC AHI Study Group J Clin Virol. 2012 May;54(1):42-7. doi: 10.1016/j.jcv.2012.01.022. Epub 2012 Feb 29 Отдел по борьбе с ВИЧ/СПИД CDCP, Атланта, США Из 99111 обследованных образцов (общая популяция) выявлено 62 с острой ВИЧинфекцией, обследованы 62 на тестах третьего поколения и 34 на тестах 4 поколения © ЗАО «Биоград», 2014 г. Чувствительность при определении острой ВИЧ-инфекции (2) Сравнение на образцах, положительных по результатам МАНК, но отрицательных или неопределенных в иммуноблоте. Чувствительность: Architect Antigen/Antibody Combo IA – 88% (классический тест 4 поколения) Determine HIV-1/2 Ag/Ab Combo – 76% (быстрый тест 4 поколения) Тесты третьего поколения (ИФА) – 55% Быстрые тесты (кроме 4 поколения) – 22-33% © ЗАО «Биоград», 2014 г. Alere Determine HIV-1/2 Ag/Ab Combo (3) Evaluation of a rapid antigen and antibody combination test in acute HIV infection. Faraoni S, Rocchetti A, Gotta F, Ruggiero T, Orofino G, Bonora S, Ghisetti V. J Clin Virol. 2013 May;57(1):84-7. doi: 10.1016/j.jcv.2013.01.007. Epub 2013 Feb 4 Лаборатория Микробиологии и Вирусологии, отделение инфекционных заболеваний, госпиталь Amedeo di Savoia, Турин, Италия. Исследовано 17 образцов от пациентов с острой ВИЧ-инфекцией © ЗАО «Биоград», 2015 г. Чувствительность при определении острой ВИЧ-инфекции (3) Тест Determine HIV-1/2 Ag/Ab Combo определил ВИЧ инфекцию в 15 из 17 образцов, из них в 5 образцах наблюдалась полоса антигена и в 10 образцах– полоса антител. Чувствительность составила 88,2% © ЗАО «Биоград», 2015 г. Alere Determine HIV-1/2 Ag/Ab Combo (4) Performance of Rapid Point-of-Care and Laboratory Tests for Acute and Established HIV Infection in San Francisco Pilcher, CD. et al Christopher D. Pilcher1*, Brian Louie2, Shelley Facente1,3, Sheila Keating5, John Hackett Jr6, Ana Vallari6, Chris Hall7, Teri Dowling3, Michael P. Busch5, Jeffrey D. Klausner1,4, Frederick M. Hecht1, Sally Liska2, Mark W. Pandori2 1 HIV/AIDS Division, University of California San Francisco, San Francisco, California, United States of America, 2 Public Health Laboratory, San Francisco Department of Public Health, San Francisco, California, United States of America, 3 HIV Prevention Section, San Francisco Department of Public Health, San Francisco, California, United States of America, 4 STD Prevention and Control Services Section, San Francisco Department of Public Health, San Francisco, California, United States of America, 5 Blood Systems Research Institute, San Francisco, California, United States of America, 6 Abbott Diagnostics, Abbott Park, Illinois, United States of America, 7 Magnet Community Health Center, San Francisco, California, United States of America PLoS ONE (2013) 8(12): e80629. doi:10.1371/journal.pone.0080629 Сан-Франциско, США © ЗАО «Биоград», 2015 г. Alere Determine HIV-1/2 Ag/Ab Combo (4) Ретроспективное исследование 22348 образцов из групп высокого риска Сан-Франциско (МСМ, пациенты клиники ЗППП, лица запросившие пост-контактную профилактику, половые партнеры лиц, у которых был выявлен ВИЧ), исследованных в 2003-2008 году при помощи антительных тестов с повторным исследованием пулированных отрицательных образцов на РНК ВИЧ. Все образцы с отрицательным результатом антительного теста, но с наличием РНК или различающимися результатами тестов были сохранены для последующего исследования. © ЗАО «Биоград», 2014 г. Alere Determine HIV-1/2 Ag/Ab Combo (4) Исходное исследование: © ЗАО «Биоград», 2015 г. Alere Determine HIV-1/2 Ag/Ab Combo (4) Исследование проводилось среди групп высокого риска, процент случаев обнаружения ВИЧ-инфекции в острой фазе при помощи Alere Determine HIV-1/2 Ag/Ab Combo был значительно выше (от 3 до 5 раз), чем при исследовании общей популяции в публикации Patel P et al (2): © ЗАО «Биоград», 2014 г. Alere Determine HIV-1/2 Ag/Ab Combo (4) Исследование образцов острой фазы ВИЧ-инфекции: © ЗАО «Биоград», 2014 г. Alere Determine HIV-1/2 Ag/Ab Combo Дополнительная информация по исследованиям и применению тест-систем Determine и Determine Combo на сайте (английский язык): http://www.alerehiv.com © ЗАО «Биоград», 2014 г. Постановление Правительства №102 от 05.02.2015 Установить, что для целей осуществления закупок отдельных видов медицинских изделий, включенных в перечень, заказчик отклоняет все заявки, содержащие предложения о поставке медицинских изделий, происходящих из иностранных государств, за исключением Республики Армения, Республики Белоруссия и Республики Казахстан, при условии, что на участие в определении поставщика подано не менее 2 удовлетворяющих требованиям документации о закупке заявок, которые одновременно: •содержат предложения о поставке одного или нескольких видов медицинских изделий, включенных в перечень, страной происхождения которых является Российская Федерация, Республика Армения, Республика Белоруссия или Республика Казахстан; •не содержат предложений о поставке одного и того же вида медицинского изделия одного производителя. © ЗАО «Биоград», 2015 г. Постановление Правительства №102 от 05.02.2015 В прилагаемом к постановлению перечне нет иммунохроматографических тестов на инфекционные заболевания, соответственно на них действие постановления не распространяется. © ЗАО «Биоград», 2015 г. Спасибо за внимание ЗАО «Биоград» Адрес: 197101, г. Санкт-Петербург, Петровский пр., д. 14, 19-Н тел./факс: (812) 325 21 71, 325 21 70 (многоканальные) http://www.biograd.ru biograd@biograd.ru © ЗАО «Биоград», 2015 г. 40