Технологические основы приготовления диагностических препаратов: диагностических сывороток, антигенов, бактериофагов и аллергенов Содержание. Введение: 1. Что такое диагностические препараты. 2. Технология приготовления бактериальных антигенов. 3. Технология приготовления вирусных антигенов. 4. Технология приготовления аллергенов. 5. Технология приготовления бактериофагов. Заключение. Список литературы 1. Тихонов И.В. «Биотехнология» Санкт – Петербург Гиорд 2005год. 2. Аксенов М.Ю. «Диагностика инфекционных заболеваний методом ПЦР» М – 1993год. 3. Самуйленко А.Я., Рубан Е.А. «Основы технологии производства ветеринарных биопрепаратов». М.: ВНИИТиБП, том 1; 2000 г. 4. Грязнева Т.Н., Тихонов И.В. «Основы производства гипериммунных сывороток и иммуноглобулинов». Учебнометодическое пособие для ВУЗов. М.: МГАВМиБ, 2003 г, 49 с. 5. Кирюткин Г.В., Горлов И.Ф. «Справочник ветеринарных биологических препаратов». Волгоград: типография Химпром, 2002 г. 6. «Ветеринарная энциклопедия. Гл. ред. К.И. Скрябин. М.: Издво «Советская энциклопедия», 1975 г. Диагностические препараты 1.Иммунные сыворотки 2.Антигены-диагностикумы 3.Бактериофаги 4.Аллергены 5.Моноклональные антитела Технологическая схема приготовления гипериммунных сывороток 1.Приготовление антигенов 2.Заготовка животных и их карантинирование 3.Вакцинация животных-продуцентов Подготовка животныхпродуцентов Грундиммунизация Отбор животных продуцентов Гипериммунизация животныхпродуцентов Получение гипериммунной сыворотки Изготовление диагностической сыворотки 1.Взятие крови у продуцентов 2.Получение нативной сыворотки 3.Очистка и концентрирование 4.Фильтрация через пластины ФиСФ 5.Консервирование 6.Контроль Диагностические сыворотки 1.Агглютинирующие 2.Преципитирующие 3.Лизирующие (комплементсвязывающие) 4.Антитоксические 5.Меченные (люминесцирующие, иммуноферментные,радиоиммунные) Диагностические антигены 1.Корпускулярные (взвесь живых или убитых микробов) 2.Тканевые антигены вирусов или риккетсий 3.Растворимые антигены (экстракты микробов, продукты метаболизма в т.ч. токсины Приготовление эритроцитарного диагностикума Диагностические методы 1.Реакция агглютинации (РА,РБП,ГНГА) 2.Реакция связывания комплемента (РСК) 3.Реакция преципитации (РП,РДП) 4.Реакция иммунофлюоресценции (МФА,РИФ) 5.Иммуноферментный анализ (ИФА) 6.Радиоиммунный анализ (РИД) 7.Реакция нейтрализации (РН) 8.Реакция гемадсорбции (РГА) Диагностические аллергены 1.Туберкулин 2.Бруцеллин 3.Малеин (ППД,АТК) Технология приготовления туберкулинов 1.Выращивание в среде Коттона с аспарагином и лимонной кислотой 2.Бактериальную массу автоклавируют 3.Белок культуральной жидкости осаждают трихлоруксусной кислотой 4.Центрифугируют и повторно осаждают белок сернокислым аммонием 5.Надосадок удаляют, приципитат растворяют дист.Н2О и диализируют для удаления сернокислого аммония 6.Раствор туберкулина подщелачивают и фильтруют 7.Расфасовывают во флаконы объемом 10-20 мл и лиофильно высушивают. 8.Проводят контроль туберкулинов на растворимость, стерильность, рН, безвредность, специфичность и содержание туберкулиновых единиц Технология приготовления бруцеллина - Прогревают в реакторе при t -105 -1100С при перемешивании, охлаждают и центрифугируют - Надосадок фильтруют через стерилизующие пластины, разводят физраствором 1:50, стерилизуют при 105 – 1100С - Доводят рН до 7,2 – 7,4 , разливают по флаконам, стерилизуют в автоклаве при t – 105 - 1100С и выдерживают трое суток при 370С - Контроль на стерильность, содержание бактерийного белка, рН, безвредность, спецефичность и активность. - Штамм Вr. abortus B -1 выращивают в питат. среде с 0,5% глюкозы глубинным методом, 4 – 5 суток Технология приготовления маллеина 1.Actinobacillus mallei № 5584 выращивают в мясопептонном глицериновом бульоне (МПГБ) в бутылях в течение 4 месяцев при 37°С. 2.Культуральную суспензию автоклавируют и отстаивают в течение 4-х месяцев при 20°С. 3.Надосадочную жидкость фильтруют через стерилизующие пластины. 4.Готовый препарат контролируют на стерильность, безвредность и специфичность. Фагодиагностика Бактериофаги-вирусы способные инфицировать бактериальную клетку, репродуцироваться в ней и вызывать её лизис или переход в лизогенное состояние Биологические формы бактериофагов 1.Вегетативный-репродуцируется внутри бакклетки и не обнаруживается 2.Вирулентный-вызывает лизис клетки и выход в среду своего потомства 3.Дефектный-не способен к репродукции полноценного фага 4.Умеренный-существует внутри клетки в форме профага, вызывая лизогению клеток Специфичность бактериофагов родственные бактерии разных видов 2.Монофаги-лизируют бактерии одного вида 3.Фаговары-лизируют только определенные варианты (фаготипы) данного вида бактерий 1.Полифаги-лизируют Специфичность бактериофагов родственные бактерии разных видов 2.Монофаги-лизируют бактерии одного вида 3.Фаговары-лизируют только определенные варианты (фаготипы) данного вида бактерий 1.Полифаги-лизируют Развитие вирулентного фага в восприимчивой бактериальной клетке А Б Г Д В А — прикрепление фага; Б — проникновение ДНК фага внутрь клетки; В — синтез белковых оболочек новых вирусных частиц; Г — обнаружение вирулентных вирусных частиц; Д— освобождение новых фаговых частиц. Адсорбция фага на бактериальной клетке Строение бактериофага Бляшки, образованные бактериофагом λ Рис.13. Крупные негативные колонии(В.Я. Ганюшкин,1984)Рис.12 Негативные колонии среднего размера(В.Я. Ганюшкин,1984)