TRAINING WORKSHOP ON PHARMACEUTICAL QUALITY, GOOD MANUFACTURING PRACTICE & BIOEQUIVALENCE Валидация аналитических методов, используемых в исследованиях биоэквивалентности Presented by John Gordon, Ph.D. Consultant to WHO e-mail: john_gordon@hc-sc.gc.ca Kyiv, 2005-10-06 1 Биоаналитический метод валидации Количественные определения лекарственных средств в образцах биологических сред, например в крови или плазме, играют существенную роль при оценке и интерпретации данных биоэквивалентности. Kyiv, 2005-10-06 2 Валидация биоаналитического метода Для получения достоверных результатов обязательно использовать аналитические методы, которые хорошо описаны и валидированы. Kyiv, 2005-10-06 3 Разработка/ использование биоаналитического метода Стандартный препарат сравнения Разработка процедуры метода Принятие валидированного метода для использования в повседневной практике Kyiv, 2005-10-06 4 Сравнительные (референтные) стандарты Стандарты калибровки / Образцы для контроля качества Удостоверенная референтность – Известная тождественность – Известная беспримесность По возможности следует применять одни и те же референтные стандарты Kyiv, 2005-10-06 5 Разработка метода Хроматографический анализ – например, газовая хроматография, жидкостная хроматография Лигандообменные методы – например, изотопное иммунологическое обследование (radioimmunoassay — RIA) Kyiv, 2005-10-06 6 Валидация биоаналитического метода Валидация метода должна включать – – – – – – Аккуратность Точность Чувствительность Специфичность Устойчивость Стабильность Kyiv, 2005-10-06 7 Валидация биоаналитического метода Точность Степень близости между установленной и истинной оценками. Среднее значение критерия приемлемости (допустимости) составляет 15% отклонения от истинного значения. Для LOQ допустимо отклонение 20%. Kyiv, 2005-10-06 8 Валидация биоаналитического метода Точность Близость результатов повторных оценок выборки. Критерий допустимости 15% CV. Для LOQ допустимо отклонение 20%. Kyiv, 2005-10-06 9 Валидация биоаналитического метода Чувствительность Предел количественного анализа (the limit of quantitation — LOQ) — это минимальная концентрация, которая может быть измерена с надлежащей правильностью и точностью. Kyiv, 2005-10-06 10 Валидация биоаналитического метода Калибровочная кривая Внедрение достаточного количества калибровочных стандартов – – – – Обычно 6 – 8 стандартов, отличных от нуля «Чистый» образец Нулевой образец Нижний предел количественных колебаний (Lower Limit of Quantification — LLOQ) Польза от надлежащей статистики Kyiv, 2005-10-06 11 Валидация биоаналитического метода Специфичность (селективность) Способность метода измерить только то, что предусмотрено для измерения, в присутствии других составляющих образца. Чистый образец биологической среды следует исследовать на предмет пересекающихся помех определения концентрации. Kyiv, 2005-10-06 12 Валидация биоаналитического метода Устойчивость Определительная эффективность аналитического процесса, выраженная в долевом соотношении к известному количеству анализируемого вещества, достигается с помощью отбора образцов и последующих шагов метода. Устойчивость не должна быть 100%-ой, но уровень устойчивости аналитического метода должен соответствовать внутреннему стандарту. Kyiv, 2005-10-06 13 Валидация биоаналитического метода Стабильность Стабильность анализа биологических сред – Отбор образцов – Хранение образцов – Анализ образцов Kyiv, 2005-10-06 14 Валидация биоаналитического метода Стабильность Стабильность при замораживании Краткосрочная стабильность Долгосрочная стабильность Стабильность после приготовления Стабильность растворов при хранении Kyiv, 2005-10-06 15 Валидация биоаналитического метода Точность разбавления Подтвердить способность образцов к разбавлению, превышающему верхний предел количественных колебаний (Upper Limit of Quantification — ULOQ) Предел количественного анализа (LOQ) Правильность и точность Kyiv, 2005-10-06 16 Валидация биоаналитического метода Дополнительные соображения для лигандообменных исследований Перекрестная реактивность Влияния среды Взаимосвязи, определяемые уровнем концентрации Kyiv, 2005-10-06 17 Анализ клинических образцов Однократное определение калибровочных стандартов Калибровочная кривая для каждого раунда анализа Экстраполяция выше или ниже калибровочного уровня не допускается. Kyiv, 2005-10-06 18 Анализ клинических образцов Контроль качества (Quality control — QC) Не меньше трех концентраций – Низкая концентрация – Средняя концентрация – Высокая концентрация Двойные определения 4 из 6 образцов для QC должны быть 15% номинального значения; два оставшихся не должны иметь одинаковую концентрацию Kyiv, 2005-10-06 19 Анализ клинических образцов Повторный анализ выборки Четкие СОПы и критерии приемлемости Причины повторного анализа – Аналитического характера – Сложная фармакокинетика Нехватка образцов Kyiv, 2005-10-06 20 Стандартные операционные процедуры Полное письменное описание СОПов – Контроль и обеспечение качества – Должны быть охвачены все аспекты, в т.ч. • • • • • • Ведение учета Обеспечение безопасности Цепочка обеспечения выборки Ремонт выборки Аналитические инструменты Процедуры для контроля качества и верификации результатов Kyiv, 2005-10-06 21 Полная / Частичная валидация Полная валидация – В ходе разработки метода Частичная валидация – Обмен между лабораториями – Изменения в инструментарии / программном обеспечении – Небольшие изменения в процессе обработки выборки Kyiv, 2005-10-06 22 Валидация биоаналитического метода Полезные ссылки: FDA Guidance for Industry Bioanalytical Method Validation (May 2001) (http://www.fda.gov/cder/guidance/4252fnl.pdf) Опубликованные стендовые доклады: Shah, V.P. et al, Pharmaceutical Research: 1992; 9:588-592 Shah, V.P. et al, Pharmaceutical Research: 2000; 17: 1551-1557 Kyiv, 2005-10-06 23