МОБ

ГБОУ ДПО РМАПО Минздравсоцразвития России
Кафедра клинической лабораторной диагностики
Д.Г. Кисиличина, Е.В. Наумова, М.Е. Почтарь, С.А. Луговская, Е.А. Никитин*
*ФГБУ
ГНЦ Минздравсоцразвития России
Сравнительное исследование минимальной остаточной болезни
в периферической крови и костном мозге больных с В-клеточным
хроническим лимфолейкозом
Москва 2011
Значение МОБ в прогнозе выживаемости
Минимальная остаточная болезнь (МОБ) – состояние,
обусловливающее развитие рецидива, связанное с сохранением
опухолевых клеток в крайне низких концентрациях, ниже предела
чувствительности морфологических методов.
Общая выживаемость
Полная ремиссия МОБ -
Moreton et al. 2005
Полная ремиссия МОБ +
Частичная ремиссия
Нет ответа
Время, мес.
Оценка МОБ методом проточной цитофлюориметрии
Многоцветная проточная цитофлюориметрия:
•Согласующиеся с АС-ПЦР данные
•Выполнимость в течение 1 рабочего дня
•Меньшая по сравнению с АС-ПЦР себестоимость исследования
•Не требуется материал до лечения
Стандартизованная панель МКА (Rawstron et al., 2007) + CD45 в каждую пробирку!
5-цветная панель
№
FITC
PE
ECD
PC5
PC7
1
sIgκ
sIgλ
CD45
CD19
CD5
2
CD3
CD14
CD45
CD19
CD5
3
CD38
CD20
CD45
CD19
CD5
4
CD22
CD81
CD45
CD19
CD5
5
CD43
CD79b
CD45
CD19
CD5
Проточный цитофлюориметр FC500 (Beckman Coulter, США)
6-цветная панель
№
FITC
PE
PC5
PC7
APC
APC-Cy7
1
sIgκ
sIgλ
CD20
CD19
CD5
CD45
2
CD3
CD81
CD5
CD19
CD22
CD45
3
CD43
CD38
CD5
CD19
CD79b
CD45
Проточный цитофлюориметр FACSCantoII (Becton Dickinson, США)
Стратегия последовательного гейтирования
6-цветный анализ
U
=
U
=
VS
Условия:
•Анализ не менее 500 000 событий для каждой пробирки (чувствительность 10-4).
• Абсолютный порог = 50 событий в регионе соответствующих характеристик;
• Уровень контаминации < абсолютного порога;
Оценка МОБ в крови и КМ после 6 циклов FCR
57 больных с В-ХЛЛ
Материал исследования – кровь и костный мозг с К3EDTA.
Согласующиеся по МОБ-статусу данные в 42 (74%) случаев
Корреляция по Спирмену R = 0,96
Сравнение уровня МОБ в крови и КМ
МОБ, % от
лейкоцитов
20
15
% МОБ в КМ
10
5
% МОБ в крови
0
1
2
3
4
5
6
7
Случай №
8
9
10
11
12
МОБ +
МОБ -
Костный мозг
% МОБ в КМ > % МОБ в крови (Me = 10):
15 15
27 0
МОБ -
Кровь
МОБ +
13
14
15
Алгоритм финальной оценки МОБ
Определение МОБ в крови
Клетки ХЛЛ ≥ 0,01%
Клетки ХЛЛ < 0,01%
Исследование
костного мозга
Ответ ≥ частичной
ремиссии
Клетки ХЛЛ > 0,01%
Полная иммунофенотипическая
ремиссия
Клетки ХЛЛ < 0,01%
Клинически полная
ремиссия
Исследование МОБ в динамике
Промежуточная оценка - после 2-3 циклов FCR
Финальная оценка - после 6 циклов FCR
3 FCR, % клеток В-ХЛЛ
6 FCR, % клеток В-ХЛЛ
От WBC Me (диапазон)
От WBC Me (диапазон)
29
0,01 (0 – 4,83)
0
8
4,1 (0,1 – 24)
1,51% (0,01 до 13,8)
50,000
% опухолевого клона В-ХЛЛ при
промежуточной оценке
N
5,000
0,500
0,050
0,005
Средний
25%-75%
Non-Outlier Range
Пределы
6 FCR МОБ6 FCR МОБ+
6 FCR
МОБ-
6 FCR
МОБ+
Выводы
Количественную оценку остаточных клеток В-ХЛЛ по окончанию
терапии возможно проводить по периферической крови. Анализ
МОБ в КМ необходим в случаях, когда остаточный клон не
выявляется в крови.
При финальной оценке МОБ
после лечения с использованием
препаратов МКА рекомендуется
исследовать КМ.
Мониторирование МОБ во время терапии выявляет динамику
элиминации опухолевых клеток и позволяет прогнозировать
достижение МОБ-негативной ремиссии.
Цель лечения В-ХЛЛ - достижение полной
гематологической ремиссии с эрадикацией МОБ.
клинико-
Спасибо за внимание