Quality Control: Molecular Diagnostics

Контроль качества:
Молекулярная
диагностика
Общий подход




Взятие, транспортировка и обработка проб
 обеспечьте сохранность нуклеиновых кислот
во время этих процессов
Контроль контаминации
 установите одностороннее движение по
технологической цепочке: от зоны, свободной
от ДНК, где готовят реагенты, к зоне
обработки проб, затем к зоне, где происходит
амплификация и анализ продуктов
Положительные и отрицательные контроли
Ссылка: CLSI MM3-A (Molecular Diagnostic
Methods for Infectious Diseases [Методы молекулярной
диагностики инфекционных заболеваний])
Контроль качества молекулярной диагностики – Тема 8
2
2
Контроль качества:
Молекулярная диагностика
Контроль качества молекулярной диагностики – Тема 8
3
3
ПЦР в реальном времени
ПРОБА
Амплифицированная
специфическая
нуклеиновая кислота
Taq полимераза
ПРАЙМЕР
Измеряемая
флуоресценция
SYBR Green
+
-
Контроль качества молекулярной диагностики – Тема 8
In
5
5
Реакции амплификации
Флуоресценция
ПОЛОЖИТЕЛЬНАЯ
АМПЛИФИКАЦИИ НЕТ
Амплификация / Время
Контроль качества молекулярной диагностики – Тема 8
6
6
ПЦР в реальном времени
Флуоресценция
Проба А
Проба Б
Экспоненциальная
фаза
Порог
Фон
Номер цикла
Контроль качества молекулярной диагностики – Тема 8
7
7
Вирус гриппа A/H3
Контроль качества молекулярной диагностики – Тема 8
8
8
Вирус гриппа A/H5
Контроль качества молекулярной диагностики – Тема 8
9
9
Риск использования ПЦР

большинство методов ПЦР в
реальном времени «домашнего
изготовления»
 праймеры
не всегда оптимизированы
для анализа
 положительные контроли «домашнего
изготовления»
 отрицательные контроли «домашнего
изготовления»

интерпретировать результаты
следует с осторожностью
Контроль качества молекулярной диагностики – Тема 8
11
11