БИОЛЮМИНЕСЦЕНТНЫЕ ЭКСПРЕСС-МЕТОДЫ В КЛИНИЧЕСКОЙ МИКРОБИОЛОГИИ ООО «Люмтек», Москва, Научный Парк МГУ Генеральный директор, профессор, доктор наук Угарова Наталья Николаевна E-mail: nugarova@gmail.com КЛАССИЧЕСКИЙ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД ДЕТЕКЦИИ МИКРОБНЫХ КЛЕТОК длительность анализа: от 24-120 часов до 5 недель высокая трудоемкость анализ в специализированной лаборатории экологическая опасность АТФ - УНИВЕРСАЛЬНЫЙ ИНДИКАТОР ПРИСУТСТВИЯ ЖИВЫХ КЛЕТОК Биологический материал Ткани млекопитающих Бактерии Одноклеточные водоросли Содержание АТФ, мкг/г сухой биомассы 500-5000 1000-10000 500-5000 КОРРЕЛЯЦИЯ МЕЖДУ КОНЦЕНТРАЦИЕЙ АТФ И ТИТРОМ БАКТЕРИАЛЬНЫХ КЛЕТОК В ОБРАЗЦЕ 10 10 7 КОЕ/мл 6 10 5 10 10 R=0.98 4 3 10 ATФ, моль/мл 2 10 -15 10 -14 10 -13 10 -12 10 -11 10 -10 ЛЮЦИФЕРИН-ЛЮЦИФЕРАЗНАЯ СИСТЕМА СВЕТЛЯКОВ АТФ-реагент D-люциферин, MgSO4, люцифераза + ATФ Продукты реакции + Свет (max = 570 нм) АТФ-РЕАГЕНТЫ (защищены патентами РФ) Основные достоинства: Высокая активность Стабильный во времени сигнал биолюминесценции Длительный срок хранения ЛЮМИНОМЕТР «ЛЮМ-1» (совместная разработка МГУ и ООО «Люмтек») широкий рабочий интервал измеряемых сигналов вес прибора: 650 г рабочий диапазон температур: от 10С до 30С встроенная память наличие интерфейса программное обеспечение автономное питание КОРРЕЛЯЦИЯ МЕЖДУ КОНЦЕНТРАЦИЕЙ АТФ И ИНТЕНСИВНОСТЬЮ БИОЛЮМИНЕСЦЕНЦИИ 100000 Imax, усл. ед. 10000 R=0.99 1000 АТФ, моль/мл 100 10 -15 -14 10 10 -13 10 -12 10 -11 Корреляция между интенсивностью биолюминесценции и титром бактериальных клеток в анализируемом образце 100000 Imax, усл. ед. (1) 10000 R=0.99 1000 КОЕ/мл 100 2 10 3 10 4 10 5 10 6 10 БИОЛЮМИНЕСЦЕНТНАЯ АТФ-МЕТРИЯ В МЕДИЦИНЕ скрининг микробных загрязнений в биологических жидкостях ( моча, кровь, раны) быстрое определение чувствительности возбудителя к антибиотикам при химиотерапии инфекционных заболеваний оценка чистоты оборудования и материалов в операционных и других помещениях клиник БИОЛЮМИНЕСЦЕНТНЫЙ СКРИНИНГ БАКТЕРИУРИИ (10-минутный тест) Общее содержание Общий АТФ, микробных пмоль/мл клеток, КОЕ/мл 0 – 103 <60 103 – 104 60 - 150 Свыше 105 Свыше 150 Рекомендации Норма посев не требуется Группа риска посев требуется Патология посев требуется АНТИБИОТИКОЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ КЛИНИЧЕСКИХ ОБРАЗЦОВ Коэффициент относительного подавления роста микробных клеток под действием антибиотика U(%) = 100 x [(1- (Iпроба) /(Iконтр)] ЭКСПРЕС-КОНТРОЛЬ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЙ ЧИСТОТЫ В КЛИНИКЕ Сильно загрязненные поверхности Длительность анализа – 5 мин Мало загрязненные поверхности Длительность анализа – до 7 часов Стерильные поверхности Длительность анализа – 7 часов Более 100 клеток на 100 см2 Высокий сигнал биолюминесценции Менее 100 клеток на 100 см2 Измерение сигнала биолюминесценции только после инкубирования Нет сигнала биолюминесценции ПРЕИМУЩЕСТВА ТЕСТ-СИСТЕМ ЛЮМТЕК Оперативность: длительность анализа от 2 до 30 мин на один образец Мобильность: возможность проводить анализ в полевых условиях Экологическая чистота: безотходные технологии Высокая чувствительность: от 100 КОЕ/мл(г) образца без предварительной инкубации Простота и удобство: анализ проводится лаборантом средней квалификации Правильность: точная количественная оценка жизнеспособных клеток в образце