ЗАО «Дина Интернешнл» Диагностика урогенитальных микоплазм ELITech Microbio (Франция) 2014 1 ELITech MICROBIO ELITech Microbio (Франция) Основан в 1989 Расположен в г.Сини, Франция ELITech Group Company 2006 Быстрые тесты по микробиологии (ELITech Microbiology Reagents) Мировой лидер по Идентификации Микоплазм, подсчета и антибиотикочувствительности. Урогенитальные микоплазмы • • • • • • • • • • Большинство микоплазм, поражающих человека, являются комменсалами Не имеют клеточной стенки Устойчивы к b-лактамам Трудно культивируются и выделяются Обнаружено 15 видов, обитающих в организме человека Из 9 выделенных из урогенитального тракта: Mycoplasma hominis (M.h.) и Ureaplasma urealyticum (U.u.) - являются наиболее часто встречающиеся U.u. и M.h. передаются половым путем В настоящее время вид Ureaplasma urealyticum разделены на два биовара: U. urealyticum и U. parvum (U.u). Ureaplasma parvum (parvo) (1, 3, 6, 14 серотипы) (biovar 1) и собственно Ureaplasma urealyticum (biovar 2) (остальные 10 серотипов, иногда этот биовар называют еще T-960). Ранее считалось,что U.urealyticum вызывает негонококковые уретриты у мужчин,а U.parvum воспалительные заболевания у женщин и патологию у новорожденных, но эти данные не были подтверждены. Сейчас U. parvum и U. urealyticum считаются отдельными видами и иногда в практической деятельности пользуются термином Ureaplasma species (Ureaplasma spp.) объединяющим оба вида. 3 Инфекции, вызванные U.u. и M.h. U. urealyticum M. hominis Негонококковый уретрит ++++ - Уретропростатит Эпидидимит Мочекаменная болезнь Пиелонефрит Пельвиоперитонит Послеродовая горячка /выкидыш ++ +++ ++ ++ ++++ +++ ++++ Хориоамнионит ++ - Инфицирование при рождении Менингит Респираторные инфекции Как правило, у женщин микоплазмы колонизируют влагалище, уретру и шейку матки, а у мужчин — уретру и крайнюю плоть, вызывая инфекционно-воспалительный процесс. Кроме того, известно, что у мужчин микоплазмы способны подавлять активность сперматозоидов, а в некоторых случаях даже вызывать их гибель. Кроме своего «основного действия», микоплазмы способны оседать в суставной жидкости и вызывать воспаление суставов Обзор Mycoplasma hominis (M.h.): Бактерии – комменсалы Патогенный титр для женщин ≥ 104 КОЕ/мл Растут от 24 до 48 часов Устойчивы к эритромицину (E) и триметоприму/сульфаметоксазолу (SXT) Морфология колоний M. hominis в виде «яичницы-глазуньи» 0.8 µm 5 Обзор Ureaplasma urealyticum (U.u.): Бактерии - комменсалы Патогенный титр для мужчин ≥ 104 КОЕ/мл и ≥ 103 КОЕ/мл (для мочи и спермы) Растут 24 часа Морфология колоний U.urealyticum в форме «морского ежа» Устойчивы к линкомицину (L) и триметоприму/сульфаметоксазолу (SXT) Колонизация новорожденных может происходить при рождении и быть причиной неонатальных инфекций (менингиты, респираторные инфекции, септицемии …). Тем не менее, носительство генитальных миколазм увеличивается в пубертатный период (соотносясь с сексуальной активностью). 0.8 µm 6 Лабораторная диагностика микоплазмоза: В настоящее время в лабораторной диагностике неоправданно широко распространяются методы молекулярной диагностики (ПЦР), трудно контролируемой и зачастую способствующей гипердиагностике, особенно инфекций передающихся половым путем (ИППП). Например, диагностика урогенитального мико/уреаплазмоза. Различные виды микоплазм могут являться причиной ряда заболеваний урогенитального тракта, этиологическим фактором преждевременных родов, невынашивания беременности, нарушения репродуктивной функции, случаев мертворождения. С другой стороны, отмечается возможность бессимптомного носительства микоплазм у клинически здоровых лиц. Лабораторная диагностика микоплазмоза: Различные виды микоплазм проявляют разную чувствительность к отдельным лекарственным препаратам . Имеет значение и общее состояние больного микоплазмозом – при этом проявляется индивидуальные особенности чувствительности микоплазм к тем или иным антибиотикам. Растет число штаммов микоплазм, нечувствительных к различным группам антибиотиков. В связи с этим сегодня считается необходимым перед назначением антибактериального лечения проводить лабораторное исследование чувствительности выделенных штаммов микоплазм к антибиотикам групп тетрациклинов и макролидов, линкозамидов, а также к фторхинолонам. Лабораторная диагностика микоплазмоза: U.u. и M.h. являются комменсалами, поэтому инфекция может быть диагностирована только путем определения патологического порога, учитывая точные количества бактерий Тестирование чувствительности к антибиотикам обязательно для определения резистентности микоплазм Оно должно выполняться каждый раз, когда диагностируется инфекция MYCOFAST 9 Наше предложение Наборы MYCOFAST (ELITech Microbio) Диагностика инфекций, вызванных Mycoplasma hominis (M.h.) и Ureaplasma urealyticum (U.u.) ПРЯМОЙ метод MYCOFAST EvolutioN 3 СКРИНИНГОВЫЙ метод MYCOFAST EvolutioN 3 UMMlyo-UMMt (3 ml) 10 Наше предложение Состав наборов: Среды для микоплазм: – Универсальная среда для микоплазм → UMMt – транспортная (желтый) → UMMlyo – лиофилизированная питательная (белый) - S.Mh стимулятор роста для M.h. (зеленый) MYCOFAST плашки – Mycofast EvolutioN 3 11 Состав наборов: MYCOFAST Evolution 3 UMMt-UMMlyo UMMt Кат. 00036 Кат. 00077 Кат. 00836 UMMt (3 ml) UMMt (3 ml) 25 шт. транспортная среда 35 шт. транспортная среда UMMlyo (+3 ml) питательная среда 25 шт. MYCOFAST Evolution 3 Плашка 25 шт. S. Mh стимулятор роста 2 шт. 12 UMMlyo (+3 ml) 35 шт. питательная среда UMMt (3 ml) 35 шт. транспортная среда Обнаружение, подсчет, идентификация и определение чувствительности к 7 антибиотикам Ureaplasma spp. и Mycoplasma hominis 13 Прямой метод • Обнаружение, подсчет и идентификация U.u. и M.h. • Визуализация роста бактерий по изменению цвета индикатора • Микрометод культивирования в жидкой среде основан на ферментативной активности бактерий • Идентификация основана на естественной устойчивости к 3 антибиотикам (линкомицину, триметоприму/сульфаметоксазолу, эритромицину) • Тестирование чувствительности к антибиотикам в 2 концентрациях • Отбираемые пробы: эндоцервикальные, вагинальные, уретральные, сперма, моча и желудочные секреты новорожденных • Результаты в течение 24 часов до 48 часов (стимулятор роста для M.h.) 14 Методика МЕТОДИКА ПЕРЕНОС ПРОБ Поместить тампон или жидкую пробу (300 мкл) во флакон с транспортной средой UMMt (3ml) сразу же после отбора пробы ПОСЕВ В КУЛЬТУРАЛЬНУЮ СРЕДУ Перенести содержимое инокулированного флакона UMMt (3ml) в среду UMMlyo (+3 ml UMMt) Прямой метод Довести температуру среды UMMt до комнатной Образцы доставить в лабораторию (при необходимости): - 56 часов при 2-8 С - 20 часов при 18 – 20 С ИНОКУЛЯЦИЯ ПЛАШКИ Снять липкую ленту и добавить в лунки каждого ряда следующее: - лунки 1-20: по 100 мкл засеянной среды UMMlyo 2 капли парафинового масла - лунки 6-7: по 50 мкл стимулятора роста S.M.h 2 капли парафинового масла (лунки E и M.h) 50 мкл S.Mh -лунки 1-20: по 2 капли парафинового масла Лунки можно снова закрыть липкой лентой (по по 100 мкл засеянной среды UMMlyo желанию) ИНКУБАЦИЯ Инкубация плашки при 35-37 °С в течение 24-48 часов 15 Прямой метод Конфигурация плашки 100 мкл инокулированной среды UMMlyo : в лунки с 1 по 20 U.u Подсчет U.u и M.h Идентификация 50 мкл S.M.h в лунки в 6 и 7 M.h Подсчет Тестирование чувствительности к антибиотикам 7 антибиотиков в 2 концентрациях (искл. пристинамицин) 2 капли парафинового масла в лунки с 1 по 20 Инкубация при температуре 37°C: 24-48ч 16 Прямой метод ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ ПОДСЧЕТ И ИДЕНТИФИКАЦИЯ Считывание через 24 часа КОЕ/мл КОЕ/мл КОЕ/мл КОЕ/мл КОЕ/мл КОЕ/мл ТЕСТИРОВАНИЕ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ К АНТИБИОТИКАМ Чувствительные Нет роста Нет роста Промежуточные Рост Рост Нет роста Рост Устойчивые (Резистентные) Обнаружение, подсчет, идентификация и тестирование чувствительности к антибиотикам Ureaplasma urealyticum и Mycoplasma hominis после скрининга 24 часов 18 Скрининговый метод Обзор • Этап скрининга : наличие или отсутствие микоплазм (положительные результаты через 24 часа) • При получении положительного результата → MYCOFAST Evolution плашка: подсчет, идентификация и тестирование чувствительности (результаты через 24 часа) • Подтверждение диагноза минимум через 48 часов после начального этапа скрининга 19 * Новая транспортная среда UMMt: хранение образцов 20 часов при комнатной температуре, 56 часов в холодильнике. Mycoplasma контроль 12 тестов (Кат.00900) Характеристики продукта: Соответствует Управлению качеством в лаборатории (ISO 15189:2007) 6 лиофилизированных штаммов U.u и 6 M.h Срок годности после восстановления: 6 часов Длительный срок хранения: 12 месяцев / легкий в использовании Совместимость при работе с Mycofast EvolutioN3 и с другими основными наборами на рынке (Biorad / Biomerieux). Краткая методика: 1. 2. 3. 4. Штаммы U.u и M.h восстанавливаются 1 мл стерильной дистиллированной воды Разбавленная бактериальная суспензия переносится в транспортную или культуральную среды Восстанавливаются в питательной среде при необходимости Засеваются в плашку или микропланшет 23 ОСНОВНЫЕ КОНКУРЕНТЫ : сравнение 1/3 Elitech Microbio bioMérieux Biorad Mycofast EV3 Mycoplasma IST2 Mycoplasma DUO/Mycoplasma S.I.R Прямой метод микрокультивирования на плашке в жидкой среде Прямой метод микрокультивирования на плашке в жидкой среде Метод путем разбавления на микропланшет Обнаружение, подсчет, идентификация U.u и M.h, тестирование чувствительности на одной плашке Обнаружение, подсчет, идентификация U.u и M.h, тестирование чувствительности на одной плашке Подсчет и определение чувствительности на отдельных планшетах Для U.u патогенный титр: 10 3, 104, 105 CCu/mL Для U.u патогенный титр: 104, 105 CCu/mL Для U.u патогенный титр: 104, 105 CCu/mL Для M.h патогенный титр: 104 CCu/mL Для M.h патогенный титр: 104 CCu/mL Для M.h патогенный титр: 104 CCu/mL Комментарии Biorad: трудоемкая и скрупулезная постановка Biorad/Bmx: отсутствует титр 103 CCu 24 ОСНОВНЫЕ КОНКУРЕНТЫ: сравнение 2/3 Elitech Microbio bioMérieux Biorad Комментарии Mycofast EV3 Mycoplasma IST2 Mycoplasma DUO/Mycoplasma S.I.R 25 тестов в наборе 25 тестов в наборе 20 тестов в наборе (DUO) 10 тестов в наборе (S.I.R) Готов к использованию Без разведений Готов к использованию Без разведений Ряд разведений Результаты для U.u и M.h в течение 24ч в 80% случаев Результаты в течение 48ч Результаты в течение 48ч Быстрый результат для штаммов M.h. С помощью наборов MEV3 (Mh стимулятор роста) Подсчет+определение чувствительности: результаты в течение 24ч – 48ч Подсчет+определение чувствительности: результаты в течение 48ч Подсчет+определение чувствительности: результаты в течение 96ч Biorad: необходимо 4 дня для получения окончательного результата Возможность провести скрининг с использованием отдельных Ummt/UmmLyo 25 ОСНОВНЫЕ КОНКУРЕНТЫ: сравнение 3/3 Elitech Microbio bioMérieux Biorad Комментарии Mycofast EV3 Mycoplasma IST2 Mycoplasma DUO/Mycoplasma S.I.R 7 антибиотиков в 2 концентрациях (искл. Пристинамицин) + 3 в одной концентрации (идентификация: L, SXT, E) 8 антибиотиков в 2 концентрациях + 1 в одной концентрации (Пристинамицин) 7 антибиотиков в 2 концентрациях Количество антибиотиков примерно одинаковое Исследуемые пробы: эндоцервикальные, вагинальные, уретральные, сперма, моча, желудочные секреты Исследуемые пробы: уретральные, вагинальные НЕ ИССЛЕДУЮТСЯ ПРОБЫ МОЧИ Исследуемые пробы: эндоцервикальные, вагинальные, уретральные, сперма, моча Biomerieux: невозможно получить результаты по пробам мочи 26 Наборы MYCOFAST Предложение, которое отвечает всем потребностям Прямой метод MYCOFAST EvolutioN 3 Скрининговый метод MYCOFAST EvolutioN 3 UMMlyo-UMMt (3 ml) Быстрее (результаты в течение Дольше (24 часа на скрининг+ 24 часа 24 часов в большинстве случаев) для получения окончательного Дороже результата) 27 Дешевле ИННОВАЦИЯ 2014 г. Методика 1. Инокуляция в транспортную среду Простые операции Прямая инокуляция на плашке Готовые к использованию реагенты Новая закрытая система 2.Инокуляция плашки MYCOFAST RevolutioN 3. Инкубация 24/48 часов при 37 °С Подсчет и идентификация 4. Результат Антибиотикочувствительность Чувствительные Промежуточные Устойчивые Быстрый результат за 24 часа (Стимулятор роста M.h) Легкая интерпретация результатов 1. Инокуляция в транспортную среду UMM(Кат.00061) 2. Инокуляция плашки Screening MYCOFAST RevolutioN (Кат.00063) 1. Инокуляция плашки MYCOFAST RevolutioN(Кат. 0006) из изначальной UMMt, хранившейся при 2-8°С 2.Инкубация 24/48ч при t 28 °С 3. Результат Подсчет и идентификация Антибиотикочувствительность 3. Инкубация 24/48 часов при 37°С Чувствительные Промежуточные 4. Результат Устойчивые Штаммы могут быть чувствительными, умеренно чувствительными или резистентными к антибиотикам в соответствии со следующими критериями определенными стандартами CLSI: MIC (мг/мл). Антибиотик U.u M.h Комментарии Класс Антибиотик S R S R Фторхинолоны Левофлоксацин <2 >4 <1 >2 Моксифлоксацин <2 >4 < 0.25 Макролиды Эритромицин <8 > 16 Линкозамиды Клиндамицин Тетрациклины Тетрациклин Организмы, чувствительные к Эритомицину будут также чувствительны к Азитромицину. < 0.25 <1 >2 > 0.5 <4 > 0.5 >8 Организмы, чувствительные к Тетрациклину, будут также чувствительны к Доксициклину. Screening RevolutioN – Методика: Этот подход может быть выбран по экономическим причинам , либо для того, чтобы сократить количество манипуляций. Высокая практичность • все компоненты доступны отдельно (адаптируются под Ваши нужды) • новая делимая плашка Дифференцирование U.u от M.h на этапе скрининга. Целостность экземляра сохраняется до 72 часов. Простые и безопасные операции: Новая интегрированная среда Новая закрытая система Готовые к использованию реагенты Результаты, которые соответствуют патологическому титру (>103 или >104) Отдельная дифференцация U.u от M.h на этапе скрининга. Удобная номенклатура Прямой & Скрининговый метод доступны по отдельности.