ЛЕПТОСПИРОЗ Лептоспироз животных Лептоспироз (синонимы: болезнь Васильева-Вейля, инфекционная желтуха, японская 7-дневная лихорадка, водная лихорадка, покосно-луговая лихорадка, собачья лихорадка и др. (leptospirosis, Weits disease, canicol fever – англ.) - острая инфекционная болезнь, вызываемая различными серотипами лептоспир, характеризуется лихорадкой, симптомами общей интоксикации, поражением почек, печени, нервной системы. При тяжелых случаях наблюдается желтуха, геморрагический синдром, острая почечная недостаточность и менингит. Leptospira Возбудитель относится к роду Leptospira, включающий в себя только один вид Leptospira interrogans. Вид подразделяется на два комплекса - паразитический (Interrogans) и сапрофитный (Biflexa). В каждом комплексе по антигенным свойствам выделяются серотипы, в настоящее время известно около 200 патогенных серотипов и около 60 - сапрофитных. Серотипы с общими антигенами объединяют в серологические группы. Патогенные серотипы объединены в 23 серогруппы. Источник инфекции: Источниками инфекции являются различные животные - лесная мышь, полевка, водяные крысы, землеройки, крысы, собаки, свиньи, крупный рогатый скот и др. Человек, больной лептоспирозом, источником инфекции не является. Факторы передачи инфекции: • Передача инфекции у животных происходит через воду и корм. • Заражение человека чаще всего происходит при контакте кожи и слизистых оболочек с водой, загрязненной выделениями животных (при купании). • Употребление продуктов питания, кормов, загрязнённых экскрементами грызунов. • Заболевание носит профессиональный характер. • • • • Патогенез болезни Воротами инфекции чаще является кожа. Для проникновения лептоспир достаточно малейших нарушений целостности кожи. В связи с этим заражение наступает даже при кратковременном контакте с водой, содержащей лептоспиры. Возбудитель может проникать также через слизистые оболочки органов пищеварения и конъюнктиву глаз. Дальнейшее продвижение лептоспир происходит по лимфатическим путям. Ни в лимфатических сосудах, ни в регионарных лимфатических узлах воспалительных явлений не развивается. Барьерная роль лимфатических узлов выражена слабо. Лептоспиры легко их преодолевают и заносятся в различные органы и ткани, в которых происходит размножение и накопление лептоспир. По времени это совпадает с инкубационным периодом (от 4 до 14 дней). Начало болезни (обычно острое) связано с массивным поступлением лептоспир и их токсинов в кровь (первые 2 недели – до 30 дней) Вторичная массивная бактериемия приводит к обсеменению различных органов, где продолжается размножение возбудителей. Лептоспиры, их токсины и продукты обмена приводят к выраженной интоксикации, которая особенно быстро нарастает в первые 2-3 дня от начала болезни. Лептоспиры обладают гемолизином, что приводит к разрушению (гемолизу) эритроцитов. Особое место в патогенезе лептоспироза занимает поражение почек. В большинстве случаев летальные исходы связаны с развитием острой почечной недостаточности (уремическая кома). Она возникает в результате непосредственного действия лептоспир и их токсических продуктов жизнедеятельности на клеточную стенку, приводит к тяжелым повреждениям эпителия почечных канальцев, коркового и подкоркового вещества почек, что приводит к нарушению процессов мочеобразования. Именно в почках наиболее длительно сохраняются лептоспиры (до 40 дней). Диагноз на лептоспироз устанавливают комплексно на основании: – эпизоотологических данных; – клинических признаков; – патологоанатомических изменений; – результатов лабораторных исследований. Методы лабораторных исследований: ПЦР - полимеразная цепная реакция • ПРЯМОЙ метод диагностики; • Выявление уникального для лептоспир фрагмента ДНК (РНК); • Максимальная чувствительность; • Высокая специфичность; Строение молекулы ДНК Структура молекулы ДНК была открыта Уотсоном и Криком в 1953 году. ДНК построена в виде двойной спирали, состоящей из двух полинуклеотидных цепей. Каждый нуклеотид состоит: - азотистого основания (аденин, тимин, гуанин, цитозин); - пятиуглеродного сахара (дезоксирибоза); - остатка фосфорной кислоты. Виды биологического материала, • • • • • • • • • используемого для ПЦР-диагностики Цельная кровь (сыворотка, плазма) Моча, сперма, носовая, влагалищная, препуциальная слизь Фекалии Слюна, смывы с конъюнктивы, из носовой полости, с прямой кишки Молоко, молозиво Патологический материал Продукты питания, корма Объекты внешней среды Бактериальные и клеточные культуры, смывы с питательных сред Основная проблема при использовании ПЦР в лабораторной диагностике – - высокий риск контаминации реагентов и биологического материала продуктами ПЦР и получение ложноположительных результатов Решение проблемы Детекция продуктов амплификации методом гибридизационнофлуоресцентной детекции в режиме «реального времени» REAL-TIME PCR Преимущества ПЦР c гибридизационно-флуоресцентной детекцией Минимальный риск контаминации Специфичность Высокая скорость анализа Удобный формат анализа данных Исключение субъективной интерпретации результатов Возможность генотипирования микроорганизмов Возможность количественного анализа Приборы для ПЦР с детекцией фрагментов амплификации в режиме реального времени “ABI Prism 7000” “Rotor Gene”Corbett Applied Biosystems, США Recearch,Австралия “iCycler iQ” Bio Rad, США MX3000 США “Smart Cycler”, Cepheid, США Основные характеристики ПЦР • Высокая чувствительность, основанная на экспоненциальном принципе накопления продукта. • Высокая специфичность, основанная на выявлении уникальных для микро-(макро)организма участков генетического материала. • Метод прямого выявления возбудителя, основанный на универсальности способа хранения и передачи генетической информации живой материи Погрешности ПЦР-диагностики • Ложноположительные результаты Причина: контаминация проб и помещений лаборатории; низкоспецифичные тест-системы; • Ложноотрицательные результаты Влияют : 1. преаналитические процедуры (условия отбора, транспортировки, хранения и подготовки проб); 2. потери ДНК на этапе выделения; 3. качество работы амплификатора; 4. низкочувствительные тест-системы