АРХИВ ПАТОЛОГИИ, 1984, выпуск 8. том XLVI (Д.Д. Зербино, Л.Л

АРХИВ ПАТОЛОГИИ, 1984, выпуск 8. том XLVI (Д.Д. Зербино, Л.Л. Лукасевич,
(г. Львов)).
«возраст» фибрина
Метод
«молодой»
«зрелый»
ОКГ
Желтый
Красный
ПКС
КСЧ
Красный
Красный
Красный
Синий
«старый»
Переход от красного
к голубому
Синий
Сине-черный
Соединительная
ткань
Синий
Темно-синий
Бледно-голубой
КСЧ- красный-сине-черный
ПКР-пикриновый красный-синий
ОКГ-оранж-красный-голубой
Кислотный красный 2С (кислотный красный 14, кармизин, нафтиловый красный GR)
Кислотный желтый светопрочный 9кислотный желтый II, феналановый желтый G,
светопрочный желтый)
Кислотный сине-черный (кислотный черный I, нафтоловый сине-черный В)
Методика ОКГ № 1.
1.
срезы депарафинировать, промыть в дист. воде.
2.
Целестиновый синий -5 минут.
3.
Вода водопроводная – 1 минута.
4.
Гемалаум Майера -5 минут.
5.
Вода водопроводная – 1 минута.
6.
Дифференцировка в 0,25% HCI на 70 гр. спирте.
7.
Вода водопроводная -1 минута.
8.
Марциус желтый – 2 минуты.
9.
Вода дист. - 1 мин.
10.
Окрасить в 1% растворе кислотного красного 2С на 2,5% водном растворе
уксусной кислоты – 10 минут.
11.
Вода дист. – 1 мин.
12.
Фосфорновольфрамовая кислота 1% - 5 минут.
13.
Вода дист. -5 минут.
14.
0,5 % водный голубой на 1% водном растворе уксусной кислоты -10 минут.
15.
Промыть в дист. воде.
16.
Спирты, ксилолы, бальзам.
Приготовление растворов красителей для ОКГ
1.
0,25% HCI в 70 гр. спирте:
- 96гр. спирт – 100 мл.
- вода дист. – 39 мл.
- HCI концентрированная – 0,35 мл.
2. Раствор марциуса желтого (или оранжевого):
- 69 гр. спирт 50 мл. марциус желтый можно заменить на марциус оранжевый равным
соотношением.
3. Раствор кислотно-красного 2С:
- кислотный красный 2С -0,5 гр.
- ледяная уксусная кислота (ЛУК) – 125 мл.
- вода дист. 48,75 мл.
4. Раствор водного голубого:
- водный голубой -0,25 г.
- ледяная уксусная кислота (ЛУК) – 0,5
- дист. вода - 49,5
5. Раствор целестеинового синего:
- 2,5 гр. железных квасцов растворить на ночь при комнатной температуре в 50 мл.дист.
воды. Добавить 0,25 г целестинового синего и кипятить 3 минуты. Охладить и
профильтровать, добавить 1 мл. глицерина. Сохраняется до 1 года.
Методика ОКГ № 2. (С-Петербург, Сафрай А.Е.)
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
13.
Депарафинизация, довести до воды (водопроводной ???)
Гематоксилин 3-15 минут.
Вода водопроводная – 10-158 минут.
Дистиллированная вода 1 минута.
Окрасить срезы в растворе Мартуса желтого и оранжевого ж – 2 минуты.
Вода дист. – 1 минута.
Кислотно – красный – 10 минут.
Вода дист. – 1 минута.
Фосфорно-вольфрамовая кислота – 5 минут.
Вода дист. -1 минута.
Водный голубой 0,5% - 10 минут.
Вода дист. -1 минута.
Спирты, ксилолы, заключение в бальзам.
Результат: Нити фибрина окрашиваются от красного (всех оттенков) до серо-голубого (в
зависимости от возраста). Соединительная ткань в ярко-голубой цвет.
Оранжевый цвет – 0-6 часов.
Оранжево-красный – 6-12 часов.
Зрелый красный -6-24 часа.
Ярко-красный -12-18 часов.
Фиолетовый – 18-24 часа (старый фибрин – более 24 часов).
Серо-голубой – более 48 часов.
Приготовление реактивов ОКГ по методике № 2
1.
Оранжевый Ж: 50 мл. 96 гр. спирта + фофорно-вольфрамовой кислоты + 0,25г.
Оранж Ж.
2.
Кислотно-ярко –красный: 1% кислотно-красного на 2,5% водном растворе
уксусной кислоты (2,5 мл. + 1 гр. кислотно-красного + 97,5 дистилированной воды).
3.
Водный раствор фофорно-вольфрамовой кислоты: 100 мл. (0,1) фосфорновольфрамовой кислоты + 100 мл. дистиллированной воды.
4.
0,5 % водно-голубого + 1 мл. уксусной кислоты + 99 мл. дист. воды.
Методика ОКГ № 3. (по Д.Д. Зербино)
Приготовление растворов красителей.
1.
0,25% HCIв 70 гр. спирте: к 100 мл 96 гр. спирта добавить 39 мл дист. воды и 0,35
мл. конц. соляной кислоты.
2.
Раствор оранжевого G: в 50 мл. 96 гр. спирта добавить 0,25 г оранжевого G и 1 г
фосфорно-вольфрамовой кислоты.
3.
Раствор кислотно-красного 2С (синоним - азофлоксин): в 48,75 мл. дист. воды
растворить 0,5 г водного голубого, добавить 0,5 мл. ЛУК.
4.
Раствор водного голубого: в 49,5 мл дист. воды расвторить 0,25 водного голубого,
добавить 0,5 мл ЛКУ.
5.
Раствор целестинового синего: 2,5 г железных квасцов растворить в течение 123
часов при комнатной температуре в 50 мл дист. воды. Добавить 0,25 г целестинового
синего и кипятить 3 мин. Охладить, профильтровать и добавить 1 мл глицерина. Срок
годности до года.
Техника окраски
1. Срезы депарафинируют, промывают в дист. воде.
2. Окрашивают ядра целестиновым синим в течение 5 минут.
3. Водопроводная вода – 1 мин.
4. Гемалаум Майера – 5 минут.
5. Вода водопроводная -1 мин.
6. Дифференцировка в 0,25% спирте.
7. Вода водопроводная
8. Раствор оранжевого G -2 мин.
9. Вода дист. – 1 мин.
10. Раствор 10% кислотного красного 2С на 2,5% водном растворе уксусной кислоты.
11. Вода дист. – 1 мин.
12. Фосфорновольфрамовая кислота – 5 мин.
13. Вода дист. -1 мин.
14. Раствор 0,5% водного голубого на 1% водном растворе уксусной кислоты.
15. Вода дист. – промыть.
16. Обезводить, просветлить, заключить.
Первые этапы обработки срезов и включающие окраску целестиновым синим и
гемалаумом можно исключить, заменив их действием на срез железного гематоксилина
Вейгерта.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
Результат:
«Молодой» фибрин – желто-оранжевый (0-6 часов).
«Зрелый» фибрин – красный цвет (6-24 часа)
Оранжево- красный 6-12 часов.
Ярко – красный – 12-18 часов.
Красно-фиолетовый (18-24 часа).
«Старый» фибрин (более 24 часов) фиолетового цвета
Серо-голубой – более 48 часов.
Методика ПКС
1-5 см. методику ОКГ.
6. Раствор желтого протравного -5 минут.
7. Вода водопроводная – 1 минута.
8. Раствор кислого фуксина 1% на 1% водном растворе уксусной кислоты - 5 минут.
9. Вода водопроводная – 1 минута.
10.Желтый дифференциатор – 10 секунд
11. Вода проточная- промыть.
12. Раствор ФВК 1% - 5 минут. Если срезы плохо профиксированы – до 10 минут.
13. Вода водопроводная – 1 минута.
14. Красный дифференциатор – 10 минут.
15.Вода водопроводная – 1 минута.
16. Раствор водного голубого 1% на 1% расвторе ускусной кислоты – 2 минуты.
17. Вода водопроводная – 1 минута.
18. Обезводить, просветлить, заключить.
Приготовление растворов красителей
1. Раствор желтого протравного:
- 200 мл 80гр. спирта, насыщенного пикриновой кислотой.
- оранжевый Ж -0,5 гр
- кислотный желтый светопрочного – 0.4 гр
2. Желтый дифференциатор:
- 30 мл желтого протравного доавить к 70 мл. 80 гр. спирта.
3. Красный дифференциатор из основного раствора (ФВК-2,5 гр, пикриновая кислота –
2,5 гр., 95 гр. спирта-100мл):
- основного раствора 40 мл.
- спирта- 40 мл.
- дист. вода – 20 мл.
Методика КСЧ
1-7 см. методику ОКГ.
8. Раствор кислотного красного 2С 1% на 1% водном растворе уксусной кислоты.
9. Вода водопроводная – 1 минута.
10. Раствор ФВК 1% - 5 минут.
11. Вода водопроводная - 1 минута.
12.Раствор кислотный сине-черный 1% на 1 % растворе уксусной кислоты – 30 минут.
13. Вода дист. – 1 минута.
14. Обезводить в спиртах, просветлить в ксилоле, заключить в бальзам.
Приготовление растворов красителей:
1. Раствор кислотного красного 2С:
- кислотный красный 2С – 0,5 гр.
- ЛУК -0,5 мл
- Вода дист. – 49,5 мл.
2. Раствор кислотного сине-черного:
- Кислотный сине-черный -0,5 гр
- ЛУК – 0,5
- Вода дист. – 49,5 мл.