Сохранение жизнеспособности чумного микроба в Музее живых

СОХРАНЕНИЕ ЖИЗНЕСПОСОБНОСТИ
ЧУМНОГО МИКРОБА В МУЗЕЕ ЖИВЫХ
ПАТОГЕНОВ.
А.С.Неъматов, Г.Р.Базарова, Н.Н.Вахабова.
Центр профилактики карантинных и особо
опасных инфекций Министерства
здравоохранения Республики Узбекистан,
Ташкент
Г.Ташкент, Шайхантохурский район
Ул. Эшон Бобохон, 2
700169
Тел: (+998) 71 114-36-93, 114-36-95
Факс: (+998) 71 118-85-66
E.mail: cpqmhi@ bcc.com.uz
1
ВВЕДЕНИЕ
В последние десятилетия появились работы многих
исследователей, изучавших свойства чумного микроба
при длительном хранении. Одной из существенных
задач
практической
эпидемиологии
является
предупреждение потери бактериальными культурами
их основных биологических свойств в процессе
хранения. В распоряжении исследователей имеется
значительное
число
способов
хранения
микроорганизмов, но большинство их требует дорогостоящего
оборудования,
сред
и
соблюдения
низкотемпературного
режима
такого,
как
лиофилизация, хранение в жидком азоте. На
сегодняшний день для стационарных, полевых
противочумных лабораторий становится актуальной
проблемой изыскание веществ, обеспечивающих более
простые, удобные и экономичные способы хранения
микроорганизмов.
ЦЕЛЬ
Сравнительное изучение различных методов
сохранения жизнеспособности и основных
биологических свойств штаммов чумного микроба, а
так же поиск более простых, удобных и экономичных
способов хранения, приемлемых для полевых
противочумных лабораторий.
2
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Нами были отобраны десять свежевыделенных
штаммов
чумного
Кызылкумского
свойства
микроба,
пустынного
которых
были
выделенных
очага,
из
биологические
предварительно
изучены.
Взятые в опыт культуры относились к типичным
штаммам данного очага.
Для
сохранения
использовали
жизнеспособности
минеральные
масла:
патогенов
вазелиновое,
касторовое и растительное.
РЕЗУЛЬТАТИ
Культуры чумного микроба были засеяны на
косяки с питательным агаром Хоттингера (рн-7,2) и в
пробирки с 0,3% полужидким агаром Хоттингера (рН7,2)
и
залиты
Одновременно
вышеперечисленными
культуры
маслами.
хранились
в
лиофилизированном состоянии.
Изучение культур проводили спустя 3 , 6 месяцев и 1-2
года хранения в условиях холодильника при t 2-8 С.
Было установлено, что количество живых микробных
клеток резко падало в течение первых трех месяцев
3
хранения с исходной концентрацией от 10¹⁰ мл до10⁵-10⁷
микробных клеток в мл.
В последующие месяцы скорость отмирания клеток
существенно снижалась и через год количество живых
клеток составило 10⁵-10⁶ в мл, что вполне обеспечивает
сохранность
штамма
Исключением
были
в
музейных
культуры,
условиях.
хранящиеся
стерильным растительным маслом.
под
Через год живые
микробные клетки не были обнаружены.
Кроме того,
штаммов
на протяжение всего срока изучения
мы
наблюдали
культурально-
полное
морфологических,
сохранение
биохимических
свойств, пестициногенности, способности к продукции
фракции-1 при всех способах хранения. Однако, следует
подчеркнуть, что после одного года хранения,
лиофильного высушивания,
процента
зависимых
кроме
наблюдалось снижение
пигментсорбирующих (Рgm +) и кальций
(Са-)
клеток
и
соответственно
ви-
рулентности для лабораторных животных. Количество
кальций зависимых клеток на среде Хигучи-Смита
снижалось с 90-100% до 50-60% в течение года.
Способность к
пигментсорбции на среде Джексона-
Берроуза после однолетного хранения составила 50-70%
4
по сравнению с исходной 93-100% пигментированных
клеток. Вирулентность определяли при подкожном
заражении морских свинок и белых мышей от 10¹ до10⁹
м.к. в мл. Спустя год у штаммов, хранившихся в
минеральных маслах, показатели ЛД 50 в среднем
составили 50 м.к. для белых мышей и 175 м.к. для
морских
свинок
соответственно
по
сравнению
перед
опытом.
с
10
и
У
18
м.к,
штаммов,
хранившихся на косяках с агаром Хоттингера, ЛД 50
через год была несколько ниже: для белых мышей –100
м.к. и для морских свинок -320 м.к. в среднем. У
лиофильно
высушенных
штаммов
существенного
снижения данных свойств не наблюдалось.
Процент живых микробных клеток,
хранившихся в течение года
0%
35%
Вазелиновое масло
Касторовое масло
65%
Растительное масло
5
ВЫВОДЫ
Таким
образом,
хранение
штаммов
чумного
микроба в течение года под вазелиновым маслом 0,3 %
полужидкого агара Хоттингера (рн-7.2) на наш взгляд
имеет
некоторое
преимущество
по
сравнению
с
общепринятыми методами хранения на питательных
средах.
Этот способ хранения культур чумного микроба в
полевых
противочумных
лабораторных
условиях
позволяет избавиться от необходимых частых пересевов
культуры
на
питательные
среды,
необходимости
использования витаминов таких как, витамин В1,
гемолизированной крови и др.
Однако,
оптимальным
способом
хранения
микроорганизмов считается содержание штаммов в
лиофильно
высушенном
состоянии
в
условиях
холодильника.
6