АсАТ-ВИТАЛ-06/16 НАБОР РЕАГЕНТОВ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ АСПАРТАТАМИНОТРАНСФЕРАЗЫ В СЫВОРОТКЕ И ПЛАЗМЕ КРОВИ ОПТИМИЗИРОВАННЫМ ЭНЗИМАТИЧЕСКИМ КИНЕТИЧЕСКИМ МЕТОДОМ Кат. № В 02.006 - 150 мл Кат. № В 02.016 - 250 мл ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА ПРИНЦИП МЕТОДА Длина волны: Hg 334, 340 или 365 нм. Длина оптического пути: 1 см. Температура инкубации : 37С (30С, 25С) Фотометрирование: против воздуха. 1. L-аспартат + -кетоглутарат АсАТ оксалоацетат + L-глутамат 2. оксалоацетат + NADH + H+МДГ L-малат + NAD+ Cкорость окисления NADH в NAD+ пропорциональна активности АсАТ. ИССЛЕДУЕМЫЙ МАТЕРИАЛ (ОБРАЗЕЦ) Свежая сыворотка или плазма крови без следов гемолиза. СОСТАВ НАБОРА РЕАГЕНТ № 1 - БУФЕР, рН 7,5 конечная концентрация в рабочем реагенте L-аспартат……...…………..…………..........240 ммоль/л Трис/NaOH………………….…………......….80 ммоль/л ИЗМЕРЕНИЕ Перед проведением анализа нагрейте рабочий реагент до выбранной температуры. Соотношение рабочий реагент/образец = 10/1 (например, 0,5 мл рабочего реагента + 0,05 мл образца). Перемешать, инкубировать при выбранной температуре 60 сек. Затем считывать изменения адсорбции с интервалом 1 минута (или через другие равные промежутки времени) в течение 3 минут. Вычислить среднее изменение адсорбции за 1 минуту (А/мин). РАСЧЕТЫ РЕАГЕНТ № 2 - ЛИОФИЛИЗАТ -кетоглутарат…………….………….....…...12 ммоль/л ЛДГ………………..…………........……………...600 U/л МДГ………………..…………........……………..600 U/л NADH……………………..………….....….0,18 ммоль/л АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ Расчет активности аспартатаминотрансферазы (U/l): Активность=3235А365 нм/мин, Активность=1746А340 нм/мин, Активность=1780А334 нм/мин. ТЕМПЕРАТУРНЫЕ КОЭФФИЦИЕНТЫ ПЕРЕСЧЕТА Температура инкубации 37С 30С 25С Линейность - отклонение не более 5 % в диапазоне активностей 10-190 U/л Чувствительность - не более 7 U/л Коэффициент вариации – не более 5 % Время проведения анализа – не более 4 мин ХРАНЕНИЕ 1. Срок годности набора – 12 мес ( хранение при 2-4С). ВНИМАНИЕ! Тщательно закрывайте флаконы непосредственно после каждого использования реагентов. ПРИГОТОВЛЕНИЕ РАБОЧЕГО РЕАГЕНТА Растворить содержимое одного флакона № 2 в 50 мл реагента № 1. Для получения оптимальных результатов рекомендуется выдержать рабочий реагент после полного растворения лиофилизата при комнатной температуре 5-10 минут. Рабочий реагент стабилен 45 суток при температуре хранения 2-4С, 7 суток при 18-25С, 10 сут при хранении в "рабочем режиме № 1" (6 ч при 37С и 18 ч при 2-4С), 20 суток при хранении в "рабочем режиме № 2" (6 ч при 18-25С и 18 ч при 2-4С). 37С 30С 25С 1,00 1,54 2,08 0,65 1,00 1,37 0,48 0,73 1,00 30С До 21 U/л До 25 U/л 25С До 15 U/л До 18 U/л НОРМАЛЬНЫЕ ВЕЛИЧИНЫ 37С Женщины До 31 U/л Мужчины До 37 U/л 1U/л = 16,67 нмоль/(сл). ПРИМЕЧАНИЕ 1. 2. 3. Если А/мин превышает 0,06/мин при фотометрировании в варианте Hg 365 или 0,11/мин в варианте 340/ Hg 334, необходимо развести образец в 10 раз физраствором. Анализ повторить, результат умножить на 10. Активность фермента в сыворотке снижается после 3 дней хранения при 2-4С – на 10%, при 18-25С – на 17%. Большинство автоматических приборов позволяет сократить время измерения А с последующим автоматическим вычислением А/мин и активности фермента. Программы к анализаторам предоставляются по запросу. КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА Правильность проверена при помощи контрольных сывороток “Сontronorm” & “Contropath” (Biocon, Германия), “Precinorm U” & “Precipath U” (Roche Diagnostics, Швейцария).