ПОЛУЧЕНИЕ КЛЕТОЧНЫХ ФОРМ АНТИБИОТИКОВ АМИНОГЛИКОЗИДОВ ... ФТОРХИНОЛОНОВ ДЛЯ ИХ НАПРАВЛЕННОГО ТРАНСПОРТА В ОРГАНИЗМ

ПОЛУЧЕНИЕ КЛЕТОЧНЫХ ФОРМ АНТИБИОТИКОВ АМИНОГЛИКОЗИДОВ И
ФТОРХИНОЛОНОВ ДЛЯ ИХ НАПРАВЛЕННОГО ТРАНСПОРТА В ОРГАНИЗМ
Л.Е. Сипливая, А.В. Кукурека, Г.В. Сипливый, В.Я. Яцюк
Курский государственный медицинский университет, г. Курск
В литературе имеются данные о возможности использования стромы эритроцитов для
направленного транспорта антибиотиков. Одним из доступных для практики методов
включения антибиотиков в строму эритроцитов является гипоосмотический гемолиз.
Эритроцитарные носители (ЭН) с включенными антибиотиками отличаются
достаточно высокой устойчивостью и могут применяться для направленного
транспорта в организм и, в частности, в печень, селезенку, почки. Так ряд авторов
сообщают, что при введении гентамицина, включенного в эритроцитарный контейнер,
существенно изменяется распределение препарата по органам и тканям: накопление в
печени, селезенке, почках увеличивается в 1,7- 3; 1,9-2,7; 1,5 раза, кроме того,
увеличивается период полувыведения и среднего времени удержания [1]. При
направленном транспорте лекарственных средств в организм обсуждаются
возможности использования различных векторов, одними из которых является
применение лейкоцитов [2].
На основании изложенного перспективным является изучение возможности
использования эритроцитарных и лейкоцитарных носителей как векторов для
направленного транспорта антибиотиков или фторхинолонов с целью повышения их
фармакологической эффективности при необструктивном пиелонефрите.
Цель: отработка лабораторной технологии получения эритроцитарных и
лейкоцитарных форм антибактериальных препаратов и изучение особенностей
включения гентамицина, амикацина, ципрофлоксацина и офлоксацина в ЭН и
лейкоцитарные носители (ЛН) здоровых животных и животных с пиелонефритом.
Материалы и методы: Для получения эритроцитарных форм антибиотиков
аминогликозидов и фторхинолонов использовали методику [3]. Эритроциты здоровых
крыс и крыс с пиелонефритом инкубировали с растворами препаратов в концентрации:
гентамицина 2 и 4 мг/мл (0,2%; 0,4%) и амикацина 12 и 24 мг/мл (1,2%; 2,4%), а
фторхинолонов 3 и 6 мг/мл (0,3%; 0,6%) в течение 10, 30, и 60 минут при 4 0С.
Выделенные из крови лейкоциты инкубировали с такими же концентрациями
препаратов и временными интервалами, но при комнатной температуре (200С). Вначале
инкубацию проводили с меньшей концентрацией, а затем концентрацию препаратов в
инкубационной жидкости увеличивали в два раза. Устойчивость ЭН и ЛН на
десорбцию и выделение препаратов из ЭН и ЛН определяли путем двукратного
предварительного отмывания и инкубации их в аутологичной плазме при 370С в
течение 30 минут. Концентрацию антибиотиков аминогликозидов или фторхинолонов в
гемолизате ЭН, ЛН, инкубационной жидкости, в надосадочной жидкости после
отмывания клеток, а также плазме крови после инкубации в ней ЭН, ЛН определяли
спектрофотометрическими методиками [4,5].
Результаты и их обсуждение.
Было установлено, что в ЭН здоровых доноров включается гентамицина 22,4% и 20,2%
амикацина, а в ЭН крыс с пиелонефритом 20,1% и 18,2%, соответственно, для
гентамицина и амикацина. Определено, что в ЭН здоровых крыс включается 17,9%
ципрофлоксацина и 16,4% офлоксацина, а в ЭН животных с пиелонефритом,
соответственно, 14,5% и 12,3%.
Доказано, что антибиотики аминогликозиды и фторхинолоны в большей степени
включаются в ЭН здоровых доноров. Полученные результаты свидетельствовали о
более высоком включении антибиотиков аминогликозидов в ЭН животных с
пиелонефритом в сравнении с фторхинолонами. Мы не обнаружили зависимости
степени включения антибиотиков и фторхинолонов в ЭН от длительности инкубации.
Разница в количественном содержании антибиотиков или фторхинолонов при
инкубации
30 или 60 минут колебалась в пределах 1,5- 1,9%. Повышение
концентрации препаратов в инкубационной жидкости в два раза привело к увеличению
их содержания в ЭН как здоровых животных, так и животных с пиелонефритом в
пределах 1,3 -1,5 раза.
Изучение устойчивости ЭН к возможной десорбции и выделению антибиотиков или
фторхинолонов в плазму крови показало достаточную их устойчивость, что позволяет
использовать ЭН для включения и направленного транспорта антибиотиков
аминогликозидов и фторхинолонов в органы и, в частности, почки.
Отмечено более высокое включение препаратов в ЛН здоровых животных.
Установлено, что введение АТФ в инкубационную среду повышает включение
антибиотиков аминогликозидов и фторхинолонов в ЛН здоровых крыс. Показано, что в
присутствии АТФ препараты практически в одинаковом процентном соотношении
включаются в ЛН как здоровых животных, так и животных с пиелонефритом.
Полученные данные представляют большой практический интерес, так как
предполагают возможность использования собственных клеток в качестве векторов
адресной доставки лекарственных средств, исключая услуги доноров. Мы установили,
что при 20 минутах инкубации в присутствии АТФ количественное содержание
препаратов в ЛН здоровых крыс и крыс с пиелонефритом было максимально.
Удлинение времени экспозиции до 60 минут не приводило к существенному
увеличению количественного содержания аминогликозидов и фторхинолонов в ЛН.
Увеличение концентрации препаратов привело к повышению их содержания в ЛН, как
здоровых животных, так и животных с пиелонефритом в 2,2 – 2,8 раза. Изучение
процессов десорбции аминогликозидов и фторхинолонов из ЛН в плазму крови
показало их достаточную устойчивость и тем самым подтвердило возможность
использования лейкоцитов как контейнеров для направленного транспорта
антибактериальных препаратов.
Выводы: предложена лабораторная технология получения клеточных (эритроцитарных
и лейкоцитарных) форм антибиотиков аминогликозидов и фторхинолонов,
включающая выделение ЭН и ЛН, получение стандартизованных по количеству
действующего вещества клеточных форм антибактериальных препаратов, установление
стабильности, условий и сроков их хранения.
Список литературы.
1. Генинг, Т.П. Фармакокинетика антибиотика, вводимого в организм в клеточных
носителях / Т.П. Генинг, К.К. Мануйлов // Антибиотики и химиотерапия. - 1991.- №9. –
С. 19-20.
2. Лохвицкий, С.В. Направленный транспорт антибиотиков при лечении больных
диабетической гнойной остеоартропатией / С.В. Лохвицкий // Сахарный диабет. - 1999.
- №3 (4). - С. 1-5.
3. Генинг, Т.П. Использование форменных элементов крови для направленной доставки
химиотерапевтических и диагностических препаратов в очаг поражения / Т.П. Генинг,
И.И. Колкер, Ж.Ш. Жумадилов // Антибиотики и химиотерапия. - 1988. - Т.33, №11 - С.
867-870.
4. Кукурека, А.В. Спектрофотометрическое определение лекарственных средств из
группы аминогликозидных антибиотиков: автореф. дис… канд. фарм. наук / А.В.
Кукурека; КГМУ. - Курск, 2000, - 18с.
5.
Карлов,
П.М.
Исследование
соединений
групп
фторхинолонов,
иммобилизированных на различных носителях: автореф. дис… канд. фарм. наук / П.М.
Карлов; КГМУ. – Курск, 2009. - 23с.