по применению набора реагентов «Сыворотки диагностические

ИНСТРУКЦИЯ
по применению набора реагентов «Сыворотки диагностические энтеровирусные моновалентные сухие для реакции нейтрализации»
1. НАЗНАЧЕНИЕ
Набор реагентов «Сыворотки диагностические энтеровирусные моновалентные сухие для реакции нейтрализации», далее по тексту «СДЭм»,
предназначены для идентификации
энтеровирусов человека в реакции
нейтрализации (РН) в перевиваемых линиях клеток RD или НЕр-2 (Цинциннати).
2. ХАРАКТЕРИСТИКА НАБОРА
2.1. «СДЭм» используются для идентификации следующих таксономических групп энтеровирусов человека: полиомиелита 1, 2, 3 типов (клетки RD);
Коксаки А 2, 4, 7, 9, 10 (клетки RD); Коксаки В 1, 2, 3, 4, 5, 6 (клетки НЕр-2);
ЕСНО 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 11, 12, 13, 16, 20, 21, 25, 27, 29, 30, 31, 33 (клетки
RD); Энтеро-68, 69, 70, 71 (клетки RD).
2.2. «СДЭм» выпускают по 1,0 мл во флаконах.
Флаконы со «СДЭм» упаковывают в пачку, содержащую 1 флакон с
индивидуальной сывороткой или в групповую пачку, содержащую набор из
10 флаконов в виде пяти комплектов.
Комплект № 1. По 4 флакона со «СДЭм» к вирусу полиомиелита 1 и 3 типов,
2 флакона со «СДЭм» к вирусу полиомиелита типа 2.
Комплект № 2. По 2 флакона каждой «СДЭм» к вирусам Коксаки А 2, 4, 7, 9,
10.
Комплект № 3. По 2 флакона «СДЭм» к вирусам Коксаки В 1, 2, 5, 6 и по 1
флакону «СДЭм» к вирусам Коксаки В 3,4.
Комплект № 4. «СДЭм» к вирусам ЕСНО состоит из 2-х пачек и содержит в
первой пачке – по 1 флакону «СДЭм» к вирусам ЕСНО 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 11,
12; во второй пачке – по 1 флакону «СДЭм» к вирусам ЕСНО 13, 16, 20, 21,
25, 27, 29, 30, 31, 33.
Комплект № 5. «СДЭм» к вирусам Энтеро- 68, 69, 70, 71 состоит из одной
пачки и содержит по 2 флакона «СДЭм» к вирусам Энтеро-68, 69 и по 3 флакона «СДЭм» к вирусам Энтеро-70, 71.
В каждую индивидуальную и групповую пачку вкладывают инструкцию по
применению.
3. АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
3.1. «СДЭм» представляют собой цельные иммунные лиофилизированные сыворотки крови кроликов или баранов, полученные в результате
иммунизаций животных вышеперечисленными энтеровирусами человека.
3.2. «СДЭм» обладают нейтрализующей активностью по отношению к гомотипичным энтеровирусам человека.
3.3. «СДЭм» – пористая гигроскопичная масса желто-коричневого цвета.
4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
4.1. Мерами предосторожности при работе со «СДЭм» является соблюдение «Правил устройства, техники безопасности, производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной гигиены при работе в лабораториях (отделениях, отделах) санитарно-эпидемиологических учреждений
системы Министерства здравоохранения СССР» (Москва, 1981 г.).
4.2. Потенциальный риск применения «СДЭм» – класс 1 (ГОСТ Р 516092000).
5. ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ
Для проведения реакции нейтрализации используют:
— микротитровальные панели с плоскодонными лунками для культивирования клеток, снабженные крышками (фирма «Costar», кат. № 3599
или его аналог);
— стерильные пробирки емкостью 5 мл для разведений;
— стерильные пипетки емкостью 1мл и 2 мл;
— стерильные капельницы или микродозаторы с наконечниками;
2
— перевиваемые линии клеток RD или НЕр-2 (Цинциннати), максимальное рекомендуемое число пассажей – 15;
— питательная среда Игла МЕМ.
6.
АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ
Анализируемые агенты предполагаемой энтеровирусной природы, выделенные из соответствующих клинических и секционных материалов, а также
объектов окружающей среды.
7.
ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА
7.1.
Во флакон со «СДЭм» вносят 1,0 мл растворителя (вода для иньекций).
7.2. Полное растворение «СДЭм» происходит в течение 5 мин. непрерывного встряхивания содержимого флакона.
7.3. Растворенную «СДЭм» инактивируют в водяной бане при 56 0С в
течение 30 мин.
7.4. Растворенную «СДЭм» доводят питательной средой Игла МЕМ
до рабочего разведения, указанного на этикетке.
7.5. Вносят по 0,05 мл рабочего разведения индивидуальной «СДЭм»
в лунки (не менее 4-х) микротитровальной панели.
7.6. Рабочее разведение идентифицируемого вируса, содержащее по
результатам предшествующего титрования примерно 100 (32-320) ТЦД50 в
0,05 мл, готовят в питательной среде «Игла МЕМ».
7.7. В лунки панели, содержащие рабочее разведение «СДЭм» (не
менее 4-х), добавляют по 0,05 мл рабочего разведения идентифицируемого
вируса.
7.8. Панель закрывают крышкой и помещают на 1 час в СО2 – инкубатор с 5 % СО2 и температурой от 35 до 37 0С.
7.9. В Питательную среду Игла МЕМ добавляют 5 % сыворотки эмбриона коровы.
3
7.10. Вышеуказанную среду используют для приготовления
взвеси
перевиваемых линий клеток RD или НЕр-2, содержащие 1-2 х 104 клеток в
0,1 мл.
7.11. После завершения инкубации в лунки панели со смесью СДЭм и
идентифицируемого вируса вносят по 0,1 мл взвеси соответствующих клеток.
7.12. Панель закрывают крышкой и помещают в СО
2
- инкубатор с
5 % СО2 и температурой от 35 до 37 0С.
7.13. Контроль концентрации идентифицируемого вируса в рабочем
разведении. В соответствующие лунки (не менее 4-х) панели вносят по
0,05 мл рабочего разведения вируса и по 0,05 мл каждого из трех его последующих десятикратных разведений. В те же лунки вносят по 0,05 мл питательной среды Игла МЕМ. Панель с содержимым помещают на 1ч в СО2 –
инкубатор с 5 % СО2 и температурой от 35 до 37 0С. После завершения инкубации в каждую лунку добавляют по 0,1 мл взвеси соответствующих клеток.
Помещают панель с содержимым в СО2-инкубатор с 5 % СО2 и температурой
от 35 до 37 0С.
7.14. Контроль качества культуры клеток. В соответствующие лунки
панели вносят по 0,1 мл питательной среды «Игла МЕМ». В те же лунки добавляют
по 0,1 мл
взвеси соответствующих клеток. Помещают панель
с содержимым в СО2-термостат с 5 % СО2 и температурой от 35 до 37 0С.
8.
РЕГИСТРАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ
Регистрацию результатов проводят ежедневно. Состояние клеток в
лунках панели оценивают с помощью инвертированного микроскопа.
9.
УЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ РЕАКЦИИ НЕЙТРАЛИЗАЦИИ
9.1. Состояние культур клеток в лунках панели ежедневно оценивается
с помощью инвертированного микроскопа.
9.2. Учитывают результаты реакции через 24 ч после развития полного
цитопатогенного эффекта (ЦПЭ) в клетках лунок контроля концентрации
идентифицируемого вируса.
4
9.3. Тип «СДЭм», подавляющий развитие ЦПЭ, соответствует типу
идентифицируемого вируса.
9.4. Результат реакции нейтрализации может быть признан достоверным
при соблюдении следующих условий: рабочая концентрация нейтрализуемого вируса составляет 100 (32-320) ТЦД50 , нет изменений морфологии клеток
в контрольных лунках панели.
10. УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ЭКСПЛУАТАЦИИ НАБОРА
10.1. Хранение при температуре от 0 до 8 0С.
10.2. Транспортирование всеми видами крытого транспорта при температуре не выше 30 0С.
10.3. «СДЭм» используются в санитарно-профилактических учреждениях.
11. СРОК ГОДНОСТИ – два года.
Рекламации направлять на предприятие-производитель ФГУП «Предприятие по производству бактерийных и вирусных препаратов Института
полиомиелита и вирусных энцефалитов им. М.П. Чумакова РАМН», 142782,
Московская обл., Ленинский р-н, поселок сельского типа Институт Полиомиелита, 27 км. Киевского шоссе, тел. (495) 439-90-02, факс (495) 439-93-21.
5