Fructose Test - 96 Tests

Fructose Test - 96 Tests
Набор для определения содержания фруктозы в семенной плазме.
Документ FP09I29 R01B.1 Дата издания 28/02/2011
Фруктоза стандарт содержит 0,09% Na-Azide
Диагностический набор in vitro, только для профессионального использования.
Общая информация
Фотометрический метод для определения количества фруктозы в семенной плазме человека
Назначение – измерение количества фруктозы в образцах семени и семенной плазме
человека. Фруктоза в семенной плазме отражает секреторную функцию семенных
пузырьков.
Принцип теста:
Фруктоза + индол = > нагревание/кислота = > комплекс, который поглощает при длине
волны 470-492 нм
Материалы, включенные в набор:
Реагент 1 - 50 мл раствора ТСА
Реагент 2 - 25 мл концентрированной (32%) НСl
Реагент 3 - 3 мл раствора индола
Реагент 4 - 25 мл NaOH (0,5М)
Стандартный раствор фруктозы - 10 мл (5мг/мл)
Материалы, не включенные в набор:
Ридер/фотометр с фильтром 470-492 нм
Пипетки и наконечники к ним
Центрифужные пробирки
Титровальная плашка
Центрифуга > 1000g
Маленькие пробирки для реагентов или пробирки Эпендорфа
Водяная баня
Метод:
1. Выдержать образец спермы при комнатной температуре.
2. Измерить общий объём стерильным шприцем
3. Перенести 100 мкл семенной жидкости/семенной плазмы в тест-пробирку
4. Пипеткой внести 100 мкл стандартного раствора фруктозы (см. ниже как его
приготовить) в такую же отдельную тест-пробирку (и проводите те же манипуляции
как и с образцом семенной жидкости)
5. Добавить по 0,5 мл реагента 1 к образцу и стандарту и перемешайте
6. Центрифугировать 10 минут при 1000 g или больше
7. Пипеткой перенести по 20 мкл супернатанта и стандарта в чистые пробирки
Эпендорфа или маленькие пробирки для реагентов.
8. Приготовление контрольной пробирки. Добавить 200 мкл дистиллированной воды в
пустую пробирку Эпендорфа или маленькую пробирку для реагентов.
9. Добавить по 200 мкл реагента 2 в каждую из пробирок
10. Добавить по 20 мкл реагента 3 (индол) в каждую из пробирок
11. Запечатать пробирки и инкубировать 30 мин при 37оС в водяной бане или 60 мин при
37оС в сухом инкубаторе
12. Добавить 200 мкл реагента 4 для прекращения реакции окрашивания
13. Пипеткой перенести 200 мкл образца в кювету и замерить на фотометре при 470-492
нм
Стандарт фруктозы.
Набор содержит раствор фруктозы концентрации 5 мг/мл
Приготовьте стандартные растворы со следующими концентрациями фруктозы:
Стандартные растворы
Раствор фруктозы
Вода
5 мг/мл
100 мкл
0
2.5 мг/мл
50 мкл
50 мкл
1 мг/мл
20 мкл
80 мкл
Для приготовления растворов используйте очищенную (дистиллированную) воду
Интерпретация.
Измеренное в образце количество сравнивается со стандартной кривой (графиком)
(используются 3 стандартные концентрации, описанные выше) с количеством по оси Y и
концентрацией фруктозы по оси X.
Для того, чтобы найти общее содержание фруктозы, умножьте результат на общий объем
семени или семенной плазмы.
Норма в соответствии с ВОЗ составляет:
- 2,4 мг/эякулят или больше
- 13 ммоль/эякулят или больше
Примечание: Стандартный график строится до 0,5 мг/мл, меньшие количества фруктозы с
помощью этого набора не определяются.
Хранение.
Реагенты хранятся при температуре от 2о до 25оС. Хранить в темном месте. Использовать не
позднее 12-ти месяцев от даты изготовления.
Меры предосторожности
Реагент 1 (раствор ТСА): Вызывает сильные ожоги, токсичен для живых организмов и может
вызывать долгосрочные неблагоприятные последствия для окружающей среды. При
попадании в глаза немедленно промыть обильным количеством воды и обратиться к врачу.
При любых происшествиях, связанных с реагентом, или, если Вы почувствовали себя
нехорошо, немедленно обратитесь к врачу.
Реагент 2 (32%-раствор HCl): Вызывает ожоги, воздействует на дыхательную систему. При
попаданию в глаза немедленно промыть обильным количеством воды и обратиться к врачу.
При любых происшествиях связанных с реагентом, или если Вы почувствовали себя
нехорошо, немедленно обратитесь к врачу. Никогда не добавляйте воду в
концентрированную HCl.
Реагент 3 (Индол): Вреден при попадании внутрь. Избегайте попадания на кожу и глаза.
Легко горюч. Токсичен при попадании внутрь или при вдыхании паров.
Реагент 4 (раствор NaOH): Вызывает ожоги. При попадании в глаза немедленно промыть
обильным количеством воды и обратиться к врачу. При любых происшествиях связанных с
реагентом, или если Вы почувствовали себя нехорошо, немедленно обратитесь к врачу.
Предупреждение
Все человеческие и органические материалы могут быть потенциальными источниками
инфекций. Все манипуляции проводите с осторожностью. Используйте защитную одежду и
перчатки.
Расчет усилия-G
Расчет усилия -G вашей центрифуги рассчитывается по следующей формуле:
(перенести из инструкции)
Расчет g-forces
Расчет g-forces Вашей центрифуги производите по следующей формуле:
g = 1.118 * r * rpm²
или
rpm = Square root {g/(1.118*r)}
r – радиус центрифуги в мм
rpm – количество оборотов в минуту/1000
Square root - √ или корень квадратный из выражения
Пример 1:
r = 100 мм; rpm = 3000 оборотов в минуту
g = 1,118 х 100х 9 = 1006g
Пример 2:
r = 100 mm; g = 1200g
rpm = SQR{1200 /(1.118х100)}= 3.28
= 3280 оборотов в минуту