Техника приготовления растворов

Балашовский филиал
Саратовского государственного университета
им. Н. Г. Чернышевского
Методы приготовления
специальных растворов и сред
Учебно-методическое пособие
для студентов биологических
и экологических специальностей
Авторы-составители:
В. Н. Решетникова, М. А. Занина, Е. Б. Смирнова
Балашов
2007
УДК 541.1
ББК 24я73
М54
Авторы-составители:
В. Н. Решетникова — кандидат химических наук, доцент;
М. А. Занина — зав. кафедрой биологии и методики ее преподавания, кандидат
сельскохозяйственных наук, доцент;
Е. Б. Смирнова — кандидат сельскохозяйственных наук, доцент.
Рецензенты:
Кандидат сельскохозяйственных наук, профессор
Саратовского аграрного университета им. Н. И. Вавилова
Г. И. Караваева;
Кандидат химических наук, доцент Балашовского филиала
Саратовского государственного университета
им. Н. Г. Чернышевского
В. С. Гончаров.
Рекомендовано к изданию Научно-методическим советом
Балашовского филиала Саратовского государственного университета
им. Н. Г. Чернышевского.
М54 Методы приготовления специальных растворов и сред : учебнометодич. пособие для студ. биологич. и экологич. специальностей / авт.сост. В. Н. Решетникова, М. А. Занина, Е. Б. Смирнова. — Балашов :
Николаев, 2007. — 48 с.
ISBN 978-5-94035-300-3
В учебно-методическом пособии изложены методы приготовления
растворов, способы расчета концентраций, рецептура специальных растворов
и сред.
Пособие предназначено для студентов биологических и экологических
специальностей, учителей школ, преподавателей, аспирантов, лаборантов.
УДК 541.1
ББК 24я73
© Решетникова В. Н., Занина М. А.,
ISBN 978-5-94035-300-3
2
Смирнова Е. Б., 2007
3
Содержание
Введение .........................................................................................................................5
Общие сведения о растворах.........................................................................................6
Расчеты для приготовления растворов.......................................................................10
Техника приготовления растворов .............................................................................14
Растворы, используемые на занятиях по физиологии растений .............................17
Растворы, применяемые на занятиях по микробиологии ........................................23
Заключение ...................................................................................................................36
Список литературы ......................................................................................................36
Приложения ..................................................................................................................37
4
Введение
Биология,
химия
и
экология,
безусловно,
относятся
к
экспериментальным наукам. В биологическом и химическом
эксперименте центральная роль принадлежит жидким, очень частоводным растворам.
Для корректной постановки опыта и получения достоверных
результатов необходимо правильно рассчитать концентрации всех
используемых растворов. Помимо этого экспериментатор должен иметь
практические навыки их приготовления, уметь определять точные
концентрации титриметрическим методом.
В настоящем пособии описаны наиболее часто употребляющиеся
методики приготовления растворов твердых и жидких веществ,
приведены
многочисленные
примеры
расчетов,
представлены
специальные растворы и среды, которые применяются на практических и
лабораторных занятиях по микробиологии и физиологии растений.
Пособие может быть использовано студентами вузов, обучающимися
по специальностям: биология, химия, экология, агрономия, безопасность
жизнедеятельности, а также преподавателями, аспирантами и
лаборантами в учебной и научно-практической деятельности.
5
Общие сведения о растворах
Растворы имеют очень важное значение в жизни и практической
деятельности человека. Так, процессы усвоения пищи человеком и
животными связаны с переводом питательных веществ в раствор.
Растворами являются все важнейшие физиологические жидкости (кровь,
лимфа т. д.). Производственные процессы, в основе которых лежат
химические реакции, обычно проводятся в растворах.
Раствор — это однофазная система переменного состава, состоящая
из двух и более компонентов.
По агрегатному состоянию растворы могут быть: газообразными,
жидкими и твердыми. Газообразный раствор можно рассматривать как
физическую смесь газов, в которой каждый компонент проявляет
индивидуальные физические и химические свойства. Типичным
представителем газообразного раствора является воздух. Твердые растворы
образуются при совместной кристаллизации нескольких веществ из
расплавов. Примерами твердых растворов могут служить стекло, чугун,
легированные стали, сплавы цветных металлов (мельхиор, дюралюмин,
бронза, латунь и др.). Самыми многочисленными и важными для
биологических и химических процессов являются жидкие растворы.
Раствор состоит из растворителя и растворенных веществ. Компонент,
агрегатное состояние которого не изменяется при образовании раствора,
принято считать растворителем. Его содержание может варьировать от
некоторого определенного значения практически до 100 %. В среде
растворителя в виде очень мелких частиц распределено растворенное
вещество. По размеру растворенных частиц растворы подразделяются на
истинные и коллоидные.
В истинных растворах растворенное вещество присутствует в виде
атомов, молекул, ионов, эти частицы по величине сравнимы с молекулами
растворителя. Таким образом, получается гомогенная система, частицы
которой не разделяются под действием силы тяжести. В химии наибольшее
значение имеют истинные растворы.
В коллоидных системах размер частиц растворенного вещества
составляет 0,1—1 мкм, они гораздо крупнее молекул растворителя, т.е.
система гетерогенна, однако на отдельные фазы еще не разделяется.
Растворы таких важных для живых организмов веществ, как белки,
нуклеиновые кислоты, являются коллоидными.
Процесс растворения тесным образом связан с диффузией
растворенного вещества и растворителя. Диффузия — это движение
молекул или ионов из области с высокой концентрацией в область с более
6
низкой концентрацией. В биологических системах наблюдается особый
вид диффузии — осмос. Это явление связано с переходом молекул
растворителя (воды) через полупроницаемые перегородки, к которым
относятся мембраны клеток.
Важную роль при растворении играют химические процессы. В
жидких растворах частицы растворенного вещества связаны с
окружающими их частицами растворителя. Эти комплексы называются
сольватами, а для водных растворов — гидратами. Подобное
представление о растворах возникло еще в 60-х гг. XIX в. в результате
работ Д. И. Менделеева.
Доказательствами химического взаимодействия растворенного
вещества с растворителем являются тепловые эффекты, изменение
объемов или окраски, сопровождающие растворение. Например,
молекулярный йод имеет фиолетовую окраску, а его спиртовой раствор
— бурую.
Иногда вода настолько прочно связывается с частицами
растворенного вещества, что при выделении последнего из раствора
входит в состав его кристаллов. Такие кристаллические образования
называются кристаллогидратами, например, медный купорос CuSO4 ∙
5H2O.
Растворимость — это способность вещества растворяться в данном
растворителе. Количественно растворимость выражается в единицах
выражения
концентрации
(моль/л)
или
через
коэффициент
растворимости, который показывает массу (в граммах) растворенного
вещества, насыщающего 100 г растворителя.
До настоящего времени нет строгой научной теории, позволяющей
вывести общие правила растворимости.
Растворимость зависит от природы растворяемого вещества и
растворителя, температуры, давления, присутствия в растворе других
веществ. Способность веществ растворяться определяется характером сил
взаимодействия между компонентами раствора. Наибольшая взаимная
растворимость достигается, когда эти силы имеют подобный характер.
Вещества с малополярными связями хорошо растворимы в неполярных
жидкостях, например, хорошо растворяются в эфире, гексане, бензоле. В
то же время бензол, жиры и эфиры практически нерастворимы в воде
(высокополярном растворителе). Биологическая роль растворимости
веществ прежде всего связана со способностью их проходить через
биологические мембраны.
Одной из важных характеристик растворов является концентрация.
Концентрацией вещества называют содержание растворенного вещества
7
в единице объема или массы раствора. Концентрации растворов
выражаются несколькими способами.
1. Массовая доля растворенного вещества (Х) — это отношение
массы вещества m(Х) к массе всего раствора m:
(X) = m(X)/m или (X) = m(X)/m · 100 %.
В некоторых источниках можно встретить название «процентная
концентрация».
2. Молярная концентрация с(Х) — это отношение количества
растворенного вещества n(Х) к объему раствора V:
c(X) = n(X)/V (моль/л).
3. Моляльная концентрация сm(Х) — это отношение количества
растворенного вещества n(Х) к массе растворителя m(р):
cm(X) = n(X)/m(p) (моль/кг)
4. Нормальная (эквивалентная) концентрация сн(Х) — число
молярных масс эквивалента растворенного вещества в 1 л раствора:
cн(X) = m(X)/(Mэ(X) · V) = c(X)/Э(Х) (моль/л).
5. Титр раствора T(X) — это отношение массы вещества m(X)
в граммах к объему раствора V в миллилитрах:
Т(X) = m(X)/V (г/мл).
Молярную концентрацию иногда записывают с помощью знака М,
например запись «0,5 М раствор» обозначает «раствор, молярная
концентрация которого с = 0,5 моль/л»; для обозначения эквивалентной
(нормальной) концентрации используют букву н: 0,1 н раствор — это
раствор, нормальная концентрация которого сн = 0,1 моль/л. Раствор,
содержащий 0,1 моля вещества в 1 л раствора, называется децимолярным
(0,1 М), содержащий 0,01 моля вещества — сантимолярным (0,01 М),
содержащий 0,001 моля — миллимолярным (0,001 М).
Закон эквивалентов: вещества взаимодействуют друг с другом в
массовых (объемных) количествах, пропорциональных их эквивалентам.
Эквивалент (фактор эквивалентности) Э — это число,
обозначающее, какая доля реальной частицы вещества соответствует
одному иону водорода (или ОН-) в кислотно-основной реакции или
одному
электрону
в окислительно-восстановительной реакции.
Молярная масса эквивалента вещества М Э — это масса вещества,
эквивалентная 1 молю ионов водорода в кислотно-основной реакции или
1 молю электронов в окислительно-восстановительной реакции.
Молярная масса эквивалента равна произведению эквивалента и
молярной массы вещества: МЭ = Э · М.
8
Если в реакции участвуют вещества в газообразном состоянии, для
них часто используют эквивалентный объем VЭ — это объем, который
при данных условиях занимает молярная масса эквивалента вещества.
Элементы, обладающие переменной валентностью, имеют различные
значения эквивалентов. Эквивалент сложного вещества также может
иметь различные значения: величина его зависит от того, в какую
реакцию вступает данное вещество.
Для нахождения эквивалента сложного вещества нужно разделить
молярную массу: кислоты — на количество атомов водорода,
участвующих в реакции; основания — на количество гидроксильных групп,
участвующих в реакции; средней соли — на количество атомов металла,
участвующих
в реакции, умноженных на валентность этого металла. В общем случае
для определения эквивалента любого вещества достаточно установить,
в каком отношении оно взаимодействует с другим веществом, эквивалент
которого известен.
Закон эквивалентов: вещества взаимодействуют друг с другом в
массовых (объемных) количествах, пропорциональных их эквивалентам.
На основании закона эквивалентов можно сказать, что растворы
одинаковой нормальности взаимодействуют между собой в равных
объемах,
объемы
растворов
реагирующих
веществ
обратно
пропорциональны их эквивалентным концентрациям. Математически это
выражается формулой:
cn1 ∙ V1 = cn2 ∙ V2 или V1/V2 = cn2/cn1.
По величине растворимости вещества растворы могут быть
разбавленные, концентрированные и насыщенные.
Разбавленным
(слабым)
называют
раствор,
концентрация
растворенного вещества в котором низкая, далекая от величины
растворимости.
Концентрированным (крепким) называют раствор, в котором
концентрация растворенного вещества близка к величине его
растворимости.
Насыщенный раствор — это раствор, в котором концентрация
растворенного вещества достигает величины растворимости, и
начинается образование осадка.
Пример. Величина растворимости NaCl равна 36 г. Это значит, что
при нормальных условиях в 100 мл воды максимально может
раствориться 36 г NaCl. Тогда слабым раствором следует назвать
физиологический раствор, где концентрация NaCl составляет 0,9 г на 100
мл раствора. Концентрированными растворами NaCl будут 20—30%-е
гипертонические растворы.
9
Расчеты для приготовления растворов
Для того чтобы приготовить раствор с определенной концентрацией,
необходимо произвести некоторые предварительные расчеты. Порядок
расчетов будет зависеть от того, чем мы располагаем: препарат чистого
вещества (содержанием примесей можно пренебречь), маркировка ч, хч
или чда; технический препарат (содержание примесей значительно);
раствор вещества известной концентрации. Рассмотрим конкретные
примеры.
Пример 1. Приготовить 400 г 15 %-го раствора хлорида калия (KCl) из
чистого препарата.
Решение. 1. Рассчитываем массу KCl в 400 г раствора:
m(KCl) = m(р-ра) ∙ (KCl)/100 % = 400 ∙ 15/100 = 60 (г).
2. Вычисляем необходимую массу растворителя (воды):
m(H2O) = m(р-ра) – m(KCl) = 400 – 60 = 340 (г).
3. Определяем объем воды:
V(H2O) = m(H2O)/(H2O) = 340/ 1 = 340 (мл).
Ответ: в 340 мл воды растворить 60 г.
Пример 2. Приготовить 200 мл 25%-го раствора KCl.
Решение. 1. Для определения навески KCl необходимо рассчитать
массу 200 мл раствора, плотность раствора находим в справочнике
( = 1,17 г/мл):
m(р-ра) = V(р-ра) ∙ (р-ра) = 200 ∙ 1,17 = 234 (г).
2. Рассчитываем массу KCl в 234 г раствора:
m(KCl) = m(р-ра) ∙ (KCl)/100 % = 234 ∙ 25/100 = 58,5 (г).
3. Навеску KCl (58,5 г) помещаем в мерную посуду, растворяем в воде
и доводим общий объем раствора водой до 200 мл.
Ответ: 58,5 г растворить в воде и долить воду до 200 мл.
Пример 3. Приготовить 200 г 15%-го раствора сульфата меди (CuSO4)
из медного купороса (CuSO4 ∙ 5H2O).
Решение. 1. Рассчитываем массу CuSO4 в 200 г раствора:
m(CuSO4) = m(р-ра) ∙ (CuSO4)/100 % = 200 ∙ 15/100 = 30 (г).
2. Вещество сульфат меди отсутствует. Рассчитываем массу медного
купороса, где содержится 30 г CuSO4, для этого составляем пропорцию:
M(CuSO4) = 159,6 г/моль; M(CuSO4 ∙ 5H2O) = 249,7 г/моль;
в 249,7 г медного купороса содержится 159,6 г сульфата меди
в X г — 30 г
Х = 249,7 ∙ 30/159,6 = 46,9 (г), m(CuSO4 ∙ 5H2O) = 46,9 г.
3. Вычисляем массу воды:
m(H2O) = m(р-ра) – m(CuSO4 ∙ 5H2O) = 200 – 46,9 = 153,1 (г).
4. Определяем объем воды:
10
V(H2O) = m(H2O)/(H2O) = 153,1/1 = 153,1 (мл).
Ответ: в 153,1 мл воды растворить 46,9 г медного купороса.
Пример 4. Приготовить 0,5 л 2 М раствора KCl из чистого препарата.
Решение. 1. Определяем количество вещества KCl, которое должно
содержаться в 0,5 л раствора с молярной концентрацией c = 2 моль/л:
n(KCl) = c ∙V(р-ра) = 2 ∙ 0,5 = 1 (моль).
2. Находим массу KCl:
m(KCl) = n(KCl) ∙ M(KCl) = 1 ∙ 74,5 = 74,5 (г).
3. Навеску KCl (74,5 г) растворяем в воде и доводим объем раствора
до 0,5 л.
Ответ: растворить 74,5 г KCl и долить воду до 0,5 л.
Пример 5. Приготовить 400 г 15%-го раствора KCl из 25%-го раствора.
Решение. Обозначим исходный 25 %-й раствор как раствор 1, а 15%-й
раствор — раствор 2.
1. Рассчитываем массу KCl в 400 г раствора 2:
m(KCl) = m(р-ра)2 ∙ (KCl)2/100 % = 400 ∙ 15/100 = 60 (г).
2. КCl в виде сухого вещества отсутствует, но есть его 25%-й водный
раствор. Вычисляем массу 25%-го раствора, в котором содержится 60 г
KCl:
m(р-ра)1 = m(KCl) ∙ 100 %/(KCl)1 = 60 ∙ 100/25 = 240 (г).
3. Вычисляем необходимую массу воды:
m(H2O) = m(р-ра)2 – m(KCl) = 400 – 240 =160 (г).
4. Определяем объемы смешиваемых жидкостей:
V(H2O) = m(H2O)/(H2O) = 160/1 = 160 (мл);
по справочнику находим (или определяем с помощью ареометра)
плотность 25%-го раствора KCl  = 1,17 г/мл:
V(р-ра)1 = m(р-ра)1/ = 240/ 1,17 = 205 (мл).
Ответ: смешать 205 мл 25%-го раствора KCl и 160 мл воды.
Пример 6. Приготовить 0,5 л 4 М раствора HCl из
концентрированного раствора соляной кислоты ((HCl) = 38 %,  = 1,19
г/мл).
Решение. 1. Рассчитываем количество вещества HCl в 0,5 л раствора
с молярной концентрацией c = 4 моль/л:
n(HCl) = c ∙V(р-ра) = 4 ∙ 0,5 = 2 (моль).
2. Определяем массу HCl:
m(HCl) = n(HCl) ∙ M(Cl) = 2 ∙ 36,5 = 73 (г).
3. Газообразный хлороводород отсутствует, имеется реактив «соляная
кислота» — 38%-й водный раствор HCl. Находим массу раствора,
который содержит 73 г HCl:
m(р-ра) = m(HCl) ∙ 100 %/(HCl) = 73 ∙ 100/38 = 192 (г).
4. Определяем объем соляной кислоты:
11
V(р-ра) = m(р-ра)/ = 192/1,19 = 161,4 (мл).
5. 161,4 мл соляной кислоты помещаем в мерную посуду и добавляем
воду до требуемого объема.
Ответ: 161,4 мл 38%-го раствора HCl довести водой до 0,5 л.
Пример 7. Приготовить 0,5 л 6 н раствора H3PO4 из 100%-й
фосфорной кислоты.
Решение. 1. Вычисляем молярную массу эквивалента фосфорной
кислоты:
MЭ(H3PO4) = M(H3PO4 ) ∙ Э(H3PO4 ) = 98/3 = 32,67 (г/моль).
2. Рассчитываем массу H3PO4, необходимую для приготовления 0,5 л
раствора с нормальной концентрацией cn = 6 моль/л:
m(H3PO4 ) = cn ∙ MЭ(H3PO4 ) ∙ V(р-ра) = 6 ∙ 32,67 ∙ 0,5 = 98 (г).
3. В наличии имеется чистая фосфорная кислота, представляющая
собой жидкость ( = 1,87 г/мл). Определяем объем 98 г H3PO4:
V(H3PO4 ) = m(H3PO4 )/ = 98/1,87 = 52,4 мл.
4. Помещаем 52,4 мл фосфорной кислоты в мерную посуду и
добавляем воду до требуемого объема.
Ответ: 52,4 мл H3PO4 довести водой до 0,5 л.
Пример 8. Смешали 160 г 40%-го раствора и 40 г 20%-го раствора
одного и того же вещества. Какова процентная концентрация
полученного раствора?
Решение. Обозначим 40%-й раствор как раствор 1, 20%-й — раствор 2,
полученный — раствор 3.
1. Определяем массы вещества в растворах 1 и 2:
m(в-ва)1 = m(р-ра)1 ∙ 1/100 % = 160 ∙ 40/100 = 64 (г);
m(в-ва)2 = m(р-ра)2 ∙ 2/100 % = 40 ∙ 20/100 = 8 (г).
2. Находим массу вещества в растворе 3:
m(в-ва)3 = m(в-ва)1 + m(в-ва)2 = 64 + 8 = 72 (г).
3. Находим массу раствора 3:
m(р-ра)3 = m(р-ра)1 + m(р-ра)2 = 160 + 40 = 200 (г).
4. Определяем массовую долю растворенного вещества в полученном
растворе:
3 = m(в-ва)3/m(р-ра)3 ∙ 100 % = 72/200 ∙ 100 = 36 (%).
Ответ: процентная концентрация полученного раствора равна 36 %.
Пример 9. К 1 л 10%-го раствора КОН ( = 1,092 г/мл) прибавили
0,5 л 5%-го раствора КОН ( = 1,045 г/мл). Объем смеси довели до 2 л.
Вычислите молярную концентрацию полученного раствора.
Решение. 1. Вычисляем массу раствора 1:
m(р-ра)1 = V(р-ра)1· ρ1 = 1000 · 1,092 = 1092 (г).
2. Находим массу КОН в растворе 1:
m1(KOH) = m(р-ра)1· ω1 = 1092 · 0,1 = 109,2 (г).
12
3. Находим массу раствора 2:
m(р-ра)2 = V(р-ра)2· ρ2 = 500 · 1,045 = 522,5 (г).
4. Находим массу КОН в растворе 2:
m2(KOH) = m(р-ра)2· ω2 = 522,5 · 0,05 = 26,125 (г).
5. Находим массу КОН в полученном растворе:
m3(KOH) = m1(KOH) + m2(KOH) =109,2 + 26,125 = 135,325 (г).
6. Находим количество вещества КОН:
n(KOH) = m3(KOH)/M(KOH) = 135,325/56 = 2,42 (моль).
7. Вычисляем молярную концентрацию полученного раствора:
c = n(KOH)/V(р-ра) = 2,42/2 = 1,2 (моль/л).
Ответ: молярная концентрация полученного раствора с = 1,2 моль/л.
Пример 10. Определить титр 0,1 н раствора серной кислоты.
Решение. 1. Определяем молярную массу эквивалента серной кислоты:
MЭ(H2SO4) = M(H2SO4) ∙ Э(H2SO4) = 98/2 = 49 (г/моль).
2. Вычисляем массу H2SO4 в 1 л раствора с эквивалентной
концентрацией cn = 0,1 моль/л:
m(H2SO4) = cn ∙ MЭ(H2SO4) ∙ V(р-ра) = 0,1∙ 49 ∙ 1 = 4,9 (г).
3. Рассчитываем титр раствора:
в 1 000 мл раствора содержится 4,9 г H2SO4
в 1 мл — Х г
Х = 4,9/1 000 = 0,0049 (г); то есть Т = 0,0049 г/мл.
Ответ: титр 0,1 н раствора серной кислоты равен 0,0049 г/мл.
Пример 11. В 282 мл воды растворили 18 г фосфорной кислоты
H3PO4. Вычислите массовую долю растворенного вещества, молярную,
моляльную и нормальную концентрации полученного раствора, если его
плотность  = 1,031 г/см3.
Решение. 1. Вычисляем массовую долю растворенного вещества:
( H3PO4) = m(H3PO4)/m(р-ра) ∙ 100 % = 18/(18 + 282) ∙ 100 = 6 (%).
2. Для удобства расчетов перейдем к объему раствора 1 л. Определяем
массу раствора:
m(р-ра) =  · V(р-ра) = 1,031 · 1000 = 1 031 (г).
3. Находим массу H3PO4 в 1 031 г раствора:
m(H3PO4) = (H3PO4) · m(р-ра)/100 % = 6 · 1031/100 = 61,86 (г).
4. Определяем количество вещества H3PO4:
n(H3PO4) = m(H3PO4)/M(H3PO4) = 61,86/98 = 0,63 (моль).
5. Вычисляем молярную концентрацию раствора:
с = n(H3PO4)/V(р-ра) = 0,63/1 = 0,63 моль/л.
6. Вычисляем моляльную концентрацию раствора. Это число моль
растворенного вещества в 1 000 г растворителя. Составляем пропорцию:
в 282 г воды — 18 г H3PO4
13
в 1 000 г воды — X г
X = 1000 · 18/282 = 63,83 (г)
n(H3PO4) = m(H3PO4)/M(H3PO4) = 63,83/98 = 0,65 (моль)
Следовательно, cm = 0,68 моль/кг.
7. Находим нормальную концентрацию раствора:
MЭ(H3PO4) = M(H3PO4)/3 = 98/3 = 32,66 (г/моль).
cн = m(H3PO4)/(MЭ(H3PO4)·V(р-ра)) = 61,86/(32,66 ·1) = 1,89 (моль/л).
Ответ: массовая доля растворенного вещества 6 %; молярная
концентрация раствора равна 0,63 моль/л; моляльная концентрация
раствора равна 0,68 моль/кг; нормальная концентрация раствора
составляет
1,89 моль/л.
Техника приготовления растворов
По точности выражения концентрации растворы условно можно
разделить на две группы: приблизительные и точные. К приблизительным
обычно относят процентные растворы, где содержание растворенного
вещества выражается через его массовую долю. Точными растворами
можно считать молярные, нормальные и титрованные.
Техника приготовления приблизительных растворов
При приготовлении приблизительных растворов твердые вещества
взвешивают на технических весах, жидкости отмеряют мерными
цилиндрами.
а) растворы солей. Навеску соли переносят в колбу или стакан.
Добавляют часть (треть или половину) необходимого количества
растворителя. Энергично перемешивают до полного растворения навески
(иногда для этого требуется нагревание). Добавляют оставшийся
растворитель, раствор фильтруют в подготовленную бутыль.
б) растворы щелочей. При приготовлении растворов щелочей следует
соблюдать следующие правила техники безопасности: взвешивать
щелочь в стеклянной или фарфоровой посуде; не брать щелочь голыми
руками; не класть щелочь на бумагу; для растворения нельзя
использовать толстостенные бутыли, так как из-за сильного разогревания
раствора бутыль может лопнуть.
Навеску щелочи помещают в стакан или большую фарфоровую
чашку, добавляют воду, чтобы получился 35—40%-й раствор.
Содержимое перемешивают стеклянной палочкой до полного
растворения щелочи. Раствор оставляют стоять до остывания и
выпадения осадка (в осадок могут выпадать примеси). Раствор осторожно
14
переливают в другой сосуд, куда добавляют нужное количество воды.
Крепкие растворы щелочей хранят в полиэтиленовых бутылках.
в) растворы кислот. При приготовлении растворов кислот
необходимо соблюдать следующие правила: нельзя использовать для
растворения толстостенную посуду; нельзя лить воду в кислоту.
Кислоту и воду отмеряют мерными цилиндрами. В колбу наливают
рассчитанное количество воды, затем постепенно, тонкой струйкой при
помешивании добавляют нужное количество кислоты.
Техника приготовления точных растворов
Точные растворы всегда готовят в мерных колбах и хранят в плотно
закрытых бутылях или колбах с притертыми пробками.
а) приготовление раствора из фиксанала. Фиксанал — это запаянная
стеклянная ампула с известным количеством какого-либо вещества. На
ампуле написано название вещества и указана нормальная концентрация
раствора. Для получения раствора необходимо содержимое ампулы
поместить в мерную колбу объемом один литр и добавить воду.
В чистую мерную колбу помещают сухую воронку, в которую
вставляют специальный стеклянный боек. Ампулу протирают спиртом,
чтобы удалить надпись, моют и обмывают дистиллированной водой.
Затем вставляют ампулу в воронку так, чтобы она своим тонким
изогнутым дном касалась бойка, приподнимают ее и слегка ударяют о
конец бойка, пробивая дно ампулы. При этом содержимое ампулы
попадает через воронку в мерную колбу. С противоположного конца
ампулы пробивают отверстие специальной стеклянной палочкой с
острым концом. Через верхнее отверстие многократно маленькими
порциями промывают дистиллированной водой из промывалки
внутренние стенки ампулы, наружные споласкивают, ампулу
выбрасывают, ополаскивают воронку и боек, вынимают воронку и
обмывают верхнюю часть шейки колбы. Если вещество находилось в
твердом состоянии, необходимо проследить за его полным растворением.
Осторожно мелкими порциями добавляют воду до тех пор, пока
нижняя часть мениска не будет касаться метки на шейке колбы.
Закрывают колбу пробкой и перемешивают раствор.
б) приготовление раствора по точной навеске. Этот способ можно
использовать для твердых веществ высокой степени чистоты, обычно так
готовят растворы солей, некоторых органических веществ. Точную
навеску делают на аналитических весах в бюксе или на часовом стекле.
Через сухую воронку навеску очень аккуратно всыпают в чистую мерную
колбу. Остатки вещества тщательно смывают через воронку в колбу.
Обмывают внутренние стенки воронки. Объем жидкости в колбе не
должен превышать половины. Колбу закрывают пробкой и
15
вращательными движениями перемешивают содержимое до полного
растворения навески. После этого доливают воду до метки на шейке
колбы, как было описано выше.
в) приготовление раствора по приблизительно взятой навеске.
Данный способ применяется в тех случаях, когда нет препарата высокой
степени чистоты. Рассчитанную навеску можно взвешивать на
технических весах, воду и другие жидкости отмерять цилиндром. После
приготовления приблизительного раствора, его точную концентрацию
устанавливают с помощью титриметрического (объемного) анализа.
Сущность процесса титрования состоит в следующем. К исследуемому
(титруемому) раствору мелкими порциями, по каплям, добавляют рабочий
раствор реагента (титранта), точная концентрация которого известна.
Момент окончания реакции (точка эквивалентности) фиксируется по
изменению какого-либо физико-химического показателя титруемого
раствора, чаще всего окраски.
С помощью пипетки определенный объем титруемого раствора
переносят в коническую колбу. Размер колбы подбирают таким образом,
чтобы общий объем жидкости в конце титрования не превышал половины
объема колбы. В колбу добавляют одну-две капли индикатора, если этого
требует конкретная методика.
Бюретку наполняют рабочим раствором, добиваясь, чтобы в ней
не было пузырьков воздуха. Объем рабочего раствора в бюретке доводят
до нулевого уровня по мениску.
Колбу с титруемым раствором подставляют под бюретку. Открывают
кран бюретки и медленно выпускают из нее раствор. Во время
титрования содержимое колбы постоянно перемешивают вращательными
движениями. Под колбу рекомендуется положить лист белой бумаги,
чтобы лучше отличить изменение цвета. Титрование проводят в трех
параллельных пробах, каждый раз отмечая объем рабочего раствора,
затраченного на реакцию.
По объему использованного рабочего раствора определяют точную
концентрацию титруемого раствора. Для удобства расчетов берут
рабочие растворы с известным титром или известной нормальной
концентрацией. Рассмотрим несколько примеров расчетов по результатам
титрования.
Пример 1. На титрование 25 мл раствора щелочи израсходовано 50 мл
0,25 н раствора кислоты. Определите нормальную концентрацию
раствора щелочи.
Решение. По закону эквивалентов: V(к)/V(щ) = cn(щ)/cn(к);
cn(щ) = V(к) ∙ cn(к)/V(щ) = 50 ∙ 0,25/ 25 = 0,5 (моль/л).
Ответ: нормальная концентрация раствора щелочи равна 0,5 моль/л.
16
Пример 2. Навеску карбоната натрия Na2CO3 растворили в мерной
колбе на 250 мл, пипеткой взяли 25,00 мл раствора. На его титрование
пошло 20,20 мл 0,101 н раствора хлороводородной кислоты. Определите
массу Na2CO3.
Решение. 1. С помощью закона эквивалентов определяем нормальную
концентрацию раствора Na2CO3:
cn(Na2CO3) = cn(HCl) ∙V(HCl)/V(Na2CO3) = 20,20 ∙ 0,101/25,00 =
= 0,8160 (моль/л).
2. Находим титр раствора Na2CO3:
T(Na2CO3) = cn(Na2CO3) ∙ M (Na2CO3)/1 000 = 0,08160 ∙ 53/1 000 =
= 0,04325 (г/мл).
3. Рассчитываем массу карбоната натрия:
m(Na2CO3) = T(Na2CO3) ∙ V(Na2CO3) = 0,04325 ∙ 250 = 10,81 (г).
Ответ: масса Na2CO3 равна 10,81 г.
Пример 3. Рассчитайте, сколько гидроксида натрия содержится в 500 мл
раствора, если на титрования 20 мл этого раствора идет 20,80 мл
хлороводородной кислоты, титр которой равен 0,002022 г/мл.
Решение. 1. Уравнение реакции: NaOH + HCl = NaCl + HOH.
2. Рассчитываем массу HCl в 20,80 мл раствора:
m(HCl) = V(HCl) ∙ T(HCl) = 20,80 ∙ 0,002022 = 0,04206 (г).
3. Определяем количество вещества HCl:
n(HCl) = m(HCl)/M(HCl) = 0,04206/36,46 = 0,001153 (моль).
4. Количество вещества NaOH в 20 мл раствора:
по уравнению реакции n(NaOH) = n(HCl) = 0,001153 (моль).
5. По пропорции находим n(NaOH) в 500 мл раствора:
в 20 мл раствора содержится 0,001153 моль
в 500 мл — Х моль
Х = 500 ∙ 0,001153/20 = 0,0288 (моль) = n(NaOH).
6. Рассчитываем массу гидроксида натрия:
m(NaOH) = n(NaOH) ∙ M(NaOH) = 0,0288 ∙ 39,99 = 1,1517 (г).
Ответ: масса NaOH равна 1,1517 г.
Растворы, используемые
на занятиях по физиологии растений
Растворы
1. Баритовая вода. На 1 л раствора берут 7—10 г гидроксида бария.
Растворяют его в 100 мл дистиллированной воды (при слабом
нагревании). Затем быстро и плотно закупоривают сосуд и в течение 10—
15 мин взбалтывают. Процедуру повторяют 10—15 раз в продолжение
суток. Затем, когда раствор отстоится, через сифон осторожно
17
переливают
его
в бутылку (лучше такого же объема). Сифонные трубки должны быть
плотно вставлены в пробки бутылок, иначе при соприкосновении с
углекислотой воздуха раствор будет мутнеть.
2. Вода без СО2. Дистиллированную воду прокипятить не менее
30 мин для удаления растворенного СО2. Перелить в склянку с плотно
закрывающейся крышкой, закрыть и охладить.
3. Дезинфицирующие растворы: 3—5%-й раствор фенола, 0,5—3%-й
раствор хлорамина, 2—3%-й раствор NaHCО3; формалина 1 мл в 300 мл
воды, 1%-й раствор перманганата калия и др.
4. Калий едкий для просветления срезов. 5%-й раствор хранят в
пузырьке с корковой пробкой, пропитанной парафином. Иногда
используют 30%-й NaOH или КОН для той же цели.
5. Концентрированные растворы пигментов для изучения
оптических свойств:
а) хлорофилл в смеси пигментов. Сухие листья крапивы измельчают
и наполняют ими склянку темного стекла на 2/3 объема. Заливают
этанолом на 2—3 см выше уровня листьев и оставляют на 5—7 дней в
холодильнике для экстракции, а затем экстракт отфильтровывают;
б) каротин. 2—3 корнеплода моркови размельчают на терке, помещают
в темную склянку и заливают бензином на 1—2 см выше уровня ткани.
Оставляют в холодильнике на 5—7 дней, а затем отфильтровывают;
в) ксантофилл. К вытяжке пигментов (см. подпункт а) добавляют
бензин в соотношении 1:1 и 1—2 капли воды. Резко встряхивают.
Верхний зеленый слой отбирают пипеткой. Если нижний слой имеет
зеленоватый оттенок, доливают чистый бензин и 1—2 капли воды и опять
встряхивают. Процедуру повторяют до полного удаления зеленого оттенка.
Чистоту пигментов контролируют с помощью спектрофотометра или
спектроскопа.
6. Люголя раствор (для окраски крахмала, гликогена, гранулезы белков).
I способ. Кристаллический йод — 7 г, йодид калия — 20 г,
дистиллированная вода — до 300 мл. Йодид растирают в ступке с 10 мл
дистиллированной воды, добавляя навеску йода. И вновь растирают до
полного растворения йода в йодиде калия (йод в воде нерастворим).
Раствор переносят в склянку, общий объем доводят до 300 мл
дистиллированной водой. Раствор хранят в темной склянке 30 дней.
II способ. Наиболее часто используют рецепт Грама: 2 г йодида калия
растворяют при нагревании в 5 мл дистиллированной воды; затем в этом
растворе растворяют 1 г металлического йода, после чего добавляют воды
до 300 мл. Хранят в оранжевой склянке с притертой пробкой. Под
действием реактива крахмальные зерна окрашиваются до черного и
18
голубого цветов, а белки (алейроновые зерна, цитоплазма) — в желтый
цвет. Для обнаружения белков чаще применяют видоизмененный раствор
следующего состава: 1 г йода + 3 г йодида калия + 100 мл воды.
7. Фитогормоны для обработки растений:
а) навески веществ ИУК (индолилуксусная кислота), абсцизовой
кислоты, гиббереллина в необходимой концентрации (мг/л, М, % и т. д.)
растворяют в небольшом количестве этанола (0,2—1 мл) и доводят объем
водой до нужного;
б) кинетин (20 мг/л). Навеску 2 мг растворяют в 1—3 мл 0,1 н КОН,
доводят значение рН до 6,5—7, добавляя 0,1 н НС1, а затем
дистиллированной водой доводят объем до 100 мл;
в) ланолиновая паста с ИУК. В фарфоровую чашку помещают 5 г
ланолина, приливают 5 мл 0,01%-го раствора ИУК и тщательно
растирают смесь стеклянной палочкой до гомогената белого цвета.
Хранят в холодильнике.
19
8. Растворы для охлаждения (табл. 1).
Таблица 1
Соли, добавляемые на
100 частей снега
Охлаждающие смеси
Достигаемая
Соли, добавляемые на
температура,
100 частей снега
оС
Достигаемая
температура,
оС
30 частей КСl
–10,9
9 частей KN03 + 67
частей NH4CNS
–28,2
25 частей NH4C1
–15,4
32 части NH NO + 59
частей NH4CNS
–30,6
45 частей NH4 NО3
–16,7
54,5 части NaN03 + 39,5
части NH4CNS
–37,4
50 частей NaN03
–17,7
143
части
СаС12
(кристаллический)
–50,0
33 части NaCl
–21,3
—
—
9. Формалин СН20. Стандартный раствор формалина содержит
37—37,3%-й формальдегид, 6—15%-й метанол, который используют
в качестве стабилизатора, и 0,02—0,04%-ю муравьиную кислоту,
благодаря чему раствор имеет кислую реакцию среды (рН 2,8—4,0).
Формальдегид полимеризуется с образованием параформальдегида,
который при длительном хранении раствора выпадает в осадок. При
наличии мути или осадка формалин перед употреблением фильтруют, что
несколько снижает концентрацию формальдегида. Целесообразнее
подогреть препарат до температуры 50 оС и выдержать в термостате при
этой температуре 24 ч. Следует иметь в виду, что формалин токсичен.
Предельно допустимая концентрация его в воздухе — 0,001 мг/дм3.
Хранят формалин в стеклянной таре, в защищенном от света месте,
при температуре не ниже 21 ºС — для высшего сорта, и не ниже 7 ºС —
для первого сорта.
10. Хромовая смесь для мытья посуды — «хромпик». В
концентрированную серную кислоту добавляют 5 % (от объема кислоты)
хорошо размельченного дихромата калия. Полученную смесь
взбалтывают и оставляют на сутки для растворения. Готовый раствор
имеет темно-оранжевый цвет и может быть применен для мытья посуды.
Изменение цвета хромовой смеси на темно-зеленый свидетельствует о ее
непригодности.
11. Флороглюцин — для выявления лигнина. Один грамм
флороглюцина растворяют в 100 мл 96%-го этанола.
20
12. Хлорида натрия насыщенный раствор. В коническую колбу
вместимостью 200 см3 вносят 26,4 г хлорида натрия и 100 см 3
дистиллированной воды температурой 25 ºС. Содержимое колбы
перемешивают. Колбу закрывают пробкой и выдерживают при
температуре 25 ºС в течение нескольких часов. После этого содержимое
отфильтровывают.
13. Изотонический коэффициент (NaCl) для расчета осмотического
потенциала по уравнению Вант-Гоффа (табл. 2).
Таблица 2
Значение изотонического коэффициента i для растворов NaCl (20 ºС)
NaCl, M
i
1,0
0,8
0,7
0,6
0,5
0,4
0,3
0,2
0,1
0,01
1,62
1,64
1,66
1,68
1,70
1,73
1,75
1,78
1,83
1,93
Здесь i — 1 + а (п — 1), где а — степень диссоциации; п — число
ионов, на которое диссоциирует молекула.
Реактивы
1. Вазелиновое масло предотвращает испарение с поверхности срезов.
2. Глицерин [С3Н5(ОН)3] употребляют для просветления временных
препаратов (2 части глицерина, 1 часть воды), для сохранения срезов, для
приготовления глицерин-желатины и для других целей.
3. Иммерсионное масло — очищенное и сгущенное кедровое масло
(п = 1,515). Применяют для рассмотрения препаратов при работе с
объективом ×90. Каплю иммерсионного масла помещают между
объективом
и покровным стеклом препарата. Для удаления иммерсионного масла
с объективов и препаратов применяют бензин или спирт.
4. Канадский бальзам — смола некоторых видов пихты, растворенная
в ксилоле до консистенций жидкого меда. Используют как лучшую среду
для приготовления постоянных препаратов.
5. Спирт абсолютный — обычный этиловый спирт-ректификат,
имеет крепость 96 %. Некоторые опыты проводят с абсолютным спиртом.
Для его получения небольшое количество CuSО4 · 5H2О тщательно
растирают в ступке и прокаливают в фарфоровом тигле до полного
перехода синей окраски порошка в белую, что указывает на обезвоживание
медного купороса. После остывания тигля (в эксикаторе) обезвоженный
сульфид меди высыпают в склянку со спиртом и плотно закрывают
пробкой.
6. Дитизон — реактив на тяжелые металлы. Три миллиграмма
дитизона растворяют в 6 мл ацетона, добавляют 2 мл Н 2О и 1—2 капли
ледяной уксусной кислоты. Используют свежеприготовленный раствор.
Фиксирующие жидкости
21
1. Этанол 70—80%-й. Время фиксации 12 ч.
2. Уксусный алкоголь. Состав: 3 части абсолютного (или 96%-го)
этанола и 1 часть ледяной уксусной кислоты. Продолжительность
фиксации от 2 до 12 ч, после чего материал промывают тремя сменами
80%-го этанола.
3. Фиксатор Чемберлена. Состав: 50—70%-го этанола — 90 частей,
40%-го формалина — 5 частей, ледяной уксусной кислоты — 5 частей.
Продолжительность фиксации 12—16 ч. В фиксаторе можно хранить
материал долгое время.
4. Фиксатор Карнуа. 96%-й этанол — 60 мл, хлороформ — 30 мл,
ледяная уксусная кислота — 10 мл. Время фиксации 12 ч.
Красители
1. Нейтральный красный для прижизненного окрашивания клеток.
Сначала готовят концентрированный раствор, который можно хранить.
0,1 г нейтрального красного растворяют в 60 мл этанола и добавляют
воды до 100 мл. Для прижизненной окраски этот раствор разбавляют
перед употреблением водопроводной водой, имеющей рН 7, в отношении
1:10 000.
2. Сафранин. 2,5%-й раствор сафранина в 96%-м этаноле — 10 мл;
вода дистиллированная — 100 мл. В виде концентрированного водного
раствора используется как реактив на лигнин. Срезы помещают в каплю
воды или глицерина и слегка подкрашивают сафранином. Одревесневшие
оболочки окрашиваются в красный цвет.
3. Судан III и Судан IV для окраски жиров кутина, суберина в
концентрации 0,5 % в 96%-м этиловом спирте или концентрированной
молочной кислоте.
4. Метиленовый синий. Шесть граммов растворяют в 100 мл 96%-го
этанола. Навеску краски высыпают в склянку из темного стекла, заливают
спиртом и ставят в термостат при температуре 37 оС на 18—24 ч,
периодически встряхивая раствор. За это время большая часть краски
растворяется, на дне склянки остается небольшой осадок,
свидетельствующий
о насыщении раствора. На основе насыщенных растворов готовят водные
растворы красок на дистиллированной воде, используя красители в
соотношении: 1:100; 1:1 000 (для прижизненных препаратов и метода
Шардакова, обнаружения выделения О2 при фотосинтезе) или 1:10; 1:40
(для постоянных препаратов).
5. Фуксин основной. Десять граммов краски растворяют в 100 мл
96%-го этанола.
Кислотно-основные индикаторы
22
1. Метиловый красный для определения фотосенсибилизирующей
активности хлорофилла. Область перехода окраски индикатора рН 4,2—
6,2, навеску в 0,2 г растворяют в 60 мл 96%-го этанола и добавляют воды
до 100 мл.
2. Метиловый красный для титрования слабых оснований и аммиака.
Водный раствор метилового красного окрашен в оранжевый цвет.
Несколько капель такого раствора окрашивают 50—100 мл воды в
бледно-желтый цвет. Главное преимущество этого индикатора состоит в
чрезвычайно резком переходе бледно-желтой окраски в фиолетовокрасную от одной капли соляной кислоты (без промежуточных оттенков),
которая почти обесцвечивается от одной капли 0,1 гидроксида натрия.
Для приготовления раствора метилового красного берут навеску 0,02 г и
растворяют ее в 100 мл горячей воды. После охлаждения раствора его
фильтруют. На каждые 100 мл титруемого раствора берут 2—3 капли
индикатора.
Способы приготовления и свойства отдельных индикаторов
приведены в таблице 5 приложения 2.
Растворы, применяемые
на занятиях по микробиологии
Составление сред и растворов
Культивирование микроорганизмов является одним из основных
методов микробиологии. Оно основано на знании метаболизма
микроорганизмов и понимании значения физико-химических условий
среды, необходимых для их жизнедеятельности.
Потребности микроорганизмов в питательных веществах чрезвычайно
разнообразны. Питательная среда должна включать доступный для
клетки источник энергии. Среда также должна содержать все
необходимые компоненты для реализации конструктивных процессов в
клетке, причем синтетические способности микроорганизмов могут
варьировать от использования CO2 в качестве единственного источника
углерода (автотрофы). До потребности в более восстановленных
соединений углерода — кислотах, спиртах, углеводах и др.
(гетеротрофы).
По способности использовать те или иные источники азота
микроорганизмы также существенно отличаются друг от друга. Одни
довольствуются молекулярным азотом воздуха, другие требуют
присутствия
в среде неорганических солей азота. Третьим нужна одна или несколько
аминокислот.
23
Для построения вещества клетки микроорганизмам необходимы
фосфор, сера, калий и др. Потребности разных групп микроорганизмов в
зольных элементах удовлетворяются обычно за счет минеральных солей.
Например, источником магния служит MgCO4, источником натрия
и хлора — NaCl, кальция — CaCO3 или CaCl2. Железо вносят в среды
в виде хлорида, сульфата или цитрата. Чтобы избежать выпадения осадка
в результате образования нерастворимых комплексы фосфатов с
некоторыми катионами, особенно железа или кальцием, к средам
рекомендуется добавить от 0,001 до 1 г/л этилендиаминтетраацетата
(ЭДТА) или гексаметафосфата натрия в концентрации 4 г/л. Комплексы,
образуемые этими соединениями с катионами, служат резервом, из
которого в результате диссоциации поступают свободные катионы.
Среды для культивирования различных микроорганизмов
Среды, обеспечивающие рост различных гетеротрофных бактерий
1. Мясопептонный бульон (МПБ)
Основой для приготовления МПБ служит мясная вода, которая
готовится следующим образом: мясо освобождают от костей, жира и
сухожилий, мелко нарезают или пропускают через мясорубку. 500 г
полученного фарша, заливают 1 л водопроводной воды и оставляют для
экстракции при комнатной температуре на 12 ч или в термостате при 30
ºС на 6 ч, или при температуре 37—39 ºС на 2 ч, а при 50 ºС — на 1 ч. За
это время из мяса экстрагируются различные вещества, в том числе
водорастворимые витамины. Затем мясо отжимают через марлю, и
полученный настой кипятят 30 мин. При том свертываются белки.
Остывшую массу фильтруют через ватный фильтр и доливают водой до
первоначального
объема.
К полученной мясной воде добавляют 1 % пептона и 0,5 % NaCl.
МПБ — богатая питательная среда, но она почти не содержит
углевода. В случае необходимости их добавляют к МПБ чаще всего в
количестве 1—2 г на 100 мл.
2. Дрожжевая среда
Используется для культивирования различных представителей
гетеротрофных микроорганизмов. Основа дрожжевой среды —
дрожжевая вода. Для ее приготовления 70—100 г свежих прессованных
дрожжей
или
7—10 г сухих дрожжей кипятят 30 мин в 1 л водопроводной воды. Затем
массе дают отстояться в высоком цилиндре на холоде, жидкость
декантируют и фильтруют через вату. К фильтрату добавляют 1 л воды,
еще кипятят 30 мин и вновь фильтруют. К полученной дрожжевой воде
добавляют K2HPO4 (0,1 %) и NaCl (0,5), а в случае необходимости
углеводы (1—2 %). Доводят pH полученной среды до 6,8—7,2.
24
3. Почвенная вытяжка (почвенный экстракт)
Используется для выделения и культивирования многих почвенных
бактерий. 500 г плодородной почвы заливают 1,5 л водопроводной воды и
автоклавируют 30 мин при 1 ати. Полученный экстракт фильтруют через
бумажный фильтр, добавляют к горячему фильтрату 0,5 г CaCO3,
тщательно перемешивают и через 5—7 мин фильтруют вновь. К
экстракту, как правило, добавляют 0,2 г K2HPO4 и доводят объем до 1 л,
pH 6,8—7,0. Среду стерилизуют при 1,5 ати 30 мин.
4. Картофельная среда
Используют в основном для культивирования спорообразующих
бактерий, представителей рода Caulobacter и некоторых других
хемоорганотрофных бактерий. В сухом веществе картофеля содержатся
5—13 % азотистых веществ и около 75 % углеводов, он богат
соединениями
калия
и фосфора, некоторыми витаминами. На картофельных средах хорошо
развиваются микроорганизмы, образующие амилолитические ферменты,
но чаще других на них выращивают представителей рода Clostridium.
Клубни картофеля, отобранные для приготовления этой среды,
тщательно моют, очищают от кожуры, глазков и испорченных мест и
снова моют. Двести граммов мелко нарезанного картофеля заливают 1 л
водопроводной воды и кипятят 30 мин. Отвар фильтруют через вату,
доводят объем фильтрата до 1 л и разливают в сосуды для
культивирования.
5. Цельное молоко
Молоко содержит все питательные вещества, необходимые для
развития гетеротрофных микроорганизмов: лактозы — около 4,5 %,
белков — 5,0 %, минеральных соединений — 1 %, витамины. В молоке
без добавок содержится примерно 0,01 % свободных аминокислот,
которые содержится в средах, обеспечивающих оптимальный рост
бактерий. Для того чтобы добиться нормального роста н среде с казеином
молока в качестве основного источника азота, у организмов должна быть
определенная способность к протеолизу.
6. Крахмало-аммиачная среда (КАА)
Среда состава (г): растворимый крахмал — 10,0; (NH4)2SO2 — 2,0;
K2HPO4 — 1,0; MgSO4 ·7H2O — 1,0; NaCl — 1,0; CaCO3 — 3,0; агар —
15,0; вода водопроводная — 1 000 мл. Крахмал предварительно
заваривают отдельно в небольшом количестве горячей воды и затем
приливают к остальной среде. Среду стерилизуют при 1 ати 20—30 мин.
7. Среда Чапека
25
Среда состава (г): сахароза — 30,0 или глюкоза — 20,0; NaNO3 — 2,0;
K2HPO4 — 1,0; MgSO4 · 7H2O — 0,5; KCl — 0,5; FeSO4 · 7H2O — 0,1; вода
дистиллированная — 1 000 мл. Среду стерилизуют при 0,5 ати 20—30 мин.
Среды для молочнокислых бактерий
1. Обезжиренное молоко
Для приготовления питательных средств часто используют
обезжиренное молоко (так называемый обрат), поскольку жир в молоке
может неблагоприятно влиять на рост некоторых микроорганизмов.
Цельное молоко сепарируют и далее поступают так же, как при
использовании цельного молока. Обезжиренное молоко можно также
получить путем центрифугирования или кипячения с последующим
отстаиванием в холодильнике в течение двух суток.
2. Среда MRS
Среда состава (г): гидролизат казеина — 10,0; мясной экстракт —
10,0; дрожжевой экстракт — 5,0; глюкоза — 20,0; ацетат натрия — 5,0;
цитрат аммония (двузамещенный) — 2,0; твин 0,8—1,0; K2HPO4 — 2,0;
MgSO4 · 7H2O — 0,2; MnSO4 · 4H2O — 0,5; вода дистиллированная —
1000 мл; pH 6,2 — 6,5. Среду стерилизуют при 0,5 ати 20—30 мин.
Среда для сапротрофных бактерий
Среда для сапротрофных коринебактерий
Среда состава (г): гидролизат казеина — 10,0; дрожжевой экстракт —
5,0; глюкоза — 5,0; NaCl — 5,0; вода дистиллированная — 1 000 мл;
pH 7,2—7,4. Среду стерилизуют при 0,5 ати 20—30 мин.
Среды для актиномицетов
1. Овсяный агар (ISP-3)
Среду применяют для хранения и определения культурных, а также
морфологических признаков. Овсяная мука (или хлопья) — 20,0 г; агар —
20,0—25,0 г; вода дистиллированная — 1 000 мл; следы солей — FeSO4 —
0,1 г; MnCl2 — 0,1 г; ZnSO4 — 0,1 г. Вместо дистиллированной воды и
солей можно использовать водопроводную воду. Для приготовления
среды овсяную муку (или хлопья) варят в 1 л воды 20 мин, фильтруют и
доводят объема до 1 л. Среду стерилизуют при 0,5 ати 20—30 мин.
2. Среда Красильникова № 1
Среда состава (г): глюкоза — 20,0; KNO3 — 1,0; K2HPO4 — 0,5;
MgSO4 · 7H2O — 0,5; NaCl — 0,5; CaCO3 — 1,0; FeSO4 · 7H2O — следы;
вода водопроводная — 1 000 мл; pH 7,0—7,2. Среду стерилизуют при
0,5 ати 20—30 мин.
3. Среда Красильникова
26
Среда состава (г): крахмал растворимый — 10,0; кукурузный экстракт —
10,0; (NH4)2SO4 — 3,0; NaCl — 0,3; CaCO3 — 3,0; вода водопроводная —
1000 мл; pH 7,0—7,2. Среду стерилизуют при 0,5 ати 20—30 мин.
4. Среда Красильникова
Среда состава (г): крахмал растворимый — 15,0; кукурузный экстракт —
10,0; (NH4)2SO4 — 4,0; K2HPO4 — 2,0; CaCO3 — 3,0; вода водопроводная —
1000 мл; pH 6,6—7,2. Среду стерилизуют при 0,5 ати 20—30 мин.
5. Среда Гаузе
Среда состава (г): крахмал растворимый — 20,0; KNO3 — 1,0; K2HPO4 —
0,5; MgSO4 · 7H2O — 0,5; NaCl — 0,5; FeSO4 · 7H2O — следы; вода
водопроводная — 1 000 мл; pH 7,2—7,4. Среду стерилизуют при 0,5 ати 20—
30 мин.
6. Среда Ваксмана
Среда состава (г): глицерин — 3,0; K2HPO4 — 1,0; NaNO3 — 2,0;
MgSO4 · 7H2O — 0,5; KCl — 0,5; FeSO4 · 7H2O — 0,01; вода
водопроводная — 1 000 мл; pH 7,0. Среду стерилизуют при 0,5 ати 20—
30 мин.
Среда для микроорганизмов
1. Среда Хетчинсона и Клейтона для аэробных бактерий
Целлюлюза — кусочки фильтровальной бумаги (10 г/л); NaNО3 — 2,5 г;
К2НРО4 — 1,0 г; MgSО4 · 7Н2О — 0,3 г; NaCl — 0,1 г; СаС12 · 4Н2О — 0,1
г; FeCl3 · 6Н2О — 0,01 г; вода дистиллированная — 1 000 мл; рН 7,2—7,3.
Среду стерилизуют при 1,0 ати 20—30 мин.
2. Среда Имшенецкого для анаэробных бактерий
Среда состава (г): фильтровальная бумага — 15,0; NaNH4HPО4 — 1,5;
KH2PО4 — 0,5; К2НРО4 — 0,5; MgSО4 · 7H2О — 0,4; NaCl — 0,1; пептон —
5,0; MnSО4 · H2О — следы; FeS04 · 7H2О — следы; СаСО3 — 2,0; вода
дистиллированная — 1 000 мл; рН 7,0—7,4. Среду стерилизуют при 0,5
ати 20—30 мин.
Среды для азотфиксаторов
1. Среда Эшби для азотобактера и олигонитрофилов
Среда состава (г): сахароза или маннит — 20,0; К2НРО4 — 0,2;
MgSО4 · 7Н2О — 0,2; NaCl — 0,2; К2SО4 — 0,1; СаСО3 — 5,0; вода
дистиллированная — 1 000 мл. В среду рекомендуется вносить смесь
микроэлементов — 1 мл/л.
Раствор микроэлементов (по Федорову) (г): Н3ВО3 — 5,0;
(NH4)2 МоО4 · 2Н2О — 5,0; ZnSО4 ·7Н2О — 0,2; KI и NaBr — по 0,5;
A12(SО4)3 · 18H2О — 0,3; вода дистиллированная — 1 000 мл.
2. Среда Виноградского для анаэробных азотфиксаторов из рода
Clostridiu
27
Среда состава (г): глюкоза — 20,0; К2НРО4 — 1,0; MgSО4 · 7H2О —
0,5; СаСО3 — 20,0 (для нейтрализации кислот, образующихся при
брожении); NaCl — 0,5, MnSО4, FeSО4 — следы; вода дистиллированная
— 1 000 мл. В среду рекомендуется добавлять дрожжевой экстракт —
10 мг/л и раствор микроэлементов по Федорову — 1 мл/л.
3. Среда Федорова в модификации Калининской для выделения
азотфиксаторов
Среда состава (г): глюкоза — 10,0—15,0; K2НРО4 — 1,74; КН2РО4 —
0,91; MgSО4 · 7H2О — 0,3; СаС12 · 6Н2О — 0,1; NaCl — 0,5; FeCl3 · 6H2О —
0,01; дрожжевой экстракт — 0,015; раствор микроэлементов (по Федорову) —
1 мл; вода дистиллированная — 1 000 мл.
4. Бобовый агар для клубеньковых бактерий
Среда состава (г): бобовый отвар — 1 000 мл; сахароза — 2,0; КН2РО4 —
1,0; MgSО4 · 7Н2О — 0,3; агар — 15,0; рН 7,0—7,2. Среду стерилизуют при
0,5 ати 20—30 мин.
5. Маннитно-дрожжевая среда для клубеньковых бактерий
Среда состава (г): маннит — 10,0; дрожжевой экстракт — 1,0; К2НРО4 —
0,5; MgSО4 · 7H2О — 0,2; NaCl — 0,1—0,2; FeCl3 · 6 H2О — 0,002; агар —
15,0; вода дистиллированная — 1 000 мл; рН 6,8—7,0. Среду стерилизуют
при 0,5 ати 20—30 мин.
Среды для денитрифицирующих бактерий
1. Среда Гильтея
Среда состава (г): цитрат Na или К (трехзамещенный) — 5,0; KNО3 —
2,0; аспарагин — 1,0; КН2РО4 — 2,0; MgSО4 · 7H2О — 2,0; СаСl2 · 6Н2О —
0,2; FeCl3 · 6H2О — следы; вода дистиллированная — 1 000 мл; рН 6,8—
7,2. Среду стерилизуют при 0,5 ати 20—30 мин.
2. Среда Березовой
Среда состава (г): цитрат Na или К (трехзамещенный) — 20,0; KNО3 —
1,0; КH2PО4 — 1,0; К2НРО4 — 1,0; MgSО4 · 7H2О — 2,0; СаС12·6Н2О — 0,2;
FeCl3 · 6Н2О — следы; вода дистиллированная — 1000 мл. рН 6,8 — 7,2.
Среду стерилизуют при 0,5 ати 20 —30 мин.
Среды Виноградского для нитрификаторов
1. I фаза нитрификации
Среда состава (г): (NH4)2SО4 — 2,0; К2НРО4 — 1,0; MgSО4 · 7Н3О — 0,5;
NaCl — 2,0; FeSО4· 7H2О — 0,05; СаСО3 — 5,0; вода водопроводная —
1 000 мл. Среду стерилизуют при 1,0 ати 20—30 мин.
2. II фаза нитрификации
Среда состава (г): NaNО2 — 1,0; K2НPО4 — 0,5; МgSО4 · 7H2О — 0,5;
NaCl — 0,5; FeSО4 · 7H2О — 0,4; Na2CО3 — 1,0; вода водопроводная 1 000 мл.
Среду стерилизуют при 1,0 ати 20—30 мин.
28
Среды, используемые в санитарной микробиологии
1. Среда Эндо (селективная среда для энтеробактерий)
100 мл стерильного МПА (рН 7,4) расплавляют на водяной бане и
охлаждают до 70 ºС, прибавляют 1 г лактозы (х. ч.), предварительно
растворенной в стерильной пробирке в небольшом количестве
дистиллированной воды и прокипяченной. В отдельных пробирках
готовят: 2—3 мл спиртового насыщенного раствора фуксина и 10 мл
10%-го водного раствора Na2SО3. В стерильную пробирку вносят 1 мл
фуксина и прибавляют раствор сульфита натрия до обесцвечивания
фуксина (бледно-розовый цвет). Приготовленную смесь вливают в
расплавленный МПА с лактозой, хорошо перемешивают и разливают по
стерильным чашкам. Правильно приготовленная среда в горячем виде
имеет бледно-розовый цвет, а при застывании становится бесцветной.
Среда выпускается в сухом виде, используют ее сразу, без стерилизации,
готовят по прописи на этикетке.
2. Среда Кесслера (среда для выделения бактерий группы кишечной
палочки)
К 1 л водопроводной воды добавляют 10 г пептона и 50 мл бычьей
желчи, кипятят смесь при помешивании 20—30 мин на водяной бане
и фильтруют через вату. Прибавляют 2,5 г лактозы (х. ч.), доводят объем
водой до 1 л, устанавливают рН 7,4—7,6, после чего добавляют 2 мл
1%-го водного раствора генцианового фиолетового для подавления роста
грамположительных бактерий, разливают (по 5 или 10 мл) в пробирки.
Среды для культивирования простейших
Иногда для сравнения рекомендуется употреблять несколько сред
одновременно, а также помещать пробы почвы в стерильную дождевую
или дистиллированную воду. Однако в такой воде численность
простейших гораздо меньше, чем в питательной среде, и они быстро
исчезают или инцистируются.
Агаровые среды разливают по чашкам Петри, стерилизуют, затем
заражают исследуемой почвой и помещают в термостат при температуре
20—25 ºС. Несколько дней среды исследуют для обнаружения
развившихся простейших. Некоторые простейшие появляются очень
быстро, но скоро инцистируются или погибают, другие виды появляются
не
сразу
и развиваются в течение нескольких недель.
1. Настой из навоза
Приготавливают 5%-й настой из лошадиного или коровьего навоза,
оставляют на сутки, затем разбавляют до 1—2 %, фильтруют и
стерилизуют.
29
2. Сенной отвар (среда для культивирования Paramecium)
Пятнадцать граммов измельченного сена кипятят 15 мин в
дистиллированной воде, затем фильтруют. Среду наливают в чашки Коха
(высотой 6 см, диаметром 10 см) или в стеклянные банки. В каждый
сосуд вносят несколько прокипяченных стебельков сена. Сосуды
оставляют на ночь открытыми, чтобы в среду могли попасть бактерии.
Затем их закрывают неплотно прилегающей крышкой. Через 1—2 дня
вносят парамеций.
3. Почвенный экстракт
Огородную или садовую почву высушивают на воздухе и затем
помещают в колбу с водой из расчета 10 % по весу или даже 1 кг на литр
воды. Суспензию кипятят 15 мин, нейтрализуют, раствор отжимают через
тряпку, затем разбавляют и фильтруют, после чего стерилизуют.
Почвенную вытяжку употребляют иногда вместе с 3—4%-м сенным
настоем.
4. Настои из овощей
Овощи (картофель, салат, морковь) кипятят до разваривания и готовят
1—5%-й настой, который употребляют после стерилизации.
5. Рисовая среда
Несколько зерен риса помещают в чашку Петри со стерильной водой.
Через 2—3 суток в чашку вносят пробу почвы.
6. Плотные среды для жгутиконосцев
Используют агаризованные (15—20 г/л агара) среды Виноградского
и Омелянского для нитрифицирующих бактерий.
7. Плотная среда для амеб и мелких инфузорий
Среда состава: маннит — 10 г; К2НРО4 — 1 г; почвенная вытяжка —
1 000 мл; агар — 15 г.
8. Мясной агар
Среда состава (г): мясной экстракт — 0,3—0,5; NaCl — 0,5; агар —
20,0; вода — 1 000 мл.
9. Среда Чокли для хищных амеб
Среда состава (мг): NaCl — 80; NaHCО3 — 4; KCI — 4; СаС12 — 4;
CaH4(PО4) · 2Н2О — 1,6. Вода бидистиллированная — 1 000 мл.
Приблизительно два раза в неделю к культурам необходимо добавлять
кормовые организмы (как правило, таких инфузорий, как Paramecium и
Colpidium).
Реактивы для окраски жгутиков
Протрава. Двенадцать граммов таннина растворяют при нагревании
в 48 мл дистиллированной воды, к раствору прибавляют 30 мл
насыщенного водного раствора железного купороса (FeSО4) и 6 мл
30
насыщенного спиртового раствора фуксина. Раствор отфильтровывают и
сохраняют
в банке с притертой пробкой. Протрава бывает готовой к употреблению
через несколько дней после приготовления и может храниться в течение
нескольких месяцев.
Краситель. Карболовый фуксин Циля и вода дистиллированная в
соотношении 1:1.
Протраву и карболовый фуксин Циля готовят заранее, разбавленный
фуксин — незадолго до употребления. Непосредственно перед работой
протраву и разбавленный фуксин необходимо профильтровать через
складчатый бумажный фильтр, так как осадки красок, легко
образующиеся на стенке сосуда при наличии даже небольших количеств
белка, будут сильно мешать окрашиванию и рассмотрению объекта.
Реактивы для окраски жгутиков по методу Фонтана
Протрава: таннин — 5,0 г; фенол кристаллический — 1,0 г; вода
дистиллированная — 100 мл.
Реактивы для серебрения: серебро азотнокислое — 5,0 г; вода
дистиллированная — 100 мл. Раствор серебра следует готовить без
фильтрования и хранить в темной склянке. К 3—4 мл 5%-го раствора
азотнокислого серебра по каплям прибавляют раствор аммиака до
помутнения и образования осадка, а затем осторожно — до растворения
осадка. После этого вновь прибавляют раствор азотнокислого серебра до
появления легкой опалесценции. Полученный раствор аммиачного
серебра разводят дистиллированной водой в 10 раз.
Анилиновый черный
Анилиновый черный — 1,5 г; этанол 96º — 50 мл; уксусная кислота
80%-я — 10 мл; вода дистиллированная — 40 мл. После растворения
краску фильтруют и через три дня она готова к употреблению.
Красители для выявления липидов
1. Судан III — 0,5 г; молочная кислота концентрированная — 100 мл.
2. Судан черный В — 0,3 г; спирт этиловый 70%-й горячий — 100 мл.
Раствор выдерживают в течение нескольких часов при 60 ºС в
закупоренной склянке, затем охлаждают и фильтруют.
Малахитовый зеленый, водный раствор
Малахитовый зеленый (малахитгрюн) — 7,5 г; вода дистиллированная —
100 мл.
Раствор Люголя в модификации Грама
Йод кристаллический — 1,0 г; калий йодистый — 2,0 г; вода
дистиллированная — 300 мл. В ступку емкостью 30—50 мл помещают
31
навеску йода и йодистого калия, растирают смесь пестиком, добавляют 1
мл дистиллированной воды и, продолжая растирать кристаллы,
добавляют
еще
5 мл воды. Йод растворяется в йодистом калии. Раствор количественно
переносят в склянку и доводят общий объем до 300 мл. Срок годности
раствора не более 30 дней: хранят его в темной посуде.
Бумага, пропитанная раствором уксуснокислого свинца
Нарезают полоски фильтровальной бумаги (0,2—0,4×5—6 см),
погружают их в 5%-й водный раствор уксуснокислого свинца
Рb(СН3СОО)2, высушивают на воздухе и стерилизуют в чашке Петри
автоклавированием при 0,5 ати. Перед употреблением бумага бесцветна, а
при наличии сероводорода она приобретает черно-бурый цвет.
Реактивы для определения белка по Лоури
Раствор А: 2%-й раствор Na2CО3 в 0,1 н NaOH.
Раствор В (готовится в день определения): 0,1 г CuS04 · 5H20
растворяют в 20 мл 1%-го раствора сегнетовой соли. Этот раствор
сохраняется не более 30 мин! 1 мл полученного раствора смешивают с 50
мл раствора А. Даже едва мутный раствор не пригоден для
использования.
Реактив Фалина. В колбу объемом 1 500 мл вносят 700 мл
дистиллированной воды, 100 г Na2WО4 · 2H2О, 25 г Na2MoО4 · 2Н2О, 50
мл 85%-й Н3РО4 и 100 мл конц. HC1. Полученную смесь кипятят на
слабом
огне
в течение 10 ч. К охлажденной смеси добавляют 150 г сернокислого
лития (LiSО4), 50 мл дистиллированной воды и 15 капель брома. Избыток
брома удаляют кипячением в течение 15 мин без холодильника. Раствор
охлаждают. Он должен быть желтым. Если раствор зеленый, добавляют
еще несколько капель брома и вновь выпаривают избыток последнего.
Объем раствора доводят до 1 000 мл и сохраняют в холодильнике в
темной склянке с притертой пробкой. Основной раствор обычно бывает 2
н. Белок определяют с помощью 1 н раствора Фолина. Для этого
титрованием 0,1 н NaOH с фенолфталеином определяют концентрацию
основного раствора и разбавляют его дистиллированной водой до 1 н. В
продаже имеется готовый реактив Фолина.
Реактив Эрлиха
Пара — диметиламинобензальдегид — 1,0 г; этанол 96º — 95 мл; НС1
концентрированная — 20 мл.
Модифицированный реактив Эрлиха: 5 г n-диметиламинобензальдегида растворяют в 100 мл кислого спирта. Кислый спирт: к 92 мл
этилового спирта 96º добавляют 8 мл концентрированной НС1.
32
Реактив Эрлиха в модификации Ковача
Пара — диметиламинобензальдегид — 1,0 г; амиловый или
изоамиловый спирт — 15 мл; НС1 концентрированная — 10 мл.
Реактив Несслера
К1 — 70,0 г; HgI2 — 100,0 г; КОН — 100 г.
Раствор 1: Навески KI и HgI2 растворяют в 400 мл дистиллированной
воды.
Раствор 2: Навеску КОН растворяют в 500 мл дистиллированной воды.
Растворы 1 и 2 смешивают и доводят общий объем до 1 л. В случае
образования осадка верхний прозрачный слой декантируют. Раствор
хранят в темной стеклянной посуде. В продаже имеется готовый реактив
Несслера.
Реактив Грисса
Раствор 1: 0,5 г сульфаниловой кислоты растворяют в 30 мл ледяной
уксусной кислоты. Добавляют 100 мл дистиллированной воды и
фильтруют. Раствор сульфаниловой кислоты устойчив в течение месяца.
Раствор 2: 0,1 г α-нафтиламина растворяют в 100 мл кипящей
дистиллированной воды. Остужают и добавляют 30 мл ледяной уксусной
кислоты. Раствор α-нафтиламина фильтруют и хранят не более недели.
Непосредственно перед употреблением смешивают равные объемы этих
растворов.
Реактивы для крахмало-йодной пробы на нитриты
Крахмал — 0,4 г; ZnCl2 — 2,0 г; вода дистиллированная — 100 мл.
ZnCl2 растворяют в 10 мл воды, кипятят и добавляют крахмал.
Доводят объем до 100 мл и оставляют стоять на неделю. Затем раствор
фильтруют и добавляют равный объем 0,2%-го раствора KI.
Раствор соляной кислоты. НС1 концентрированная — 16 мл; вода
дистиллированная — 84 мл.
33
Рецепты растворов
1. Реактивы для выявления оксидазы
• Свежеприготовленный 1%-й водный раствор солянокислого
тетраметил-п-фенилендиамина.
• 30—40 мг α-нафтола растворяют в 2,5 мл этилового спиртаректификата, добавляют 7,5 мл дистиллированной воды и растворяют
40—60 мг диметил-п-фенилендиамина.
2. Фиксирующие жидкости
• Этиловый спирт 96º; время фиксации — 10—15 мин.
• Метиловый спирт безводный; время фиксации — 3—5 мин.
• Смесь Никифорова: этиловый спирт и серный эфир в равных
объемах; время фиксации — 5—10 мин.
• Спиртформол: 40%-й формалин — 5 мл; этиловый спирт 96º —
95 мл; время фиксации — 5—15 мин.
• 1—2%-й водный раствор осмиевой кислоты; фиксация в парах 3—5
мин. Раствор осмиевой кислоты сохраняют в темном флаконе с притертой
пробкой. При работе следует соблюдать осторожность, так как пары
осмия могут повредить глаза!
• 40%-й формалин; фиксация в парах несколько секунд.
• Фиксатор Карнуа: этиловый спирт 96º — 60 мл; хлороформ — 30 мл;
ледяная уксусная кислота — 10 мл; время фиксации — 15 мин.
• Жидкость Руге: 40%-й формалин — 20 мл; ледяная уксусная кислота
— 1 мл; вода дистиллированная — 100 мл; время фиксации — 5 мин.
Рекомендуется для фиксации клеток, выращенных в жидких средах
неопределенного состава.
• Фосфорномолибденовая кислота, 5%-й водный раствор; время
фиксации — 5 мин.
• Смесь Шаудина: насыщенный раствор сулемы — 2 части; этиловый
спирт 96º или абсолютный — 1 часть; на мазок наносят каплю фиксатора
и медленно подсушивают на воздухе.
3. Чернила по стеклу
Раствор 1: 1,0 г фуксина основного растирают в ступке с 15 мл
этилового спирта.
Раствор 2: к 2,0 г таннина добавляют 15 мл воды и нагревают до
кипения. Растворы 1 и 2 смешивают в равных объемах.
4. Перегонка фенола
Фенол перегоняют из колбы Вюрца, закрытой корковой пробкой.
Колбу помещают непосредственно на сетку. В качестве приемника
используют заранее взвешенную сухую фарфоровую чашку. В нее
отгоняют некоторое количество фенола и, когда он застынет, определяют
его массу, исходя из которой готовят соответствующий объем раствора
34
или необходимого реактива. Перегонку фенола осуществляют в
вытяжном шкафу. При работе с фенолом следует соблюдать большую
осторожность, так как он вызывает сильные ожоги!
5. Физиологический раствор
Готовят 0,85%-й раствор NaCl в дистиллированной воде. При
необходимости стерилизуют 30 мин при 1 ати.
6. Подготовка предметных и покровных стекол для приготовления
препаратов
Предметные и покровные стекла считаются чистыми, когда капля
воды растекается по их поверхности. Новые стекла обычно кипятят в 1%м растворе соды, затем промывают дистиллированной водой, слабым
раствором соляной кислоты и затем опять дистиллированной водой.
Стекла, бывшие в употреблении, кипятят в мыльной воде и затем не
менее суток выдерживают в растворе хромовой смеси. От бихромата
стекла отмывают дистиллированной водой. Чистые стекла хранят в 96º
этаноле.
7. Обработка предметных стекол по Цеттнову
• Стекла кипятят 10 мин в следующем растворе: бихромата калия —
20,0 г; дистиллированная вода — 200 мл; концентрированная серная
кислота — 20 мл.
• Промывают в течение 5 мин слабым раствором едкого натра.
• Тщательно промывают водой (10 раз).
• Промывают спиртом (три раза).
• Быстрый способ обезжиривания предметных стекол: При отсутствии
заранее приготовленных обезжиренных стекол можно быстро
приготовить стекла, натирая их в сухом виде хозяйственным мылом и
очищая затем чистой хлопчатобумажной тканью.
35
Заключение
Приведенные в пособии примеры являются яркой иллюстрацией
большого практического значения растворов в жизни природы и
деятельности человека.
Подробное описание методик приготовления растворов и сред,
способов расчета и определения концентрации растворов будут полезны
студентам, преподавателям, аспирантам для проведения научных
исследований и оформлении их результатов.
Данное пособие можно использовать на практических и лабораторных
занятиях по ряду химико-биологических дисциплин.
Список литературы
1. Решетникова, В. Н. Сборник контрольных заданий по химии : метод.
рекомен. для студ.-заоч. биол. фак-тов / В. Н. Решетникова. — Балашов : Изд-во
БФСГУ, 2001. — 64 с.
2. Викторов, Д. П. Малый практикум по физиологии растений : учеб. пособие
/ Д. П. Викторов. — М. : Высш. школа, 1983. —135 с.
3. Гродзинский, А. М. Краткий справочник по физиологии растений /
А. М. Гродзинский, Д. М. Гродзинский. — Киев : Наукова думка, 1973. — 591 с.
4. Практикум по физиологии растений : учеб. пособие / под ред. В. Б.
Иванова. — Академия, 2001. — 144 с.
5. Занина, М. А. Физиология растений : учеб.-метод. пособие для студ. з/о
отделения фак-та экологии и биологии / М. А. Занина. —Балашов : Николаев, 2005.
— 64 с.
36
Приложения
Приложение 1
Правила техники безопасности
при работе в химической лаборатории
Многие из веществ, используемых в органической химии, являются в какой-то
мере воспламеняющимися или токсичными, или теми и другими одновременно.
Поэтому при работе в лаборатории необходимо строго соблюдать основные
правила техники безопасности независимо оттого, какой выполняют эксперимент.
1. Категорически запрещается работать одному в лаборатории, так как
в экстренном случае будет некому оказать пострадавшему первую помощь и
ликвидировать последствия неудавшегося эксперимента. Работать следует только
в отведенное время под контролем преподавателя или других сотрудников.
2. Необходимо соблюдать тишину, чистоту и порядок. Поспешность и
неряшливость в работе часто приводят к несчастным случаям. Нельзя отвлекаться
от работы и отвлекать своих товарищей. Запрещается держать на лабораторном
столе посторонние предметы (сумки, учебники и т. д.).
3. Категорически запрещается принимать и хранить пищу, пить воду и курить.
4. Каждый должен знать, где находятся средства индивидуальной защиты,
аптечка, средства для тушения пожара. Кроме очков, в лаборатории должны быть
защитные маски, респираторы и противогазы. Во всех лабораториях в легко
доступных местах находятся средства для пожаротушения (ящики с песком и
совком, огнетушители, противопожарные одеяла), а также аптечки, которые
снабжены всеми медикаментами, необходимыми для оказания первой
медицинской помощи (растворы борной кислоты, гидрокарбоната натрия,
перманганата калия, танина, нашатырного спирта, а также вата, бинт, йодная
настойка, активированный уголь, мазь от ожогов, склянка для промывания глаз).
5. В лаборатории необходимо находиться в застегнутом хлопчатобумажном
халате. Это обеспечивает некоторую индивидуальную защиту и позволяет
избежать загрязнения одежды.
6. Приступать к работе можно только после усвоения всей техники ее
выполнения. Если вы испытываете какие-либо сомнения в методике проведения
эксперимента или в технике безопасности, прежде чем продолжать работу,
проконсультируйтесь с преподавателем.
7. Нельзя проводить опыты, используя загрязненную посуду, ее следует мыть
сразу после окончания эксперимента.
8. Категорически запрещается пробовать химические вещества на вкус.
Нюхать вещества следует осторожно, не поднося сосуд близко к лицу, а лишь
направляя к себе пары или газы легким движением руки, при этом нельзя делать
полный вдох. Жидкие органические вещества и их растворы запрещается
набирать в пипетки ртом, для этого необходимо использовать резиновые груши и
другие приспособления.
37
9. В процессе работы необходимо следить, чтобы вещества не попадали на
кожу, так как многие из них вызывают раздражение и ожоги кожи и слизистых
оболочек.
10. Все банки, в которых хранятся вещества, должны быть снабжены
этикетками с соответствующими названиями.
11. Запрещается нагревать, смешивать и взбалтывать реактивы вблизи лица.
При нагревании нельзя держать пробирку или колбу отверстием к себе или в
направлении работающего товарища.
12. Необходимо пользоваться защитными очками в следующих случаях:
а) при работе с едкими веществами (с концентрированными растворами
кислот и щелочей, при дроблении твердой щелочи и т. д.);
б) при перегонке жидкостей при пониженном давлении и работе с вакуумприборами;
в) при работе со щелочными металлами;
г) при определении температуры плавления веществ в приборе с
концентрированной серной кислотой;
д) при работе с ампулами и изготовлении стеклянных капилляров.
13. Запрещено выливать в раковину остатки кислот и щелочей, огнеопасных
и взрывоопасных, а также сильно пахнущих веществ. Для слива этих веществ
в вытяжном шкафу должны находиться специальные сосуды с плотно
притертыми крышками и соответствующими этикетками («СЛИВ КИСЛОТ»,
«СЛИВ ЩЕЛОЧЕЙ», «СЛИВ ОРГАНИКИ»).
14. Не разрешается бросать в раковину стекла от разбитой посуды, бумагу и вату.
15. После завершения работы необходимо отключить газ, воду, вытяжные
шкафы и электроэнергию.
Правила техники безопасности
при работе с кислотами и щелочами
1. Хранить концентрированные кислоты и щелочи следует в вытяжном шкафу
в прочной посуде на поддоне.
2. Все работы с кислотами и щелочами нужно проводить в защитных очках.
3. Концентрированную соляную и азотную кислоты можно переливать только
в вытяжном шкафу. Разбавление кислот следует проводить в жаростойкой посуде,
при этом кислоту необходимо приливать к воде небольшими порциями, при
перемешивании (нельзя приливать воду к концентрированной кислоте, так как
в этом случае выделяется большое количество теплоты: вода, как менее плотное
вещество, вскипает на поверхности кислоты, и жидкость может быть выброшена
из сосуда).
4. При растворении гидроксидов натрия и калия кусочки щелочи можно брать
только пинцетом или шпателем, но не руками; растворение этих веществ следует
проводить небольшими порциями.
38
Правила техники безопасности при работе с бромом
1. Бром необходимо хранить только в толстостенной посуде из темного стекла
с плотно притертыми пробками в ящике с песком под тягой отдельно от
концентрированных кислот и аммиака.
2. Все работы с бромом необходимо проводить в вытяжном шкафу в резиновых
перчатках и защитных очках, так как он является сильно ядовитым веществом,
действующим на слизистые оболочки и вызывающим при попадании на кожу
тяжело заживающие ожоги. Категорически запрещается набирать бром в пипетку
ртом, для этого следует использовать резиновую грушу.
3. Переносить склянки с бромом можно только в емкостях с песком.
Правила техники безопасности
при работе с металлическими натрием и калием
1. Нельзя допускать соприкосновения щелочных металлов с водой и
галогеносодержащими соединениями.
2. Необходимо хранить металлические натрий и калий в толстостенной посуде
из темного стекла под слоем обезвоженного керосина или трансформаторного
масла в вытяжном шкафу.
3. Для работы металлический натрий нужно извлечь пинцетом из-под
защитного слоя, остатки керосина промокнуть сухой фильтровальной бумагой,
отрезать ножом необходимое количество металла и сразу же использовать его по
назначению.
4. Большие обрезки натрия следует собрать под слоем керосина, а небольшие
кусочки, посуду и бумагу с остатками металла залить этиловым спиртом.
5. Категорически запрещается выбрасывать остатки металлических натрия и
калия в мусорное ведро и раковину и оставлять их в пробирках и колбах.
6. Для нагревания реакционных смесей, содержащих щелочные металлы,
можно пользоваться только воздушными и песчаными банями.
Правила техники безопасности
при работе с легковоспламеняющимися жидкостями
1. Работы с легковоспламеняющимися жидкостями (ЛВЖ) следует проводить
подальше от огня. Запрещается нагревать летучие и легковоспламеняющиеся
жидкости (ацетон, эфиры, спирты, петролейный эфир, бензин, бензол,
сероуглерод) на открытом пламени. Для нагревания ЛВЖ можно пользоваться
водяной баней или электрической плиткой с закрытой спиралью, при этом колба
должна быть снабжена водяным холодильником.
2. Нельзя нагревать горючие вещества в открытых сосудах. Это следует
делать в колбах с обратным холодильником.
3. Перегонять ЛВЖ следует в приборе с водяным холодильником или на
роторном испарителе. Нельзя перегонять жидкости досуха — это может привести
к взрыву или пожару. Приборы, в которых содержится ЛВЖ, следует разбирать
после удаления всех источников пламени (зажженные газовые горелки,
39
спиртовки, электрические плитки с открытой спиралью и т. д.) и полного
охлаждения колбы.
4. Категорически запрещается выливать ЛВЖ в канализацию, ведра и ящики
для мусора, так как случайно брошенная спичка может вызвать пожар.
5. ЛВЖ должны храниться в металлических шкафах в количествах, не
превышающих ежедневные потребности.
Правила техники безопасности при работе под вакуумом
При работе под вакуумом (перегонка под вакуумом, вакуум-эксикаторы)
необходимо пользоваться очками или защитной маской. При перегонке под
вакуумом запрещено использовать плоскодонные колбы, так как они будут
раздавлены. По окончании работы давление необходимо выравнивать лишь после
полного охлаждения прибора.
Меры безопасности при утечке газа
и тушении локального пожара и горящей одежды
1. При обнаружении запаха газа необходимо отключить газовую магистраль,
электроприборы и тщательно проветрить лабораторию. Категорически
запрещается пользоваться спичками и включать электрический свет.
2. При возникновении пожара нужно быстро убрать все горючие вещества
подальше от места возгорания, отключить газовую магистраль, все
электроприборы и прекратить активный доступ воздуха в лабораторию.
3. Пламя следует тушить песком или противопожарным одеялом. Тушение
пламени водой может привести к расширению очага пожара. В случае более
обширной площади возгорания следует пользоваться огнетушителем.
4. Если на ком-либо загорится одежда, необходимо плотно накрыть
загоревшуюся ткань противопожарным одеялом. При возгорании одежды нельзя
бежать, так как это способствует распространению пламени.
Оказание первой медицинской помощи
при ожогах и отравлениях химическими веществами
1. При термических ожогах I степени (краснота и припухлость) обожженное
место надо обработать спиртовым раствором таннина, 96%-м этиловым спиртом
или раствором перманганата калия. При ожогах II и III степеней (пузыри и язвы)
допустимы только обеззараживающие примочки из раствора перманганата калия,
после чего необходимо обратиться к врачу.
2. При ожогах кислотами необходимо промыть пораженное место большим
количеством проточной воды, а затем 3 %-м раствором гидрокарбоната натрия,
после чего — снова водой.
3. При ожогах щелочами нужно промыть очаг поражения проточной водой,
а затем разбавленным раствором борной или уксусной кислоты.
4. При попадании щелочи или кислоты в глаза необходимо промыть их
проточной водой (3—5 мин), а затем раствором борной кислоты (в случае
40
попадания щелочи) или гидрокарбоната натрия (в случае попадания кислоты),
после чего обратиться к врачу.
5. При ожогах фенолом очаг поражения следует обработать 70%-м этиловым
спиртом, а затем глицерином до исчезновения белых пятен на коже. При
отравлении парами фенола категорически запрещается пить молоко.
6. При ожогах бромом его нужно смыть 96%-м спиртом или разбавленным
раствором щелочи, после чего место поражения смазать мазью от ожогов и
обратиться к врачу. При отравлении парами брома необходимо несколько раз
глубоко вдохнуть пары этилового спирта, а затем выпить молока.
7. При попадании на кожу едких органических веществ, не растворимых в
воде, их необходимо смыть большим количеством подходящего растворителя.
После оказания первой помощи пострадавший должен быть направлен в
медпункт.
41
Приложение 2
Таблица 1
Плотность растворов серной кислоты при 20 оС
Содержание
H2S04, г
Содержание H2S04, г
Плотность
1,005
1,012
1,018
1,025
1,038
1,052
1,066
1,080
1,095
1,109
1,124
1,139
1,155
1,170
1,186
1,202
1,219
в 100 г
раствора
в 100 мл
раствора
1
2
3
4
6
8
10
12
14
16
18
20
22
24
26
28
30
1,005
2,024
3.055
4,100
6,231
8,418
10,66
12.96
15.33
17.75
20,23
22,79
25,41
28,09
30,84
33,66
36,56
Содержание
H2 S04, г
Плотнос
Плотн
в 100 г
ть
в 100 мл ость
в 100 г
раствор
раствора
раствора
а
1,235
1,252
1,268
1,286
1,303
1,321
1,338
1,357
1,376
1,395
1,415
1,435
1,456
1,477
1,498
1,520
1,542
32
34
36
38
40
42
44
46
48
50
52
54
56
58
60
62
64
39,52
42,55
45,66
48.85
52,11
55,46
58,89
62,42
66,05
69,75
73,58
77,49
81,52
85,67
89,88
94,24
98,69
1,565
1,587
1,611
1,634
1,657
1,681
1,704
1,727
1,749
1,769
1,787
1,802
1,814
1,824
1,831
1,836
66
68
70
72
74
76
78
80
82
84
86
88
90
92
94
96
в 100 мл
раствора
103,3
107.9
112,7
117,6
122,6
127,8
132,9
138,2
143,4
148,6
153,7
158,6
163,3
167,8
172,1
176,2
Таблица 2
Плотность растворов соляной кислоты при 20 ºС
Плотность
1,003
1,008
1,018
1,028
1,038
1,047
1,057
Содержание
НС1, г
в 100 г
раствора
в 100 мл
раствора
1
2
4
6
8
10
12
1,00
2,02
4,07
6,17
8,30
10,47
12,69
Плотность
1,068
1,078
1,088
1,098
1,108
1,119
1,129
Содержание
НС1, г
Содержание
НС1, г
Плотв 100 г
в 100 мл ность в 100 г
раствор
раствора
раствора
а
14
16
18
20
22
24
26
42
14,95
17,24
19,58
21,96
24,38
26,85
29,35
1,139
1,149
1.159
1,169
1,179
1,189
28
30
32
34
36
38
в 100 мл
раствора
31,90
34,47
37,10
39,75
42,44
45,16
Таблица 3
Плотность растворов гидроксида натрия (при 15 оС)
Плотность,
г/см3
1,01
1,02
1,03
1,04
1,05
1,06
1,07
1,08
1,09
1,10
1,11
1,12
1,13
1,14
1,15
1,16
1,17
1,18
1,19
1,20
1,21
1,22
1,23
1,24
1,25
1,26
1,27
Содержание NaOH
%
г/л
0,85
1,70
2,57
3,46
4,35
5,23
6,10
6,95
7,88
8,78
9,65
10,58
11,50
12,40
13,20
14,20
15,10
16,00
16,91
17,81
18,71
19,65
20,54
21,23
22,34
23,22
24,16
8,7
17,3
26,4
36,1
45,5
56,0
65,0
75,5
86,0
96,6
108,5
119,2
130,0
142,0
153,5
165,2
176,3
188,8
202,2
218,7
226,4
239,7
252,6
265,7
279,5
292,8
306,5
Плотность,
г/см3
1,28
1,29
1,30
1,31
1,32
1,33
1,34
1,35
1,36
1,37
1,38
1,39
1,40
1,41
1,42
1,43
1,44
1,45
1,46
1,47
1,48
1,49
1,50
1,51
1,52
1,53
43
Содержание NaOH
%
г/л
25,03
25,95
26,83
27,48
28,83
29,80
30,78
31,79
32,75
33,73
34,70
35,70
36,68
37,65
38,68
39,69
40,71
41,76
42,77
43,81
44,86
45,87
46,92
47,96
49,02
50,10
320,6
335,0
349,0
364,7
380,6
397,0
413,0
429,3
446,0
462,1
479,2
495,6
512,6
530,9
549,4
567,2
584,7
604,8
623,8
644,0
664,5
684,0
704,0
724,5
745,4
766,5
Таблица 4
Молекулярные массы некоторых соединений
Вещество
Молекулярная
масса
Неорганические соли
СаС12 · 6Н2О
219,09
Ca(NО3)2
164,10
Са3(РО4)2
310,20
CaSО4 · 2Н2О
172 17
FeCl3 · 6Н2О
270,32
Fe3(PО4)2
357,51
KCNS
97,17
(безводный)
КС1
74,55
КН2РО4
136,09
К2НРО4
174,18
KNО3
101,10
K2SО4
174,25
MgCl2 · 6Н2О
203,33
MgSO4 · 7Н2О
246,49
NaCl
58,45
NaH2PО4
119,99
Na2HPО4 · 2H2О
178,01
NaN03
Na2S02 · 10H2O
NH4C1
NH4MgPО4
NH4NО3
85,01
322,21
53,50
137,34
80,05
(NH4)2S04
132,14
Молекулярная
масса
Вещество
Кислоты
НС1
HNО3
H2SО4
Н3РО4
CH3CООH
36,47
63,02
98,08
98,00
60,05
Щелочи
КОН
56,10
NaOH
40,01
NH4ОH
35,05
Ва(ОН)2
171,38
Са(ОН)2
74,10
Органические вещества
Карбамид
60,06
Глюкоза
180,16
Сахароза
342,30
Абсцизовая
264,3
кислота
Гибберелловая
346,4
кислота
Кинетин
ИУК
ИМК
2,4-Дихлорфеноксиуксусная
кислота
44
215,2
175,20
203,20
221,00
Таблица 5
Характеристика некоторых кислотно-основных индикаторов
Область
Окраска
перехода
Способ
Индикатор
кислотной
щелочной
(интервал
приготовления
формы
формы
рН)
Крезоловый
Красная
Желтая
0,10 ± 0,01 г
красный с
Желтая
Пурпурная индикатора растворяют
0,2—1,8
массовой
в
100
см3
7,0—8,8
долей 0,1 %
дистиллированной
воды
Крезоловый
Красная
Желтая
0,10 ± 0,01 г
пурпурный с 1,2—2,8 Желтая
Пурпурная индикатора растворяют
массовой
в 100 см3 этанола
7,4—9,0
долей 0,1 %
Метиловый
Красная
Желтая
0,10 ± 0,01 г
красный
с
индикатора растворяют
4,4—6,2
массовой
в 100 см3 95%-го
долей 0,1 %
этанола
Метиловый
оранжевый с
массовой
долей 0,1 %
Нейтральный
красный
с
массовой
долей 0,1 %
Тимолфталеин
с массовой
долей 0,1 %
Фенолфталеин
с
массовой
долей 0,1 %
Азолитлин
лакмус
Розовая
Оранжевожелтая
Красная
Желтокоричневая
3,1—4,4
6,8—8,0
Отсутствует
Синяя
0,50 ± 0,01 г
индикатора растворяют
в 100 см3 96%-го
этанола
Красная
0,10 ± 0,01 г
индикатора растворяют
в 100 см3 96%-го
этанола
0,50 + 0,01 г
индикатора растворяют
в 100 см3 воды
9,3—10,5
Отсутствует
8,0—9,6
Красная
Синяя
5,0—8,0
45
0,10 ±0,01 г
индикатора растворяют
в 100 см3
дистиллированной
воды
0,10 ± 0,01 г
индикатора растворяют
в 100 см3 96%-го
этанола
Таблица 6
Состав питательных смесей Кнопа, Гельригеля и Хоглэнда
Концентрация соли в смесях
Соль
Кнопа
Гельригеля
Хоглэнда
Ca(N03)2
г/л
1,00
ммоль/л
6,1
г/л
0,492
ммоль/л
3,0
г/л
0,821
ммоль/л
5
КН2РО4
0,25
1,8
0,136
1,0
0,136
1
MgS04
0,125
1,0
0,060
0,5
0,120
1
—
—
0,075
0,5
—
—
КС1
KN03
0,25
2,5
—
—
0,506
5
FeCl3
Следы
Следы
0,025
0,15
—
—
Железо виннокислое
—
—
—
—
0,005
0,03
Общая
концентрация
1,63
12,5
0,788
5,15
1,588
12,3
Таблица 7
Состав питательной смеси Прянишникова и смесей Цинцадзе
со стабильной реакцией среды
Концентрация соли в смесях
Соль
NH4N03
СаНР04-2Н20
MgS04
CaS04-2H20
КС1
FeCl3
KNO3
Fe2(S04)3
FeP04
Ca3(P04)2
Ca(N03)2
KOH
Прянишникова
г/л
ммоль/л
0,240
0,172
0,06
0,344
0,150
0,025
—
—
—
—
—
—
Цинцадзе, г/л,
4,0
5,0
3
1
0,5
2
2
0,15
—
—
—
—
—
—
0,33
—
0,50
1,46
0,61
—
0,17
0,04
0,68
—
—
—
46
0,33
—
0,50
0,50
0,61
—
0,17
0,25
—
0,70
—
—
при значениях рН
5,5—6,6
7,3
0,20
—
0,50
—
0,36
—
0,51
0,32
—
5,00
—
—
—
—
0,50
0,28
—
—
0,80
0,25
—
0,70
0,21
0,17
Таблица 8
Оптимальные значения рН среды для роста растений
Растение
рН
Растение
РН
Пшеница
6,5—7,8
Картофель
5,0—7,2
Ячмень
6,5—7,8
Конопля
6,0—7,0
Рожь
5,0—6,0
Лен
5,0—6,0
Овес
5,0—6,0
Огурцы
5,5—7,4
Кукуруза
5,5—7,5
Салат
6,0—8,0
Бобы конские
6,0—7,0
Подсолнечник
5,7—6,5
Горох
6,0—7,0
Сахарная свекла
7,0—8,0
Люпин
4,5—6,0
Табак
5,2—6,5
Люцерна
6,2—7,8
Томат
5,6—6,5
Фасоль
6,7—7,4
Тыква
6,0—7,0
Гречиха
5,0—6,5
Хлопчатник
5,0—6,0
Капуста
5,0—6,0
Таблица 9
Некоторые константы растворителей
Растворитель
Температура
П20D
кипения, ºС
Относительная
летучесть
Эфир диэтиловый
34,5
1,3527
1,0
Ацетон
56,0
1,3589
2,1
Спирт этиловый
метиловый
изопропиловый
78,3
64,5
2,4
1,3614
1,3286
1,3776
8,3
Хлороформ
61,2
1,4455
2,5
Бензол
80,1
1,5011
3,0
Петролейный эфир
(легкая фракция)
40—60
—
—
Петролейный эфир
(тяжелая фракция)
60—80
—
—
Бензин «Калоша»
85—115
—
—
47
Таблица 10
Производные группы хлорофилла
Максимум поглощения
Молекулярная
Пигмент
Формула
в красной области спектра
масса
в этиловом эфире, нм
Протохлорофилл а C55H70O5N4Mg
891,46
623
Хлорофилл а
C55H72OsN4Mg
893,48
660
Хлорофилл b
C55H70O6N4Mg
907,46
644
Феофитин а
C55H74OsN4
871,18
667
Феофитин b
C55H7206N4
885,16
655
Феофорбид а
C35H3605N4
592,67
667
Феофорбид b
C35H3406N4
606,67
656,2
48
ДЛЯ ЗАМЕТОК
49
Учебно-методическое издание
Методы приготовления специальных растворов и сред
Учебно-методическое пособие для студентов
биологических и экологических специальностей
Авторы-составители:
Решетникова Вера Николаевна,
Занина Марина Анатольевна,
Смирнова Елена Борисовна
Редактор М. Б. Иванова
Корректор Н. Н. Дробышева
50
Подписано в печать 28.05.07. Формат 60×84 1/16.
Уч.-изд. л. 2,05. Усл.-печ. л. 3,0.
Тираж 100 экз. Заказ №
Издательство «Николаев»,
г. Балашов, Саратовская обл., а/я 55.
Отпечатано с оригинал-макета,
изготовленного издательской группой
Балашовского филиала
Саратовского государственного университета
им. Н. Г. Чернышевского.
412300, г. Балашов, Саратовская обл., ул. К. Маркса, 29.
Печатное агентство «Арья»,
ИП «Николаев», Лиц. ПЛД № 68-52.
412340, г. Балашов, Саратовская обл.,
ул. К. Маркса, 43.
E-mail: arya@balashov.san.ru
51
Методы приготовления
специальных растворов и сред
52