Мухина Ю.И, Подгорная О.И.*, Ефремова ... Halisarca dujardini *- Институт цитологии РАН

реклама
Мухина Ю.И, Подгорная О.И.*, Ефремова С.М. Маркирование клеток
личинок губки Halisarca dujardini с помощью поликлональных антител
*- Институт цитологии РАН
Проблемы клеточной дифференциации и реорганизации личинок губок во
время метаморфоза являются дискуссионными уже более ста лет.
Ультраструктурный анализ метаморфоза не дает убедительного ответа на
вопрос, принимают ли участие поверхностные клетки личинок в
организации дефинитивных структур губки. Для прослеживания их
судьбы нужны надежные маркеры этих и других клеток губки.
Разделение клеток личинок губок в градиенте перколла позволило
получить 5 морфологически разных категорий клеток. В результате
электрофоретического разделения белков каждой фракции были выявлены
их мажорные белки. Для дальнейшей работы были выбраны мажорные
белки 68 кД фракции 2 (жгутиковые клетки личинки), 58 кД фракции 5
(колленцитоподобные клетки личинки) и 18 кД фракции 7 взрослой губки
(эозинофильные клетки). К этим белкам были получены поликлональные
антитела (АBL2, ABL5, ABB7, соответственно). В качестве вторых
антител использовались антитела к иммуноглобулинам крысы (для клеток
фракции 2) и морской свинки (для фракций 5 и 7), конъюгированные с
флюоресцеин-изотиоцианатом.
Иммуноцитохимический анализ препаратов диссоциированных
клеток и целых личинок показал, что ABL2 взаимодействуют с белками в
апикальной области жгутиковых клеток личинки, ABL5 взаимодействуют
с гранулами колленцитоподобных клеток, а ABB7, полученные к белкам
эозинофильных клеток взрослой губки, связываются с гранулами тех же
клеток в составе личинки.
ABL2 и ABL5 при иммуноблотинге электрофоретически
разделенных белков целых личинок реагировали с белками 68 кД и 58 кД
соответственно. ABB7 окрашивали несколько дискретных зон, с основной
зоной 70 кД. Вероятно, белок 18 кД, содержащийся в гранулярных
эозинофильных клетках взрослой губки, синтезируется в виде
высокомолекулярного предшественника, который в дальнейшем
подвергается процессингу.
Связывания антител ABL2 (к белкам поверхностных жгутиковых клеток)
с белками взрослой губки не происходило.
Таким образом, можно считать полученные антитела надежным маркером
клеток, принимающих участие в процессе метаморфоза личинок и
последующем развитии губок.
Скачать