Ведение Состояние мембраны - важный критерий оценки функциональной активности клеток, так как через мембрану осуществляется транспорт ионов, субстратов и кофакторов для всех видов обмена, и поэтому от их характеристик напрямую зависит как метаболическая активность лимфоцита так и его участие в иммунных реакциях [4]. Известно, что биомембраны характеризуются гетерогенной организацией, в них присутствуют как белковые, так и липидные молекулы. Входящие в липидный спектр мембраны молекулы определяют основные характеристики мембраны - текучесть, упругость, подвижность рецепторных молекул. Фосфолипиды для мембранных структур являются основным динамическим компонентом, поддерживающим оптимальное структурнофункциональное состояние путем сбалансированных реакций распада и синтеза, обмена между отдельными субклеточными образованиями. Фосфолипидный состав биомембран в значительной степени подвержен регуляторным влияниям организма. Например, при стрессорных воздействиях избыток катехоламинов вызывает активацию перекисного окисления липидов, которое изменяет или повреждает липидный бислой [2,10]. Отмечены определенные перестройки в мембранах лимфоцитов при вторичных иммунодефицитных состояниях. Для них характерно увеличение в мембране доли холестерина, который снижает текучесть мембраны, и снижение количества фосфолипидов. Значимое изменение липидного спектра лимфоцитов происходит при гнойной хирургической инфекции, отмечено, что в период разгара заболевания в мембране увеличивается содержание трудноокислясмых фракций липидов [1,5,8]. В последние годы усиливается интерес к роли глутатиона и связанных с ним ферментных систем, так как предполагается, что глутатион регулирует концентрацию реакционноспособных интермедиантов (активные формы кислорода) эндо- и экзогенного происхождения на безопасном для организма уровне [7,9]. Глутоксим является структурным аналогом естественного метаболита - окисленного глутатиона. Искусственная стабилизация дисульфидной связи окисленного глугатиона позволяет многократно усилить физиологические эффекты, присущие естественному модифицированному окисленному глутатиону. Работа клетки в новом окислительно-восстановительном режиме и изменение динамики фосфорилирования ключевых блоков сигнал-передающих систем и транскриптационных факторов, в первую очередь иммунокомпетентных клеток, определяет иммуномодулирующий и системный цитопротекторный эффект препарата. Многими авторами указываются на гепато- и нефропротекторное действие глугоксима. Обладая высокой реактогенной способностью, озон активно вступает в реакции с различными биологическими объектами, в том числе со структурами клетки. В силу плотной упаковки липидов и белков в биомембранах именно последние выступают в роли основной мишени биологического действия озона на клетку. По мере нарастания дозы озона в плазматической мембране модифицируются силы межмолекулярного воздействия, это проявляется изменением зарядового состояния поверхности. Растет гидрофильность, изменяется микровязкость анулярного и бислойного липида. Происходят изменения физического и структурного состояния мембран, связанные с окислительной деструкцией липидов и белков [3,6]. Настоящая работа посвящена анализу влияния глутоксима и озонированного физиологического раствора на липидный спектр лимфоцитов у больных острым панкреатитом. Материалы и методы Обследованно 49 больных отечной формой острого панкреатита различной этиологии. Диагноз ставился на основании жалоб, анамнеза, клинико-лабораторных данных, результатов осмотра и ультразвукового исследования. Контрольную группу составили 20 больных, получавших традиционную терапию. На фоне традиционной терапии 20 больных получали озонотерапию, которую осуществляли введением в кубитальную вену 400 мл озонированного физиологического раствора с концентрацией озона 6 мг/л один раз в сутки в течение 8 дней. Скорость инфузии - 40 капель в минуту. Озонирование раствора необходимо осуществлять непосредственно перед инфузией, так как озон обладает высокой реактогенной способностью и поэтому быстро разлагается. На фоне традиционной терапии глутоксим вводился 9 больным внутримышечно ежедневно по 10 мг в течение 5 дней. Традиционное лечение включало антибактериальную и инфузионную терапию (коллоидные и кристалоидные растворы, белковые препараты, растворы, корригирующие кислотно-щелочное состояние и электролитный баланс, гемотрансфузии), цитостатики, ингибиторы протеаз, антикоагулянты. На 1-3-и и 6-8-е сутки заболевания проводилась оценка липидного спектра лимфоцитов больных. Для проведения тонкослойной хроматографии брали пробу, содержащую 2,0 *10" лимфоцитов. В дальнейшем экстракцию липидов из пробы проводили по методу Фолча с соавт. (1957). После экстракции липидов в смеси хлороформ-метанола (2:1 по объему) и ее упаривания экстракт наносили на силуфолевые пластины фирмы «Cavaler», которые заранее активировались при 110 "С в течение 1 часа. Разгонка липидных фракций на пластинах осуществлялась при предварительно насыщенных в течение 2-2,5 часа парами хроматографической смеси (гексан, этиловый эфир, ледяная уксусная кислота в объемном соотношении компонентов 85:15:1). После разгонки фракций пластины просушивали, опрыскивали 5% раствором фосфорномолибденовой кис- лоты в 96% этаноле и прогревали до 110-120 °С в сухожаровом шкафу. Следующим этапом анализа липидного спектра лимфоцитов крови была обработка силуфолевых пластин на денситометре «Хромоскан-200». Сначала на приборе описывались пики, соответствующие по своим размерам величине липидных фракций, а затем интегратором денситометра определялась доля каждого из пиков. В дальнейшем обработку денситограмм производили на ПЭВМ, на котором обсчитывался процент каждой фракции липидов. Результаты исследования и их обсуждение При исследовании липидного спектра лимфоцитов больных острым панкреатитом выявлены существенные различия в содержании фракций липидов в сравнении с показателями нормы. На 1-3-е сутки поступления в стационар у больных ОП наблюдалось снижение в клетках содержания фосфолипидов. Поскольку ФЛ, являясь динамическим компонентом клеточной мембраны, влияют на проницаемость последней для воды и различных молекул, на подвижность рецепторов, можно думать о снижении проницаемости мембран лимфоцитов у больных острым панкреатитом в разгар болезни и уменьшении интенсивности поступления в клетки и из них продуктов метаболизма. Увеличивалось соотношения СЖК/ТАГ Отмеченное уменьшение количества в лимфоцитах ЭХ сопровождалось возрастанием содержания в клетках ХОЛ. Эти изменения подтверждались и достоверным увеличением соотношения ХОЛ/ФЛ, что свидетельствовало о повышении микровязкости липидного бислоя мембран лимфоцитов. Активация ПОЛ, процессов липолиза и накопление СЖК в лимфоцитах при остром панкреатите приводит к увеличению потребности в ХОЛ, активно участвующего в защитных механизмах мембран клеток. Этот механизм защиты приводит к тому, что повышается плотность мембраны, что отрицательно сказывается на функциональных возможностях лимфоцитов (рисунок 1). При сравнении результатов исследования липидного спектра лимфоцитов больных ОП с разными схемами лечения установлено следующее. После 8 дней традиционной терапии (группа А) повышалась текучесть липидного бислоя мембран лимфоцитов за счет снижения ХОЛ, уровень СЖК сохранялся высоким, что свидетельствует о повышенной активности липолиза (и, вероятно, ПОЛ, так как эти процессы, как правило, являются взаимостимулирующими). У больных, получавших озонотерапию в течение 8 дней (группа В), происходили следующие изменения липидного спектра по сравнению с больными группы А: показатель ХОЛ приближался к норме, повышалось содержание ФЛ и за счет этого понижался показатель ХОЛ/ФЛ. Снижение ТАГ в лимфоцитах больных группы В, по-видимому, можно объяснить тем, что, с одной стороны, субстратные потоки в липидном обмене преимущественно направлены на синтез ФЛ и ХОЛ, увеличивающихся в лимфоцитах этих больных, а с другой стороны - повышенным использованием ТАГ, характерным для напряженного функционирования лимфоцитов. Отношение СЖК/ТАГ, определяющее направленность процессов в системе «липогенез - липолиз», было еще меньше, чем в группе А, и достигало уровня контрольной группы. Это указывало на более выраженное ингибирование процессов липолиза. Изменения липидного спектра лимфоцитов больных, получавших глутоксим (группа С), были подобны отмечаемым в группе В, но были более выражены и свидетельствовали о том, что применение данного препарата у больных ОП в еще большей степени способствовало нормализации липидного обмена лимфоцитов и восстановлению их функциональных способностей (рис.2). Выводы Таким образом, включение в схемы лечения больных острым панкреатитом озонированного физиологического раствора и глутоксима позволило получить вполне удовлетворительные клинические результаты. Кроме того, динамика показателей липидного спектра лимфоцитов больных острым панкреатитом, наблюдавшаяся после лечения, подтверждала достоверность теоретических выводов о механизмах нарушений структурно-функциональных возможностей лимфоцитов при остром панкреатите, а также возможность «нормализации» их с помощью озонотерапии или метаболического иммунокорректора глутоксима. Рис. 1. Объем липидных фракций (%) лимфоцитов больных острым пакреатитам на 1 -2-е сутки забапевания. Рис. 2. Объем липидных фракций (%) лимфоцитов бапьных острым пакреатитам, в зависимости от применяемой схемы лечения.