37 ÃÀÌÊÅÐÃÈ×ÅÑÊÀß ÑÈÑÒÅÌÀ  ÐÅÀËÈÇÀÖÈÈ ÀÍÊÑÈÎËÈÒÈ×ÅÑÊÎÃÎ ÄÅÉÑÒÂÈß “ÏÐÎÏÐÎÒÅÍÀ”: ÝÊÑÏÅÐÈÌÅÍÒÀËÜÍÎÅ ÈÑÑËÅÄÎÂÀÍÈÅ Ò.À.Âîðîíèíà, Ã.Ì.Ìîëîäàâêèí, Ñ.À.Ñåðãååâà, Î.È.Ýïøòåéí Íàó÷íî-ïðîèçâîäñòâåííàÿ ôèðìà “Ìàòåðèà Ìåäèêà Õîëäèíã”, Ìîñêâà “Ïðîïðîòåí” — ëåêàðñòâåííûé ïðåïàðàò, ñîäåðæàùèé ñâåðõìàëûå äîçû àíòèòåë ê áåëêó S100, êîòîðûé ÿâëÿåòñÿ îäíèì èç âàæíåéøèõ ðåãóëÿòîðîâ èíòåãðàòèâíîé äåÿòåëüíîñòè ìîçãà è ñèíàïòè÷åñêèõ ïðîöåññîâ. Ó áåñïîðîäíûõ êðûñ-ñàìöîâ â óñëîâèÿõ êîíôëèêòíîé ñèòóàöèè ïðîïðîòåí (2.5 ìë/êã), äèàçåïàì (2 ìã/êã) è ìåêñèäîë (100 ìã/êã) ïðè âíóòðèæåëóäî÷íîì ââåäåíèè îêàçûâàþò âûðàæåííîå àíêñèîëèòè÷åñêîå äåéñòâèå, ÷òî âûðàæàåòñÿ â äîñòîâåðíîì óâåëè÷åíèè ÷èñëà íàêàçóåìûõ âçÿòèé âîäû. Àíòàãîíèñòû ÃÀÌÊåðãè÷åñêîé ïåðåäà÷è áèêóêóëëèí (áëîêàòîð ÃÀÌÊÀ-ðåöåïòîðà) è ïèêðîòîêñèí (áëîêàòîð õëîðíîãî êàíàëà) âûçûâàëè ïðîêîíôëèêòíûé, àíêñèîãåííûé ýôôåêò, ñîïðîâîæäàþùèéñÿ ñíèæåíèåì ÷èñëà íàêàçóåìûõ âçÿòèé âîäû ó êîíòðîëüíûõ æèâîòíûõ. Ââåäåíèå ïðîïðîòåíà íà ôîíå áëîêàäû ÃÀÌÊÀ-ðåöåïòîðà èëè õëîðíûõ êàíàëîâ ïðèâîäèëî ê äîñòîâåðíîìó ñíèæåíèþ àíòèêîíôëèêòíîãî äåéñòâèÿ ïðåïàðàòà. Àíàëîãè÷íîå äåéñòâèå áèêóêóëëèí è ïèêðîòîêñèí îêàçûâàëè íà àíêñèîëèòè÷åñêèé ýôôåêò äèàçåïàìà è ìåêñèäîëà. Ïîëó÷åííûå äàííûå ïðåäïîëàãàþò ó÷àñòèå ÃÀÌÊåðãè÷åñêîé ñèñòåìû â ðåàëèçàöèè àíêñèîëèòè÷åñêîãî äåéñòâèÿ êàê äèàçåïàìà è ìåêñèäîëà, òàê è ïðîïðîòåíà. Êëþ÷åâûå ñëîâà: ïðîïðîòåí, áåëîê S100, ñâåðõìàëûå äîçû, àíòèòåëà ê áåëêó S100, àíêñèîëèòèê, òðàíêâèëèçàòîð, äèàçåïàì, ìåêñèäîë, ÃÀÌÊåðãè÷åñêàÿ ïåðåäà÷à Îñíîâíîé òîðìîçíûé ìåäèàòîð â ÖÍÑ — ÃÀÌÊ èãðàåò âåäóùóþ ðîëü â ïàòîãåíåçå òðåâîãè, ñóäîðîã è äðóãèõ íåâðîòè÷åñêèõ è íåâðîëîãè÷åñêèõ ñîñòîÿíèé. Ñ óñèëåíèåì ÃÀÌÊåðãè÷åñêîãî òîðìîæåíèÿ ñâÿçûâàþò ìåõàíèçì äåéñòâèÿ áîëüøèíñòâà ïðèìåíÿåìûõ â íàñòîÿùåå âðåìÿ àíêñèîëèòè÷åñêèõ ïðåïàðàòîâ [1]. Îòå÷åñòâåííûé ïðåïàðàò “Ïðîïðîòåí” [6,7] ïðåäñòàâëÿåò ñîáîé ïîòåíöèðîâàííûå ïî ãîìåîïàòè÷åñêîé òåõíîëîãèè ñâåðõìàëûå äîçû àíòèòåë ê áåëêó S100 (ÏÀÒ-S100; ÍÏÔ “Ìàòåðèà Ìåäèêà Õîëäèíã”), êîòîðûé ÿâëÿåòñÿ îäíèì èç âàæíåéøèõ ðåãóëÿòîðîâ èíòåãðàòèâíîé äåÿòåëüíîñòè ìîçãà è, êàê äðóãèå Ñà2+-ñâÿçûâàþùèå áåëêè, ó÷àñòâóåò â ñèíàïòè÷åñêèõ ïðîöåññàõ [5,12]. Ïðîïðîòåí îáëàäàåò øèðîêèì ñïåêòðîì ôàðìàêîëîãè÷åñêèõ ýôôåêòîâ, â òîì ÷èñëå îêàçûâàåò âûðàæåííîå àíêñèîëèòè÷åñêîå, àíòèñòðåññîðíîå äåéñòâèå [11], ñíèæàåò ÷àñòîòó ðåàêöèè ñàìîñòèìóëÿöèè ëàòåðàëüíîãî ãèïîòàëàìóñà, òîðìîçèò íåéðîíàëüíóþ àêòèâíîñòü â ëèìáè÷åñêîé ñèñòåìå [9]. Öåëüþ íàñòîÿùåãî èññëåäîâàíèÿ ÿâèëîñü èçó÷åíèå âîçìîæíîãî ó÷àñòèÿ ÃÀÌÊåðãè÷åñêîé ñèñ- òåìû â ðåàëèçàöèè àíêñèîëèòè÷åñêîãî ýôôåêòà ïðîïðîòåíà ïî ñðàâíåíèþ ñ áåíçîäèàçåïèíîâûì òðàíêâèëèçàòîðîì äèàçåïàìîì è äíåâíûì òðàíêâèëèçàòîðîì ìåêñèäîëîì. ÌÅÒÎÄÈÊÀ ÈÑÑËÅÄÎÂÀÍÈß Èññëåäîâàíèå ïðîâîäèëè íà ïîëîâîçðåëûõ áåëûõ áåñïîðîäíûõ êðûñàõ-ñàìöàõ ìàññîé 230-250 ã (12 ãðóïï ïî 10 æèâîòíûõ). Àíêñèîëèòè÷åñêîå äåéñòâèå ïðîïðîòåíà, äèàçåïàìà è ìåêñèäîëà èññëåäîâàëè ñ ïîìîùüþ ìåòîäà êîíôëèêòíîé ñèòóàöèè ïî Vogel, îñíîâàííîé íà ñòîëêíîâåíèè ïèòüåâîé è îáîðîíèòåëüíîé ìîòèâàöèé, êîãäà êàæäàÿ ïîïûòêà âçÿòèÿ æèâîòíûì âîäû íàêàçûâàëàñü ýëåêòðîáîëåâûì ðàçäðàæåíèåì [2,3]. Ñíà÷àëà ó êðûñû âûðàáàòûâàëè ñèëüíîå ÷óâñòâî æàæäû è íàâûê ïîëó÷åíèÿ âîäû èç ñïåöèàëüíîé ïîèëêè. Çàòåì íà 3-è ñóòêè ÷åðåç 10 ñ ïîñëå ïåðâîãî âçÿòèÿ âîäû èç ïîèëîê íà ýëåêòðîäíûé ïîë êàìåðû ïîäàâàëè ïîñòîÿííûé òîê ñèëîé 0.2 ìÀ, òàê ÷òî êàæäîå âçÿòèå âîäû ñòàíîâèëîñü íàêàçóåìûì è äëÿ óäîâëåòâîðåíèÿ æàæäû êðûñàì íàäî áûëî 38 Бюллетень экспериментальной биологии и медицины, 2003, приложение № 1 ïðåîäîëåòü ñòðàõ, ðàçâèâøèéñÿ â ðåçóëüòàòå íàêàçàíèÿ. Ðåãèñòðèðîâàëè ÷èñëî íàêàçóåìûõ âçÿòèé âîäû çà 10 ìèí. Ïðîïðîòåí ââîäèëè ïî 2.5 ìë/êã (0.25 ìë/ 100 ã ìàññû òåëà). Äëÿ ñðàâíåíèÿ èñïîëüçîâàëè äèàçåïàì ïî 2 ìã/êã è ìåêñèäîë â äîçå 100 ìã/êã (êîíòðîëü — äèñòèëëèðîâàííàÿ âîäà, 2.5 ìë/êã). Âåùåñòâà ââîäèëè èíòðàãàñòðàëüíî îäíîêðàòíî çà 30 ìèí äî ýêñïåðèìåíòà. Ñ öåëüþ áëîêàäû ÃÀÌÊÀ-ðåöåïòîðà èñïîëüçîâàëcÿ åãî àíòàãîíèñò áèêóêóëëèí (“ICN Biomedicals Inc.”) â äîçå 1 ìã/êã âíóòðèáðþøèííî, à äëÿ áëîêàäû õëîðíîãî êàíàëà ÃÀÌÊ-áåíçîäèàçåïèíîâîãî ðåöåïòîðíîãî êîìïëåêñà — ïèêðîòîêñèí (“ICN Biomedicals Inc”.) â äîçå 1 ìã/êã. Áèêóêóëëèí èëè ïèêðîòîêñèí ââîäèëè âíóòðèáðþøèííî îäíîâðåìåííî ñ ââåäåíèåì ïðîïðîòåíà, äèàçåïàìà, ìåêñèäîëà èëè âîäû (â ñîîòâåòñòâóþùèõ ãðóïïàõ) Ïîëó÷åííûå ðåçóëüòàòû îáðàáàòûâàëè ñòàòèñòè÷åñêè ñ èñïîëüçîâàíèåì U êðèòåðèÿ Ìàííà— Óèòíè è t êðèòåðèÿ Ñòüþäåíòà [2]. ÐÅÇÓËÜÒÀÒÛ ÈÑÑËÅÄÎÂÀÍÈß Ïðîïðîòåí (2.5 ìë/êã), äèàçåïàì (2 ìã/êã) è ìåêñèäîë (100 ìã/êã) îêàçûâàëè îò÷åòëèâîå àíêñèîëèòè÷åñêîå äåéñòâèå â óñëîâèÿõ êîíôëèêòíîé ñèòóàöèè, êîãäà êàæäîå âçÿòèå æèâîòíûì âîäû íàêàçûâàëîñü áîëåâûì ðàçäðàæåíèåì. Âñå ïðåïàðàòû äîñòîâåðíî óâåëè÷èâàëè ÷èñëî íàêàçóåìûõ âçÿòèé âîäû ïî ñðàâíåíèþ ñ êîíòðîëåì: ïðîïðîòåí â 1.6 ðàçà, äèàçåïàì â 1.5 ðàçà è ìåêñèäîë â 1.47 ðàçà (òàáëèöà). Òàêèì îáðàçîì, â èñïîëüçóåìûõ äîçàõ ïðåïàðàòû îêàçûâàëè ñõîäíûé ïî âûðàæåííîñòè ýôôåêò. Ââåäåíèå æèâîòíûì áèêóêóëëèíà — áëîêàòîðà ÃÀÌÊ-À-ðåöåïòîðà èëè ïèêðîòîêñèíà — áëîêàòîðà õëîðíîãî êàíàëà âûçûâàëî ïðîêîíôëèêòíûé, àíêñèîãåííûé ýôôåêò, ÷òî âûðàæàëîñü â ñíèæåíèè ÷èñëà íàêàçóåìûõ âçÿòèé âîäû, ñîîòâåòñòâåííî, â 1.6 è 1.8 ðàçà ïî ñðàâíåíèþ ñ ïîêàçàòåëÿìè êîíòðîëüíûõ æèâîòíûõ (òàáëèöà). Ïðè ñîâìåñòíîì ââåäåíèè ïðîïðîòåíà è áèêóêóëëèíà íàáëþäàëè îñëàáëåíèå àíòèêîíôëèêòíîãî äåéñòâèÿ ïðåïàðàòà: ÷èñëî íàêàçóåìûõ âçÿòèé âîäû ñíèæàëîñü â 1.76 ðàçà ïî ñðàâíåíèþ ñ îäíèì ïðîïðîòåíîì. Àíàëîãè÷íîå äåéñòâèå áèêóêóëëèí îêàçûâàë íà àíêñèîëèòè÷åñêèå ñâîéñòâà äèàçåïàìà è ìåêñèäîëà, çíà÷èòåëüíî óìåíüøàÿ (â 2 è 1.9 ðàçà ñîîòâåòñòâåííî) ÷èñëî íàêàçóåìûõ âçÿòèé âîäû â êîíôëèêòíîé ñèòóàöèè (òàáëèöà). Òàêèì îáðàçîì, íà ôîíå áëîêàäû ÃÀÌÊÀðåöåïòîðà, âûçûâàåìîé áèêóêóëëèíîì, îòìå÷à- åòñÿ äîñòîâåðíîå ñíèæåíèå àíòèêîíôëèêòíîãî äåéñòâèÿ ïðîïðîòåíà, òàêæå êàê è äåéñòâèÿ äèàçåïàìà è ìåêñèäîëà. Áëîêàòîð õëîðíûõ êàíàëîâ ïèêðîòîêñèí, òàêæå êàê è áèêóêóëëèí, îêàçûâàë àíêñèîãåííîå äåéñòâèå â óñëîâèÿõ êîíôëèêòíîé ñèòóàöèè. Êîìáèíèðîâàííîå ïðèìåíåíèå ïèêðîòîêñèíà ñ ïðîïðîòåíîì óìåíüøàëî â 1.67 ðàçà òðàíêâèëèçèðóþùèé ýôôåêò ïîñëåäíåãî. Êîìáèíàöèÿ ïèêðîòîêñèíà ñ äèàçåïàìîì è ìåêñèäîëîì òàêæå ïðèâîäèëà ê ñóùåñòâåííîìó ñíèæåíèþ ïîêàçàòåëÿ íàêàçóåìûõ âçÿòèé âîäû â êîíôëèêòíîé ñèòóàöèè, ÷òî ñâèäåòåëüñòâóåò îá îñëàáëåíèè àíêñèîëèòè÷åñêèõ ýôôåêòîâ ïðåïàðàòîâ. Òàêèì îáðàçîì, ïðè áëîêàäå ÃÀÌÊÀ-ðåöåïòîðà, âûçûâàåìîé áèêóêóëëèíîì, è õëîðíîãî êàíàëà ïðè ââåäåíèè ïèêðîòîêñèíà îòìå÷àåòñÿ äîñòîâåðíîå ñíèæåíèå àíòèêîíôëèêòíîãî äåéñòâèÿ äèàçåïàìà, ìåêñèäîëà è ïðîïðîòåíà, ÷òî ïîçâîëÿåò ïðåäïîëàãàòü âîâëå÷åíèå ýòèõ ñóáúåäèíèö ÃÀÌÊ-áåíçîäèàçåïèíîâîãî õëîðèîíîôîðíîãî ðåöåïòîðíîãî êîìïëåêñà â ðåàëèçàöèþ àíêñèîëèòè÷åñêîãî äåéñòâèÿ ýòèõ ïðåïàðàòîâ. Îäíàêî ïóòè âîçäåéñòâèÿ ýòèõ àíêñèîëèòèêîâ íà ñèñòåìó ÃÀÌÊ ðàçëè÷íû. Ìåõàíèçì äåéñòâèÿ áåíçîäèàçåïèíîâûõ òðàíêâèëèçàòîðîâ, â òîì ÷èñëå è äèàçåïàìà, îïðåäåëÿåòñÿ èõ ñïîñîáíîñòüþ íåïîñðåäñòâåííî ñâÿçûâàòüñÿ ñ áåíçîäèàçåïèíîâûì ðåöåïòîðîì, èçìåíÿòü êîíôîðìàöèþ àëëîñòåðè÷åñêè ñâÿçàííîãî ñ íèì ÃÀÌÊÀ-ðåöåïòîðà è â ðåçóëüòàòå óñèÂëèÿíèå àíòàãîíèñòîâ ÃÀÌÊ-áåíçîäèàçåïèíîâîãî ðåöåïòîðíîãî êîìïëåêñà íà àíêñèîëèòè÷åñêèé ýôôåêò ïðîïðîòåíà, äèàçåïàìà è ìåêñèäîëà (M±m, n=10) Âåùåñòâî Контроль ×èñëî íàêàçóåìûõ âçÿòèé âîäû 528.1±73.4 Пропротен 740.0±108.4* Диазепам 721.0±84.3* Мексидол Бикукуллин Пикротоксин 748.2±101.4* +вода 327.3±115.4* +пропротен 419.6±107.4+ +диазепам 353.6±74.1+ +мексидол 389.5±68.4+ +вода 296.9±125.1* +пропротен 469.3±85.5+ +диазепам 304.8±95.4+ +мексидол 358.3±87.8+ Примечание. p<0.05 по сравнению: *с контролем, +с эффектом пропротена, диазепама или мексидола без введения антагониста. n — количество животных в каждой группе. 39 ëèâàòü ÷àñòîòó è ïðîäîëæèòåëüíîñòü îòêðûòèÿ õëîðíûõ êàíàëîâ, ÷òî ïðèâîäèò ê ñíèæåíèþ íåéðîíàëüíîé âîçáóäèìîñòè è èçìåíåíèþ ñèíàïòè÷åñêîé ïåðåäà÷è [1,4]. Ìåêñèäîë, â îòëè÷èå îò äèàçåïàìà, íå ÿâëÿåòñÿ ïðÿìûì àãîíèñòîì áåíçîäèàçåïèíîâîãî ðåöåïòîðà, íî ýòî ìåìáðàííûé ìîäóëÿòîð ÃÀÌÊÀáåíçîäèàçåïèíîâîãî ðåöåïòîðíîãî êîìïëåêñà, îñóùåñòâëÿþùèé åãî íàïðàâëåííóþ ðåãóëÿöèþ ÷åðåç ìåìáðàííî-ðåöåïòîðíîå âçàèìîäåéñòâèå è óñèëèâàþùèé ñâÿçü ïðÿìûõ àãîíèñòîâ ñ ðåöåïòîðàìè [3]. Ìîçãîñïåöèôè÷åñêèé áåëîê S100 ïðèíèìàåò ó÷àñòèå â ïðîöåññàõ ãåíåðàöèè è ïðîâåäåíèÿ íåðâíîãî èìïóëüñà, îáåñïå÷èâàåò äëèòåëüíóþ ïîñòñèíàïòè÷åñêóþ ïîòåíöèàöèþ, èìåþùóþ ðåøàþùåå çíà÷åíèå äëÿ ñèíàïòè÷åñêèõ ïðîöåññîâ [5,6,8]. Óñòàíîâëåíî, ÷òî íàòèâíàÿ àíòèñûâîðîòêà ê áåëêó S100 ïîäàâëÿåò èíäóêöèþ äëèòåëüíîé ïîñòñèíàïòè÷åñêîé ïîòåíöèàöèè â ñðåçàõ ãèïïîêàìïà, à ïðîïðîòåí ìîäèôèöèðóåò ýòîò ýôôåêò [6,8,13]. Êðîìå òîãî, â èññëåäîâàíèÿõ íà ãèãàíòñêèõ íåéðîíàõ âèíîãðàäíîé óëèòêè ïîêàçàíî, ÷òî ïðîïðîòåí îáëàäàåò ïðÿìûì ìåìáðàíîòðîïíûì äåéñòâèåì è âûçûâàåò ñíèæåíèå àìïëèòóäû ïîòåíöèàëà äåéñòâèÿ è ìàêñèìàëüíîé ïðîâîäèìîñòè [10]. Òàêèì îáðàçîì, ìîæíî ïðåäïîëîæèòü, ÷òî ìåõàíèçì àíêñèîëèòè÷åñêîãî äåéñòâèÿ ïðîïðîòåíà ñâÿçàí ñ åãî ñïîñîáíîñòüþ ìîäèôèöèðîâàòü ôóíêöèîíàëüíóþ àêòèâíîñòü ìîçãîñïåöèôè÷åñêîãî áåëêà S100 è ñ èçìåíåíèåì ñèíàïòè÷åñêîé ïåðåäà÷è â ëèìáè÷åñêèõ ñòðóêòóðàõ ìîçãà, â òîì ÷èñëå ïîñðåäñòâîì ìîäóëÿöèè ìåìáðàííî-ðåöåïòîðíîãî âçàèìîäåéñòâèÿ íà óðîâíå ÃÀÌÊ-À õëîðèîíîôîðíîãî ðåöåïòîðíîãî êîìïëåêñà. ËÈÒÅÐÀÒÓÐÀ 1. Àëåêñàíäðîâñêèé Þ.À. Ïîãðàíè÷íûå ïñèõè÷åñêèå ðàññòðîéñòâà. Ì., 2000. 2. Âîðîíèíà Ò.À., Ñåðåäåíèí Ñ.Á. Ðóêîâîäñòâî ïî ýêñïåðèìåíòàëüíîìó (äîêëèíè÷åñêîìó) èçó÷åíèþ íîâûõ ôàðìàêîëîãè÷åñêèõ âåùåñòâ. Ì., 2000. Ñ. 126-130. 3. Âîðîíèíà Ò.À. // Ïñèõîôàðìàêîë. è áèîë. íàðêîë. 2001. ¹ 1. Ñ. 2-12. 4. Ñåðãååâ Ï.Â., Øèìàíîâñêèé Í.Ë., Ïåòðîâ Â.È. Ðåöåïòîðû ôèçèîëîãè÷åñêè àêòèâíûõ âåùåñòâ. Âîëãîãðàä, 1999. 5. Øòàðê Ì.Á. Ìîçãîñïåöèôè÷åñêèå áåëêè (àíòèãåíû) è ôóíêöèè íåéðîíà. Íîâîñèáèðñê, 1985. 6. Øòàðê Ì.Á., Áåðåãîâîé Í.À., Ñòàðîñòèíà Ì.Â. è äð. // Ìàòåðèàëû XIII ñúåçäà ïñèõèàòðîâ Ðîññèè, îêòÿáðü 2000. Ì., 2000. Ñ. 374. 7. Ýïøòåéí Î.È. // Áþë. ÑÎ ÐÀÌÍ. 1999. ¹ 1. Ñ. 132-149. 8. Ýïøòåéí Î.È., Áåðåãîâîé Í.À., Ñîðîêèíà Í.Ñ. è äð. // Áþë. ýêñïåð. áèîë. 1999. Ò. 127, ¹ 3. Ñ. 317-320. 9. Ýïøòåéí Î.È., Âîðîáüåâà Ò.Â., Áåð÷åíêî Î.Ã. è äð. // Òàì æå. ¹ 5. Ñ. 547-549. 10. Ýïøòåéí Î.È., Ãàéíóòäèíîâ Õ.Ë., Øòàðê Ì.Á. // Òàì æå. ¹ 4. Ñ. 466-477. 11. Ýïøòåéí Î.È., Âîðîíèíà Ò.À., Ìîëîäàâêèí Ã.Ì., Ñåðãååâà Ñ.À. // Òðóäû I Ìåæäóíàðîäíîãî ñèìïîçèóìà “Ñòðåññ è ýêñòðåìàëüíûå ñîñòîÿíèÿ”. Êàðà-Äàã, Ôåîäîñèÿ, 2002. Ñ. 90-91. 12. Heizmann C., Fritz G., Schafer B.W. // Frontiers in Biosci. 2002. Vol. 7. P. 1356-1368. 13. Lewis D., Teyler T.J. // Brain Res. 1986. Vol. 383, N 1-2. P. 159-164.