Сифилис

реклама
Тараканова Елена Александровна.
ЗАО «ЭКОлаб»
Лабораторная диагностика
сифилиса
1
ХХ век был отмечен
значительными успехами как в
изучении возбудителя
сифилитической инфекции,
T.pallidum,, так и развитием новых
T.pallidum
методов диагностики
сифилитической инфекции
2
Динамика антителообразования при сифилисе
IgG
Рецидив или
реинфекция
Эффективное лечение
IgM
Реагины
Недели после инфицирования
3
Методы диагностики сифилиса
Прямые
Темнопольная
микроскопия
Непрямые
(серологические)
Нетрепонемные
тесты
Прямая иммунофлюоресценция
ПЦР
Трепонемные
тесты
4
Серологические исследования являются в настоящее
время основным элементом клинической лабораторной
диагностики сифилиса.
Они решают три задачи:
скрининг на сифилис;
диагностика сифилиса при наличии
подозрений на него;
контроль эффективности лечения
диагностированного сифилиса
5
Нетрепонемные тесты
Сифилис-АгКЛ-РМП
реакция микропреципитации
и её модификация
Сифилис RPR-тест
Сифилис VDRL -тест
6
Трепонемные тесты
Сифилис-РПГА –тест
реакция пассивной гемагглютинации
ИФТС
ИФА-Антипаллидум-скрин
ИФА-Антипаллидум-одностадийный
ИФА-Антипаллидум-IgM
ИФА-Антипаллидум-IgG
иммуноферментный анализ
Лайн-блот-сифилис
иммунный блоттинг
Сифилис-IgG-РИФ и Сифилис-IgM-РИФ
реакция иммунофлюоресценции
7
Сифилис-АгКЛ-РМП
Для серодиагностики сифилиса и контроля результатов его лечения.
Комплект №1
СОСТАВ НАБОРА
Антиген кардиолипиновый – раствор холестерина, кардиолипина, лецитина
в абсолютированном спирте.
Раствор холин-хлорида в 0,9% растворе натрия хлористого
Рассчитан на 1000 определений;
Комплект №2
Взвесь, содержащая кардиолипин, лецитин, холестерин в 10% растворе
холин-хлорида, содержит консервант
Положительная контрольная сыворотка (К+)
Рассчитан на 500 определений.
Срок годности – 2 года.
8
Быстрый скрининговый метод. Время постановки 5
минут
Незаменим при мониторинге эффективности лечения
Аналитическая чувствительность набора составляет1,5 МЕ/мл
Сифилис-RPR-ТЕСТ
Для серодиагностики сифилиса и контроля результатов его лечения.
СОСТАВ НАБОРА
RPR-антиген – водная 0,02 % суспензия угольных частиц
сенсибилизированных смесью холестерина, кардиолипина, лецитина;
содержит консервант – азид натрия в конечной концентрации 0,095 %.
Положительная контрольная сыворотка (К+)
Отрицательная контрольная сыворотка (К-)
Карточки для реакции
Набор выпускается в двух вариантах комплектации:
комплект № 1 (на 100 определений);
комплект № 2 (на 500 определений).
Срок годности – 2 года.
Быстрый скрининговый метод. Время
постановки 8 минут
Незаменим при мониторинге эффективности лечения
Аналитическая чувствительность набора
составляет-1,5 МЕ/мл
10
19
11
Нетрепонемные тесты
Антитело
(Ig)
Сифилис VDRL –тест
(Veneral Disease Research Laboratory)
Рекомендован к применению ВОЗ
Антиген
(Treponema pallidum)
Микрофлокуляционный тест на основе кардиолипинового антигена
Применение микроскопа с Х100 позволяет рассмотреть
микрокомплексы АГ-АТ
Исследование образцов cмж редко даёт ложноположительный
результат в отличие от исследования инактивированной сыворотки
Традиционный диагностический тест для постановки диагноза
нейросифилиса
Мониторинг эффективности лечения
12
Сифилис-VDRL-тест
Для серодиагностики сифилиса и контроля результатов его лечения.
СОСТАВ НАБОРА
VDRL-антиген – раствор кардиолипина (0,3 г /л),лецитина ( 2,1 г /л) и
холестерина (9 г /л) в абсолютизированном этиловом спирте
Фосфатный буферный раствор (ФБР)
Положительная контрольная сыворотка (К+)
Отрицательная контрольная сыворотка (К-)
Набор рассчитан на исследование 250 образцов, включая контрольные
Срок годности – 1,5 года.
13
Быстрый скрининговый метод. Время
постановки 4 минуты
Незаменим при мониторинге эффективности
лечения
Аналитическая чувствительность набора
составляет-1,5 МЕ/мл
Сифилис -РПГА -тест
Набор реагентов для определения антител
к Treponema pallidum в реакции пассивной
гемагглютинации.
ФСР № 2010/08228 от 07.07.10г.
Единственный отечественный набор с использованием лизатных
антигенов T.pallidum (штамм Nichols), что обеспечивает его
эффективность, не уступающую лучшим мировым образцам
(фирмы Spinreact, Испания; Newmarket Laboratories Ltd,
Великобритания; BioKit, Испания; Human, Германия.), также
использующих лизатные антигены T.pallidum
15
15
16
Сифилис--РПГАСифилис
РПГА-тест
основные характеристики
Аналитическая чувствительность метода – 0,05 МЕ/мл
Набор выпускается в двух вариантах комплектации:
комплект № 1 – только для качественного исследования
комплект № 2 – для качественного и полуколичественного исследования
Наименование реагента
Комплект № 1
Комплект № 2
Тест--эритроциты (ТЭ)
Тест
1 фл. (8,5 мл)
2 фл. ( по 8,5 мл)
Контрольные эритроциты (КЭ)
1 фл. (8,5 мл)
1 фл. (8,5 мл)
Буферный раствор (БР)
1 фл. (20
(20 мл)
1 фл. (25
(25 мл)
Контрольный положительный образец (К+)
1 фл. (0,5
(0,5 мл)
1 фл. (0,5
(0,5 мл)
Контрольный отрицательный образец (К(К-)
1 фл. (0
(0,5 мл)
1 фл. (0
(0,5 мл)
Планшет для микротитрования
2 шт.
2 шт.
Объемы реагентов достаточны для исследования 100 образцов, включая контрольные
К+ стандартизован по содержанию антител с использованием международного
стандарта ВОЗ (NIBSC, London, UK); титр 1:2560.
Исследуемые образцы – сыворотка (плазма) крови, ликвор.
Время экспозиции до учета результатов – 45 мин.
Экспозиция при комнатной температуре.
17
Срок годности набора – 1,5 года
Учет результатов РПГА
4+
3+
2+
1+ или +
--
Резко положительная реакция - ровный слой ("зонтик") агглютинированных
эритроцитов, распределенных по дну лунки (4+)
Положительная реакция – эритроциты располагаются на большей части дна
лунки, при этом по периферии осадка формируется заметное кольцо (3+).
Слабоположительная реакция - эритроциты располагаются на небольшой
части дна лунки, формируя плотное кольцо из осадка эритроцитов с
заметным просветлением в центре (2+).
Неопределенная реакция – наличие небольшого рыхлого осадка эритроцитов
в центральной части лунки с нечеткими краями с незначительным просветом
в центре (1+ или +)
Отрицательная реакция – компактный осадок ("пуговка") в центральной
части дна лунки на чистом окружающем фоне (–)
18
Для автоматизации постановки РПГА и учета ее
результатов могут быть использованы
отечественные аппаратноаппаратно-программные
комплексы "Критерий"Критерий-2", "Эксперт
"Эксперт--Лаб",
импортные ридеры типа Anthos LP400,
LP400, MRX
MRX,,
MR
MR7000,
7000, Dynateh MRXII и автоматические
анализаторы типа
Olimpus РК 3000.
19
Комплекс «Эксперт-Лаб»
20
В серодиагностике сифилиса РПГА может
использоваться для:
скрининга образцов - (простота, скорость, хорошая
воспроизводимость, возможность автоматизации )
подтверждающих исследований - (высокая
чувствительность и специфичность реакции ).
21
Источники ошибок
Небиологические:
Небиологические:
загрязнённые плашки
неправильное пипетирование
наличие вибрации в лаборатории
температура воздуха в лаборатории выходит за рамки 1818-25
градусов.
Биологические::
Биологические
Зарегистрированы ложные позитивы у больных с
инфекционным мононуклеозом, боррелиозом, СКВ, у
наркоманов, у больных с коллагенозами, лепрой.
Из двух стандартных трепонемных тестов (флюоресценция и
гемагглютинация), РПГА даёт меньшее количество
ложноположительных результатов.
В основном , встречаемость ложноположительных
результатов в РПГА исследованиях очень редка у «здоровых»
людей (меньше 1%).
22
РИФ – реакция иммунофлуоресценции
(FTA Fluorescent treponemal antibody)
набор реагентов для определения антител к антигенам T.pallidum
Сифилис-IgG-РИФ и Сифилис-IgM-РИФ
23
Иммуноферментные тест-системы
ИФА-Антипаллидум-скрин (антитела классов M, G, A)
ИФА-Антипаллидум-одностадийный (антитела M, G, A)
ИФА-Антипаллидум-IgM
ИФА-Антипаллидум-IgG
Исследуемые образцы – сыворотка (плазма) крови, ликвор
Комплектация наборов позволяет использовать их как для ручной
постановки, так и с ИФАИФА-анализаторами.
Возможно определение титра антител, в том числе по коэффициенту
позитивности (КП), т.е. без использования дополнительных стрипов
Аналитическая чувствительность метода – 0,025 МЕ/мл
Цветная индикация растворов
25
Срок годности = 12 месяцев.
Лайн--Блот Сифилис
Лайн
Тест-система для выявления антител к отдельным антигенам
Тествозбудителя сифилиса методом иммунного блоттинга с
использованием рекомбинантных антигенов.
27
Состав набора
Лайн-Блот-Сифилис
Маркировка
Зона TpN15
Зона TmpA
Контроль
интенсивности
реакции
Стандартная схема
нанесения антигенов
Treponema pallidum и
контролей на стрип
Иммуносорбент – тест-полоски (стрипы) из нитроцеллюлозной
мембраны, на каждую из которых в виде поперечных полос
нанесены рекомбинантные аналоги антигенов Treponema pallidum
(TpN15, TpN17, TmpA, TpN47), а также четыре контрольные полосы:
контроль специфичности реакции (КАГ),
контроли интенсивности окрашивания:
•
полоса с максимальной интенсивностью окрашивания
("3+");
•
полоса со средней интенсивностью окрашивания ("1+") –
служит одновременно контролем внесения образца.
•
полоса с минимальной интенсивностью окрашивания
("0,5+")
Контрольный положительный образец (К+)
Контрольный отрицательный образец (К–)
Конъюгат – антитела козьи к IgG человека, конъюгированные со
щелочной фосфатазой в стабилизирующем растворе; прозрачная
фиолетового цвета жидкость.
Раствор для разведения образцов (РРО)
Субстратный раствор (СР)
10-кратный концентрат промывочного раствора (ПРх10)
Образец для анализа:сыворотка (плазма) крови , ликвор
Количество определений :24 включая контроли
Срок годности 1 год
Чувствительность и спцефичность : 100%
28
Принцип технологии иммуноблоттинга
Иммобилизация на нитроцеллюлозную мембрану
рекомбинантных белков - аналогов антигенов
Treponema pallidum p17, p 47, p 41, p15
Проведение иммуноферментного анализа для
одновременного дифференцированного
выявления антител к каждому из нанесённых
на мембрану антигенов
Антитела к белкам T. pallidum в разной степени
регистрируются на всех стадиях инфекции
29
Реактивность сыворотки
оценивают по каждому
антигену отдельно, путём
сравнения интенсивности
окрашивания полученных
полос с окрашиванием
трёх калибровочных линий
Отслеживание белкового
профиля помогает при
уточнении стадии
инфекции и в оценке
эффективности
проведённого лечения
30
Частота выявления антител к основным
иммунореактивным белкам Tr.
Tr.Pallidum
TpN15 – 67,5%
TpN17 – 98,5%
TmpA – 95,0%
TpN47 – 92,5%
За счет высокой степени
очистки рекомбинантных
антигенов и одновременного
выявления антител к
наиболее иммуногенным
детерминантам возбудителя
сифилиса метод обладает
высокой чувствительностью (
99,6--100%) и специфичностью
99,6
(100%), что позволяет
рассматривать его как новый
подтверждающий тест на
сифилис.
31
18
Применение метода иммуноблоттинга
целесообразно:
Для ранней диагностики сифилиса. В возможном
инкубационном периоде и при первичном сифилисе
Для подтверждения диагноза скрытого раннего
сифилиса ( при противоречивых результатах
традиционных серологических методов)
При необходимости проведения дифференциальной
диагностики с л/положительными результатами
серологических реакций на сифилис, особенно, при
аутоиммунных заболеваниях: ревматизме,СКВ
В сложных диагностических ситуациях, как референсреференсметод.
При оценке результатов лечения
32
Производство диагностических систем.
142530, Московская обл., г. Электрогорск,
ул. Буденного, д. 1 http://www.ekolab.ru
Отдел маркетинга:
тел./факс: +7 (496) 433-35-29
E-mаil: market@ekolab.ru; ekolab_market@mail.ru
Представительство в г. Москве:
тел./факс: +7(495) 938-8165, 938-8174
E-mаil: mosekolab@yandex.ru
33
24
Спасибо за
внимание !
Скачать