Шахрай C.В., Гаин Ю.М., Гаин М.Ю. Белорусская медицинская

реклама
Шахрай C.В., Гаин Ю.М., Гаин М.Ю.
Белорусская медицинская академия последипломного образования, Минск, Беларусь
Первый опыт клинического применения мезенхимальных стволовых клеток в
лечении свищей прямой кишки
ВВЕДЕНИЕ
Вопросам лечения свищей прямой кишки в зарубежной и отечественной литературе
последние 20 лет посвящено большое количество публикаций. Это связано с отсутствием до
сих пор в проктологической практике надежного, безрецидивного способа лечения данной
патологии, несмотря на большое количество существующих вариантов оперативного
лечения, а также с наличием осложнений в послеоперационном периоде, особенно
функционального характера. Анальная инконтиненция в той или иной степени после
операций по поводу транссфинктерных и экстрасфинктерных свищей, по данным ряда
авторов, имеют место в 7–32% случаев. Сроки послеоперационной реабилитации достигают
нескольких месяцев, что, несомненно, влияет на качество жизни пациентов и их социальную
и профессиональную реабилитацию, а также несет значительную финансовую нагрузку на
органы здравоохранения. Поэтому поиск и внедрение новых методик лечения свищей
прямой кишки – актуальный вопрос современной хирургии аноректальной области.
ЦЕЛЬ
Изучение
результатов
лечения
свищей
прямой
кишки
с
использованием
аутологичных мезенхимальных стволовых клеток жировой ткани.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Первичный клинический опыт применения мезенхимальных стволовых клеток в
лечении ректальных свищей основывается на результате четырех наблюдений. На первом
этапе у пациента параумбиликально производился забор жировой ткани под местной
анестезией. Для этого по кожной складке справа или слева от пупка делался дугообразный
разрез кожи, острым путем иссекался участок подкожной клетчатки в объеме до 5 мл,
который помещался в стерильную пробирку с транспортной средой. В лабораторных
условиях жировая ткань дважды промывалась в фосфатном буферном растворе (ФБР),
содержащем 100 U/мл пенициллина, 100 мкг/мл стрептомицина. Затем ткань измельчалась
острым путем и инкубировалась в течение 40–50 минут в 0,075% растворе коллагеназы I
типа («Sigma», Германия) при 37 0С и постоянном помешивании. Нейтрализация активности
фермента проводилась равным объемом среды DMEM, содержащей 10% фетальной бычьей
сыворотки (ФБС). Образовавшаяся пленка из адипоцитов и супернатанта удалялась, а
клеточный осадок, содержащий мезенхимальные стволовые клетки, ресуспензировался и
дважды отмывался центрифугированием в ФБР / 5% ФБС (1200 об./мин в течение 10 минут).
Количественный выход жизнеспособных клеток определялся при их подсчете в камере
Горяева. Осадок ресуспензировался в питательной среде DMEM («Sigma», США) с
добавлением 10% ФБС, 2 mM L-глутамина, 100 U/мл пенициллина, 100 мкг/мл
стрептомицина и засевался в культуральные чашки диаметром 60 мм в концентрации 4 × 104
ядросодержащих клеток на 1 см2 поверхности культурального пластика. Для удаления не
прикрепившихся клеток через 24 часа проводилась замена питательной среды. Дальнейшая
смена среды производилась каждые четвертые сутки до получения концентрации
мезенхимальных стволовых клеток 105 в 1 мл культуры.
Для отделения клеток от субстрата после образования в монослое (10–12 дней)
использовался 0,25% раствор трипсина – ЭДТА. После разъединения клеток их переводили в
суспензию добавлением ростовой среды. Затем клетки осаждали центрифугированием при
1200 об./мин в течение 10 минут. Количественный выход жизнеспособных клеток
определялся при их окраске 0,5% раствором трипанового синего и подсчете в камере
Горяева. Доза клеток для трансплантации доводилась до 500 тыс./мл. Процесс сепарации и
подготовки клеточной массы для трансплантации занимал от 14 до 20 дней. В этот период
производилась однократная санация свищевого хода лазерным излучением длиной волны
1560
нм.
Процедура
парафистулярной
выполнялась
анестезией
следующим
1%-ным
раствором
образом:
под
лидокаина
инфильтрационной
под
эхоскопическим
трансректальным контролем в просвет свища до внутреннего его отверстия проводился
стекловолоконный лазерный световод с дистанционно-радиальным излучением. Под
контролем пилотного лазера с красной индикацией производилось наложение кисетного или
П-образного шва на внутреннее отверстие свищевого хода. Затем излучением мощностью 8
Вт в постоянном режиме эмиссии обрабатывался просвет свищевого хода при извлечении
световода со скоростью 2 мм/сек. При готовности клеточной культуры выполнялось
иссечение наружного отверстия и части свища до мышечного слоя. Затем в просвет свища и
парафистулярно
инъекционно
вводилась
подготовленная
суспензия
аутологичных
мезенхимальных стволовых клеток в физиологическом растворе хлорида натрия. На одни
сутки накладывался провизорный шов, герметизирующий ход свища.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
Методика применена у четырех пациентов, у двоих имел место транссфинктерный
ход свища, у оставшихся – экстрасфинктерный, что подтверждалось до операции
рентгенологически и эхоскопически. Заживление раны у всех пациентов проходило без
осложнений. Раневой процесс завершился рубцеванием в сроки от 3 до 5 недель, что
зависело от толщины подкожной клетчатки. Наблюдение за пациентами в течение шести
месяцев не выявило рецидива процесса.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Первичные результаты применения мезенхимальных стволовых клеток жировой
ткани в лечении свищей прямой кишки позволяют говорить о перспективности применяемой
методики и необходимости проведения дальнейших наблюдений и исследований.
Скачать