Теоретическая и экспериментальная медицина

Теоретическая
и экспериментальная
медицина
УДК 612.017.1 : 611 - 018.53
А.С. Шаронов1, И.А. Храмова2, И.П. Кольцов3
ЗАВИСИМОСТЬ ИММУНОГЕНЕЗА НА ЕГО НАЧАЛЬНЫХ
ЭТАПАХ ОТ СОСТОЯНИЯ СТАБИЛЬНОСТИ ЛИЗОСОМНЫХ
МЕМБРАН ФАГОЦИТИРУЮЩИХ КЛЕТОК
Военно-морской клинический госпиталь ТОФ1, 690000, ул. Ивановского, 4, тел.: 8-(4232)-26-96-67;
Владивостокский государственный медицинский университет2,
пр. Острякова, 2, тел.: 8-(4232)-27-26-87, г. Владивосток;
Дальневосточный государственный медицинский университет3,
680000, ул. Муравьева-Амурского, 35, тел.: 8-(4212)-32-63-93, e-mail: nauka@mail.fesmu.ru, г. Хабаровск
Термин «стабильность лизосомных мембран клеток»
введен первооткрывателем лизосом De Duve для обозначения одной из функций лизосом. Эта функция лизосом
определяет степень прикрепления лизосомных ферментов к мембранам лизосом [3], как правило, оцениваемой
по маркерным ферментам лизосом (кислая фосфатаза,
катепсин Д, лизоцим). Функциональные свойства клеток
и их лизосомных мембран подвержены влиянию различных физических, химических агентов, биологических
факторов [2, 4, 6]. В результате исследований выявлено
стабилизирующее или лабилизирующее действие изучаемых факторов. Стабилизирующее действие опосредовано активацией ц-АМФ, а лабилизирующее — ц-ГМФ [2,
3, 7].
Полученные и описанные результаты по изменению
состояния стабильности лизосомных мембран на стадиях фагоцитоза различных фагоцитируемых частиц
позволили выявить общую закономерность лабилизирующего эффекта на ранних фазах фагоцитоза, независимо от вида объекта фагоцитоза, и разнонаправленное
на стадии переваривания, определяемое лизосомомембранотропностью фагоцитируемых корпускул, являющихся антигенами [5]. В частности, зимозан, имеющий
полисахаридную природу, за счет затрудненного переваривания вызывает пролонгированное состояния
лабилизации. Эритроциты на стадии переваривания
приводят к стабилизации лизосомных мембран фагоцитов под воздействием высвобождающегося гемоглобина [5].
Целью исследования было экспериментальное обоснование возможности регуляции гуморального иммунно-
го ответа путем целенаправленной коррекции состояния
стабильности лизосомных мембран антигенпрезентирующих (фагоцитарных) клеток.
Материалы и методы
Крысам внутрибрюшинно вводили по 5 мл 1% взвеси
эритроцитов морской свинки (1 группа, 12 крыс — контроль №1); 1 мл (10 мг) взвеси частиц зимозана (2 группа,
12 крыс — контроль №2); 5 мл 1% взвеси эритроцитов
морской свинки одновременно с 0,25 мл 0,1% (1,1×10-6М)
адреналина гидрохлорида (3 группа, 11 крыс — опыт
№1) или с 0,2 мл 2% (2,2×10-5М) ацетилхолина хлорида
(4 группа, 11 крыс — опыт №2); 1 мл (10 мг) взвеси
частиц зимозана одновременно с 0,25 мл 0,1% адреналина гидрохлорида (5 группа, 12 крыс — опыт №3) или с 0,2
мл 2% ацетилхолина хлорида (6 группа, 12 крыс — опыт
№4); 5 мл 1% взвеси эритроцитов морской свинки и через
1 ч 0,25 мл 0,1% адреналина гидрохлорида (7 группа, 10
крыс — опыт №5) или 0,2 мл 2% ацетилхолина хлорида
(8 группа, 10 крыс — опыт №6); 1 мл (10 мг) частиц зимозана и через 1 ч 0,25 мл 0,1% адреналина гидрохлорида
(опыт №7 — 10 крыс) или 0,2 мл 2% раствора ацетилхолина хлорида (опыт №8 — 10 крыс).
Кровь в количестве 2 мл брали из сердца крыс на 5 дн.
со дня иммунизации. В сыворотке крови определяли титр
противоэритроцитарных антител в реакции гемагглютинации (РГА) и притивозимозановых в реакции потребления комплемента (РПК).
Всего в эксперимент было взято 24 контрольных и 86
опытных крыс. Результаты обработаны методом вариационной статистики с расчетом средней арифметической
87
Рез ю ме
Таблица 1
Уровень антител при иммунизации крыс стабилизирующим
и лабилизирующим антигенами при одновременном введении
адреналина гидрохлорида или ацетилхолина хлорида
Корригирующие стабильность лизосомных мембран
фагоцитирующих клеток
вещества
Результаты иммунизации
титр противоэритроцитарных антител
титр противозимозановых
антител, гем.ед.мл
М±m
Р
М±m
Р
1:(115,8+10)
(1)
-
1,3±0,17
(2)
-
Адреналин
гидрохлорид
1:(1600±225,6)
(опыт №1)
<0,01
3,25±0,95
(опыт №3)
<0,05
Ацетилхолин
хлорида
1:( 100±22,5)
(опыт №2)
>0,05
0,75±0,22
(опыт №4)
>0,05
Контроль
В экспериментальных исследованиях на крысах линии
Wistar (110 крыс), иммунизированных различными антигенами, был выявлен ряд фактов, позволивших показать
биологическую роль изменения состояния стабильности
лизосомных мембран фагоцитирующих клеток в формировании иммунного ответа и регуляции силы его проявления.
Получены факты по регуляции силы иммунного ответа путем коррекции стабильности лизосомных мембран
фагоцитов с учетом лизосомомембранотропных свойств
антигенов и лабилизирующего эффекта процесса фагоцитоза в начальные его фазы.
Установленные данные позволяют считать важной
роль состояния стабильности лизосомных мембран фагоцитирующих клеток в иммуногенезе на его начальных
этапах, что определяет конечный результат иммунного
ответа и предполагает возможность целенаправленной его
регуляции.
Ключевые слова: иммуногенез, фагоцитирующие клетки.
Примечание. Контроль — иммунизация антигеном без дополнительного введения корригирующих стабильность лизосомных мембран веществ; опыт — иммунизация антигенами с дополнительным введением
корригирующих стабильность лизосомных мембран веществ.
Таблица 2
Уровень противоэритроцитарных и противозимозановых
антител при иммунизации крыс стабилизирующим
и лабилизирующим антигенами с последующим
через 1 ч введением адреналина гидрохлорида
или ацетилхолина хлористого
A.S. Sharonov, I.A. Khramova, I.P. Koltsov
IMMUNOGENESIS CONTROL ON ITS ESSENTIAL
STAGES VIA CORRECTION OF STABILITY STATE OF
LISOSOMAL MEMBRANES OF PHAGOCYTES CELLS
Результаты иммунизации
Корригирующие
стабильность лизосомных мембран
фагоцитирующих
клеток вещества
титр противоэритроцитарных антител
Контроль
1:(115,8±10)
(1)
Адреналин
гидрохлорид
Ацетилхолин
хлорида
М±m
титр противозимозановых антител, гем.
ед./мл
Р
М±m
Р
-
1,3±0,17
(2)
-
1:(64,4±5,0)
(опыт №5)
<0,01
3,9±0,7
(опыт №7)
<0,01
1:(154±15,6)
(опыт №6)
>0,05
0,5±0,25
(опыт №8)
<0,05
FEF Navy Clinic Hospital;
Vladivostok State Medical University, Vladivostok;
Far Eastern state medical university, Khabarovsk
Summar y
In experiments on Wistar rats (110 rats in total) immunized by various antigens there were revealed several factors
which allow us to demonstrate the biological role of changes
in a stability state of lisosome membranes of phagocytes cells
in creation of immune respond and in correction of its manifestation.
The achieved results show the control of immune respond
via correction of stability of lisosome membranes of phagocytes
with consideration of antigeries’ lisosomal membrane qualities
and the labializing effect of phagocytes’ process in its essential
phase.
The data received make it possible to consider the role of
the stability state of lisosome membranes of phagocytes cells
in immunogenesis at its essential stages to be important. This
defines the result of immune respond and presupposes a possibility of its purposeful control.
Key words: immunogenesis, phagocytes cells.
Примечание. Контроль — иммунизация крыс без дополнительного
введения корригирующих стабильность лизосомных мембран веществ;
опыт — иммунизация крыс с дополнительным введением корригирующих стабильность лизосомных мембран веществ.
(М), средней ошибки средней арифметической (m) и коэффициента вероятности различий (р).
Результаты и обсуждение
В табл. 1 представлены результаты оценки иммунизации эритроцитарным и зимозановым антигенами при
одновременном введении адреналина гидрохлорида и
ацетилхолина хлористого.
Как видно из табл. 1, одновременное введение адреналина гидрохлорида и антигена приводит к 10-кратному увеличению титра противоэритроцитарных антител и
2,5-кратному увеличению противозимозановых антител.
Одновременное с антигенами введение ацетилхолина
хлорида приводит к снижению титра противоэритроцитарных и противозимозановых антител.
Введение адреналина гидрохлорида через 1 ч после
введения антигенов (табл. 2) приводит почти к 2-кратному снижению титра притивоэритроцитарных антител и к
3-кратному увеличению притивозимозановых антител.
Введение через 1 ч ацетилхолина хлорида после введения
антигенов, напротив, приводит к достоверному увеличению в 1,3 раза титра притивоэритроцитарных антител и
снижению в 2,8 раза — притивозимозановых антител.
Опыты по иммунизации стабилизирующим эритроцитарным антигеном и лабилизирующим — зимозановым с
дополнительной коррекцией состояния стабильности лизосомных мембран веществами неантигенной природы
со строго установленными свойствами стабилизировать
(адреналин гидрохлорид) и лабилизировать (ацетилхо88
лин хлорида) лизосомные мембраны клеток, в том числе
лейкоцитов, через избирательную активацию внутриклеточных мессенджеров — ц-АМФ и ц-ГМФ [1-3, 7],
свидетельствует о возможности иммунорегуляции путем
целенаправленной коррекции состояния стабильности
лизосомных мемран антигенпрезентирующих клеток, какими являются фагоцитирующие клетки, на начальном
этапе иммуногенеза.
клеток новорожденных в краткосрочных культурах //
Иммунология. - 2008. - Т.29, №3. - С. 141-147.
5. Шаронов А.С. Исследование стабильности лизосомных мембран фагоцитирующих клеток при фагоцитозе
различных объектов // RJI. - 2004. - Vol. 9, Suppl. 1. - P. 358.
6. Lambrecht B.N. Dendritic cells and the regulation of
the allergic immune response // Allergy. - 2005. - Vol. 60,
№3. - P.271-282.
7. Ramsay C.E., Hayden C.M., Filler K.J. et al.
Polimorphism in the B-adrenoreceptor gene are associated
with decreased airway responsiveness // Clin.Exp.Allergy. 1999. - Vol. 29. - P. 1195-1203.
Ли те ра тура
1. Кобылянский Л.Н. Влияние ацетилхолина на функциональное состояние лизосом печени и почек крыс при
тяжелой механической травме // Бюл. экспер. биол. и мед.
- 1983. - ХСУ (1). - С. 27-79.
2. Коровкин Б.Ф. Циклазная система и активность
лизосомальных ферментов в норме и патологии // Вестн.
АМН СССР. - 1982. - № 9.- С. 69-74.
3. Панин Л.Е., Маянская Н.Н. Лизосомы: роль в адаптации и восстановлении. - Новосибирск: Наука СО, 1987.
- 198 с.
4. Талаев В.Ю., Бабайкина О.Н., Ломунова М.А. и др.
Функциональные свойства моноцитарных дендритных
Координаты для связи с авторами: Шаронов Анатолий Степанович — доктор мед. наук, профессор, заведующий иммунологической лабораторией главного
госпиталя Военно-морского ТОФ, тел.: 8(4232)-26-96-67;
Храмова Ирина Афанасьевна — канд. мед. наук, доцент
кафедры акушерства и гинекологии, тел.: 8(4232)-27-2687; Кольцов Игорь Петрович — канд. мед. наук, доцент,
заведующий кафедрой микробиологии, вирусологии и
иммунологии.
УДК 616.381 - 003.235 : 616 - 092.9
А.А. Кашафеева, С.Г. Гаймоленко, Б.С. Хышиктуев, А.Г. Гончаров
СОСТОЯНИЕ ПЕРЕКИСНОГО СТАТУСА БРЮШИНЫ
ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ ПЕРИТОНИТЕ У КРЫС
Государственная медицинская академия,
672090, ул. Горького, 39 а, e-mail: macadem@mail.chita.ru, г. Чита
Несмотря на совершенствование техники хирургических вмешательств, внедрение новых методов лечения, перитонит остается одной из основных причин
неблагоприятных исходов у больных с абдоминальной
хирургической патологией. По данным литературы [5,
6], летальность при перитоните варьирует от 13 до 40%.
Известна важная патогенетическая роль перекисного
дисбаланса при гнойно-воспалительных процессах, в том
числе и перитоните, и в формировании полиорганной
недостаточности как основной причины летальных исходов. Однако большая часть исследований при перитоните
основана на изучении показателей крови, что снижает их
информативность и степень объективности оценки перекисного гомеостаза в брюшной полости [2, 8]. В связи с
этим определенный интерес представляет исследование
локального перекисного статуса, что позволит установить патогенетические закономерности его изменений
и создать предпосылки для поиска новых направлений в
лечении перитонита.
Цель исследования — изучить динамику показателей
липопероксидации и антиокислительной защиты брюшины при экспериментальном перитоните.
Материалы и методы
Исследование проведено на 30 беспородных половозрелых крысах обоего пола с массой тела около 200 г.
Все эксперименты выполнялись в соответствии с Приказом № 742 от 13.11.84 г. «Об утверждении проведения
работ с использованием экспериментальных животных»,
утвержденным в ГУ НИИ нормальной физиологии им.
П.К. Анохина РАМН и ГУ НИИ общей патологии и патофизиологии РАМН, который соответствует требованиям
Всемирного общества защиты животных (WSPA) и Европейской конвенции по защите животных, используемых
для экспериментальных и других научных целей. Всем
крысам под эфирным наркозом выполнялась срединная
лапаротомия. Для исследования смыва петли кишечника и париетальная брюшина орошались 4,5 мл 0,9% раствора NaCl, который затем аспирировался в пробирку
89